冠心病患者线粒体细胞色素C氧化酶亚基Ⅱ基因片段的重排

采用玻璃粉微量吸附法获取DNA直接作为PCR反应的模板 ,利用巢式PCR技术 ,检测冠心病患者血细胞内编码细胞色素C氧化酶亚基Ⅱ的线粒体DNA扩增片段多态性 ,探讨线粒体DNA的片段缺失与动脉粥样硬化发生发展的关系。研究发现在全部冠心病患者编码细胞色素C氧化酶亚基Ⅱ的基因中出现了大约 10 0bp的缺失片段 ,其中 1例冠心病患者中还出现了大约 45 0bp核基因组和 6 0 0bp的线粒体DNA扩增片段 ,而在正常对照老人中没有出现片段的重排现象。表明冠心病患者中存在该基因片段的缺失和模板量减少的现象 ,该基因可能参与了冠状动脉粥样硬化的形成与发展 ,编码呼吸链复合物一些亚基线粒体DNA片段的重排可能是动脉粥样硬化进行性发展的恶化因素。

阿尔茨海默病患者血液细胞线粒体内细胞色素C氧化酶亚基Ⅱ基因存在缺失

目的 调查 2 5例老年痴呆患者血细胞线粒体中细胞色素C氧化酶亚基Ⅱ基因的突变情况 ,探讨线粒体DNA突变与阿尔茨海默病 (AD)性老年痴呆发生发展的关系。 方法 采用微量法提取血细胞总DNA直接作为PCR模板 ,进行巢式PCR扩增 ,最后采用DNA序列分析鉴定突变。 结果 在正常老人组 ,只扩增了 2 80bp的线粒体细胞色素C氧化酶亚基Ⅱ基因 (COX2 )扩增片段 ,而在老年痴呆患者中出现了 4 6 4bp和 2 80bp的多态性扩增片段 ,并且发现了 1个 32 0bp的新的线粒体DNA缺失片段 ,1位AD患者的COX2基因存在一种新的缺失后重组现象 ,COX2基因的 1条单链在np75 0 3处断裂 ,另 1条单链在np7785处断裂 ,这两个断裂的游离片段通过插入 1个额外的胞嘧啶核苷酸重新连接起来。 结论 老年痴呆患者中的COX2基因存在片段扩增多态性。

两种新蚤细胞色素氧化酶亚基II基因的克隆和测序

本文报道了二齿新蚤和宽新蚤线粒体 DN A中一段 90 0碱基的片段 ,其中包括完整的 COII基因和两个氨基酸 t RNA基因片段。两种新蚤 COII基因的 CG含量都是 33.3% ,这在昆虫中是较高的。两者基因间碱基的变异率为 1.8% ,变异以 T→ C转换为主 ,显示两种新蚤间较近的亲缘关系。两种新蚤氨基酸 t RNA基因碱基的变异率低于 0 .5%。两种新蚤的 COII基因和猫栉首蚤 COII基因间碱基的变异率大于 2 0 %。同时列出了完整的细胞色素氧化酶亚基 II氨基酸序列。并列出了在这个基因片段中一些保守序列的位置。

过氧化物酶体增殖物激活受体γC161-T、细胞色素P450ⅡE1基因多态性与脂肪性肝病相关性研究

目的探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γC161-T(PPARγC161-T)、细胞色素P450ⅡE1(CYPⅡE1)基因多态性脂肪性肝病的关系。方法检测183例脂肪肝患者和40例健康对照者PPARγC161-T、CYPⅡE1的基因多态性。检测所有受试者的BMI、腰围、血压,测定谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、谷氨酰转肽酶(GGT)、空腹血糖(FBG)、腹胰岛素(FINS)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)等指标。结果脂肪肝组腰围、BMI、SBP、FBG、HOMA-IR、TG、TC、UA、ALT、AST、GGT均高于对照组;PPAR-γC161-T基因型频率及等位基因频率在脂肪肝组与对照组差异无显著性;PPAR-γC161-T基因型CC和CT/TT型比较,对照组中基因型CT/TT的FBG较CC基因型高;CYPⅡE1基因型C_1C_2、C_2C_2频率及等位基因C_2频率脂肪肝较对照组增加。CYPⅡE1基因型C_1C_1和C_1C_2/C_2C_2型比较,脂肪肝组C_1C_2/C_2C_2型的GGT增高。结论 CYPⅡE1基因多态性与脂肪肝脂质过氧化密切相关,等位基因C_2与脂肪肝的发病密切相关。CYPⅡE1基因多态性可能在脂肪肝的形成中起着决定性的作用。

