极谱法测量大鼠脑线粒体细胞色素氧化酶活性的改良方法

细胞色素氧化酶,即呼吸链复合体Ⅳ,它位于呼吸链的最末端,催化细胞色素C(cytochrome C,cyt.c)的氧化,同时驱动ATP的合成,它也是线粒体的标志酶,其酶活性的发挥对于维持线粒体结构和功能以及细胞能量的产生有非常重要的意义.虽然国内外有关细胞色素氧化酶活性测量的报道很多,但运用较广的方法主要有三种:紫外分光光度法、极谱法和组织化学法,紫外分光光度法根据cyt.c的还原型和氧化型有不同的光吸收这一原理,通过测量还原型cyt.c的氧化率来反映细胞色素氧化酶的活性;极谱法是根据还原型cyt.c被酶氧化的同时消耗O2这一原理,通过测量反应体系中氧耗率来反映酶活[1].

同步辐射圆二色谱法研究Fe_3O_4纳米颗粒对细胞色素C结构的影响

四氧化三铁纳米颗粒(Fe3O4-NPs)在生物医学领域有着广泛的应用。通过同步辐射真空紫外圆二色谱(SRCD)和紫外可见(UV-Vis)吸收谱技术研究了Fe3O4纳米颗粒的粒径(10 nm和40 nm)对细胞色素C(Cyt c)结构的影响。结果表明,随着Fe3O4-NPs颗粒物浓度的增大,Cyt c在408 nm处的吸光度值逐渐下降。SRCD结果显示Cyt c与Fe3O4-NPs作用后,蛋白的α螺旋含量减少,β折叠含量增加;Fe3O4-NPs与Cyt C的作用强度具有尺寸依赖性,小尺寸的Fe3O4-NPs作用更为明显。

基于细胞膜色谱技术的中药复杂体系目标物筛选分析装备

中药是临床防治疾病的有效药物。由于中药物质基础的复杂性以及成药过程的多环节因素,实现中药全面质量控制的难度相对较大。如果能够在明确中药有效物质与有害物质的基础上,在成药过程中重点控制其含量和限量,则能在很大程度上“纲举目张”,有效保障中药质量的可控性和重复性。当前,我国药物研发源头创新技术不足,研发效率有待提升,缺乏高通量的精准分析装备。我国医药分析装备长期依赖进口,高端智能分析装备缺乏,亟需构建“医药智能分析系统”。本项目在国家自然科学基金重大仪器研制项目的资助下,利用细胞膜色谱技术的原创性与独创性,结合生物工程技术和人工智能技术,研制二维细胞膜色谱(2D/CMC)分析仪,对成型的“2D/CMC-中药药效物质分析仪”和“2D/CMC-中药注射液类过敏物分析仪”开展了示范应用,提升了中药药效物质和过敏组分的筛选、发现的效率,并同步进行定性、定量分析,为中药提质增效提供高效分析工具。

基于细胞膜色谱技术的鹿角胶肽段筛选及鉴定

利用细胞膜色谱/超高相液相色谱-质谱(CMC/UPLC-MS)方法对中药饮片鹿角胶中的有效成分进行筛选,结合Maxquant软件、Perseus软件以及Uniprot数据库对所得谱图进行数据分析,使用Protein Data Bank对分析结果进行结构鉴定,同时采用生物信息学平台对这些肽段的生物活性、不良反应、相对分子质量、等电点、不稳定指数等基本分子特性进行预测。鉴定肽段活性概率为0.09,无毒,无溶血性,有致敏性,相对分子质量为1541.68,肽链长度为14,亲水性为良好,等电点值为3.92,不稳定性指数为34.39。该方法为快速筛选鉴定具有药理作用的多肽和蛋白质等活性成分提供了一条可行的研究思路。

细胞膜色谱技术在中药活性成分筛选中的应用新进展

细胞膜色谱(CMC)是一种发展迅速的新兴仿生色谱技术,该技术将活性表征与色谱分离相结合,克服了传统“分离-评价”模式的缺点,凭借其在线、高通量、高灵敏度、自动化等多种方法学优势,在中药活性成分筛选研究中备受关注。通过对CMC在中药抗肿瘤、抗类过敏、抗心血管疾病、抗骨质疏松、抗炎镇痛、抗病毒、抗前列腺增生等有效成分及中药注射剂致敏成分筛选中的最新研究进展(2018-2023年)进行综述,旨在为未来更多中药相关活性成分的高通量筛选提供方法学参考依据,同时为创新药物发现、药效作用机制研究、中药及其制剂的质量控制提供参考。

