二恶英对内膜组织中细胞色素芳香化酶P450表达的影响

目的建立小鼠模型并探讨二恶英对小鼠内膜组织中细胞色素芳香化酶P450表达的影响。方法建立小鼠模型,采用二恶英0、3、10μg/kg对小鼠进行宫内、外暴露或宫内宫外联合暴露,从而将小鼠模型分为五组:0-0组、3-0组、0-3组、3-3组和3-10组,各有24只小鼠。采用免疫组织化学法检测小鼠模型中子宫内膜组织中细胞色素芳香化酶P450的表达水平。结果细胞色素芳香化酶P450在小鼠暴露组的表达高于对照组(P<0.05),并随二恶英暴露剂量的增加而升高(P<0.05)。结论二恶英可以促进子宫内膜中细胞色素芳香化酶P450的表达。

芳香化酶抑制剂对子宫内膜异位症患者的效果及对细胞色素芳香化酶P450的影响研究

目的探讨芳香化酶抑制剂治疗子宫内膜异位症患者的临床效果及对细胞色素芳香化酶P450的影响。方法对2014年1月-2016年1月诊治的78例子宫内膜异位症患者进行回顾性分析,其中40例患者采用常规药物+阿那曲唑治疗(联合组),38例患者仅给予常规治疗(对照组)。治疗时间3个月。结果治疗前,两组患者的血清雌二醇(E2)、孕酮(P)、卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)水平差异均无统计学意义(P>0.05);治疗后,联合组患者的血清E2水平显著低于对照组(P<0.05)。治疗后,联合组患者的在位子宫内膜和异位子宫内膜细胞色素芳香化酶P450阳性表达率均显著低于对照组(P<0.05)。治疗前,两组患者的子宫内膜厚度比较差异无统计学意义(P>0.05);治疗后,两组患者的子宫内膜厚度较治疗前均显著降低(P<0.05),联合组患者的子宫内膜厚度显著低于对照组(P<0.05)。结论芳香化酶抑制剂治疗子宫内膜异位症患者可降低细胞色素芳香化酶P450阳性表达率,提高临床效果。

细胞色素P450-RhFRED人工融合酶的研究进展与应用

来自于红球菌Rhodococcus sp.NCIMB 9784的P450RhF是一个自给自足型的细胞色素P450酶,它的血红素结构域主要负责控制酶的底物特异性,P450还原酶伴侣蛋白RhFRED与细胞色素P450血红素结构域天然融合在一起,电子主要从蛋白分子内转移到P450血红素结构域。依据融合型P450RhF自给自足的特性,有学者利用P450RhF的还原伴侣蛋白RhFRED,与其它P450构建人工融合酶P450-RhFRED,来实现多种细胞色素P450基因的功能表达。基于此建立的P450-Rh-FRED融合文库对未知功能P450的催化功能探索有很大意义,P450-RhFRED融合酶技术也可用于开发已知细胞色素P450酶的工业应用。

细胞色素芳香化酶P-450在正常、子宫内膜异位症子宫内膜的表达及意义

目的 :探讨细胞色素芳香化酶P - 45 0在子宫内膜异位症 (内异症 )发病中的作用 ,检测子宫内膜细胞色素芳香化酶P - 45 0的表达用于诊断内异症的可行性。方法 :应用免疫组化方法检测正常子宫内膜和内异症的在位及异位内膜细胞色素芳香化酶P - 45 0的表达。结果 :细胞色素芳香化酶P - 45 0在正常子宫内膜无表达 ,在内异症的在位和异位内膜均有强表达 ,增殖期与分泌期无差别。检测子宫内膜细胞色素芳香化酶P - 45 0的表达 ,用于诊断内异症的敏感度为 91 5 % ,特异度为 10 0 % ,阳性预测值为 10 0 %。内异症子宫内膜细胞色素芳香化酶P - 45 0的表达与AFS分期无相关性。结论 :子宫内膜细胞色素芳香化酶P - 45 0分泌增加促进内异症的发生 ;内异症子宫内膜细胞色素芳香化酶P -45

