血小板T细胞活化抗原1与移植肾急性排斥反应的相关性

目的 :观察肾移植术后血清可溶性血小板T细胞活化抗原 1 (sPTA1 )水平及细胞膜性血小板T细胞活化抗原 1 (mPTA1 )的表达与排斥反应 (AR)的相关性。 方法 :选取 1 7例围手术期同种尸体肾移植患者以及 2例术后超过 1年的AR的患者 ,根据患者的不同病况每周采取血样 ,采用夹心ELISA法测定血清sPTA1水平 ,流式细胞术检测淋巴细胞mPTA1表达 ,对明确有排斥反应、可疑有排斥反应以及不能区分排斥反应的患者在B超引导下行移植肾活检穿刺病理检查。 结果 :术前sPTA1水平及mPTA1表达与对照无显著差异 (P >0 0 5)。术后第 1天sPTA1即有高水平的表达 ,与对照组差异显著 (P <0 0 5)。 1 9例尸体肾移植患者中经病理证实的 5例排斥反应患者sPTA1显著升高 ,mPTA1表达增强 ,与对照组差异非常显著 (P <0 0 1 )。经激素冲击治疗后 ,血清sPTA1下降 ,mPTA1表达下降。而且sPTA1水平变化早于AR的临床表现 ,持续时间较长。 结论 :PTA1可以作为移植物AR的预警和监测指标 ,与病理检查的结果有较好的一致性 ;

人血小板/T细胞活化抗原PTA1/Ig融合蛋白表达载体的构建、表达及鉴定

目的：获得人血小板／Ｔ细胞活化抗原１（ｐｌａｔｅｌｅｔａｎｄＴｃｅｌａｃｔｉｖａｔｉｏｎａｎｔｉｇｅｎ１，ＰＴＡ１）胞膜外区与人ＩｇＧ１Ｆｃ段融合蛋白，为ＰＴＡ１配体的鉴定及其功能的研究提供有力的工具。方法：针对人ＰＴＡ１ｃＤＮＡ序列设计３段引物，通过反转录、半套式ＰＣＲ方法从活化Ｊｕｒｋａｔ细胞中扩增出ＰＴＡ１胞膜外区基因片段，并将其克隆入融合蛋白表达载体ｐＩＧ中，通过酶切、ＰＣＲ及序列测定鉴定重组表达载体。重组载体通过ＤＥＡＥｄｅｘｔｒａｎ法转染ＣＯＳ７细胞，经夹心ＥＬＩＳＡ及亲和层析、ＳＤＳＰＡＧＥ鉴定融合蛋白的表达及免疫学活性。结果：经序列测定后证实重组表达载体含有正确的ＰＴＡ１胞膜外区序列及剪接供体序列，转染ＣＯＳ７细胞后，通过亲和层析纯化证实融合蛋白的Ｍｒ为８３０００，并能被抗ＰＴＡ１胞膜外区单抗及抗人ＩｇＧＦｃ的单抗同时识别。结论：ｐＰＴＡ１／Ｉｇ融合表达载体的构建及表达成功，为ＰＴＡ１的功能及配体（ＰＴＡ１Ｌ）的研究打下了良好的基础。

人血小板T细胞活化抗原PTA1基因探针的制备及初步鉴定

目的：制备地高辛标记的PTA1基因探针，以用于PTA1表达及功能的研究．方法：根据新克隆的人PTA1基因序列，设计针对PTA1分子不同结构域的引物，通过PCR扩增、地高辛标记的方法制备基因探针．结果：细胞原位杂交方法证实这种探针具有较高的敏感性和特异性．结论：PTA1基因探针的制备为进一步研究PTA1分子的分布、表达及功能打下了较好的基础．