基于生物信息学鉴定CCNB2为肾嫌色细胞癌进展的关键基因

本研究旨在通过生物信息学方法筛选与肾嫌色细胞癌(Chromophobe renal cell carcinoma, chrcc)相关的生物标志物,作为预测chrcc预后的关键基因。GSE15641数据集从Gene Expression Omnibus (GEO)数据库中获取,共鉴定出1153个差异表达基因(DEGs)。随后,检测差异表达基因进行基因本体(GO)注释和京都基因基因组百科全书(KEGG)途径富集分析。此外,利用Cytoscape软件构建蛋白–蛋白相互作用(PPI)网络并可视化鉴定关键基因,包括KRAS、EGFR、EHHADH和CCNB2,根据Kaplan-Meier (K-M)生存分析,CCNB2是唯一重要的核心基因。根据我们的研究结果,CCNB2在The Cancer Genome Atlas(TCGA)-chrcc患者中的表达明显高于正常样本,并且CCNB2在癌症组织中的高表达与不良的临床病理因素有关。CCNB2高表达组与低表达组相比,总生存期(OS)和无进展间期(PFI)明显较差。同时,免疫浸润分析显示CCNB2表达与chrcc患者Th2细胞富集水平呈正相关,CCNB2表达与细胞毒性细胞和DC细胞呈负相关。最后,根据包括CCNB2基因在内的基因集富集分析(Gene Set Enrichment Analysis, GSEA)富集结果,肝癌(HCC)亚类与乳腺癌(BC)的分类存在显著差异。在目前的工作中,CCNB2可以被认为是chrcc的预测性分子标记物和潜在的治疗靶点。

104例肾嫌色细胞癌的临床分析

目的探讨肾嫌色细胞癌的临床特点、治疗方式的选择及患者预后生存情况。方法回顾性分析陆军军医大学第二附属医院2012年1月至2022年1月收治的104例经术后病理诊断为肾嫌色细胞癌(chRCC)的患者临床资料。所有患者均行手术治疗,对患者的影像学资料、病理资料及术后生存情况进行分析和总结。结果104例患者中有67例行CT检查,报告显示平扫期多数呈等密度或稍高密度软组织影,肿瘤内若存在坏死灶,则可能出现混杂密度影,部分肿瘤内有钙化,增强期大多呈现轻度或中度不均匀强化;4例行MRI检查,强化时均呈不均匀强化,静脉期强化均减退;病理结果示chRCC主要包括两种细胞类型,一种为体积较大的多角形半透明细胞,另一种为小圆形的嗜酸性细胞。8例患者失访,3例患者因非肾肿瘤性疾病死亡,2例因转移死亡,其余患者均长期生存,预后良好。结论chRCC临床症状不典型,超声可作为首选体检筛查手段,CT和MRI检查在chRCC诊断上也具有一定优势。手术为早期chRCC首选治疗方案,多数患者预后良好,极少数患者术后出现转移或复发。晚期chRCC目前尚无统一治疗方案。

肾嫌色细胞癌的多排螺旋CT影像表现

目的探讨肾嫌色细胞癌的多排螺旋CT影像表现,提高对肾嫌色细胞癌的影像诊断能力。方法回顾性分析2015年1月至2023年9月8例经手术病理确诊的肾嫌色细胞癌患者的临床及影像资料,总结其影像学表现。结果8例患者中男2例,女6例,年龄(46±4.7)岁。左右肾各4例。影像学表现:5例呈类圆形,形态规则,3例形态不规则;6例为外生型,2例为内生型;5例CT平扫密度均匀,其中4例等密度,1例稍低密度,均未见坏死、钙化、出血,3例混杂密度伴坏死、钙化;增强扫描6例不均匀强化,2例均匀强化;1例轻度强化,3例中度强化,4例明显强化,各期强化程度均低于肾皮质;2例强化峰值在动脉期,5例在门脉期,1例在静脉期;6例患者病灶内多发血管影,1例可见中央瘢痕延迟强化,1例可见分隔样强化;2例肿瘤可见包膜。结论肾嫌色细胞癌CT平扫多表现为等、稍低密度肿块影,可合并坏死、钙化,增强扫描强化方式多样,各期强化均低于正常肾皮质,呈相对乏血供肿瘤,瘤内可见血管样强化及中央瘢痕延迟强化。

