细胞色素P4502E1(CYP2E1)与胃癌遗传易感性

为探讨细胞色素P4502E1(CYP2E1)基因变化与胃癌易感的关系,采用病例—对照分子流行病学研究方法和多聚酶链反应技术—限制性片段长度多态性(PCR—RFLP),对142例胃癌患者和167例正常对照者CYP2E1基因RsaⅠ酶切位点进行多态性分析。结果显示胃癌患者和正常对照人群在基因型和等位基因频率上均无显著的统计学差异;我国人群CYP2E1 RsaⅠ酶切位点多态性的分布频率与日本人群相近,与欧美人群差异较大。

注射用丹参总酚酸(冻干)对人CYP450酶和P-糖蛋白体外抑制作用及对大鼠CYP1A2和CYP3A体内诱导作用(英文)

目的探讨注射用丹参总酚酸(冻干)(SLI)对人CYP450酶和P-糖蛋白体外抑制作用以及对大鼠CYP1A2和CYP3A体内诱导作用。方法①应用P450-GloTMCYP450检测试剂盒,通过化学发光法测定SLI和经典抑制剂对细胞色素P4501A2(CYP1A2),CYP2D6,CYP3A4,CYP2C19和CYP2C9的IC50值,通过比较SLI和经典抑制剂对相应细胞色素P450亚型的IC50值来判断SLI对人CYP450酶的体外抑制作用。②Wistar大鼠分别iv给予SLI 3,10和30 mg·kg-1和诱导剂苯巴比妥钠20 mg·kg-1,采用探针底物法,通过比较代谢产物的生成速率来评价SLI对大鼠CYP1A2和CYP3A的诱导作用。③应用ATP酶检测试剂盒,通过化学发光法测定ATP酶活性来评价SLI是否为P-gp的底物或抑制剂。结果①CYP1A2,CYP2C9,CYP2C19,CYP2D6和CYP3A4抑制剂的IC50与SLI对其的IC50进行比较(CYP1A2:0.12μmol·L-1vs 840μmol·L-1;CYP2C9:3.362μmol·L-1vs 704μmol·L-1;CYP2C19:3.236μmol·L-1vs 306μmol·L-1;CYP2D6:0.117μmol·L-1vs 2660μmol·L-1;CYP3A4:0.078μmol·L-1vs 1780μmol·L-1)。②与空白对照组(86.4±6.3)nmol·g-1.min-1相比,SLI 3,10和30 mg·kg-1组CYP1A2活性分别为83.4±6.6,82.5±4.0和(83.4±6.6)nmol·g-1.min-1。与空白对照组(16.1±0.9)nmol·g-1.min-1比较,SLI 3,10和30 mg·kg-1组CYP3A活性分别为15.7±0.6,15.9±0.7和(15.9±1.0)nmol·g-1.min-1,无显著性差异。③以临床血药浓度为依据设计的一系列浓度的SLI 0.0002,0.0006,0.002,0.006,0.017,0.052,0.156和0.468 g.L-1的ATP酶活性分别与空白对照组进行比较(5.8,5.3,5.8,5.5,5.8,5.2,,5.8,5.3,vs 5.75μmol·g-1.min-1),无显著性差异。结论SLI临床给药剂量既不能体外抑制人CYP1A2,CYP2D6,CYP3A4,CYP2C19和CYP2C9酶活性,也不能诱导大鼠CYP1A2和CYP3A,同时也不是P-gp的体外抑制剂或底物。

不同细胞色素P450 2C19基因型肝病合并消化性溃疡患者泮托拉唑钠血药浓度测定

背景:细胞色素P4502C19(CYP2C19)基因多态性对第一代质子泵抑制剂(PPI)的代谢有直接影响。CYP2C19的表达具有肝脏特异性。目的:观察不同CYP2C19基因型肝病合并消化性溃疡患者泮托拉唑钠代谢的差异,探讨肝脏病变对CYP2C19活性的影响。方法:合并消化性溃疡的21例原发性肝癌患者和22例脂肪肝患者纳入研究,25名健康志愿者作为对照。受试者口服泮托拉唑钠40mg/d一周,分别于服药1d和7d后采血,以反相高效液相色谱法测定血浆泮托拉唑钠浓度。结果:服药7d后,健康对照组、脂肪肝组和原发性肝癌组CYP2C19强代谢者的血浆泮托拉唑钠浓度均显著低于弱代谢者(P<0.05)。无论是强代谢者还是弱代谢者,服药7d后血浆泮托拉唑钠浓度均表现为原发性肝癌组>脂肪肝组>健康对照组(P<0.05)。结论:CYP2C19活性与肝病严重程度呈负相关。终末期肝病患者泮托拉唑钠血药浓度明显升高,尤其是CYP2C19弱代谢者。