地高辛标记的血小板T细胞活化抗原1cRNA探针的制备与鉴定

目的制备用地高辛 (digoxigenin ,Dig)标记的血小板T细胞活化抗原1(plateletandTcellactivationantigen1,PTA1)cRNA探针。方法构建重组质粒 pGEM 3ZF( +) PTA1 ,并做序列分析证实PTA1基因的插入方向正确后 ,用EcoRI消化得到线性DNA片段 ,再用SP6RNA聚合酶转录合成带有Dig标记的高比活度的单链cRNA探针。结果经斑点杂交证实 ,该探针敏感性高、特异性强。结论地高辛标记PTA1cRNA探针的制备 ,为进一步研究PTA1mR NA在组织、细胞的表达和分布提供了有效的工具。

血小板/T 细胞活化抗原1(PTA1)胞膜外区基因片段的克隆及其融合蛋白的表达

目的 克隆血小板／ Ｔ 细胞活化抗原１ （ｐｌａｔｅｌｅｔ ａｎｄ Ｔｃｅｌｌ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ａｎｔｉｇｅｎ １ ， Ｐ Ｔ Ａ１）胞膜外区基因片段，构建、表达、纯化 Ｐ Ｔ Ａ１ 胞膜外区与 Ｉｇ Ｇ Ｆｃ 融合蛋白，用于 Ｐ Ｔ Ａ１ 配体鉴定的研究。方法 针对人 Ｐ Ｔ Ａ１ ｃ Ｄ Ｎ Ａ 设计引物，通过反转录、半套式 Ｐ Ｃ Ｒ 从 Ｔ Ｐ Ａ 活化的 Ｊｕｒｋａｔ 细胞中扩增 Ｐ Ｔ Ａ１ 胞膜外区基因片段，并进行序列测定，而后将其进一步克隆入融合蛋白表达载体ｐ Ｉ Ｇ 中，构建重组表达载体ｐ Ｐ Ｔ Ａ１／ Ｉｇ ，经 Ｄ Ｅ Ａ Ｅ Ｄｅｘｔｒａｎ 法转染 Ｃ Ｏ Ｓ７ 细胞后通过亲和层析纯化，融合蛋白经 Ｓ Ｄ Ｓ Ｐ Ａ Ｇ Ｅ、夹心 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 及 Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ 鉴定。结果 获得７９３ｂｐ Ｐ Ｔ Ａ１ 胞膜外区基因片段，构建成功 Ｐ Ｔ Ａ１／ Ｉｇ 融合蛋白表达载体，制备了可用于纯化 Ｐ Ｔ Ａ１／ Ｉｇ 的亲和层析柱，建立了检测融合蛋白的夹心 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 方法。经 Ｓ Ｄ Ｓ Ｐ Ａ Ｇ Ｅ、夹心 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 及 Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ 证实融合蛋白在 Ｃ Ｏ Ｓ７ 细胞中获得表达，相对分子质量为８３ ×１０３ ，表达效率约为１ ．３ ｍｇ／ ?

血小板T细胞活化抗原1分子在NK细胞上的作用研究

目的 研究血小板T细胞活化抗原 1(PTA1)分子在NK细胞杀伤过程中的作用。方法 应用重导向细胞毒实验 ,探讨了PTA1分子对混合淋巴细胞反应中活化的NK细胞杀伤作用的影响。结果 在重导向细胞毒实验中 ,PTA1McAb能明显上调NK细胞及CTL的杀伤活性。结论 PTA1分子在NK细胞上具有刺激性受体的功能。

血小板/T细胞活化抗原1融合蛋白对内皮细胞表达的阻断作用

目的探讨用血小板/T细胞活化抗原1(PTA1/Ig,亦简称CD226)融合蛋白预作用血小板后观察其对内皮细胞的黏附的阻断作用。方法妊娠高血压综合征患者血清与血管内皮细胞进行共培养,再与血小板进行粘附试验阻断实验,用间接免疫荧光法进行标记,用流式细胞仪检测受刺激后血管内皮细胞上血小板/T细胞活化抗原1的表达。结果妊娠高血压综合征患者和正常孕妇血清刺激的血管内皮细胞表达CD226的百分率分别为15.51%和7.15%,妊娠高血压综合征患者组显著高于对照组(P<0.001)。PTA1/Ig融合蛋白预作用于活化血小板后可明显地阻断其与内皮细胞的黏附,阻断率为48.9%,明显高于PTA1/Ig融合蛋白预作用于活化内皮细胞后对两者的阻断作用(阻断率为13.6%)。结论妊娠高血压综合征患者血清具有刺激血管内皮细胞表达CD226的作用,内皮细胞与血小板的黏附过程中以血小板表面的T细胞活化抗原1(PTA1)配体与内皮细胞表面的PTA1分子相互作用为主。

