以混合探针药的方法评价白藜芦醇对人体细胞色素酶P450活性的影响

目的:采用混合探针法研究白藜芦醇对人细胞色素酶P450五种亚型CYP1A2、CYP2D6、CYP2C9、CYP3A4和CYP2C19的影响。方法:采用随机对照研究,将26名男性健康受试者随机分为安慰剂组和白藜芦醇组,分别予以口服安慰剂/白藜芦醇每次1 g,每日一次,连续服药14 d,再口服咖啡因、氯沙坦、奥美拉唑、右美沙芬和咪达唑仑五种探针药物,采集不同时间的血样,检测咪达唑仑、咖啡因、奥美拉唑三种探针药物的血药浓度。并收集0~8 h尿液,记录尿量,检测氯沙坦及右美沙芬的代谢速率。比较两组之间的药代动力学差异。结果:与对照组相比,白藜芦醇组CYP1A2的探针药物咖啡因AUC0-12、AUC0-∞、Cmax分别增加32.10%(P<0.001)、71.52%(P<0.001)、10.62%(P=0.004),同时T1/2也显著增加(P=0.002);CYP2C19的探针药物奥美拉唑和CYP3A4的探针药物咪达唑仑的药代动力学参数AUC0-12、AUC0-∞、T1/2和Cmax均未见显著改变(P>0.05);CYP2C9探针药物右美沙芬与其代谢产物去甲右美沙芬比率(DTM/DT)的比率增加了79.91%(P=0.003);CYP2D6探针药物氯沙坦与其代谢产物E-3174的比率(losartan/E-3174)增加了531.34%(P<0.001)。结论:白藜芦醇多次给药后,能显著抑制CYP1A2、CYP2D6和CYP2C9的酶活性,而对CYP3A4和CYP2C19的酶活性无显著影响。

人类细胞色素酶P4502J2的研究进展

多年来 ,对细胞色素酶P4 5 0的研究主要集中在其代谢外源性药物和毒物的方面。然而它在内源性物质 ,如类固醇、胆固醇、激素、脂肪酸和维生素等的代谢转化中也起了很重要的作用。CYP2J就是这样一种主要代谢内源性物质花生四烯酸的细胞色素酶P4 5 0超家族。人体内的CYP2J2在不久前被发现 ,它与疾病的相关性正引起研究者广泛的兴趣。本文就人类CYP2J2的组织分布、生理作用、编码基因及其基因突变等方面的研究进展作一简要综述。

细胞色素酶P4501A1(CYP1A1)与免疫性疾病关系的研究进展

细胞色素酶P450是一组含铁血红素超家族,因还原型P450与一氧化碳具有特殊的亲和力,二者的复合物在分光光度计的450nm处有特异吸收峰而得名.P450有三大家族：CYP1、CYP2、CYP3,是内源性、外源性物质转化酶系的主要成员.CYP1的亚家族CYP1A1能够代谢和活化多种环境致癌和致突变物质,多年来一直是生物医药和毒理学的研宄热点.CYP1A1可催化代谢多环芳烃类（PAHs）、

细胞色素酶P450 1A2表型分析及其应用价值

在人的肝脏中，细胞色素酶P4501A2（CYPlA2）占整个细胞色素酶P450的15％。不仅许多药物如茶碱、氯氮平、奥美拉唑、咖啡因、非那西丁，内生性底物（如褪黑激素和雌二醇）和环境中有害物质的代谢等主要是通过CYPlA2，

艾司西酞普兰抗抑郁疗效与细胞色素酶P450 2C19基因及5-羟色胺转运体基因多态性关联性分析

目的:探索艾司西酞普兰抗抑郁疗效与细胞色素酶P450 2C19基因(CYP2C19)及5-羟色胺转运体基因(5-HTTLPR)多态性关联性。方法:给予51例抑郁症患者艾司西酞普兰10～20 mg/d单药治疗4周;以治疗前后汉密尔顿抑郁量表24项(HAMD-24)减分率> 50%为有效。应用聚合酶链反应技术检测CYP2C19基因、5-羟色胺转运体基因(5-HTTLPR)多态性,并分析其与艾司西酞普兰有效性的关系。结果:CYP2C19及5-HTTLPR各基因型间艾司西酞普兰治疗的有效率比较差异无统计学意义(χ2=0. 166,P=1. 000;χ2=2. 000,P=0. 217); CYP2C19各基因型患者的不良反应发生率比较差异有统计学意义(χ2=16. 115,P <0. 001),低代谢型患者不良反应发生率明显高于其他型; Logistic回归分析显示艾司西酞普兰抗抑郁疗效与年龄(B=-0. 192,P=0. 009)和病程(B=-0. 170,P=0. 011)相关。结论:CYP2C19、5-HTT基因多态性不影响艾司西酞普兰抗抑郁的疗效。