丹参酮对大鼠细胞色素P-450酶系和谷胱甘肽转移酶的作用

目的探讨丹参有效成分丹参酮 (Tan)对大鼠肝、肾组织内的细胞色素P 450酶 (cytochromeP 450,CYP)系和谷胱甘肽转移酶(GT)的影响。方法给予SD雄性大鼠丹参酮 (100mg·kg-1 )灌胃,每日 1次,连续10天后,选用CYP1A1、1A2、2B1、2E1及 3A特异性代谢底物,检测它们在肝和肾微粒体中的活性,同时检测肝、肾微粒体中的GT水平变化。结果实验表明,丹参酮可诱导肝微粒体内的CYP1A1、CYP1A2和CYP2B1活性显著升高(均P<0. 01),同时显著抑制CYP2E1的活性 (P<0. 01),也可诱导肝微粒体中GT的活性升高 (P<0.05)。结论丹参酮对CYP亚型的不同调节作用可能会影响与其合用药物在体内的代谢消除,丹参酮对GT的影响也具有一定的临床意义。

稳定表达人细胞色素P4501A2的HepG2细胞的建立及其代谢效应

目的 :建立稳定表达人细胞的色素 P4 5 0 1A2 (CYP1A2 )的 Hep G2细胞。方法 :将所克隆的野生型CYP1A2 c DNA从重组质粒 p GEM- CYP1A2中用 Kpn / Bam H 双酶切 ,并亚克隆到哺乳动物细胞表达载体p REP9中。再将重组质粒转化感受态大肠杆菌 Top10 ,用氨苄青霉素抗性筛选和限制酶谱鉴定。改良的磷酸钙介导的细胞转染法将重组质粒 p REP9- CYP1A2转染肝癌细胞 Hep G2 ,用 RT- PCR技术对转基因细胞的 CYP1A2m RNA表达作了分析 ,并用 MTT法比较转基因细胞对黄曲霉素 B1(AFB1)细胞毒敏感试验。结果 :与 Hep G2细胞相比 ,Hep G2 - CYP1A2转基因细胞表达 CYP1A2 m RNA,能增强 AFB1的细胞毒作用。结论 :建立了稳定表达CYP1A2的转基因细胞系 ,可用于由 CYP1A2参与的毒理学与药物代谢研究。

重组CYP2D26主要B细胞表位在Ⅱ型自身免疫性肝炎小鼠模型构建中的效应研究

目的研究在大肠杆菌中以重组病毒样颗粒形式表达的人II型自身免疫性肝炎标志蛋白CYP2D6主要抗原表位aa262-270免疫小鼠后对构建小鼠自身免疫性肝炎模型的效应。方法设计人II型自身免疫性肝炎标志蛋白主要抗原表位aa262-270(WDPAQPPRD)的正负链寡核苷酸片段,经退火后插入表达乙肝核心蛋白HBcAg的质粒pNP中(pNP质粒由pThioHisA质粒插入HBcAg基因片段构建而成)。构建成质粒pNP-AIH2;转染大肠杆菌DH5α感受态细胞;以IPTG诱导重组蛋白表达,经硫酸铵沉淀、洗涤,密度梯度离心纯化和脱盐后,肌肉注射免疫小鼠3次,以ELISA和western blot检测免疫后小鼠特异性抗体的产生和水平,通过转氨酶检测和肝脏石蜡切片HE染色观察炎症反应。结果 SDS-PAGE结果显示重组菌诱导表达的目的蛋白分子量为19kD,与预期相符;电镜证实其以可溶性的病毒样颗粒形式存在;ELISA显示,免疫小鼠血清与包被的肝脏匀浆蛋白特异反应,检测到持续存在的特异抗体,滴度至少为1:2000;western blot检测表明,抗血清在分子量约为55kD的地方产生了一个特异的条带,与小鼠CYP2D6蛋白大小一致。与正常对照相比,实验组小鼠转氨酶水平未明显升高,肝切片HE染色没有观测到明显的病理特征。结论携带人II型自身免疫性肝炎标志蛋白CYP2D26主要表位的病毒样颗粒免疫小鼠后,可刺激产生较强的特异抗体水平,但在观测时间内,未见诱导小鼠产生明显的肝脏炎症反应。