重组人血小板生成素可能通过调节免疫负调控因子水平治疗免疫性血小板减少性紫癜

目的观察使用重组人血小板生成素(rh TPO,特比澳)前后免疫性血小板减少性紫癜(ITP)患者血浆IL-10,CTLA-4,TGF-β1变化情况,并与肾上腺皮质激素治疗前后ITP患者以及正常人血浆IL-10,CTLA-4,TGF-β1含量的比较。方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定21例ITP患者(其中11例使用rh TPO治疗,10例使用肾上腺皮质激素治疗)治疗前、后及15名正常对照者血浆IL-10,CTLA-4,TGF-β1水平,并对检测结果进行分析。结果 ITP患者血浆中IL-10、CTLA-4、TGF-β1水平明显低于正常人;经rh TPO或肾上腺皮质激素治疗后IL-10,CTLA-4,TGF-β1水平均有明显升高,并恢复至正常人水平;rh TPO及肾上腺皮质激素升高ITP患者血浆中IL-10,CTLA-4,TGF-β1水平的程度无差别。结论 ITP患者IL-10,CTLA-4,TGF-β1水平低于正常人,经治疗后水平可恢复正常;单用rh TPO后三种细胞因子水平显著升高,提示rh TPO可能有免疫调节的作用。

重组血小板生成素与小剂量人血丙种球蛋白治疗特发性小儿血小板减少性紫癜的免疫学疗效比较

目的比较重组血小板生成素与小剂量人血丙种球蛋白治疗特发性小儿血小板减少性紫癜的免疫学作用。方法将300例特发性小儿血小板减少性紫癜患儿随机分为A、B、C组各100例。A组给予重组血小板生成素治疗,B组给予糖皮质激素治疗,C组给予糖皮质激素联合小剂量丙种球蛋白治疗。对比观察3组患儿治疗前后白介素-10(IL-10)、细胞毒T淋巴细胞相关抗原4(CTLA-4)、转化生长因子-β1(TGF-β1)水平变化。结果治疗前3组患者血清IL-10、CTLA-4和TGF-β1水平差异均无统计学意义(P>0.05)。治疗后3组患者血清IL-10、CTLA-4和TGF-β1水平均有上升,且A、C组上升幅度均大于B组,差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗后A组血清IL-10、CTLA-4和TGF-β1水平虽然均高于C组,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论重组血小板生成素和小剂量人血丙种球蛋白均可改善特发性小儿血小板减少性紫癜的免疫功能。

小鼠CD226(PTA1)的基因克隆及其异型

目的 :克隆小鼠CD2 2 6 (PTA1)分子。方法 :从GenBank中检索出与人CD2 2 6分子在氨基酸水平上有 5 1%同源性的EST序列 ,设计并合成特异性引物 ,采用快速扩增cDNA末端的RACE方法 ,从 4周龄BALB c小鼠的胸腺中扩增小鼠CD2 2 6cDNA序列。结果 :克隆出完整的小鼠CD2 2 6cDNA ,长 2 2 2 3bp ,其中开放读框为 10 0 2bp ,编码含信号肽在内的 333个氨基酸 ,属免疫球蛋白超家族分子 ,较人CD2 2 6分子少了 3个氨基酸 ,在氨基酸水平上有 5 3%的同源性。此外 ,还克隆了小鼠CD2 2 6分子的 3种异型。结论 :成功克隆出小鼠CD2 2 6 (PTA1)cDNA ,并发现 3种异型 ,全面探讨该分子生物学特性 ,进行体内功能实验 ,基因敲除小鼠和转基因小鼠的研究提供了坚实的基础。

