泥鳅和大鳞副泥鳅细胞色素P450c17-Ⅰ(CYP17-Ⅰ)基因的克隆及组织表达分析

采用3'-和5'-RACE法克隆了泥鳅和大鳞副泥鳅CYP17-Ⅰ基因的c DNA全长序列,通过实时荧光定量PCR技术分析其表达情况。结果表明,泥鳅CYP17-Ⅰ基因c DNA全长1 706 bp,开放阅读框(open reading frame,ORF)1 563 bp,编码520个氨基酸;大鳞副泥鳅CYP17-Ⅰ基因c DNA全长1 763 bp,ORF长1 545 bp,编码514个氨基酸。2种鳅CYP17-Ⅰ氨基酸序列都有1个信号肽、1个跨膜区、1个保守的蛋白结构域和3个功能保守区。相似度分析显示,2种鳅之间CYP17-Ⅰ相似度为99%,与其他鱼类的相似度也超过70%。系统进化分析显示,2种鳅之间关系最为接近,其系统发育关系基本符合传统的分类地位。qRT-PCR结果显示,CYP17-Ⅰ在2种鳅的肠、肌肉、心脏、胃、肝脏、精巢、卵巢、脾脏等8个组织均有表达,在精巢和卵巢中表达量相对较高。

3种多环芳烃对海胆细胞色素 CYP17A1 基因表达的影响

为揭示不同种类多环芳烃(PAHs)污染物对中间球海胆(Strongylocentrotus intermedius)的生态毒理效应,研究了不同浓度的苯并(a)芘(1、5和20μg·L-1)以及2种烷基多环芳烃3-甲基菲(5、10和100μg·L-1)和2-甲基蒽(5、10和50μg·L-1)对海胆细胞色素CYP17A1基因表达的影响。结果表明,随着暴露时间的增加,不同浓度的3种多环芳烃对海胆细胞色素CYP17A1基因表达产生不同程度的影响。与对照组相比,暴露14 d后,苯并(a)芘20μg·L-1处理组对海胆CYP17A1基因的表达表现出抑制作用(P<0.05);暴露14 d后,3-甲基菲100μg·L-1处理组对海胆CYP17A1基因的表达表现出诱导作用(P<0.05);暴露14 d后,2-甲基蒽50μg·L-1处理组对海胆CYP17A1基因的表达表现出抑制作用(P<0.05)。2-甲基蒽对海胆CYP17A1基因表达的影响比苯并(a)芘、3-甲基菲的影响更为明显。

棉铃虫细胞色素P450基因CYP9A17v2核心启动子区缺失分析

CYP9A17v2的过量表达与棉铃虫Helicoverpa armigera对拟除虫菊酯类杀虫剂的抗性相关。为了研究CYP9A17v2表达调控机制,对CYP9A17v2核心启动子区域的功能进行了分析;构建了含荧光素酶报告基因和CYP9A17v2启动子不同长度缺失片段(-1095～+43)的重组质粒,转染Sf9细胞瞬时表达后用双荧光素酶报告基因检测系统检测启动子活性。功能分析结果表明:所有的7个缺失片段均具有启动子活性,-197～+43启动子区域的转录活性最高。在CYP9A17v2基因5′-调控区-197～-113区域内可能存在转录增强因子的结合位点,而在-1095～-197区域内可能存在转录抑制因子的结合位点。本研究为探索棉铃虫CYP9A17v2过量表达的转录调控机理奠定了重要基础。

黄酮类化合物对细胞色素P450 CYP1A2的抑制作用及其构效关系研究

利用本实验室已建立的体外肝微粒体模型,测定36个黄酮类单体化合物对人细胞色素P450 CYP1A2的抑制活性,并使用三维定量构效关系方法研究化合物的分子结构参数与其抑制活性之间的关系。CoMSIA模型证实黄酮类化合物的结构参数与其CYP1A2抑制活性存在明显的相关性(模型的相关系数R2为0.948),且有良好的预测能力(交叉验证相关系数q2为0.630),同时使用"留五法"证实模型的稳定性和可靠性。结果表明,相对于黄酮,α-萘黄酮的π-π共轭体系更有利于提高化合物的抑制活性。根据获得的模型的三维等势图,在α-萘黄酮基础上,6、3′、4′位引入带正电基团或是疏水基团,同时5位引入带负电基团,能有效改善化合物的CYP1A2抑制活性。