肝硬化模型大鼠CYP2B6和CYP3A酶活性变化

目的研究CYP2B6和CYP3A酶活性在肝硬化模型大鼠体内的变化。方法雄性SD大鼠分别采用每周2次ip给予30%CCl4连续7周、饮用含0.03%-0.04%硫代乙酰胺（TAA）液连续10周、复合法（sc给予用花生油配制的40%CCl4＋高脂饲料＋15%乙醇,共6周）及免疫法（sc给予牛血清白蛋白20-40 mg·kg-1,共11周）制备肝硬化模型后,联合ig给予安非他酮15 mg·kg-1和咪达唑仑10 mg·kg-1。测定给药前及给药后0.083,0.25,0.5,1,1.5,2,2.5,3,4,6,8,12和24 h的血药浓度。结果与正常对照组相比,四氯化碳组和TAA组的2个探针药曲线下面积（AUC）均显著性升高（P〈0.05）,峰浓度c max显著性升高（P〈0.01）,清除率Cl/F均显著性下降（P〈0.05）;复合法组2个探针药c max均显著性下降（P〈0.05）;免疫组2个探针药的药代参数均无统计学意义。结论 CCl4和TAA诱导的肝硬化模型大鼠体内CYP2B6和CYP3A酶活性降低。

银杏内酯B对CYP2C9底物双氯芬酸在大鼠体内药动学和药效学的影响

目的:在大鼠体内,以双氯芬酸为工具药,研究银杏内酯B对双氯芬酸药动学和药效学的影响,阐明银杏内酯B对大鼠肝细胞色素P450 2C9(CYP 2C9)是否有抑制或诱导作用。方法:通过观察大鼠连续给予银杏内酯B(剂量为12 mg·kg^(-1),ip,bid,连续7 d)前后对单次给予临床等效量的双氯芬酸(15 mg·kg^(-1),iv)的药时曲线及药动学参数的改变,评价其对双氯芬酸药动学的影响,并评价银杏内酯B连续给药后对单次给予双氯芬酸抗足跖肿胀作用药效学的影响。结果:连续给予银杏内酯B后,与用药前比较,双氯芬酸及其主要代谢物4-羟基双氯芬酸的血药浓度及其药动学参数未见显著性改变;双氯芬酸抗足跖肿胀作用亦未见显著性改变。结论:多剂量给予银杏内酯B对临床等效量双氯芬酸在大鼠体内药动学和药效学无显著影响;银杏内酯B对大鼠肝CYP 2C9无明显的抑制或诱导作用。

人肝微粒体中CYP2B6对氯胺酮代谢的催化作用

氯胺酮是临床常用静脉麻醉药，特别是广泛用于小儿短小手术的麻醉和术前基础麻醉。已知氯胺酮进入体内之后，大部分经肝脏细胞色素P450代谢，形成去甲氯胺酮。有必要进一步研究氯胺酮的代谢饥制和影响其代谢的遗传机制。

心肌缺血再灌注损伤对大鼠肝细胞色素P450酶代谢的影响

目的探讨心肌缺血再灌注状态下,大鼠肝代谢功能和相关的氧化/抗氧化能力变化。方法雄性SD大鼠随机分为5组,除假手术组外,制备在体心肌缺血再灌注模型,并于缺血40min、再灌注15,60和180min分别处死大鼠,检测血浆丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)活性,肝匀浆丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性;以红霉素N-脱甲基酶、五氧基异噁唑O-脱乙基酶和苯胺羟化酶法为探针测定肝细胞色素P450(CYP)3A,CYP2B1和CYP2E1催化功能;RT-PCR法检测肝Ⅰ相药物代谢酶CYP3A1,CYP2B1/2,CYP2E1,以及Ⅱ相解毒酶NAD(P)H醌氧化还原酶(NQO1)及其上游因子NF-E2相关因子(Nrf2)mRNA水平。结果再灌注60 min,肝匀浆MDA含量升高(P<0.05),SOD活力下降(P<0.01);再灌注180 min时,血浆ALT和AST活性升高(P<0.05)。Nrf2基因于再灌注60 min时显著激活(P<0.05),下游因子NQO1 mRNA于再灌注180 min时明显上调(P<0.05)。CYP3A催化功能和mRNA水平分别于再灌注60和180 min开始明显降低(P<0.05);CYP2B1/2 mRNA和催化功能水平分别于再灌注15和180 min开始明显降低(P<0.05);CYP2E1催化功能无明显改变。结论大鼠心肌缺血再灌注可引起肝组织氧化应激及并导致功能损伤。在再灌注早期,具有抗氧化功能的NQO1在转录水平显著上调,其机制可能与上游因子Nrf2被激活相关;CYP3A和CYP2B催化功能在转录和(或)转录后水平明显下调。