细胞色素酶P450参与了雏鸡和鹌鹑体内黄曲霉毒素B1的代谢

研究旨在确定细胞色素酶P450同源物(CYP,CYP450)参与了黄曲霉毒素B1(AFB1)转换成更高毒素代谢产物,即雏鸡和鹌鹑肝微粒体代谢物——黄曲霉毒素-8,9-环氧化物(AFBO)的生物活化过程。包括特定细胞色素P450酶抑制剂的使用和AFBO生产的典型基底物质活性间的关系。此外,酶的定性测定采用免疫印记技术。结果表明,雏鸡和鹌鹑体内微粒体代谢物酶有CYP1A1、CYP1A2、CYP2A6和CYP3A4。CYP1A1和CYP2A6两个菌种的活性和AFB1的生物活化过程紧密相关。研究证明了CYP2A6在AFB1的生物活化过程中的作用,免疫印迹结果显示,CYP2A6和CYP3A4两个物种的同源物的条带清晰,研究结果表明,在较小程度上,CYP2A6和CYP1A1是AFB1生物活化成雏鸡和鹌鹑肝微粒体代谢物AFBO的原因。

细胞色素P450-RhFRED人工融合酶的研究进展与应用

来自于红球菌Rhodococcus sp.NCIMB 9784的P450RhF是一个自给自足型的细胞色素P450酶,它的血红素结构域主要负责控制酶的底物特异性,P450还原酶伴侣蛋白RhFRED与细胞色素P450血红素结构域天然融合在一起,电子主要从蛋白分子内转移到P450血红素结构域。依据融合型P450RhF自给自足的特性,有学者利用P450RhF的还原伴侣蛋白RhFRED,与其它P450构建人工融合酶P450-RhFRED,来实现多种细胞色素P450基因的功能表达。基于此建立的P450-Rh-FRED融合文库对未知功能P450的催化功能探索有很大意义,P450-RhFRED融合酶技术也可用于开发已知细胞色素P450酶的工业应用。

重组细胞色素酶P450 3A4表达和鉴定

细胞色素酶P450是代谢内源性物质和外源性物质的重要的酶,在药物治疗和药物开发领域以及了解潜在的毒性物质和致癌性物质的代谢机制起决定性作用。旨在构建细胞色素酶P450 3A4的表达载体,在大肠杆菌中表达并纯化得到CYP3A4蛋白。用逆转录-聚合酶链反应方法从人肝脏总RNA中得到CYP3A4的cDNA,然后直接插入pMD20-T Vector中,将测序正确的N-末端和C-末端进行修饰。然后利用双酶切插入到表达载体pET-28a-c(+)Vectors,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中表达。并通过定点突变的方法获得CYP3A4亚型P467S(CYP3A4*19)。采用SPSS13.0设计4因素2水平正交实验,对α-ALA(0.5 mmol/L和1 mmol/L)、IPTG(0.5 mmol/L和1 mmol/L)、卡那霉素(50μg/mL和100μg/mL)添加浓度及菌的接种密度(接种1%和接种2%)进行优化。并用SPSS13.0对结果进行分析,选择出比较好的组合进行下一步的大规模的诱导表达。经定点突变的方法成功获得了CYP3A4*19亚型。经IPTG诱导获得CYP3A4蛋白,并通过Western blot验证。用BCA蛋白浓度定量分析试剂盒测定的膜蛋白浓度在65μg/mL左右,α-ALA、抗生素(卡那霉素)、T7启动子诱导剂IPTG及接种密度高低两水平中对膜蛋白的表达水平的影响没有统计学意义。

