血小板细胞膜固相色谱法的建立及其对丹参效应物质的初步分析

目的 建立血小板细胞膜固相色谱法,并应用其分析丹参对血小板作用的活性成分。方法 应用血小板细胞膜作为固定相选择性地结合中药提取液中的活性成分,洗去未结合的其他成分后,使细胞膜靶点失活,被结合的活性成分从血小板细胞膜中释放出来,样品经固相萃取后用HPLC对这些成分进行解析。结果 丹参水提液的效应成分初步确定为6个,其中之一为原儿茶醛。结论 血小板细胞膜固相色谱法基本可以反映化合物与细胞膜生物靶点(受体、通道、酶等)的相互作用;该体系中的保留成分和其药理作用有显著的相关性。

系膜细胞膜固相色谱法研究丹皮中的效应成分

丹皮常被用于治疗肾病的中药复方中,但其活性成分并不明确,因此,采用肾小球系膜细胞膜固相色谱法分析丹皮中的效应成分.培养小鼠肾小球系膜细胞,并作为固定相选择性结合丹皮中的活性成分,排除未与细胞膜靶点结合的非活性成分后,使细胞膜靶点失活,解离系膜细胞膜上被结合的活性成分,用UPLC对解离液进行分析.结果表明丹皮酚是丹皮与肾系膜细胞结合的成分,因此认为丹皮酚是丹皮中的效应成分.

细胞膜固相色谱法筛查奶粉中AGEs特异结合成分

采用细胞膜固相色谱技术检测食品中的晚期糖基化终产物。以含晚期糖基化终产物食品奶粉为研究对象,借助细胞膜固相色谱技术和HPLC-MS/MS技术筛查其相应AGEs特异结合成分。结果表明:羧甲基赖氨酸(CML)、羧乙基赖氨酸(CEL)和吡咯素(Pyr)这3个成分是奶粉中AGEs主要成分,并测得奶粉样品中CML含量为23.38～32.68 mg/(kg样品); CEL含量为12.67～19.76 mg/(kg样品); Pyr含量为84.56～97.36 mg/(kg样品)。本方法操作简便、快速、特异性好,可应用于食品中AGEs成分的筛查。

UPLC-MS/MS联合细胞膜固相色谱法分析补阳还五汤作用于神经元样PC12细胞的效应成分

目的：筛选补阳还五汤（BYHWT）中特异作用于神经元样PC12细胞的化学成分,为该复方的后续研究与应用提供实验依据。方法：采用固相萃取、神经元样PC12细胞细胞膜固相色谱法富集补阳还五汤特异结合神经元样PC12的效应成分,采用超高效液相色谱联用电喷雾飞行时间质谱（UPLC-MS/MS）鉴定特异结合成分,色谱条件为流动相甲醇-0.1%甲酸水溶液梯度洗脱,进样量3μL,流速0.3 mL·min^-1;质谱条件为雾化器压力和辅助气压力均为379.2 kPa,气帘气压力241.3 kPa,离子源温度500℃,喷雾电压-4.5 k V。结果：补阳还五汤特异结合神经元PC12细胞的化学成分可能为6-羟基山柰酚-3,6-二-O-葡萄糖苷,6-羟基山柰酚-3,6,7-三-O-葡萄糖苷和毛蕊异黄酮苷。结论：6-羟基山柰酚-3,6-二-O-葡萄糖苷,6-羟基山柰酚-3,6,7-三-O-葡萄糖苷和毛蕊异黄酮苷可特异结合神经元样PC12细胞,可能是补阳还五汤中发挥神经保护的效应成分。

细胞膜固相色谱法联合网络药理学探讨补阳还五汤促进缺血性脑卒中康复的作用

目的:采用细胞膜固相色谱法联合网络药理学探讨补阳还五汤促进缺血性脑卒中康复的作用机制。方法:细胞膜固相色谱法筛选补阳还五汤供试液中与海马神经元细胞特异性结合的成分;检索PubChem,PharmMapper,在线人类孟德尔遗传数据库(OMIM),GeneCards等数据库获取特异性结合成分的作用靶点及缺血性脑卒中疾病的靶点;借助STRING,Cytoscape 3.7.1软件绘制蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络;利用DAVID在线数据库对PPI网络中的核心靶点进行基因本体(GO)功能富集分析及京都基因与基因组百科全书(KEGG)生物途径分析,探讨补阳还五汤促进缺血性脑中风康复可能的作用机制。结果:通过细胞膜固相色谱法,筛选出了13个与海马神经元细胞特异性结合的成分;通过网络分析和靶点富集,显示作用靶点主要关联细胞增殖调控、蛋白质磷酸化、缺氧反应、血管生成等生物过程,对叉头转录因子(FoxO)信号通路、腺苷酸激活蛋白激酶(AMPK)信号通路、核转录因子-κB(NF-κB)信号通路、细胞凋亡通路等具有广泛的干预作用。结论:补阳还五汤可能通过调节FoxO,AMPK,NF-κB,细胞凋亡等信号通路促进缺血性脑中风的康复。

细胞膜固相色谱法筛选夏枯草抗人乳腺癌细胞效应成分

目的应用细胞膜固相色谱法(CMC)筛选夏枯草中抗人乳腺癌细胞MDA-MB-231的效应成分。方法采用人乳腺癌细胞MDA-MB-231与夏枯草提取液共培养,让人乳腺癌细胞MDA-MB-231的细胞膜上靶点与夏枯草提取液成分结合,洗去未结合的其他成分,再用磷酸盐缓冲液(pH=4.0)使细胞膜靶点失活,让结合于细胞膜上的夏枯草提取液成分解离,解离液经萃取后用液质联用仪进行测定与解析,并用CCK8法检测结合于细胞膜上的成分抗人乳腺癌细胞活性。结果通过细胞膜固相色谱法检测出结合于MDA-MB-231细胞膜上的成分有芦丁、迷迭香酸,CCK8法检测结果显示,芦丁、迷迭香酸均在实验浓度对MDA-MB-231细胞有明显抑制作用(P<0.05,P<0.01)。结论夏枯草中抗人乳腺癌细胞活性的效应成分为芦丁、迷迭香酸,芦丁、迷迭香酸可以作为夏枯草的质量控制成分。