CYP2B和CYP3A参与药物代谢的影响因素及对氯胺酮代谢的影响

目的:为进一步研究氯胺酮在成瘾动物体内代谢动力学规律及细胞色素P_(450)活性的调控和相关性研究提供参考。方法:以"细胞色素P_(450)""性别""氯胺酮""CYP2B""CYP3A""Sex""Ketamine"等为关键词,组合查询1980-2016年在Pub Med、Elsevier、中国知网、万方、维普等数据库中的相关文献,对CYP2B和CYP3A参与药物代谢的诱导、抑制和性别等影响因素及对氯胺酮代谢的影响进行综述。结果与结论:共检索到相关文献256篇,其中有效文献62篇。CYP2B和CYP3A是重要的细胞色素P_(450),二者参与代谢了临床大多数药物,包括氯胺酮。诱导、抑制和性别差异等因素主要是通过改变细胞色素P_(450)的基因表达和蛋白表达来影响药物在动物体内代谢的。氯胺酮是一种被广泛滥用的药物,具有成瘾性和个体的耐受差异性。通过研究细胞色素P_(450)的基因表达和蛋白表达有利于指导研究氯胺酮在成瘾动物体内的特殊代谢动力学规律,以及为阐释成瘾动物体内的细胞色素P_(450)活性的调控机制和相关性研究提供理论支持。

细胞色素P2C19基因多态性对行介入治疗急性心肌梗死患者抗血小板药物的影响

目的检测行PCI的急性心肌梗死(AMI)患者细胞色素P2C19(CYP2C19)基因多态性,分析不同基因型患者抗血小板治疗的疗效。方法收集2016年6月~2018年6月郑州大学第二附属医院心内科接受PCI首次治疗的AMI患者247例,其中快代谢型(EM)56例,中间代谢型(IM)97例,慢代谢型(PM)94例,根据治疗方法分为氯吡格雷组172例和替格瑞洛组75例。采用流式细胞仪检测P选择素(CD62P)和血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa复合物纤维蛋白原受体(PAC-1)表达水平,采用PCR检测2组患者CYP2C19基因型。结果2组患者CYP2C19基因型分布和代谢类型分型比较,差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后,氯吡格雷组EM患者CD62P和PAC-1表达明显低于IM和PM患者(3.36±0.54 vs 4.52±1.07和4.47±1.25,2.24±0.81 vs 3.07±0.84和3.54±0.96,P<0.01),IM与PM患者CD62P和PAC-1表达比较及替格瑞洛组EM、IM与PM患者CD62P和PAC-1表达比较,差异无统计学意义(P>0.05);氯吡格雷组EM、IM和PM患者CD62P和PAC-1表达分别明显高于替格瑞洛组同代谢类型患者(P<0.05,P<0.01)。结论氯吡格雷和替格瑞洛均可抑制血小板活化标志物CD62P和PAC-1表达,替格瑞洛对血小板活化标志物的抑制作用强于氯吡格雷、且不受CYP2C19基因多态性的影响,在临床上,优先推荐阿司匹林联合替格瑞洛用于PCI后抗血小板治疗。