酒精性肝损伤大鼠细胞色素P450 CYP2E1和细胞色素P450 CYP3A的代谢活性

目的观察酒精性肝损伤对大鼠细胞色素P450CYP3A(CYP3A)和细胞色素P450CYP2E1(CYP2E1)代谢活性的影响。方法采用ig给予白酒制备大鼠酒精性肝损伤模型,检测血清中谷丙转氨酶(GPT)和谷草转氨酶(GOT)活性,采用HE染色法光镜下观测酒精对肝脏损伤程度。大鼠ip给予CYP3A探针药物咪达唑仑10mg·kg-1或ig给予CYP2E1探针药物氯唑沙宗50mg·kg-1后,采用高效液相色谱法测定不同时间点大鼠血浆中咪达唑仑和氯唑沙宗的血药浓度,并应用3P87软件计算其药代动力学参数,以考察CYP2E1和CYP3A的代谢活性的变化。大鼠ig给予氯唑沙宗80mg·kg-1后,热板方法测定大鼠添足次数和添足反射潜伏期。结果酒精性肝损伤可致大鼠肝小叶结构不清,肝索排列紊乱,肝细胞体积增大,呈弥漫性中度水变性,肝窦受压,大部分肝细胞胞浆内见大小不等的脂肪空泡;与正常对照组相比,酒精性肝损伤组大鼠GPT和GOT活性分别增加了16.0%和20.0%(P<0.05,P<0.01)。酒精性肝损伤致大鼠CYP2E1对探针药物氯唑沙宗的代谢活性增强,AUC,t1/2和cmax分别降低了38.0%,30.5%和35.0%(P<0.05);酒精肝损伤组大鼠氯唑沙宗镇痛效果明显降低;酒精性肝损伤致大鼠CYP3A对探针药物咪达唑仑的代谢活性增强,AUC,t1/2和cmax分别降低了122.6%,54.9%和56.9%(P<0.01,P<0.05)。结论酒精性肝损伤可使大鼠CYP2E1和CYP3A代谢活性增强。

细胞色素P450新家族的第一个基因CYP337A1的分子克隆与序列分析

依据家蚕基因组数据,通过BLASTP比对,选择了主要与抗性相关的CYP3集团(clan)中具有完全编码框并含有P450基因特征结构域的1条序列为研究对象,用RT-PCR方法对其进行了克隆.结果表明,该基因ORF为1 467 bp,编码489个氨基酸,推定的蛋白质分子质量为56.60 KDa,等电点为8.64.只有1个内含子,外显子/内含子边界处符合GT-AG规则.与美国棉铃虫的CYP321A、邪恶按蚊的CYP6P9的相似性(identity)相对较高,分别为34%、32%,低于同一家族成员氨基酸相似性应高于40%的规定,从而被细胞色素P450委员会命名为新家族的第一个基因CYP337A1(GenBank登陆号:EF415297).

细胞色素P450 CYP2E1酶构型特征及其表达调控机制的研究进展

细胞色素P450CYP2E1酶参与代谢活化及失活多种前毒物、前致癌物和少数药物。在细胞色素P450超家族中,CYP2E1具有易介导自由基生成引发氧化应激反应的特征。CYP2E1表达水平可能是机体对环境和工业毒物或致癌物敏感程度的重要因素。研究表明,CYP2E1可被多种内、外源性物质所调控,并且CYP2E1的药理和毒理学功能与其以蛋白构型为基础的代谢行为密切相关。本文综述了CYP2E1基因多态性、酶构型特征与其代谢活性间的关系,并分析了其区别于其他细胞色素P450亚型的表达调控机制。