调神益肾针法对更年期大鼠卵巢芳香化酶细胞色素P450mRNA表达的影响

目的:研究调神益肾针法对更年期大鼠卵巢芳香化醇细胞色素P450(P450_(AROM))mRNA表达的影响。方法:采用组织细胞原位杂交技术,辅以计算机图像分析。结果:更年期大鼠卵巢窦状卵泡、成熟黄体细胞中P450_(AROM)mRNA的表达减弱,间质腺细胞中的表达则基本维持正常;经针刺干预后,这些部位尤其是窦状卵泡、成熟黄体该酶mRNA的表达明显增强。结论:促进卵巢P450_(AROM)mRNA的表达,有利于增加雌激素合成限速酶的含量,这可能是调神益肾针法升高体内雌激素水平的分子机制之一。安徽中医学院临床医学二系,合肥市梅山路103号(230038) 天津中医学院第一附属医院安徽中医学院临床医学二系.合肥市梅山路103号(230038)

中药益坤宁方调节围绝经期大鼠卵巢细胞色素P450芳香化酶mRNA的实验研究

目的：探讨细胞色素P450芳香化酶（aromatase cytochrome P450,P450arom）mRNA在围绝经期自然老化大鼠卵巢上的表达及意义。方法：选用11-13月龄雌性围绝经期Wistar大鼠32只。随机将其分为模型组、益坤宁组、西药对照组。另选青年大鼠10只,月龄4个月,作为青年对照组,用原位杂交方法检测大鼠卵巢上的P450arom mRNA的表达。结果：P450arom mRNA在模型组卵巢上呈阴性或弱阳性表达,在青年组呈强阳性表达,两组比较差异有统计学意义（P〈0.01）。而在益坤宁组及西药对照组均呈阳性表达,与模型组比较差异均具有统计学意义（P〈0.01）。结论：中药益坤宁可促进大鼠卵巢P450arom mRNA的表达,有利于雌激素的合成。

芳香化酶细胞色素P450在子宫内膜异位症中的检测与临床意义

目的:探讨芳香化酶细胞色素P450(P450arom)在子宫内膜异位症(EM)患者子宫内膜中的表达及临床意义。方法:采用免疫组织化学方法检测63例EM患者、40例妇科良性疾病患者及30例正常对照组患者子宫内膜中P450arom蛋白的表达,并结合EM患者的临床分期等进行比较分析。结果:P450arom蛋白在正常对照组子宫内膜中无表达;在良性疾病对照组中阳性检出率为17.50%(7/40),表达水平(0.22±0.16);在EM患者子宫内膜中阳性检出率为81%,表达水平(0.57±0.26),差异有统计学意义(P<0.05)。P450arom蛋白表达在增生期与分泌期差异无统计学意义(P>0.05)。P450arom蛋白表达随EM临床分期增加呈增强趋势,但差异无统计学意义(r=0.226,P>0.05)。结论:P450arom在EM患者子宫内膜中的高表达与EM的发生有关;检测P450arom蛋白在子宫内膜的表达可作为诊断EM新的参考指标。

益坤宁对围绝经期大鼠卵巢细胞色素P450芳香化酶的调节作用和血清雌二醇水平的影响

目的:观察中药益坤宁方对围绝经期大鼠卵巢细胞色素P450芳香化酶(Aromatase cytochrome P450,P450arom)的调节作用。方法:建立自然衰老的大鼠模型,将模型分为青年对照组、模型组、益坤宁组和西药对照组4组,益坤宁组和西药对照组分别给予中药益坤宁汤剂和西药利维爱混悬液治疗。4周后,采用免疫组织化学及Western Blot方法检测大鼠卵巢P450arom蛋白表达情况;采用放射免疫法测定大鼠空腹血清雌二醇(E2)水平。结果:P450arom蛋白在益坤宁组大鼠卵巢上均多呈阳性表达,与模型组比较均具有显著性差异(P<0.01);与西药对照组比较差异不具有统计学意义(P>0.05)。益坤宁组大鼠空腹血清雌二醇(E2)水平升高,与模型组比较差异显著(P<0.01),与西药对照组比较差异不具统计学意义(P>0.05),但其E2水平仍然低于青年对照组,差异具有显著性(P<0.05)。结论:中药益坤宁可促进围绝经期大鼠卵巢P450arom蛋白的表达。中药益坤宁可提高大鼠血清雌二醇(E2)的水平。中药益坤宁可通过促进卵巢P450arom的表达而利于雌激素的生成。

