参苓白术散通过自噬调节肠隐窝上皮细胞损伤的作用机制

目的探究参苓白术散通过细胞自噬调节脂多糖(LPS)诱导的肠隐窝上皮细胞(IEC-6)损伤的作用与机制。方法 IEC-6细胞分组:空白组、LPS模型组、LPS+参苓白术散含药血清低、中、高(5%、10%、20%)剂量组、自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤组(3-MA)、自噬诱导剂雷帕霉素靶蛋白(mTOR)阻断剂雷帕霉素组(Rapamycin)。采用MTT方法检测LPS的细胞毒性、检测参苓白术散含药血清浓度梯度活性;通过ELISA试剂盒测定IEC-6细胞上清液中白介素1β(IL-1β)、白介素8(IL-8)、白介素10(IL-10)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的浓度;通过RT-PCR法检测ATG5、ATG12、ATG13、ATG16的mRNA水平;使用RFP-GFP-LC3腺病毒转染IEC-6细胞,测定IEC-6细胞自噬体的数目。结果 LPS浓度为100μg·mL-1时,IEC-6细胞抑制率为29.3%,以该浓度进行后续实验;不同浓度参苓白术散含药血清对细胞活力均无明显作用;模型组与空白组比较,促炎因子IL-1β、IL-8和TNF-α浓度上升,抑炎因子IL-10浓度下降,ATG5、ATG13、ATG16L2 mRNA水平上升(均P <0.05),模型组中没有明显的自噬体斑点形成;含药血清组与模型组比较,促炎因子IL-1β、IL-8和TNF-α浓度下降,抑炎因子IL-10浓度上升,ATG5、ATG13、ATG16L2 mRNA水平下降(均P <0.05),ATG12和ATG16L1 mRNA水平无显著性差异(P> 0.05),含药血清组和自噬诱导剂Rapamycin组自噬斑点的形成明显增多;自噬抑制剂3-MA组与模型组比较,自噬体斑点没有差别。结论参苓白术散含药血清能抑制促炎症因子IL-1β、IL-8和TNF-α的释放,增加抑炎症因子IL-10的释放,减轻IEC-6细胞的炎症损伤,这一过程可能与调控自噬相关通路Beclin1有关。