miR-128-3p靶向TGF-β_(2)/JNK信号通路调控冠心病内皮细胞膜微粒及炎症因子的机制研究

目的探讨miR-128-3p靶向转化生长因子β_(2)/c-Jun氨基末端激酶(TGF-β_(2)/JNK)信号通路调控冠心病(CHD)内皮细胞膜微粒(EMPs)及炎症因子的机制。方法将60只大鼠随机分为正常组、模型组、miR-128-3p agomir组、NC agomir组、miR-128-3p inhibitor组、NC inhibitor组,每组10只,除正常组外,其余各组均建立CHD大鼠模型,miR-128-3p agomir组、NC agomir组、miR-128-3p inhibitor组、NC inhibitor组大鼠分别尾静脉注射miR-128-3p激动剂、NC agomir、miR-128-3p抑制剂、NC inhibitor,模型组和正常组大鼠尾静脉注射相同剂量的生理盐水。采用ELISA检测各组大鼠血清EMPs、一氧化氮(NO)、白细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-1受体拮抗剂(IL-1Ra)水平;采用HE染色观察各组大鼠心肌组织病理形态变化;采用蛋白质免疫印迹法检测各组大鼠心肌组织TGF-β_(2)、JNK、p-JNK蛋白水平。结果正常组大鼠各项检测指标均明显优于其他组,差异均有统计学意义(P<0.05);模型组、NC inhibitor组、NC agomir组心肌组织血清EMPs、NO、IL-6、TNF-α、TGF-β_(2)、JNK、p-JNK蛋白水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05);与模型组比较,miR-128-3p agomir组大鼠血清EMPs、IL-6、TNF-α水平下降最明显,而NO、IL-1Ra水平升高最显明显,差异均有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,miR-128-3p agomir组大鼠心肌组织病理形态改善明显,心肌组织TGF-β_(2)、JNK、p-JNK蛋白水平降低最明显,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论上调miR-323-3p能通过抑制TGF-β_(2)/JNK信号通路相关蛋白(TGF-β_(2)、JNK、p-JNK)水平,降低CHD大鼠EMPs及炎症因子水平,在CHD的发生和发展过程中可能具有保护作用。

内皮细胞膜微粒与动脉粥样硬化相关性研究进展

动脉粥样硬化是心脑血管疾病的致病基础,内皮细胞膜微粒在动脉粥样硬化过程中起到了重要作用,是血管内皮损伤及内皮功能障碍的重要生物学标记物之一。对内皮细胞膜微粒进行深入研究,发现具有疾病预测价值的内皮细胞膜微粒表型,可对心脑血管疾病的早期预防起到积极的作用。

冠心病患者外周血内皮细胞膜微粒、辅助性T细胞细胞因子水平变化及临床意义

目的探讨冠心病患者外周血内皮细胞膜微粒(EMPs)、辅助性T细胞细胞因子水平变化及临床意义。方法选择2012年8月至2015年7月该院收治的136例冠心病为研究对象,按照世界卫生组织标准分为急性心肌梗死组47例,不稳定型心绞痛组41例,稳定型心绞痛组48例;选择同期健康体检者40例为对照组,测定各组外周血EMPs、辅助性T细胞细胞因子白细胞介素2(IL-2)、白细胞介素10(IL-10)和γ干扰素(IFN-γ)水平,并进行统计分析。结果冠心病患者外周血EMPs、IL-2、IFN-γ水平均显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。急性心肌梗死组和不稳定型心绞痛组外周血EMPs、IL-2、IFN-γ水平均显著高于稳定型心绞痛组,差异有统计学意义(P<0.05);急性心肌梗死组以上各项指标亦高于不稳定型心绞痛组,差异有统计学意义(P<0.05)。EMPs与IL-2、IFN-γ水平呈正相关(r=0.716、0.753,P<0.05)。结论冠心病患者外周血EMPs、IL-2、IFN-γ水平升高,EMPs与IL-2、IFN-γ水平呈正相关,提示检测EMPs水平可以反映患者内皮功能、斑块炎性反应程度及斑块稳定情况。