糖脂平对胰岛素抵抗大鼠PGC-1α、细胞色素C、ATP合成酶β亚基基因表达影响

目的观察糖脂平对高脂饮食诱导的胰岛素抵抗(IR)大鼠过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅助因子1α(PGC-1α)、细胞色素C、ATP合成酶β亚基基因表达的影响。方法将80只雄性SD大鼠随机分为正常组(20只)和造模组(60只),造模组用高脂高糖饲料喂养8周造模,其中54只造模成功的大鼠分为模型组、中药组、西药组,每组18只。中药组和西药组分别给予糖脂平和二甲双胍灌胃,模型组和正常组灌服等量的生理盐水。给药8周后,用RT-PCR测定各组大鼠骨骼肌PGC-1α和细胞色素C、ATP合成酶β亚基基因表达情况。结果与正常组相比,模型组大鼠PGC-1α、细胞色素C及ATP合成酶β亚基基因表达量明显下降(P<0.05);与模型组比较,糖脂平可以上调PGC-1α、细胞色素C及ATP合成酶β亚基的基因表达量(P<0.05)。结论中药糖脂平可以上调PGC-1α的基因表达量,从而提高细胞色素C及ATP合成酶β亚基基因表达量,具用明显改善IR大鼠线粒体氧化磷酸化功能的作用。

抗霉素A抑制PC12细胞线粒体COⅡ基因表达

采用不同浓度的抗霉素 A(一种能提高线粒体内活性氧水平的线粒体抑制剂 )处理 PC12细胞 ,利用血细胞计数、台盼蓝排除法以及 MTT法进行细胞活性检测。实验证明 ,当抗霉素 A的浓度达到 15 0 μmol/L时 ,PC12细胞开始出现损伤 ;进一步采用 RNA斑点杂交和 RT-PCR技术分析发现抗霉素 A所致的细胞损伤和线粒体内细胞色素 C氧化酶亚基 (CO )基因表达下降有关。本研究证实线粒体介导的活性氧的产生能早期诱导线粒体细胞色素氧化酶的活性的改变 ,逐步引起

3种蚊虫线粒体COⅡ基因的分子进化

测定和比较了中华按蚊、白纹伊蚊和致倦库蚊的细胞色素C氧化酶亚基 基因全序列,并与其他几种蚊虫的CO 基因序列进行了比较,根据CO 基因序列构建了分子系统树,对这些蚊虫的进化年代及亲缘关系进行了讨论。结果显示,这3种蚊虫以中华按蚊比较原始,在CO 分子结构上,白纹伊蚊与致倦库蚊具有更近的亲缘关系。CO 基因是蚊类分子系统学研究的有效分子标记.

冬凌草甲素调控miR-200c/EZH2轴抑制黑色素瘤细胞上皮-间质转化的机制研究

目的 探究冬凌草甲素调控微小RNA200c(miR-200c)/组蛋白甲基化转移酶果蝇zeste基因增强子同源物2(EZH2)轴抑制黑色素瘤细胞(A375细胞)上皮-间质转化(EMT)的影响机制。方法 MTT法检测冬凌草甲素对A375细胞活力的影响;将A375细胞分为对照组、冬凌草甲素组、mimic control组、miR-200c mimics组、冬凌草甲素+inhibitor control组、冬凌草甲素+miR-200c inhibitor组,qRT-PCR检测miR-200c、EZH2 mRNA表达情况;免疫印迹法检测EZH2及EMT相关蛋白表达情况;黏附实验检测A375细胞黏附能力;Transwell实验检测A375细胞侵袭及迁移能力;荧光素酶报告基因实验检测miR-200c与EZH2的靶向关系;构建移植瘤裸鼠模型,检测肿瘤质量;免疫组化法分析EMT相关蛋白表达情况。结果 A375细胞存活率随冬凌草甲素浓度的增加以剂量依赖性显著降低(P<0.05),由于40μmol/L冬凌草甲素接近半数抑制浓度,因此选取40μmol/L冬凌草甲素进行后续实验;与对照组相比,冬凌草甲素组、miR-200c mimics组A375细胞中miR-200c、钙粘附蛋白E(E-cadherin)表达水平显著增加,EZH2 mRNA及蛋白表达水平、神经型钙黏附蛋白(N-cadherin)及波形蛋白(Vimentin)表达水平、迁移细胞数、侵袭细胞数、黏附细胞数显著降低(P<0.05);与对照组、mimic control组相比,miR-200c mimics组EZH2蛋白表达水平显著降低(P<0.05);miR-200c沉默可逆转冬凌草甲素对A375细胞的作用;与对照组相比,冬凌草甲素组肿瘤质量、EZH2 mRNA、N-cadherin及Vimentin蛋白表达水平显著降低,miR-200c、E-cadherin蛋白表达水平显著增加(P<0.05);与冬凌草甲素组相比,冬凌草甲素+miR-200c inhibitor组肿瘤质量、EZH2 mRNA、N-cadherin及Vimentin蛋白表达水平显著增加,miR-200c、E-cadherin蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。结论 冬凌草甲素可能通过促进miR-200c/EZH2轴来抑制A375细胞的EMT及肿瘤生长。

