二甲亚砜或蔗糖预处理对TAT体外穿膜效率的影响

目的研究二甲亚砜(DMSO)或蔗糖预处理细胞对TAT体外穿膜效率的影响。方法人工合成荧光标记多肽TAT-FITC和无意义肽NCO-FITC,将其作用于体外培养的人宫颈癌细胞株Caski、人肝癌细胞株HepG2及非洲绿猴肾细胞株COS7。荧光显微镜观察不同DMSO或蔗糖预处理后,TAT-FITC的穿膜效率及其在细胞内的定位;流式细胞仪及荧光酶标仪定量细胞对荧光标记短肽的摄取;10%DMSO或0.5mol·L-1蔗糖预处理后,荧光酶标仪定量内吞抑制剂NH4Cl和阿米洛利对荧光标记短肽摄取的影响。结果10%DMSO或0.5mol·L-1蔗糖预处理细胞后,TAT-FITC可高效进入细胞,且在胞浆、胞核中均匀分布,胞核中浓度高于胞浆;未见NCO-FITC穿膜进入细胞。10%DMSO预处理后,加入TAT-FITC的细胞荧光强度较0.5mol·L-1蔗糖预处理强,有显著差异(P<0.05)。加入2种抑制剂后,10%DMSO或0.5mol·L-1蔗糖预处理的、加入TAT-FITC的Caski细胞荧光强度均明显减弱(P<0.05)。结论10%DMSO或0.5mol·L-1蔗糖预处理均可提高TAT的体外穿膜效率,且预处理后TAT-FITC的穿膜途径仍为细胞内吞。