CD226分子参与脐静脉内皮细胞的功能

目的 :观察人血小板T细胞活化抗原 1 (CD2 2 6 )分子所参与的内皮细胞的功能 .方法 :采用3 H TdR掺入、51 Cr黏附实验、PI染色结合流式细胞仪技术观测CD2 2 6分子对体外培养人脐静脉内皮细胞 (HUVEC)增殖、粘附、细胞周期及凋亡的影响 .结果 :CD2 2 6分子参与HUVEC的粘附功能 ,但CD2 2 6mAb(LeoA1 )对HUVEC的增殖、细胞周期及细胞凋亡均无显著影响 .结论 :CD2 2 6分子是活化HUVEC表面一种新的粘附分子 。

PTA1单克隆抗体诱导人血小板活化聚集和胞浆Ca^(2+)水平的升高

目的：探讨血小板和Ｔ细胞活化抗原１（ＰＴＡ１）诱导人血小板活化聚集和对血小板胞浆Ｃａ２＋水平影响的机制。方法：血小板聚集与ＡＴＰ释放试验及血小板胞浆Ｃａ２＋水平测定。结果：ＰＴＡ１单克隆抗体（ＭｃＡｂ）体外可诱导人血小板活化聚集，ＥＧＴＡ与ＰＧＩ２可以完全抑制ＰＴＡ１ＭｃＡｂ诱导的血小板活化聚集，ＰＴＡ１ＭｃＡｂＦ（ａｂ′）２对ＣＤ９或ＣＤ４１诱导的血小板活化聚集无明显影响。ＰＴＡ１ＭｃＡｂ促进血小板胞浆Ｃａ２＋水平升高。结论：ＰＴＡ１ＭｃＡｂ的刺激作用与血小板膜表面Ｆｃ受体和ＣＤ４１／ＣＤ６１（ⅡｂⅢａ）复合物有关，促进血小板胞浆Ｃａ２＋水平升高为胞外Ｃａ２＋内流与胞浆内Ｃａ２＋储存释放共同作用所致。

系统性红斑狼疮患者T淋巴细胞PTA1表达的研究

目的 研究血小板和T细胞活化抗原 1(PTA1)在系统性红斑狼疮 (SLE)外周血T淋巴细胞的表达及其与SLE活动相关性 ,探索活化T细胞在SLE发病中的作用。方法 应用双色直接荧光标记 ,流式细胞仪分析 2 7例 (其中活动期 13例、非活动期 14例 )SLE患者和 30名健康志愿者的CD3、CD4、CD8淋巴细胞 ,在植物血凝素 (PHA)刺激下PTA1(CD2 2 6 )表达 ,同时检测SLE患者抗dsDNA抗体、C3和C4补体 ,疾病活动度用SLEDAI记分。结果 SLE患者组CD3、CD4、CD8淋巴细胞上PTA1表达率均高于正常对照组 ,CD3上PTA1表达两组差异有显著性 (P <0 0 1) ;活动期SLE组CD3、CD4、CD8细胞上PTA1表达均高于正常对照组和非活动期SLE组 (P <0 0 1) ,而非活动期SLE组与正常对照组差异无显著性 (P >0 0 5 ) ;SLE患者CD3、CD8细胞PTA1表达与SLEDAI、抗dsDNA抗体之间呈正相关 ,与C3、C4补体水平呈负相关 ,CD8细胞PTA1表达与SLEDAI、抗dsDNA抗体、C3、C4补体水平呈直线相关 (P <0 0 5 )。结论 SLE患者存在T细胞亚群异常活化 ;活动期SLE淋巴细胞PTA1表达增高 ;SLE患者CD8细胞PTA1表达异常与SLEDAI、抗dsDNA抗体、C3和C4补体之间有明显相关 ,CD8细胞活化程度与SLE疾病程度有关 。