细胞色素CYP2E1和GST M1与肺癌易感性的病例对照研究

目的 探讨谷胱甘肽转硫酶 (GST)和细胞色素CYP2E1多态性与肺癌易感性的关系。方法 选取广州市广东籍新发肺癌病人 91例及同期非肺部疾患及相同性别的病人 91例作匹配 ,调查他们的吸烟、饮酒等因素的暴露情况。用聚合酶链式反应 (PCR)和限制性片段长度多态性 (RFLP)技术检测CYP2E1和GST的基因多态性。结果 CYP2E1C1C1基因型与C1C2基因型比较 ,其OR为 1.82 (95 %CI =0 .95～ 3.4 0 ) ,GSTM 1基因缺失型的OR值为 1.2 6 (0 .6 9～ 2 .30 ) ,而两者联合分析时 ,则可增加患肺癌的危险 ,其OR值为 2 .13(0 .82～ 5 .5 6 ) ,但无统计学意义 (P >0 .0 5 )。吸烟与肺癌关系密切 ,其OR值为 2 .82(1.5 6～ 5 .12 ) ,当吸烟与这两种基因型协同作用时 ,可明显提高患肺癌的危险性 ,携带CYP2E1C1C1基因型的吸烟者的OR值为 5 .4 2 (2 .0 5～ 14 .32 ) ,GSTM1基因缺失型的吸烟者的OR值为 4 .38(1.81～ 10 .6 1)。多因素logistic回归分析结果表明 :文化程度 (OR为 0 .6 3,0 .4 5～ 0 .86 )、吸烟量 (OR为 1.5 6 ,1.14～ 2 .14 )、无抽油烟机 (OR为 3.77,1.4 8～ 9.5 6 )、食用动物油(OR为 1.6 7,1.2 5～ 2 .2 4 )、胡萝卜 (OR为 0 .4 7,0 .2 2～ 0 .98)、饮酒 (OR为 6 .5 8,1.5 3～ 2 8.3)、直系亲属肺癌史 (OR为 3.75 。

细胞色素CYPⅡE1与肝脏疾病关系的研究进展

在肝细胞微粒体内有1个氧化还原酶系统，由多种水解酶和结合酶组成。这个酶系统在生理情况下，可以促进生理活性物质的灭活和排泄，另一方面也可以促进药物代谢，所以又叫药酶，细胞色素P450是药酶中的一种多功能氧化还原酶，他可以使药物的烃基及芳香基羟化，使硝基及偶氮化合物还原成氨基，因他的一氧化碳结合物的吸收光谱高峰在450nm处，故叫P450，P450是肝药酶中最重要的酶系，参与各种外源物(如药物、化学毒物、致癌物等)和内源物(如类固醇激素、维生素D、胆酸等)在体内代谢过程，P450中现已知有70多种药物代谢酶分别催化不同物质的生物转化。

细胞色素P450酶17基因T-34C多态性与前列腺癌易感性关系的Meta分析

目的探讨细胞色素P450酶17基因(CYP17)T-34C多态性与前列腺癌易感性是否存在相关性。方法检索EMBase、Ovid、PubMed、Highwire press、中国生物医学文献数据库(CBM)、中国期刊全文数据库(CNKI)、万方等数据库。查找国内外公开发表的CYP17 T-34C多态性与前列腺癌易感性关系的研究。以病例组及对照组CYP17T-34C等位基因分布的比值比(OR)为效应指标,应用Review Manager 4.2统计软件根据异质性检验结果选择随机效应模型或固定效应模型对OR进行合并分析。结果最终纳入分析文献19篇,高加索人群病例组4 832例,对照4 746例;东亚人群病例750例,对照1 033例。显性模式下:以野生纯合子TT为参照评估突变纯合子和杂合子(CC+TC)患前列腺癌的风险,高加索人群OR=0.91,95%CI(0.84,0.99),P=0.04;东亚人群OR=1.06,95%CI(0.84,1.34),P=0.63;隐形模式下:以野生纯合子和杂合子(TT+TC)为参照评估突变纯合子CC患前列腺癌的风险,高加索人群OR=0.95,95%CI(0.85,1.07),P=0.40;东亚人群OR=1.05,95%CI(0.85,1.29),P=0.68。结论CYP17 T-34C CC基因型或TC基因型可能是高加索人群中前列腺癌的保护因子。

细胞色素氧化酶CYP1A2基因多态性与利培酮治疗汉族精神分裂症患者疗效的关联研究

目的:探对细胞色素氧化酶CYP1A2基因多态性与利培酮治疗汉族精神分裂症患者疗效的相关性。方法:给予93例汉族精神分裂症患者单一利培酮治疗12周;治疗前后阳性与阴性症状量表(PANSS)、个人和社会功能量表(PSP)及认知功能评估;采用微测序分型技术(SNa Pshot SNP)检测患者及100名汉族正常对照者(对照组)CYP1A2基因5个位点(rs2069514,rs2472304,rs35694136,rs4646427,rs762551)多态性,分析CYP1A2基因多态性与利培酮疗效的关系。结果:两组间5个多态性位点的基因型、等位基因频率及SNPs单倍型比较差异无统计学意义;5个多态性位点不同基因型患者间的临床疗效比较差异无统计学意义;多重线性回归分析发现部分多态性位点与利培酮治疗精神分裂症后阴性症状、一般病理学症状、PANSS总分、注意转移力、注意集中力的疗效有关。结论:未发现细胞色素氧化酶CYP1A2多态性是汉族精神分裂症的易感基因相关证据;CYP1A2基因多态性与利培酮治疗的疗效相关。

