细胞膜色谱固定相的制备条件优化研究

目的:对细胞膜色谱固定相的制备条件进行了优化,在此基础上提出了标准操作流程。方法:以兔红细胞为原材料,使用超声破碎法获取细胞膜,减压震荡法进行细胞膜固定化,通过BCA法测定细胞膜蛋白含量,研究细胞膜加入量、真空度、静置时间和载体材料对细胞膜色谱法的影响。结果:确定制备细胞膜色谱固定相的最优条件是细胞膜蛋白加入量为80μg(膜蛋白)/mg(硅胶),真空度为0.075 MPa,静置时间为14 h,并采用多孔硅胶。结论:通过试验考查出了细胞膜色谱固定相制备的最优条件和标准操作流程。

血小板细胞膜色谱构建及柱温研究

目的建立血小板细胞膜色谱模型,考察不同温度下抗血小板聚集药物在该色谱柱上的保留行为,模拟药物在正常和发热病理状态下与血小板的相互作用。方法通过物理吸附法.构建血小板细胞膜色谱固定相,湿法装柱,制成血小板细胞膜色谱柱,BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白含量,Na^+、K^+-ATPase检测试剂盒测定生物活性,应用该色谱模型,考察色谱柱的特异性及在35.0~42.0℃温度范围下药物的保留特性。结果构建的血小板细胞膜色谱模型其血小板ATP酶活性值为0.214,固定前血小板膜蛋白质量浓度为0.3409 mg·mL^-1,固定后血小板膜蛋白质量浓度为0.0805 mg·mL^-1。3个抗血小板聚集药物氯吡格雷,双嘧达莫和西洛他唑在血小板细胞膜色谱柱和空白硅胶柱上保留特征有较大差异,36.0℃时3个药物在血小板细胞膜色谱柱上的保留时间均为最大值,然后随温度的升高,保留时间均呈下降的趋势。结论成功构建了血小板细胞膜色谱模型,并首次研究了不同温度下抗血小板聚集药物在该色谱模型上的保留特性,模拟了正常和发热体温时抗血小板聚集药物的色谱保留行为。