芳香化酶细胞色素P450及CA_(125)联合检测对子宫内膜异位症的诊断价值

目的:探讨子宫内膜芳香化酶细胞色素P450(简称芳香化酶P450),CA125联合检测对子宫内膜异位症(简称内异症)的诊断价值。方法:36例经腹腔镜检或开腹手术证实为内异症的患者为研究组,22例非内异症的不孕或盆腔疼痛妇女为对照组。化学发光法测定血CA125值。术中取子宫内膜,应用免疫组织化学方法,检测芳香化酶P450在上述妇女子宫内膜的表达情况。结果:血CA125值测定用于诊断内异症的敏感性为44%,特异性为82%,阳性预测值为80%,阴性预测值为47%;子宫内膜芳香化酶用于诊断内异症的敏感性为83%,特异性为86%,阳性预测值为91%,阴性预测值为76%;免疫组织化学方法检测芳香化酶P450联合血CA125用于诊断内异症的敏感性为91.7%,特异性为68.2%。结论:子宫内膜芳香化酶及CA125联合检测对内异症诊断价值高,尤其对于早期内异症患者,明显优于血CA125值测定。

陕西关中人群骨质疏松性骨折与细胞色素P450芳香化酶编码基因的关联分析

目的探讨骨质疏松性髋部骨折(osteoporotic hip fracture,OHF)与细胞色素P450芳香化酶编码基因(cyto-chrome P450c19,CYP19)多态性的关系。方法采用群体关联分析的方法,对来自陕西关中人群的400例OHF患者和400例正常对照的7个单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNP)位点进行了分型实验和单体型的病例-对照研究。结果共700个个体分型成功,haploview关联分析识别出了3个单体域的单体型,并挑选出7个标签SNP。方差分析的结果表明,位于CYP19基因的SNP位点rs643892和rs3781590以及单体域3区多态性与髋部骨折之间存在相关性。结论细胞色素P450芳香化酶编码基因和我们所研究的陕西关中汉族群体的骨质疏松性骨折(osteoporotic fracture,OF)发病率关联。细胞色素P450芳香化酶编码基因可能对中国陕西关中汉族人群OHF的发病率有影响。

细胞色素P450芳香化酶在大鼠多囊卵巢中的表达及意义

目的检测细胞色素P450芳香化酶(P450 arom)在大鼠多囊卵巢颗粒细胞中的表达水平,探讨P450 arom与多囊卵巢综合征(PCOS)的关系。方法应用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测PCOS实验组及正常对照组大鼠卵巢组织中P450 arom基因(CYP19)的表达;采用链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶(SP)法对大鼠卵巢组织中P450 arom进行检测。结果实验组和对照组卵巢组织中CYP19基因,相对表达强度分别为(0.138±0.072)和(0.759±0.236),差别有显著性意义(P<0.01);实验组中原始卵泡、初级卵泡和成熟卵泡比较,P450 arom蛋白表达下降(P<0.05)。对照组间初级卵泡、次级卵泡和成熟卵泡比较,arom蛋白表达有显著性差异(P<0.05)。结论P450 arom mRNA在PCOS大鼠卵巢组织中呈低表达;P450 arom蛋白在PCOS大鼠卵巢初级卵泡和成熟卵泡中表达下降;PCOS的发生可能与P450 arom在mRNA和蛋白水平的表达下调有关。

芳香化酶细胞色素P450在子宫内膜异位症的表达

目的探讨芳香化酶细胞色素P450(以下简称芳香化酶)在子宫内膜异位症(EMs)发病机制中的作用。方法采用免疫组化方法检测36例EMs患者在位及异位子宫内膜组织芳香化酶的表达,并与22例正常子宫内膜进行比较。结果芳香化酶在EMs组异位内膜及在位内膜的表达明显高于对照组(P<0.05),增殖期与分泌期无明显差异(P>0.05),且与修订的美国生育协会标准(rAFS)分期无相关性(P>0.05)。结论芳香化酶在异位内膜及在位内膜的的表达可能在EMs的发病中起重要作用。芳香化酶表达与EMs的严重程度无关。