胆固醇损伤内皮细胞差异表达基因的生物信息学分析

目的利用差异表达基因克隆方法(抑制消减杂交)获得大量的动脉粥样硬化相关候选基因和表达序列标签后,探讨如何进行后续基因表达及功能的研究。方法利用Internet网络上的数据库及生物学分析软件对胆固醇损伤内皮细胞后获得的差异表达基因进行核酸序列和蛋白质序列分析,探索差异表达基因克隆后的研究方法和思路。结果通过电子延伸得到一个684bp的全长cDNA序列;通过核酸序列分析,该序列定位在线粒体基因组的7587位～8270位,含有一个完整的开放阅读框,编码与氧化磷酸化相关的9个亚基。对其中一个亚基细胞色素氧化酶Ⅱ(COX2)分析得知,细胞色素氧化酶Ⅱ基因编码一段25.6kDa的弱酸性的信号锚蛋白,细胞色素氧化酶Ⅱ蛋白的三维结构是一个典型的椅式结构,它含有一段疏水区域,一个跨膜结构域和一个胞质结构域。运用蛋白的进化分析,得知细胞色素氧化酶Ⅱ蛋白胞质结构域的氨基酸序列在进化过程中高度保守。结论生物信息学技术是一种高效的获取疾病相关基因信息的方法,利用生物信息学方法对细胞色素氧化酶Ⅱ基因进行分析,获得了基因及其编码蛋白的相关信息,该蛋白参与电子传递,可能与细胞的氧化应激有关。

细胞色素P450酶2C9*3和血管紧张素Ⅱ1型受体(1166A>C)基因多态性与原发性高血压的发生及厄贝沙坦降压疗效的关系

目的分析细胞色素P450酶2C9*3(CYP2C9*3)和血管紧张素Ⅱ1型受体(AGTR1)(1166A>C)基因多态性是否与原发性高血压(EH)患病风险和厄贝沙坦临床降压疗效相关。方法选择2018年1月至2019年7月在徐州医科大学附属医院就诊的EH患者2057例和健康对照者286人,采用基因芯片法进行基因型鉴定,其中598例EH患者口服厄贝沙坦150mg/d,持续4周。收集受试者服药前和服药第4周末的收缩压、舒张压,计算服药前后的血压降低幅度。结果EH组与对照组的CYP2C9*3和AGTR1(1166A>C)两种基因分布差异无统计学意义(均P>0.05)。对于CYP2C9*3基因型,与*1*1组相比,*1*3+*3*3组的收缩压降低值和舒张压降低值更大[分别为(34.9±15.5)比(29.3±10.2)mm Hg和(22.8±9.0)比(19.6±8.5)mm Hg];对于AGTR1(1166A>C)基因型,与AA组相比,AC+CC组具有更好的降压疗效[收缩压降低值(32.1±14.2)比(29.2±13.4)mm Hg,舒张压降低值(21.2±9.4)比(19.4±8.4)mm Hg],但两者差异无统计学意义(均P>0.05)。通过协方差分析发现,在男性亚组中与AA组相比,AC+CC组收缩压降低值和舒张压降低值更大[分别为(31.9±1.7)比(28.0±0.6)mm Hg和(22.1±1.1)比(19.0±0.4)mm Hg],且差异有统计学意义(分别P=0.04和0.01)。结论CYP2C9*3和AGTR1(1166A>C)基因型在淮海地区汉族EH与非EH人群中的分布无差异,AGTR1(1166A>C)基因型对男性的厄贝沙坦降压疗效具有影响,AC+CC组比AA组的降压疗效更好。