锰中毒对鸡肝脏细胞色素P450酶系及CYP2H1 mRNA转录水平的影响

本研究旨在探讨锰对公鸡肝脏细胞色素P450酶系的影响。50日龄海兰褐公鸡400只,随机分为4组,分别在饲料中添加0、600、900、1 800 mg.kg-1MnCl2建立亚慢性锰中毒模型,于30、60、90 d采取肝脏检测肝微粒体细胞色素P450酶系活性以及CYP2H1基因转录水平的变化。结果显示,细胞色素P450、b5含量,氨基吡啉-N-脱甲基酶(AND)和苯胺-4-羟化酶(AH)活性在各个时间点随染锰剂量的增加,基本呈降低趋势,且高剂量组均极显著(P<0.01)低于正常组,低、中剂量组有高于正常组的情况。NADPH-细胞色素C还原酶(CR)和红霉素-N-脱甲基酶(ERND)的活性的变化规律不明显,30和60 d NADPH-细胞色素C还原酶活性呈降低趋势,而90 d时呈升高趋势,且高剂量组极显著(P<0.01)高于正常组。红霉素-N-脱甲基酶在30 d时呈升高趋势,60和90 d时呈波动性降低变化,且高剂量组均极显著(P<0.01)低于正常组。在各个时间点,CYP2H1 mRNA的转录水平除30 d低、高剂量组,60 d中剂量组,90 d低剂量组高于正常组外,其他组均低于正常组。结果提示,锰中毒可影响鸡肝脏细胞色素P450酶系以及CYP2H1 mRNA的转录水平。

lncRNA CYP17A1-AS1对喉鳞癌细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡的影响

目的探讨lncRNA CYP17A1-AS1在喉鳞癌细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡中的作用及其机制。方法实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测喉鳞癌组织和癌旁正常组织中的CYP17A1-AS1表达。在喉鳞癌细胞TU686中转染pcDNA-CYP17A1-AS1,qRT-PCR检测CYP17A1-AS1表达,噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)检测细胞增殖,Transwell检测细胞迁移和侵袭,流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白质印迹法(Western blotting)检测细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、细胞色素P450c17(CYP17A1)、β-连环蛋白(β-catenin)、c-Myc、survivin蛋白表达。结果癌旁组织、Ⅰ、Ⅱ期喉鳞癌组织、Ⅲ、Ⅳ期喉鳞癌组织CYP17A1-AS1表达量分别为(1.00±0.09)、(0.67±0.07)、(0.31±0.06),与癌旁正常组织相比,喉鳞癌组织中CYP17A1-AS1表达量明显下调(P<0.05)。CYP17A1-AS1过表达显著降低TU686细胞活力、细胞侵袭数、细胞迁移数、Cyclin D1、MMP-2、Bcl-2、CYP17A1、β-catenin、c-Myc和survivin蛋白表达,并提高细胞凋亡率和Bax蛋白水平,均差异有统计学意义(P<0.05)。结论 CYP17A1-AS1可能通过抑制CYP17A1并下调wnt/β-catenin信号通路,进而抑制喉鳞癌细胞的增殖、侵袭和迁移,以及促进其凋亡。

人类细胞色素CYP1B1基因表达与癌症

细胞色素CYP1B1是细胞色素P450(CYP)氧化酶超家族、CYP1家族的成员,主要在肝外组织中表达。CYP1B1能催化许多内源性(如雌激素)和外源性化合物包括环境前致癌物(如多环芳烃)及药物的代谢。CYP1B1在肿瘤组织中高表达,在正常组织中不表达或低表达。CYP1B1与多种肿瘤发生发展有关。因此,将CYP1B1作为标志物用于癌症的诊断,以CYP1B1为靶标进行癌症预防和治疗具有广阔的前景。了解CYP1B1基因的表达调控机制及其在癌症发生发展中的作用是CYP1B1应用研究的基础。本文综述了CYP1B1基因表达调控机制的研究进展以及CYP1B1基因表达与癌症关系的研究概况。