复方丹参滴丸对大鼠肝细胞色素P450酶的影响

目的观察复方丹参滴丸及其单味药对大鼠肝细胞色素P450酶(CYP)主要亚型的影响。方法 SD大鼠分别ig给予复方丹参滴丸0.3258 g.kg-1,丹参0.27 g.kg-1,三七0.0528 g.kg-1和冰片0.003 g.kg-1,每天1次,连续28 d,取大鼠肝微粒体,与CYP1A2,CYP2B6,CYP2C12,CYP2C13,CYP2D2和CYP3A1特异性底物探针共孵育,用高效液相色谱-质谱联用仪(HPLC-MS/MS)测定底物的代谢产物,分析CYP1A2,CYP2B6,CYP2C12,CYP2C13,CYP2D2和CYP3A1酶活性,同时用PCR方法检测cyp1a2,cyp2b1/2,cyp2c11,cyp2e1和cyp3a1 mRNA表达的变化。结果与正常对照组相比,苯巴比妥(阳性对照)对CYP2D2和CYP3A1活性有明显抑制作用,对CYP1A2,CYP2B6,CYP2C12和CYP2C13有明显诱导作用(P<0.05,P<0.01);复方丹参滴丸对CYP1A2和CYP2B6活性有明显抑制作用,对CYP2D2有诱导作用(P<0.05);丹参对CYP1A2和CYP2B6活性有明显抑制作用(P<0.05);三七对CYP1A2,CYP2B6,CYP2C13和CYP2D2活性有明显抑制作用(P<0.05);冰片明显抑制CYP1A2,CYP2B6,CYP2C12,CYP2C13和CYP2D2活性(P<0.01),且抑制强度高于复方丹参滴丸。与正常对照组相比,苯巴比妥对cyp1a2和cyp2b1/2 mRNA水平有明显诱导作用(P<0.05);复方丹参滴丸、丹参和三七对cyp1a2,cyp2b1/2,cyp2c11,cyp2e1和cyp3a1 mRNA水平无明显影响;冰片对cyp1a2,cyp2b1/2和cyp2c11 mRNA水平有明显抑制作用(P<0.05,P<0.01)。结论复方丹参滴丸中各单味药对CYP酶的影响强于全方对CYP酶的影响,其中以冰片对药物代谢酶的影响最为显著。

食物对细胞色素P450药物代谢酶的影响

细胞色素P450酶系在大多数内源性和外源性分子的生物氧化过程中发挥重要的作用,尤其在药物代谢方面。CYP450酶个体差异大,除了遗传因素的影响外,食物等外界因素也可能影响其活性或表达,从而影响经酶代谢药物的疗效和不良反应。故本文就食物因素对细胞色素P450酶影响的相关研究进行综述。

探针药物法评价半夏生姜配伍对细胞色素P_(450)酶的影响

目的运用探针药物法分析半夏生姜配伍对大鼠细胞色素P450(CYP)酶的影响,为揭示相畏相杀配伍的科学内涵提供依据。方法将SD雄性大鼠随机分为四组,分别给予半夏、生姜的水提物及半夏-生姜合煎剂,以0.9%氯化钠溶液作为空白对照组,尾静脉注射丙米嗪探针药物,于给药后10,20,30,40,50和60min,眼眶取静脉血0.5mL,经提取、处理后,通过高效液相色谱(HPLC)法检测探针药物丙米嗪的药物浓度。结果半夏组、生姜组及配伍组丙米嗪浓度均低于对照组,各组CYP水平均明显升高;配伍组在10min处丙米嗪浓度低于半夏组,即配伍后CYP水平高于半夏组。结论半夏、生姜及半夏-生姜配伍均可诱导CYP酶;同时半夏-生姜配伍运用较之半夏单用,配伍运用对CYP酶具有诱导作用,可抵消半夏单用对CYP酶的抑制作用。

朱砂安神丸、朱砂、硫化汞和氯化汞对大鼠肝脏细胞色素P450酶的影响

目的探讨硫化汞(HgS)、氯化汞(HgCl2)、朱砂及其复方朱砂安神丸对肝细胞色素P450酶的影响。方法雄性SD大鼠ig给予朱砂安神丸1.4 g.kg-1、朱砂0.15 g.kg-1、HgS 0.15 g.kg-1和HgCl20.02 g.kg-1,每天1次,连续21 d,观察大鼠日常行为变化,记录体质量,末次给药后处死大鼠,检测血清谷丙转氨酶(ALT)、肝指数和肝汞蓄积量;RT-PCR法检测肝金属硫蛋白-2(MT-2),CYP1A1,CYP1A2,CYP3A2,CYP4A10,CYP2B1和结构型雄烷受体(CAR)基因的表达。结果与正常对照组相比,HgCl2组大鼠饮食、活动减少,精神较差,体质量明显降低,肝有增大趋势,肝汞蓄积量明显升高(P<0.05),MT-2,CYP1A1,CYP1A2基因表达明显升高(P<0.05),CYP4A10有增高趋势,CAR基因表达明显降低。与正常对照组相比,朱砂、朱砂安神丸和HgS组的肝指数、ALT和汞蓄积量没有明显差异,同时朱砂安神丸、朱砂和HgS组的MT-2,CYP1A1,CYP1A2,CYP3A2,CYP4A10,CAR及CYP2B1基因表达没有明显变化,但朱砂可明显上调CYP3A2基因表达。结论朱砂安神丸、朱砂和HgS短期给药肝组织汞蓄积量远小于HgCl2,未改变MT-2、CYP酶、CAR基因的表达,但朱砂可上调CYP3A2基因表达,而HgCl2可明显影响MT-2、CYP酶、CAR的基因表达。