珍稀绢丝昆虫柳蚕的DNA条形编码与系统进化初步分析

利用DNA测序技术获得柳蚕(Actias selene)线粒体细胞色素酶C亚基Ⅰ基因(COI)5′端574 bp的片段,作为用于柳蚕种质资源分子鉴定的DNA条形编码(GenBank:FJ358505)。测定的柳蚕COI基因序列与其它大蚕蛾科绢丝昆虫的COI序列一样,均表现出偏好于碱基T的倾向(AT skew=-0.179)。在所分析的蚕类昆虫中,柳蚕与合目大蚕蛾的遗传距离最小(0.120),而与蓖麻蚕之间的遗传距离最大(0.138)。构建的NJ和UPGMA分子树中,大蚕蛾科的柳蚕属、柞蚕属、蓖麻蚕属、大乌桕蚕属、栗蚕属均各自形成一个支系,并且明显形成两个分支:大蚕蛾族(saturni-ini),包括柳蚕、柞蚕和栗蚕;眉纹大蚕蛾族(attacini),包括蓖麻蚕和大乌桕蚕。这一结果与传统分类一致。

POLD1基因在原发性肝癌中的表达及其意义

目的:探讨DNA聚合酶δ催化亚基基因(DNApolymerase delta catalytic subunit gene1POLD1)及其编码蛋白p125在原发性肝癌中的表达及意义.方法:选用原发性肝癌患者手术切除标本20例,分别采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法和Western blot法检测POLD1基因表达,同时分析POLD1基因产物p125蛋白与临床特征的相关性.结果:与癌旁组织相比,肝癌组织中POLD1基因表达明显升高(0.70±0.34vs0.37±0.23P<0.05);其编码蛋白p125表达与POLD1基因表达一致,在肝癌组织中的表达显著高于癌旁组织(0.63±0.19vs0.39±0.21,P<0.05).p125蛋白的阳性表达率与肿瘤大小和临床分期有关(P<0.05),而与HBV是否感染、性别及年龄无明显关系(P>0.05).结论:原发性肝癌与POLD1基因表达有关检测其蛋白产物p125有利于判断肝癌的恶性程度.

CYP2C19基因多态性与介入治疗后氯吡格雷药物疗效的相关性研究

目的探讨PCI术后CYP2C19基因多态性与不同剂量氯吡格雷药物效果的相关性。方法通过基因芯片检测技术,筛选PCI术后CYP2C19基因突变为CYP2C19*2/*2、CYP2C19*2/*3或CYP2C19*3/*3的患者67例,随机分为常规组22例、2倍组22例和3倍组23例。常规组75 mg氯吡格雷、2倍组150 mg氯吡格雷、3倍组225 mg氯吡格雷,1次/d。分别于PCI术后1、3、6个月通过血栓弹力图检测各组氯吡格雷药物抑制率及再发心血管缺血事件发生率。结果 PCI术后6个月内,2倍组和3倍组患者心血管缺血事件发生率较常规组明显降低(81.8%vs 31.8%vs 21.7%,P<0.01),2倍组与3倍组比较差异无统计学意义(P>0.05)。术后1、3、6个月2倍组和3倍组氯吡格雷药物抑制率较常规组显著升高(P<0.01),2倍组与3倍组比较差异无统计学意义(P>0.05)。3组出血风险比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 CYP2C19基因变异患者增加氯吡格雷药物服用剂量,可在一定程度上提高血小板的抑制,降低心血管缺血事件发生率,且不增加出血事件的发生率。

清肝活血方对酒精性肝病大鼠ADH及CYPⅡE1的影响

目的:观察清肝活血方对酒精性肝病大鼠乙醇代谢关键酶基因表达的影响。方法:用乙醇、玉米油、吡唑等制备酒精性肝病大鼠模型。RT-PCR法检测大鼠肝组织ADH及CYPⅡElmRNA表达。结果:酒粉性肝病大鼠模型表现为肝功能异常,以AST变化为显著;模型组ADH活性及其mRNA与CYPⅡE1 mRNA表达下降;高剂量清肝活血方组大鼠ADH活性及ADH与CYPⅡE1 mRNA的表达显著提高。结论:清肝活血方能显著提高模型组大鼠ADH活性及ADH与YPⅡE1mRNA的表达,促进肝脏的解毒功能。