细胞膜微粒CD31、CD54与酒精性股骨头缺血性坏死的关系:随机对照实验方案

背景:细胞膜微粒CD31、CD54可通过介导血管炎症反应、促凝、影响血管舒缩及促进血管内皮损伤导致股骨头内微血管损伤。文献已证实细胞膜微粒在激素性股骨头坏死中发挥重要作用,但是目前尚未见微粒与酒精性股骨头缺血性坏死相关性的研究。方法/设计:随机对照动物实验。健康雄性Wistar大鼠随机分为2组,模型组连续6个月灌胃给予烈性白酒制备酒精性股骨头缺血性坏死模型,空白对照组给予等量生理盐水灌胃。干预1-6个月,每月2组各随机取6只大鼠,分批取血,流式细胞仪检测血清细胞膜微粒CD31、CD54水平;取双侧股骨头,固定、脱钙、石蜡包埋切片,行苏木精-伊红染色光镜下进行空骨陷窝计数确定股骨头坏死情况,再行Verhoeff氏染色及MSB微血栓染色观察股骨头内微血管损伤及微血栓形成情况;并分析细胞膜微粒CD31、CD54水平与股骨头坏死、血管内皮损伤及微血栓形成的相关性。讨论:实验结果拟探讨细胞膜微粒CD31、CD54在酒精性股骨头坏死中的作用,更加深入探讨酒精性股骨头坏死发病机制,对其早期诊断、早期治疗提供新的理论依据,可能为其治疗提供一种新的靶点。伦理批准:实验方案经内蒙古医科大学动物实验伦理委员会批准,批准号为YKD2016154。大鼠的实验操作和取材遵循《关于善待实验动物的指导性意见》的规定,并与美国国立卫生与健康研究院的指南一致。

冠心病患者内皮细胞膜微粒及Th细胞因子水平变化及意义

目的探讨冠心病患者外周血内皮细胞膜微粒(EMPs)、辅助性T细胞(Th)细胞因子水平变化及临床意义。方法选择2011年7月至2013年7月孝感市中心医院收治的68例冠心病患者作为研究对象,按照世界卫生组织分类标准分为稳定型心绞痛(SA)21例,不稳定心绞痛(UA)22例,急性心肌梗死(AMI)25例;另选择同期在孝感市中心医院体检的健康人群30例作为健康对照组。比较4组受检者外周血EMPs、γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-2(IL-2)、IL-4、IL-10水平。结果 4组受检者中,SA组、UA组、AMI组外周血EMPs、IFN-γ、IL-2水平均显著高于健康对照组,其中UA组和AMI组水平又高于SA组,差异均有统计学意义(P<0.05);AMI组外周血EMPs显著高于UA组,差异有统计学意义(P<0.05)。相关性分析结果显示,EMPs与IFN-γ、IL-2呈正相关关系(P<0.05),而与IL-4、IL-10无明显相关性(P>0.05)。结论冠心病患者外周血EMPs水平能够反映患者内皮功能、斑块炎性反应程度及斑块稳定性;导致EMPs升高的原因可能与Th1/Th2细胞因子分泌异常有关。

细胞膜微粒对内皮细胞凋亡影响的研究

目的探讨体外内皮细胞膜微粒（endothelial microparticle,EMPs）对血管内皮细胞凋亡功能的影响。方法将内皮细胞自身产生的膜微粒与内皮细胞共培养,评估共培养下内皮细胞凋亡的变化。结果 7.66×10~4,7.66×10~3,7.66×10~2个/ml浓度的EMPs组（简称高、中、低浓度组）其内皮细胞caspase-3活性、磷脂酰丝氨酸（Phosphatidylserine,PS）活性表达均高于0个/ml浓度EMPs的对照组（P〈0.05）。PCR检测凋亡基因变化后,发现高、中浓度EMPs组APAF-1（apoptotic protease activating factor-1）基因表达较对照增高（P=0.003、P=0.000）,低浓度组没有明显差异（P=0.272）,AIF（apoptosis-inducing factor）基因方面,以Realtime-PCR方法测定,RQ值代表的是各组/对照组的基因表达量,则提示高中浓度EMPs组AIF表达较对照增高（RQ=1.836、RQ=1.324）,低浓度组则呈现下降（RQ=0.569）。结论内皮细胞膜微粒在体外可促进血管内皮细胞凋亡发生。7.66×10~4、7.66×10~3、7.66×10~2个/ml浓度EMPs可促进细胞Caspase-3、PS表达活性增强,7.66×10~4、7.66×10~3个/ml浓度EMPs可促进APAF-1、AIF凋亡基因表达,7.66×10~2个/ml浓度无明显促进作用。