氟喹诺酮类药物对大鼠肝微粒体细胞色素P450酶系的影响

目的比较4种氟喹诺酮类药物[左氧氟沙星(LVFX)、加替沙星(GTFX)、莫西沙星(MXFX)、帕珠沙星(PZFX)]对大鼠肝微粒体细胞色素P450(CYP450)酶系的影响。方法 30只雄性Wistar大鼠随机分为空白对照组、LVFX组(LV组)、GTFX组(GT组)、MXFX组(MX组)、PZFX组(PZ组),每组6只,给药方案为120mg/(kg.d),尾静脉注射给药,连续7d。末次给药后24h处死动物,差速离心法制备肝微粒体混悬液,Lowry法测定肝微粒体蛋白浓度,分光光度法检测肝微粒体CYP450酶系的含量及活性,并采用单因素方差分析进行统计。结果与空白对照组比较,MX组和GT组大鼠肝重明显降低(P<0.01,P<0.05),LV组、GT组和MX组大鼠肝微粒体蛋白浓度明显增加(P<0.01),LV组和GT组CYP450含量增加(P<0.05,P<0.01),GT组细胞色素b5(Cytb5)含量增加(P<0.05)。肝微粒体NADPH-CytC还原酶活性测定结果显示,给药组与空白对照组差异无统计学意义(P>0.05)。氨基吡啉-N-脱甲基酶活性测定结果显示,LV组、GT组和MX组酶活性与空白对照组比较差异均有统计学意义(P<0.01)。红霉素-N-脱甲基酶活性测定结果显示,与空白对照组比较,GT组酶活性降低,MX组酶活性升高,差异有统计学意义(P<0.01)。大鼠肝微粒体CYP450酶系亚家族活性检测结果显示,与空白对照组比较,LV组、MX组和PZ组7-苄基香豆素脱烃酶(BROD)活性升高(P<0.01),GT组7-甲氧基香豆素脱烃酶(MROD)活性降低(P<0.05)、7-苯基香豆素脱烃酶(PROD)活性增加,PZ组PROD活性降低(P<0.01),4种药物均可使乙氧基香豆素脱烃酶(EROD)活性增加(P<0.01)。结论 4种氟喹诺酮类药物对CYP450酶系均有肯定作用,对不同的酶其作用效果不同,从影响范围来看,GTFX、MXFX、LVFX和PZFX的作用依次减小。

黄连解毒汤对人细胞色素P450酶6个亚型的体外抑制作用研究

目的:研究黄连解毒汤对人肝微粒体6个亚型CYP1A2、CYP2C8、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6和CYP3A4的体外抑制作用。方法:采用液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)同时测定对乙酰氨基酚、6α-羟基紫杉醇、4-羟基双氯芬酸、4-羟基美芬妥英、右啡烷、1-羟基咪达唑仑和6β-羟基睾酮,分别代表CYP1A2、CYP2C8、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6和CYP3A4的活性;黄连解毒汤提取物和7种混合探针底物在人肝微粒体中共同孵育,并计算其IC50值表示对CYP450酶的抑制程度。结果:在人肝微粒体体外孵育体系中,黄连解毒汤对CYP2D6的IC50值为3.54μg/mL,对CYP1A2的IC50值为10.8μg/mL,对CYP2C8、CYP2C9、CYP2C19、CYP3A4_T和CYP3A4_M亚酶的IC50值依次为67.7、299、530、199和607μg/mL。结论:在正常剂量下,黄连解毒汤对人肝微粒体CYP2D6和1A2可能有抑制作用,对人肝微粒体CYP2C8、CYP2C9、CYP2C19和CYP3A4无明显抑制作用。

细胞色素P450酶诱导/抑制的研究方法及在药物研究中的应用

细胞色素P450(CYP450)在外源及内源物质的生物转化过程中发挥着至关重要的作用,是肝脏中重要的药物代谢酶。CYP450酶活性/含量的改变直接影响了经其代谢的药物在体内的有效量和作用时间,与药效和用药安全性有密切的联系。因此,了解药物对CYP450酶可能存在的诱导或抑制作用是药物研究过程中不可缺少的研究内容。本文综述了近年来研究CYP450酶诱导/抑制水平和机制的试验方法以及在药物、尤其是在天然产物研究中的应用。