细胞色素酶P4501A1(CYP1A1)与免疫性疾病关系的研究进展

细胞色素酶P450是一组含铁血红素超家族,因还原型P450与一氧化碳具有特殊的亲和力,二者的复合物在分光光度计的450nm处有特异吸收峰而得名.P450有三大家族：CYP1、CYP2、CYP3,是内源性、外源性物质转化酶系的主要成员.CYP1的亚家族CYP1A1能够代谢和活化多种环境致癌和致突变物质,多年来一直是生物医药和毒理学的研宄热点.CYP1A1可催化代谢多环芳烃类（PAHs）、

细胞色素氧化酶CYP1A2基因多态性与奥氮平治疗精神分裂症患者疗效的关系分析

目的探讨细胞色素氧化酶CYP1A2基因多态性与精神分裂症患者疗效的关系。方法选取40例精神分裂症患者作为观察组,应用奥氮平治疗3个月,同期40例健康体检正常者作为对照组。应用微测序分型技术检测两组CYP1A2基因3个位点多态性,探讨CYP1A2基因多态性与精神分裂症患者疗效的关系。结果将三种基因型作为自变量,将不同症状治疗前后差值作为因变量行逐步回归分析,结果显示部分多态性位点与精神分裂症患者治疗后阳性与阴性症状量表(PANSS)阴性症状分、PANSS总分、PANSS一般精神病理分、注意转移力有一定关系,但差异无统计学意义(P>0.05)。PANSS阴性症状分、PANSS阳性症状分、PANSS总分、一般精神病理分、注意集中力、注意转移力、注意选择性均为影响精神分裂症患者疗效的相关因素,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论未发现细胞色素氧化酶CYP1A2多态性为精神分裂症的易感基因相关证据,但CYP1A2基因多态性与精神分裂症患者疗效有一定关系。

细胞色素P4502E1(CYP2E1)与胃癌遗传易感性

为探讨细胞色素P4502E1(CYP2E1)基因变化与胃癌易感的关系,采用病例—对照分子流行病学研究方法和多聚酶链反应技术—限制性片段长度多态性(PCR—RFLP),对142例胃癌患者和167例正常对照者CYP2E1基因RsaⅠ酶切位点进行多态性分析。结果显示胃癌患者和正常对照人群在基因型和等位基因频率上均无显著的统计学差异;我国人群CYP2E1 RsaⅠ酶切位点多态性的分布频率与日本人群相近,与欧美人群差异较大。

家蚕细胞色素P450 CYP337A1的原核表达

以含有CYP337A1基因完全编码框的克隆载体质粒DNA为模板进行PCR扩增,产物经TA克隆测序鉴定后,亚克隆至原核融合表达载体PET50(b)(含有编码64.3 kD的Nus.Tag蛋白标签)中,在大肠杆菌BL21(DE3)中进行原核表达。利用SDS-PAGE方法,以空载和未诱导菌体作对照,对细菌总蛋白进行电泳分析,结果表明:经1mmol/L IPTG诱导2h后,即能看到1条大约120 kD的蛋白质特异带,与预计大小一致。进一步利用不同时间、不同温度以及不同浓度的IPTG进行诱导结果比较,发现在诱导时间为2h,温度为32℃,IPTG浓度为0.6 mmol/L的诱导条件下,融合蛋白表达量最大。该实验为利用该基因的蛋白产物进行功能分析创造了条件。

检测细胞色素P-450基因族中CYP1A1基因表达的一个简捷方法(英文)

NMR1系雄性小鼠被用来研究肺微粒体细胞色素P450家族中一个同功基因CYP1A1在香烟烟雾的诱导下表达.双轮回‘聚合酶链式反应’(PCR)和‘反向转录酶-聚合酶链式反应’(RT-PCR)被用来检测基因CYP1A1的转录水平.代表CYP1A1蛋白活性的7-乙氧基试卤灵-0-去乙基酶(EROD)的活性被用来检测基因CYP1A1的表达.双轮回‘聚合酶链式反应’(PCR)和‘反向转录酶-聚合酶链式反应’(RT-PCR)被用来检测基因CYP1A1的转录水平.测试结果表明在吸入香烟烟雾的情况下,小鼠肺微粒体EROD的活性和基因CYP1A1的转录水平是同步增加的.这个结果不同于以前在同样实验条件的一个自相矛盾的结果,即在CYP1A1蛋白增加时,基因CYP1A1的转录水平却是下降或不变.这说明本文所使用的方法可能要优于以前的实验方法.