内皮细胞膜微粒在慢性阻塞性肺疾病中的表达及意义

目的探讨内皮细胞膜微粒（EMPs）在慢性阻塞性肺疾病（COPD）中的表达及意义。方法选取本院2013年10月~2014年7月收治的30例COPD急性加重期患者作为AECOPD组,选取同期的30例COPD稳定期患者作为COPD稳定期组,选取同期的30例无COPD健康志愿者作为对照组,检测其EMPs水平。结果 COPD稳定期组与对照组的PECAM、VE-cadherin及E-selectin水平显著低于AECOPD组,差异有统计学意义（P〈0.01）。对照组的PECAM、VE-cadherin及E-selectin水平显著低于COPD稳定期组,差异有统计学意义（P〈0.01）。在30例COPD稳定期患者中,10例有反复急性加重病史。有急性加重病史组的PECAM、VE-cadherin、E-selectin水平显著高于无急性加重病史组,差异有统计学意义（P〈0.01）。结论 COPD急性加重期内皮损伤主要在肺毛细血管,高基线E-selectin、VE-cadherin及PECAM水平预示着COPD患者容易急性加重。EMPs可作为COPD急性加重的易感性标志物。

细胞饥饿及TNF-α干预后内皮细胞膜微粒对人脑微血管内皮细胞的影响

目的探讨饥饿及TNF-α刺激条件下,内皮细胞膜微粒(EMVs)对人脑微血管内皮细胞(HBMECs)增殖、迁移及血管生成功能的影响。方法体外培养HBMECs,分为PBS组、饥饿组、TNF-α组。于饥饿24 h后提取饥饿后产生的EMVs(s HB-MVs),于TNF-α刺激24 h后提取TNF-α刺激下产生的EMVs(αHB-MVs)。将s HB-MVs与αHB-MVs按照1×108个/m L、每孔10μL分别与饥饿组及TNF-α组HBMECs共培养,PBS组给予10μL PBS处理。采用MTT法测定各组HBMECs增殖能力,倒置显微镜下测定HBMECs迁移距离,观察血管形成数。结果饥饿组增殖能力高于PBS组(P<0.01),TNF-α组HBMECs增殖能力低于PBS组(P<0.01)。饥饿组迁移距离长于PBS组(P<0.05),TNF-α组迁移距离短于PBS组(P<0.01)。饥饿组血管生成数多于PBS组(P<0.01),TNF-α组血管生成数少于PBS组(P<0.01)。结论饥饿刺激下产生的EMVs可促进HBMECs增殖、迁移及血管生成功能,TNF-α刺激下产生的EMVs可抑制HBMECs增殖、迁移及血管生成功能。

衰老对内皮细胞膜微粒及内皮细胞功能的影响

目的探讨衰老对内皮细胞膜微粒（EMVs）及内皮细胞功能的影响。方法年轻（yEMVs）和年老EMVs（aEMVs）分别来源于年轻（3-5代）、年老（25-28代）人脑微血管内皮细胞（HBMECs）。年轻与老年HBMECs与yEMVs或aEMVs共培养,检测miR-34a表达、细胞增殖、血管生成能力及活性氧、一氧化氮水平。结果老年HBMECs释放的EMVs中miR-34a表达明显高于年轻HBMECs。aEMVs增加HBMECs表达miR-34a及活性氧生成,但抑制细胞增殖、血管生成及一氧化氮产生;yEMVs则有相反作用。结论衰老引起内皮细胞释放不同EMVs,影响内皮细胞功能,并且可能与EMVs所携带的miR-34a有关。