细胞色素P450介导的杂草抗药性研究进展

细胞色素P450(cytochrome P450)是一类重要的亚铁血红素-硫醇盐蛋白超家族,属于单加氧酶,广泛分布于生物界中。研究发现P450主要具有“生物合成”和“生物解毒”两大功能,被誉为“万能的生物催化剂”。大多数除草剂在植物体内代谢的初始阶段即涉及植物细胞色素P450的作用。近些年,由P450介导的抗药性杂草呈多发态势,其复杂的抗性谱,给杂草化学防除带来了新的挑战。本文对P450分类命名、P450与除草剂代谢的关系、P450抗性鉴定手段、P450介导抗性杂草发生情况、与除草剂代谢有关的植物细胞色素P450基因克隆等内容进行了综述,旨在为该领域的相关研究提供参考。

细胞色素P450芳香化酶与多囊卵巢综合征

目的:探讨细胞色素P450芳香化酶(cytochrom e P450 arom atase,P450 arom)与多囊卵巢综合征(P-COS)相关性的研究新进展。方法:阅读国内外有关文献并进行综述。结果与结论:细胞色素P450芳香化酶是体内催化雄激素转化为雌激素的限速酶,与PCOS高雄激素血症有关。

稳定表达细胞色素P4502B6的Flp-In^(TM)CHO细胞系的建立及鉴定

目的构建稳定表达细胞色素P4502B6(CYP2B6)的Flp-In^(TM)CHO细胞系。方法将Flp-In^(TM)CHO细胞分为Flp-In^(TM)CHO组、Flp-In^(TM)CHO空载体组及Flp-In^(TM)CHO-CYP2B6组,通过Lipofectamine2000转染试剂,分别将pcDNA5/FRT空质粒和pcDNA5/FRT-CYP2B6重组质粒转染至Flp-In^(TM)CHO空载体组细胞和Flp-In^(TM)CHO-CYP2B6组细胞中,利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、蛋白免疫印迹(Western blot)及荧光素酶实验检测转染细胞中CYP2B6 mRNA水平、蛋白表达水平及活性,用四氮唑盐(MTS)测定转染CYP2B6的Flp-In^(TM)CHO细胞对环磷酰胺的毒性敏感性。结果与Flp-In^(TM)CHO组和Flp-In^(TM)CHO空载体组相比,Flp-In^(TM)CHO-CYP2B6组细胞中CYP2B6的mRNA和蛋白表达水平显著升高(P<0.01)、酶活性显著增加(P<0.001),对环磷酰胺的毒性敏感度显著增加(P<0.001)。结论成功构建稳定表达CYP2B6的Flp-In^(TM)CHO细胞系,为研究药物代谢和筛选毒性药物提供工具。

长链非编码RNA LINC00987通过细胞色素P450途径促进AML细胞凋亡的机制研究

目的:探讨长链非编码RNA LINC00987在抗肿瘤药物诱导的急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)细胞凋亡中的作用及分子机制。方法:通过RT-qPCR检测AML中的LINC00987表达水平。构建稳定敲减LINC00987基因的Molm13细胞(shLINC00987),通过Annexin V/PI检测LINC00987低表达对阿糖胞苷诱导AML细胞凋亡的影响。对LINC00987共表达基因进行信号通路富集,分析LINC00987的表达对细胞色素家族基因的影响。结果:与健康对照组相比,lncRNA LINC00987在AML细胞系和AML病人标本中均显著降低,而在抗AML治疗后缓解组中高表达;此外,低表达LINC00987与AML患者预后不良有关。抗肿瘤药物阿糖胞苷、阿霉素、三氧化二砷和维奈托克可显著诱导AML细胞系Molm13和MV411的LINC00987表达。下调LINC00987的表达可抑制阿糖胞苷诱导的Molm13细胞凋亡。进一步研究发现,LINC00987共表达基因可富集于细胞色素P450(cytochrome,P450,CYP450)介导的氧化应激通路/网络,且LINC00987的表达与CYP450家族基因CYP11B1、CYP2U1和CYP2C9的表达水平呈正相关。下调LINC00987的表达则可抑制阿糖胞苷诱导的CYP11B1、CYP2U1和CYP2C9的mRNA表达。结论:LINC00987可以作为AML的预后标志物,其可能通过CYP450介导的氧化应激途径促进阿糖胞苷诱导的AML细胞凋亡。