基于CT影像特征鉴别小肾嫌色细胞癌及小乏脂型肾血管平滑肌脂肪瘤

目的:探讨小肾嫌色细胞癌(CRCC)及小乏脂型肾血管平滑肌脂肪瘤(fpAML)的CT影像学特征及其鉴别诊断要点。方法:回顾性纳入经手术病理证实的小fpAML(n=20)及小CRCC(n=26)患者的临床及影像资料,所有患者均接受CT平扫及增强检查。对2组患者的影像学特征进行分类整理,并进行统计学分析,对组间存在统计学差异的指标采用受试者工作特征(ROC)曲线法分析其鉴别小CRCC和小fpAML的价值。结果:20例小fpAML及26例小CRCC的肿瘤主体生长位置、平扫期CT值、假包膜、“冰淇凌蛋筒征”等特征均具有统计学差异,且平扫期CT值ROC曲线下面积最大为0.823,当平扫期CT值选择为39 HU时,鉴别小fpAML和小CRCC的灵敏度为85%,特异度为77%。2组病例增强扫描的强化程度及强化方式均无统计学差异,皮质期均以明显强化为主,且2组中大多数病例均表现为持续强化。结论:小fpAML和小CRCC在CT图像上平扫期CT值、肿瘤主体生长位置、“冰淇凌蛋筒征”及假包膜等特点对两者的鉴别诊断具有重要价值,再结合患者的性别、年龄等特点综合分析能在一定程度上提高其术前诊断准确率。

肾杂合性嗜酸细胞/嫌色细胞肿瘤1例

目的:观察肾杂合性嗜酸细胞/嫌色细胞肿瘤(HOCT)的医学影像及病理学表现。方法:对2022年3月浙江大学医学院附属第四医院收治的1例肾杂合性嗜酸细胞/嫌色细胞肿瘤患者进行主动脉CTA检查、肾脏MRI平扫+增强检查与病理检查,观察检出结果并复习相关文献。结果:患者主动脉CTA示右肾占位性病灶,大小约3.1 cm×2.6 cm,境界欠清,平扫呈低密度改变,增强后皮质期病灶不均匀强化,内见星形相对低密度区。肾脏MRI平扫+增强示右肾病灶在T_(1)WI上呈低信号,在T_(2)WI、FS-T_(2)WI上呈等、稍高信号,DWI未见弥散受限,增强后病灶实性部分持续、渐进性强化,实质期达峰值,中央见星状相对低强化区,呈轻度充填样强化。后经术后病理诊断结果为右肾HOCT。结论:在临床工作中肾HOCT存在一定的影像学特征,最终还要依靠病理学诊断。

传染病教学中开设多色流式细胞术课程的实践

多色流式细胞术是一种高效、精准、快速的细胞学检测技术,已广泛应用于传染病检测和研究中。在传染病研究生教学中,本团队建立多色流式课程体系并通过教学实践过程总结教学经验。文章阐述了传染病研究生教学中开设多色流式细胞术课程的几个方面,并进行了总结,包括确定课程目标、设计课程结构、确定课程内容、确定课程形式和确定课程大纲五个方面。笔者进一步通过重点推动多色流式细胞术实践课程并总结实践的初步经验,包括明确多色流式细胞术可以检测的样本类型、多色流式细胞术的仪器类型、染色策略和实验方案、加强流式数据分析和结果判读能力、多色流式细胞术实践过程中应强化生物安全操作五个要点。该课程的开展有助于传染病研究生对免疫学和传染病发病机制的理解,为其未来从事传染病防治和免疫学研究的教学工作提供坚实的基础。

细胞膜色谱技术用于中药活性成分筛选的研究进展

细胞膜色谱技术是生物色谱法在中药活性成分研究中的一个热点,适用于中药及天然药物药效物质基础的筛选研究。简要综述了细胞膜色谱技术在中药活性成分筛选方面的研究进展,并探讨了细胞膜色谱技术在其发展中所面临的问题及对策。

用细胞膜色谱法筛选研究红毛七中的有效成分

目的 筛选天然植物红毛七中对主动脉血管有舒张作用的有效成分。方法 采用兔血管细胞膜色谱 (cellmembranechromatography ,CMC)模型筛选 ,液 固柱层色谱法分离 ,并结合离体药理实验确定红毛七中的有效成分。 结果 红毛七正丁醇部位 (HMQ 4)是红毛七中对血管有舒张作用的有效部位 ,而由红毛七正丁醇部位中分离得到的成分 (HMQ 44)则是其有效成分。结论 血管CMC模型基本可以反映活性成分与细胞膜及膜受体的相互作用 。