急性冠状动脉综合征患者经皮冠状动脉介入术后支架再狭窄与血浆内皮细胞膜微粒的相关性

目的探讨血浆内皮细胞膜微粒(EMPs)、血清白细胞介素-6(IL-6)和细胞间黏附分子-1(ICAM-1)与急性冠状动脉综合征患者经皮冠状动脉介入术(PCI)后支架再狭窄的相关性。方法回顾性分析2016年5月至2018年11月广东医科大学附属医院收治的200例急性冠状动脉综合征患者的临床资料,患者均顺利完成PCI手术。术后1 a对患者进行冠状动脉造影,根据PCI术后是否出现支架再狭窄分为再狭窄组(n=36)和非狭窄组(n=164),并对再狭窄组患者的狭窄程度进行分级。分别于PCI术前1 h及术后1 d、1周、1个月、6个月、1 a,采用酶联免疫吸附试验检测2组患者血清IL-6、ICAM-1水平;流式细胞仪检测2组患者血浆EMPs水平。分析血清IL-6、ICAM-1水平与血浆EMPs水平的相关性及血浆EMPs水平与急性冠状动脉综合征患者PCI术后支架再狭窄的相关性。结果PCI术前及术后1 d,再狭窄组和非狭窄组患者血清IL-6、ICAM-1及血浆EMPs水平比较差异均无统计学意义(P>0.05);术后1周、1个月、6个月、1 a,再狭窄组患者血清IL-6、ICAM-1及血浆EMPs水平高于非狭窄组(P<0.05)。术后1 a,再狭窄组患者中血管狭窄A级31例(86.11%),B级3例(8.33%),O级2例(5.56%)。急性冠状动脉综合征患者PCI术后血清IL-6、ICAM-1水平均与血浆EMPs呈正相关(r=0.033、0.530,P<0.05)。急性冠状动脉综合征患者PCI术后血浆EMPs水平与支架再狭窄的发生呈正相关(r=0.658,P<0.05)。结论急性冠状动脉综合征患者PCI术后血清IL-6、ICAM-1及血浆EMPs水平均升高,血浆EMPs水平与PCI术后支架再狭窄的发生有关。

内皮祖细胞膜微粒与脑卒中治疗相关性研究进展

血管内皮功能障碍与脑卒中的发生发展互为因果。内皮祖细胞膜微粒可以通过修复损伤的血管内皮来延缓脑卒中的进展和改善脑卒中患者的预后,为脑卒中的治疗提供了新的方法。本文就内皮祖细胞膜微粒与脑卒中治疗相关性进行综述。

内皮细胞膜微粒与缺血性脑卒中的相关性研究进展

脑卒中是全球成年人致残的首要原因,其中缺血性脑卒中(IS)占脑卒中病例的80%以上。内皮细胞膜微粒(EMVs)是内皮细胞(ECs)活化或凋亡时从其表面释放的小囊泡。近年来多项研究发现EMVs在IS的发生发展过程中扮演着重要角色。本综述将阐述和总结EMVs生物学特性及其在IS临床诊疗中的潜在临床价值。

血液和血液成分制剂中细胞膜微粒的形成和意义

细胞膜微粒（MP）是指大小为0．05～1．5Mm的包含来源细胞膜蛋白的脂质颗粒。MP循环于血液中，在多种病理情况下可见其升高。血浆中存在有来源于血液细胞、上皮细胞和其他类型细胞的多种MP。MP具有重要的生理学意义，可能参与细胞与细胞之间的相互作用，诱导细胞信号传导，甚至在不同种类的细胞之间传递受体。在血栓形成、炎症、肿瘤转移或对病原体的反应过程中，MP都具有重要病理学意义。由于MP存在于血浆和血液细胞制剂中，研究其在血液制剂制备和贮存过程中的释放，对临床输血安全具有重要意义。