4种终末宿主土耳其斯坦东毕吸虫cox1和nad1基因的序列分析

收集黑龙江省大庆地区牛源、绵羊源、绒山羊源和山羊源土耳其斯坦东毕吸虫，以SDS-蛋白酶K法抽提其基因组DNA，用特异性引物通过PCR扩增土耳其斯坦东毕吸虫成虫细胞色素C氧化酶亚基1基因（coxl）和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶亚基1基因（nad1）并进行测序，应用Chromas和DNAStar软件分析扩增产物的变异情况。结果表明，大庆地区4种终末宿主土耳其斯坦东毕吸虫cox1基因均为1125bp，nad1基因均为518bp；且其线粒体基因存在差异，coxl的同源性为99．0％～99．7％，nad1的同源性为98．3％～99．4％。

中哈边境阿拉山口口岸输入性猫栉首蚤指名亚种线粒体COI和COII基因序列分析

目的分析阿拉山口口岸地区输入性猫栉首蚤指名亚种细胞色素C氧化酶Ⅰ(COI)和Ⅱ(COII)基因特征和系统进化关系。方法从2014年1月入境集装箱死猫体表采集蚤类样本,形态学鉴定完毕后提取DNA,PCR扩增COI和COII基因并测定序列,使用Mega 6.0通过ML法构建系统发育树。结果猫栉首蚤指名亚种COI和COII基因富含A+T,碱基突变多为置换突变,无移码,缺失和插入突变;Blast显示与澳大利亚猫栉首蚤指名亚种同源性较高(99%)。结论 COI基因序列存在足够的变异能够区分亲缘关系很近的种类,为外来或新发现的蚤种的鉴别提供了分子水平的技术依据。

可溶性TGF-β_1Ⅱ型受体逆转录病毒表达载体的构建

目的:构建表达人TGF—β1Ⅱ型受体细胞外结合区和人IgG1 Fc的融合蛋白逆转录病毒载体,为进一步肝纤维化的基因治疗奠定实验基础. 方法:以RT—PCR方法扩增目的基因TβRⅡ-IgG1 Fc,扩增产物纯化后克隆至测序载体pGEM—T—Easy,挑取阳性克隆酶切鉴定后测序;利用重组DNA 技术,将TβRⅡ-IgG1 Fc基因亚克隆至逆转录病毒载体pLXSN中,重组质粒pL(TβRⅡ-IgG1 Fc)SN在脂质体介导下转染PA317包装细胞,G418筛选,直至出现抗性克隆,扩大培养,测定病毒滴度. 结果:经测序、限制性酶切分析及PCR方法鉴定,载体插入基因序列、大小、位置均正确,并用PA317细胞进行包装、病毒滴度测定、筛选,建立具有较高滴度的感染性重组病毒产生细胞系. 结论:成功构建了重组质粒pL(TβRⅡ-IgG1 Fc)SN, 可望为肝纤维化的基因治疗提供有效途径.

蒙古马马胃蝇幼虫形态学及线粒体基因的研究

为了研究目前蒙古马马胃蝇流行种类,2019年1月在内蒙古呼和浩特市四子王旗收集到感染马胃蝇的8匹蒙古马,剖检后获取胃蝇幼虫。利用解剖镜、光学显微镜和扫描电镜对蒙古马马胃蝇幼虫进行形态学观察。同时选取20个蒙古马马胃蝇三龄幼虫,通过PCR方法,扩增蒙古马马胃蝇线粒体细胞色素氧化酶亚基(COXⅡ)基因、16S rRNA基因。利用MEGA 6.0软件对蒙古马马胃蝇细胞色素氧化酶亚基(COXⅡ)基因、16S rRNA基因与GenBank数据库中胃蝇属的其他种类同源序列进行比较并构建系统发育树。结果表明:蒙古马马胃蝇幼虫三龄幼虫领部棘刺,体节上的棘刺底部宽、刺尖细,口脊骨页部形态平滑,伪头小刺结构清晰,这些特征与黑腹胃蝇三期幼虫的形态相似。蒙古马马胃蝇与GenBank数据库中狂蝇属、黄蝇属、胃蝇属(肠胃蝇、黑腹胃蝇、红尾胃蝇)和皮蝇属的昆虫在系统发育树中分开,有一定遗传距离,且单独成一个分支。鉴于分离到的蒙古马马胃蝇形态上与黑腹胃蝇相似,但是线粒体基因存在变异,可能代表黑腹胃蝇的一个新变种。