用CD40高表达细胞膜色谱模型筛选丹参中抗动脉粥样硬化的活性成分

目的:用CD40高表达细胞膜色谱模型筛选抗动脉粥样硬化中药丹参的有效成分。方法:构建CD40高表达的内皮细胞(ECV-304),制备细胞膜固定相,应用CD40高表达的内皮细胞膜色谱模型筛选丹参中抗动脉粥样硬化的有效成分。结果:丹参酯溶性和水提取部位均存在对CD40高表达细胞膜的亲和作用,而由丹参酯溶性和水提取部位中分离得到的成分丹参酮ⅡA、丹参酮ⅠA和丹参素则是其有效成分。结论:CD40高表达细胞膜色谱模型可用于抗动脉粥样硬化药物的筛选。

肾嫌色细胞癌19例临床病理分析

目的 探讨肾嫌色细胞癌的临床病理特征、免疫学表型、鉴别诊断及预后。方法对19例肾嫌色细胞癌进行光镜观察、免疫组化研究及随访10～102个月，并复习相关文献。结果 19例中男性9例，女性10例；年龄30—72岁，平均47．9岁。肿块直径3～18cm。镜下肿瘤由嫌色细胞和嗜酸细胞构成，呈片状、梁状和腺状分布。嫌色细胞体积较大、多角形，胞膜清晰，胞质半透明细网状，胞核皱缩，可见核沟及核异型，核仁不明显；而嗜酸细胞胞质嗜酸，可见明显的核周空晕。免疫表型中的表达率分别为：EMA和Ksp-cadherin100％，CD1047％，vimentin 0，CK7 73．7％，P504S21．1％，CD11794．7％。结论 肾嫌色细胞癌是一种少见的肾肿瘤，预后好于透明细胞癌，与乳头状肾细胞癌相当。其特征性的组织形态、免疫表型、电镜及遗传学改变有助于诊断和鉴别诊断。

肾嫌色细胞癌23例临床分析

目的提高肾嫌色细胞癌的诊治水平。方法回顾性分析23例肾嫌色细胞癌临床及病理资料，结合文献复习进行讨论。结果21例行根治性肾切除术，2例行肾部分切除术。17例获得随访，随访9～74个月，所有患者均健康存活。结论‘肾嫌色细胞癌是一种低度恶性的肾细胞癌，B超、CT检查缺乏特异性，确诊有赖于典型的病理表现。其TNM分期均为早期，治疗以手术为主，预后良好。

肾嫌色细胞癌的临床病理学观察

观察肾嫌色细胞癌的病理特点并与其它肾上皮性肿瘤鉴别。方法在光镜观察基础上，运用免疫组织化学检测ＣＫ８及Ｖｉｍｅｎｔｉｎ，并行Ｈａｌｅ胶体铁染色及电镜检查来观察７例肾嫌色细胞癌。并对７例病人进了随访。结果嫌色细胞癌由两种细胞类型组成，即典型型及嗜酸型。这些细胞的特点是ＣＫ８阳性，Ｖｉｍｅｎｔｉｎ阴性，Ｈａｌｅ胶体铁阳性，电镜下见大量胞浆内的单层膜构成的小空泡。随访３～１２６个月（平均７０个月），７例病人均无肿瘤复发及转移并存活至今。结论嫌色细胞癌是具有独特的形态特点及较好预后的肿瘤。根据组织学改变及辅助检测方法，可与其它肾上皮性肿瘤鉴别，具有临床意义。

肾嫌色细胞癌的超声与病理对照分析

目的分析肾嫌色细胞癌超声特点及病理基础,以提高对本病的认识。方法8例肾嫌色细胞癌经手术病理证实,术前均行超声检查。结果7例表现为肾中部实质不均匀低或等回声肿块,其中2例肿块外周部可见少许血流信号。1例表现为肾盂内低回声肿块并伴环状钙化。结论虽然肾嫌色细胞癌确诊靠病理,超声仍有助于它的诊断及鉴别。