细胞膜微粒对血管内皮细胞功能的影响

目的探讨细胞膜微粒（Mp）在激素相关性股骨头缺血坏死（ANFH）发生机制中所起的作用。方法选择体外培养的第3代人脐静脉内皮细胞（HUVEC）作为研究对象。从健康人、股骨头坏死患者和使用大剂量激素治疗的非股骨头坏死患者血液中分离出的细胞膜微粒作为刺激因子。将不同来源的细胞膜微粒与HUVEC共同培养一段时间后观察细胞形态学变化，并用流式细胞仪检测细胞培养基中膜微粒种类和数量的改变，反转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测内皮细胞凋亡基因的表达。结果倒置相差显微镜观察细胞：发现各组内皮细胞的形状、密度、生长速度和细胞核的形态差异无统计学意义。流式细胞仪分析显示，CD62E＋／CD31＋代表细胞活跃程度。共培养48h后，激素治疗的实验组CD62E＋／CD31＋明显低于对照组（P=0．035），其他各实验组和对照组差异无统计学意义（P〉0．05）。RT-PCR分析显示，fas／β-肌动蛋白代表凋亡基因的表达。激素性ANFH的实验组fas／β-肌动蛋白明显高于对照组（0．776±0．230〉0．669±0．148，P=0．006）。激素治疗的实验组高于对照组（0．914±0．226〉0．832±0．200，P=0．005）。其余各实验组和对照组之间差异无统计学意义（如：酒精性ANFH0．810±0．252〉0．781±0．194，P〉0．05）。结论使用激素患者的细胞膜微粒在体外有促进血管内皮细胞凋亡的作用。激素性股骨头坏死患者的细胞膜微粒在体外能够增加血管内皮细胞凋亡基因的表达，但是对内皮细胞释放膜微粒无明显影响。健康人和酒精性股骨头坏死患者的细胞膜微粒在体外对血管内皮细胞的凋亡无明显影响。

天舒片治疗后循环缺血合并高血压患者的临床疗效及其对内皮细胞膜微粒表达的影响

目的观察天舒片治疗后循环缺血合并高血压患者的临床疗效,探讨其对内皮细胞膜微粒(EMPs)表达的影响。方法选取2015年1月—2017年1月西南医科大学附属医院神经内科收治的后循环缺血合并高血压患者100例,采用随机数字表法分为对照组和治疗组,每组50例。对照组患者给予常规治疗,治疗组患者在对照组基础上给予天舒片治疗;两组患者均连续治疗2周。比较两组患者临床疗效,治疗前后眩晕程度评定量表评分、椎-基底动脉平均血流速度、外周血EMPs表达情况;观察两组患者治疗期间不良反应发生情况。结果治疗组患者临床疗效优于对照组(P<0.05)。治疗前两组患者眩晕程度评定量表评分、椎-基底动脉平均血流速度比较,差异无统计学意义(P>0.05);治疗后治疗组患者眩晕程度评定量表评分低于对照组,椎-基底动脉平均血流速度快于对照组(P<0.05)。治疗前两组患者外周血CD_(31)^+/CD_(42)b^-微粒、CD_(144)^+微粒、CD_(62)E^+微粒分数比较,差异无统计学意义(P>0.05);治疗后治疗组患者外周血CD_(31)^+/CD_(42)b^-微粒、CD_(144)^+微粒分数低于对照组,而外周血CD_(62)E^+微粒分数高于对照组(P<0.05)。治疗期间治疗组患者出现2例轻微胃部不适。结论天舒片治疗后循环缺血合并高血压患者的临床疗效确切,可有效减轻患者眩晕程度,改善椎-基底动脉血流,调节EMPs的表达,且安全性较高。

白细胞膜微粒在动脉粥样硬化发生发展的作用

白细胞膜微粒是白细胞在活化、损伤或凋亡时,从其表面释放的富含脂质的膜囊泡,其在内皮细胞损伤、血管功能障碍、氧化应激、炎症反应及细胞之间的信号传导等方面发挥重要作用。近来研究发现,在动脉粥样硬化基础上发生的心脑血管疾病、血栓栓塞性疾病、代谢性疾病和恶性高血压病等疾病中白细胞膜微粒明显增高。文中就白细胞膜微粒对动脉粥样硬化发生发展的作用进行概述。