烟粉虱细胞色素P450基因CYP6JM1的克隆及其在噻虫嗪抗性中的作用

烟粉虱Bemisia tabaci是全球性农业害虫之一,目前采用的防治手段多为化学防治。噻虫嗪作为一种新烟碱类杀虫剂,现被广泛应用于田间烟粉虱的防治,但烟粉虱已对其产生了抗性。本文通过RT-qPCR对烟粉虱噻虫嗪抗性与敏感种群的细胞色素P450基因CYP6JM1表达水平进行了比较,结果显示,烟粉虱噻虫嗪抗性种群CYP6JM1基因表达水平明显升高。基因克隆和序列分析表明,CYP6JM1基因具备昆虫P450基因的典型特征。RT-qPCR检测结果表明,该基因在烟粉虱1~2龄时期及腹部高水平表达。RNAi结果表明,降低烟粉虱体内CYP6JM1基因的表达量能够显著提高其对噻虫嗪的敏感性,表明CYP6JM1基因可能与烟粉虱对噻虫嗪的抗性有关。

细胞色素P450芳香化酶活性调控对小鼠卵巢发育的影响

本研究旨在探索P450芳香化酶抑制剂(来曲唑)对小鼠卵巢发育的影响。将SPF级昆明系雌性小鼠随机分为对照组和2、4、6、8、10、30、50g/kg来曲唑剂量组,连续灌服3d,在停药后的第9、15和30天观测小鼠卵巢的发育情况。结果表明:①在停药后第9、30天的6和8g/kg组及第15天的4～10g/kg组的卵巢指数显著高于对照组(P<0.05),而停药后第15和30天的50g/kg组显著低于(P<0.05)对照组和2～10g/kg组;②在停药后第9和15天的4～8g/kg组及停药后第30天的6g/kg组的初级卵泡数显著高于(P<0.05)对照组和其它各试验组,而停药后第9天的30和50g/kg组、第15天的50g/kg组及第30天的10～50g/kg组都显著低于(P<0.05)对照组和其它各试验组;③在停药后第9、15和30天的4～8g/kg组的次级卵泡数都显著高于对照组(P<0.05);而停药后第9天的30和50g/kg组、第30天的50g/kg组都显著低于对照组(P<0.05);④在停药后第9天的4～8g/kg组、第15天的6和8g/kg组及第30天的2～8g/kg组的成熟卵泡数都显著高于对照组(P<0.05);而停药后第9天的10～50g/kg组、第15、30天的30和50g/kg组几乎没有成熟卵泡的形成。以上结果表明,用6g/kg来曲唑浓度可一定程度抑制P450芳香化酶的活性,降低内源性雌激素合成,能够促进小鼠卵巢和卵泡的发育。

稳定表达人细胞色素P450氧化还原酶(POR)的Flp-In^(TM) CHO细胞系的建立

目的建立稳定表达人细胞色素P450氧化还原酶(POR)的Flp-In^(TM) CHO细胞系,为进一步建立稳定双表达人POR与人细胞色素P450(CYP)的细胞系奠定基础。方法构建POR重组慢病毒并感染Flp-In^(TM) CHO细胞,荧光显微镜观察绿色荧光蛋白表达,挑选转染细胞进行嘌呤霉素筛选和单克隆培养,以获得稳定转染细胞株。利用丝裂霉素C(MMC)细胞毒实验、实时荧光定量PCR和Western blot法检测细胞POR的表达,获得稳定表达POR的Flp-In^(TM) CHO-POR细胞株。构建稳定双表达POR和CYP2C19的Flp-In^(TM) CHO-POR细胞(Flp-In^(TM) CHO-POR-2C19)和单表达CYP2C19的Flp-In^(TM) CHO细胞(Flp-In^(TM) CHO-2C19),并用环磷酰胺(CPA)测定CYP2C19酶活性。结果与感染阴性对照病毒的Flp-In^(TM) CHO细胞相比,感染POR重组慢病毒的Flp-In^(TM) CHO细胞MMC代谢活性升高,POR mRNA和蛋白的表达水平增加,说明获得了可稳定表达POR的Flp-In^(TM) CHO-POR细胞。与Flp-In^(TM) CHO细胞相比,Flp-In^(TM) CHO-2C19的CPA代谢活性无显著差异,而Flp-In^(TM) CHO-POR-2C19的CPA代谢活性增加且明显高于Flp-In^(TM) CHO-2C19细胞。结论成功建立了稳定表达POR且可进一步用于CYP转基因细胞构建的Flp-In^(TM) CHO-POR细胞系。