肾嫌色细胞癌和嗜酸细胞腺瘤的形态学、组织化学和免疫表型的比较研究

目的探讨肾嫌色细胞癌(chromophoberenalcellcarcinoma,CRCC)和嗜酸细胞腺瘤(oncocytoma)的临床病理学特征、诊断和鉴别诊断。方法对手术切除的13例肾嫌色细胞癌和6例肾嗜酸细胞腺瘤进行眼观、光镜和电镜观察,Hale胶体铁和免疫组化染色。结果嫌色细胞癌以实体结构为主,胞质半透明或嗜酸颗粒状,核皱缩,有核周空晕;其中6例(46%)为嫌色细胞癌嗜酸变型;电镜下见胞质内微泡和管泡状嵴线粒体;Hale胶体铁染色12/13阳性。嗜酸细胞腺瘤以巢状结构为主,胞质嗜酸颗粒状,核圆伴小核仁;1例(16.7%)出现核异型性;电镜下见胞质内层状嵴线粒体;Hale胶体铁染色阴性。免疫组化两者均表达Ecadherin、EMA,不表达CD10、CK20、vimentin;CK7在10/13例嫌色细胞癌中呈强阳性表达,2/6例嗜酸细胞腺瘤呈灶性表达。结论肾嫌色细胞癌和嗜酸细胞腺瘤形态学各有特征,免疫表型相似,鉴别诊断基于生长方式和细胞学特征,Hale胶体铁染色和电镜检查是区分二者的有效手段。

86例肾嫌色细胞癌与33例嗜酸细胞腺瘤的临床病理特征的比较分析

目的探讨比较肾嫌色细胞癌(CRCC)与嗜酸细胞腺瘤(Oncocytoma)的临床病理特征差异,以及比较CD44、CK7、CK20和线粒体抗体的免疫组化在两者以及亚组中的诊断及鉴别诊断的意义。方法对北京协和医院2002-10—2014-05间手术切除的86例肾嫌色细胞癌和33例肾嗜酸细胞腺瘤标本进行总结,并对其组织进行CD44、CK7、CK20和线粒体抗体的免疫组化染色、镜下评判,评估他们在诊断以及鉴别诊断中的作用,并分析他们与临床病理特征之间的关系。结果在嫌色细胞癌、嗜酸亚型嫌色细胞癌与嗜酸细胞腺瘤三组中,患者的性别构成、肿瘤大小、肿瘤发生的左右部位、采取的手术切除方式、肿瘤是否侵犯包膜以及生存时间方面均无显著性差异。嫌色细胞癌组的患者年龄(均数51.3岁,标准差12.4)倾向于<嗜酸细胞腺瘤组(均数56.4岁,标准差15.1)的患者年龄,但不具有统计学显著性差异(P>0.05)。在嗜酸亚型嫌色细胞癌与非嗜酸亚型嫌色细胞癌组的比较中,临床分期有显著性差异(P<0.01),前者为较低的临床分期(主要为I期及II期);而在TNM分期的比较中,两组未显示出有明显差异(P>0.05)。CK7分子在嫌色细胞癌组(54/86,63%)与嗜酸细胞腺瘤组(0/33,0%)两组中的表达有显著性差异(P<0.01),同时在嗜酸亚型嫌色细胞癌组(11/14,79%)与嗜酸细胞腺瘤组两组中的表达比较也有显著性差异(P<0.01),CK7在嫌色细胞癌组中均高表达;而CK20分子的表达在嫌色细胞癌(49/86,57%)、嗜酸亚型嫌色细胞癌(8/14,57%)以及嗜酸细胞腺瘤(15/33,45%)三组中的表达无显著性差异;CD44分子的表达在嫌色细胞癌(20/86,23%)、嗜酸亚型嫌色细胞癌(1/14,7%)以及嗜酸细胞腺瘤(5/32,16%)三组中的表达也无显著性差异;线粒体抗体的表达在嫌色细胞癌(68/84,81%)、嗜酸亚型嫌色细胞癌(12/14,86%)以及嗜酸细胞腺瘤(25/32,78%)三组中的表达也无显著性差异。结论肾嫌色细胞癌、嗜酸亚型嫌色细胞癌与嗜酸细胞腺瘤三组病例中,包括生存时间等的多数临床病理特征均无显著的差异,三者具有诸多相似之处,嗜酸亚型嫌色细胞癌组比非嗜酸亚型嫌色细胞癌组临床分期低;CK7(+)支持肾嫌色细胞癌的诊断,CK20、CD44和线粒体抗体的免疫组化表达在嫌色细胞癌及其亚组与肾嗜酸细胞腺瘤的诊断与鉴别诊断中无显著差异。