负载肿瘤干细胞膜微粒抗原的半相合异基因树突细胞-细胞因子诱导的杀伤细胞治疗T淋巴母细胞淋巴瘤一例并文献复习

目的观察负载肿瘤干细胞膜微粒抗原的半相合异基因树突细胞-细胞因子诱导的杀伤细胞(DC-CIK)治疗T淋巴母细胞淋巴瘤(T-LBL)的疗效。方法回顾性分析攀枝花学院附属医院收治的1例应用负载膜微粒抗原的半相合异基因DC-CIK治疗的T-LBL患儿的临床资料,并复习相关文献。结果该患儿经颈部淋巴结活组织检查确诊为T-LBL,入院时血常规无异常,影像学示浅表及深部淋巴结肿大,骨髓淋巴母细胞0.230,脑脊液未见异常,诊断为T-LBLⅣ期。予改良BFM-90方案化疗及规范鞘内注射治疗,骨髓完全缓解后给予4个疗程共12次输注负载肿瘤干细胞膜微粒的半相合异基因DC-CIK。细胞治疗11个月后复查骨髓淋巴母细胞为0.095。至截稿前随访患儿仍正常学习、生活。结论T-LBL是一种高侵袭性的淋巴瘤,预后差。规范化疗联合负载肿瘤干细胞膜微粒的异基因DC-CIK可作为T-LBL治疗的一种新选择。

干细胞来源的细胞外囊泡影响肝再生的研究进展

严重或持续肝损伤最终可导致肝功能衰竭,肝损伤修复机制的研究备受关注。细胞外囊泡(extracellular vesicles,EVs)是由细胞分泌或从细胞膜上脱落的囊泡小体,其可向靶细胞传递各种蛋白质和核酸等,调控靶细胞的多种生物学行为,是细胞间信息交流的重要载体。干细胞来源的EVs可向肝组织细胞传递多种蛋白质和核酸,调节肝细胞和肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSCs)的分裂增殖、凋亡等,对肝再生修复具有重要意义。现就干细胞来源的EVs对肝再生的影响作一概述,以加深对该EVs影响肝再生作用机制的了解,为临床治疗肝损伤提供新的思路。

激素性股骨头坏死血小板和内皮细胞源性膜微粒数量的变化及药物干预实验研究

目的探讨在糖皮质激素诱发血液高凝、易栓状态导致的股骨头缺血坏死发病过程中,血小板和内皮细胞源性膜微粒(EMPs)的数量的变化,同时在给予干预药物抗骨增生胶囊情况下,观察上述膜微粒的数量变化。方法给健康成年新西兰兔肌注射甲泼尼龙,同时对照组肌注相同剂量的生理盐水,干预组连续给予干预药物,于注射前、注射后第1、3、7、14天和第28天各抽静脉全血,使用流式细胞仪对CD31+/CD42b-和CD31+/CD42b+的膜微粒进行定量测定。结果给予激素肌注后,CD31+/CD42b-和CD31+/CD42b+的膜微粒显著升高(P<0·05),分别在第7天和第14天达峰值,而干预组的膜微粒在激素和干预药物的共同作用下虽有波动,但未出现统计学差异。结论应用大剂量糖皮质激素后,兔体内血小板和内皮细胞源性膜微粒数量显著增加,干预药物能够抑制微粒的产生,或许有助于预防或避免激素诱发股骨头缺血坏死的发生。

人工关节置换与深静脉血栓的生物标志物

背景:深静脉血栓是人工关节置换的常见及严重并发症,在临床上超声及静脉造影被广泛应用于深静脉血栓的诊断,但是他们各有缺点。目的:寻找一种更加合适无创的早期诊断深静脉血栓的生物标记物。方法:以"Thrombosis,DVT,Biomarke,rTotal Joint Arthroplasty,D-dimer,FactorⅧ,Thrombin Generation Fibrin Monomer,P-selectin,Inflammatory Cytokines,Microparticles,Leukocyte Count,Genetic factors,Micro RNAs"为检索词,应用计算机在PubM ed数据库检索1995年1月至2015年3月的相关文献,并进行筛选、归纳和总结。结果与结论:共纳入66篇符合标准文献。将诊断深静脉血栓的生物标志物分为凝血相关标志物、炎性标志物及基于分子生物学及遗传学三大层面,并阐述其在诊断治疗中的机制与作用,以求寻找经济、安全、临床可以广泛应用且准确度和敏感度更佳的生物标志物,为早期预测诊断深静脉血栓提供理论基础。