中药复方对细胞色素P450酶的调控研究进展

通过参阅大量近年来国内外有关中药对药物代谢酶细胞色素P450酶影响的文献,并结合笔者实验室的相关研究,对中药对细胞色素P450酶的研究文献进行整理和分析。发现各国学者目前主要从中药有效成分、单味中药或提取物、中药复方三个层面研究了中药对细胞色素P450酶的影响,其中作为中药主导使用形式的中药复方对细胞色素P450酶影响的研究明显偏少,研究的深度也不如前两者,研究中发现一些中药复方对细胞色素P450酶确实存在不同程度的抑制或诱导作用。因此深入研究中药复方对细胞色素P450酶活性的影响,既有利于中医药基础理论的深入和发展,又有助于指导中药在临床上的合理使用,避免因药物相互作用导致的不良反应,还可为个体化用药和发现新药提供参考。

细胞色素P450酶系体外药物代谢研究方法进展

目的综述细胞色素P450(CYP 450)酶影响药物代谢的体外研究方法。方法参考国内外文献,对与药物代谢相关的CYP酶亚型、CYP酶种属差异、CYP酶体外反应体系、药物主要代谢酶的确认方法及体外CYP酶的抑制和诱导,进行分类、归纳和整理。结果与结论CYP 450在药物代谢中具有重要作用,药物代谢研究是新药评价体系中重要的一部分。

超高效液相串联质谱法同时定量检测6个细胞色素P450酶探针代谢产物

应用超高效液相色谱-质谱联用技术(LC-MS/MS),建立了同时定量测定6个细胞色素P450酶(CYP)探针代谢产物的方法。用甲醇和乙腈混合溶剂沉淀肝微粒体孵育液中的蛋白,在ZORBAX-C18色谱柱(100 mm×4.6 mm,3.5μm)上,以5 mmol/L甲酸铵和0.1%甲酸-乙腈为流动相,梯度分离待测物。在串联质谱正离子多反应监测模式下定量检测待测物。方法学验证结果表明,6个代谢产物在1.0～1000.0μg/L的范围内均呈良好的线性关系(r2>0.994);定量限为1μg/L;方法的日内和日间精密度(RSD)均小于12%;加标回收率为92.8%～104.4%;不同储存条件下样品稳定性实验的浓度偏差(RSD)小于10%。人肝微粒体活性测定的结果显示CYP1A2和CYP3A4的酶活性最强,分别为(466.1±32.1)和(694.3±11.7)pmole/(mg.min),与最低的CYP2C19酶活性分别相差27.7和41.3倍。本方法简便、快速、灵敏,适用于大量化合物CYP酶诱导和抑制评价的酶活性测定。

灯盏生脉胶囊有效组分对大鼠细胞色素P450酶同工酶作用的体外研究

目的探讨灯盏生脉胶囊6种有效组分对细胞色素P450酶(CYP450酶)4种主要亚型(同工酶)的作用。方法采用大鼠肝微粒体体外孵育的方法和液质联用(LC/MS/MS)技术,通过体外cocktail高通量筛选,选择不同的CYP450酶同工酶特异性探针底物与灯盏生脉有效组分共同孵育,比较灯盏生脉有效组分对大鼠肝微粒体中CYP450酶同工酶抑制作用。结果五味子甲素对大鼠肝微粒体CYP3A1、2C6及2C11有弱抑制作用,五味子酯甲对CYP3A1及2C11有弱抑制作用,IC50值均在10～50μmol/L之间。结论本研究初步界定参与灯盏生脉胶囊有效组分代谢的大鼠CYP450酶同工酶,及其有效组分对大鼠CYP450酶同工酶的抑制作用,为灯盏生脉胶囊与其他药物的联合使用提供科学依据。

细胞色素P450酶诱导和抑制效应高通量筛选系统研究进展

细胞色素P450酶(CYP450)活性的诱导或抑制,是引起临床药物代谢性相互作用的主要作用机制。目前确定候选药物出现此类相互作用可能性的主要方法是通过体外CYP450诱导和抑制潜能的快速筛选。现从CYP450诱导机制、目前发展的综合活性筛选系统和诱导筛选系统、抑制效应筛选系统以及硅上虚拟筛选系统等几个方面,对CYP450诱导和抑制效应高通量筛选系统的研究进展作一综述。