表没食子儿茶素-3-没食子酸酯对细胞色素P450酶活性的影响

目的研究表没食子儿茶素-3-没食子酸酯(EGCG)对人肝微粒体中细胞色素P450(CYP450)酶活性的影响。方法以未处理的肝微粒体作为阴性对照组,CYP450酶各亚型的特异性抑制剂作为阳性对照组,通过EGCG或特异性抑制剂与探针底物共同孵育,高效液相色谱法定量分析特异性底物的代谢产物,分析EGCG对CYP450酶各亚型活性的影响,并通过统计学分析拟合获得相应的动力学参数。结果与阴性对照组相比,EGCG显著抑制了CYP1A2酶和CYP3A4酶的活性,但抑制作用远小于阳性抑制剂的抑制作用。EGCG对CYP1A2酶和CYP3A4酶的抑制作用受EGCG浓度的影响,IC50值分别为8.69和14.07μmol/L。EGCG能够竞争性抑制CYP1A2酶的活性,而对CYP3A4酶为非竞争性抑制作用。此外,EGCG对CYP3A4酶的抑制作用具有时间依赖性,随着培养时间的延长,抑制作用逐渐增强。结论EGCG可显著抑制CYP1A2酶及CYP3A4酶的活性。因此,在EGCG的应用中应充分考虑可能出现的药物相互作用及潜在风险。

ABCB1及CYP2C19基因多态性对氯吡格雷治疗的影响

氯吡格雷是一种人工合成的噻吩并吡啶类抗血小板药物，广泛应用于心脑血管病预防及治疗过程中。其本身为无作用的前体药物，口服后约85%的氯吡格雷被酯酶水解，只有15%的药物经肝脏的细胞色素P450酶系（cytochromeP450，CYP）转化成为活性成分后发挥作用[1]。吸收后的氯吡格雷经CYP活化过程分为两步[2]：第一步，氯吡格雷经细胞色素氧化酶P450-2C19（CYP2C19），细胞色素氧化酶P450-1A2（CYP1A2）和细胞色素氧化酶P450-2B6（CYP2B6）转化为2-氧-氯吡格雷，转化比例分别约为45%、36%、19%。第二步，2-氧-氯吡格雷经细胞色素氧化酶P450-3A4/5（CYP3A4/5），CYP2B6，CYP2C19和细胞色素P450-2C9（CYP2C9）转化为硫醇活化代谢产物，转化比例分别约为40%、33%、21%和7%。之后活化的氯吡格雷与血小板表面的二磷酸腺苷（ADP）P2Y12受体不可逆的结合，阻断ADP对腺苷环化酶的抑制作用，从而发挥抑制血小板聚集的功能。

抑制NF-κB的活化对免疫性肝损伤大鼠CYP1A2的影响

目的研究在免疫性肝损伤大鼠模型中,抑制核转录因子κB (nuclear factor kappa B,NF-κB)的活化对细胞色素P450总含量、亚型1A2(CYP1A2)表达、代谢活力的影响。方法采用尾静脉注射卡介苗(BCG)125 mg·kg^(-1) 14 d制备免疫性肝损伤大鼠模型。采用双光束紫外分光光度法测定肝匀浆中CYP450总含量;肝脏组织HE染色法和测定血清中ALT、AST水平,检测大鼠肝损伤情况; Western blot法检测大鼠肝组织中CYP1A2蛋白表达; HPLC法检测CYP1A2的探针药物茶碱的血浆药物浓度经时变化,从而反映CYP1A2的代谢活力。结果大鼠尾静脉注射BCG 14 d后,可引起肝组织炎性细胞浸润,肝重、脾重增加,血清转氨酶ALT及AST水平明显升高,CYP450总含量降低,CYP1A2表达和代谢活力明显降低。采用吡咯烷二硫氨基甲酸(PDTC)抑制NF-κB活化,可缓解CYP450总含量的降低,减缓CYP1A2蛋白表达和代谢活力的下调。结论免疫损伤刺激明显下调CYP1A2,钝化NF-κB活化可明显抑制免疫性肝损伤大鼠肝组织中CYP1A2的下调,NF-κB可能参与CYP1A2下调机制。

CYP2B6单核苷酸多态性与丙型肝炎病毒复发性的相关研究

聚乙二醇干扰素联合利巴韦林是目前治疗丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)感染最常用方案,70%以上患者可达到有效的持续性病毒学应答(sustained virological response,SVR),但仍有部分患者在抗病毒治疗后出现复发,影响预后[1]。细胞色素P450家族2B6亚基(Cytochromes P4502B6,CYP2B6)的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)与HCV治疗反应相关[2],但是否与HCV复发相关目前未见报道。本研究主要探讨CYP2B6的SNP与HCV初次感染患者治疗后复发的相关性。

CYP2E1基因多态和血清硒水平与肺癌关系的研究

目的：探讨CYP2E1基因RsaⅠ多态性单独作用和血清硒水平联合作用时与肺癌危险性的关系。方法：采用成组病例一对照研究方法，选择广州地区原发性肺癌患者58例，对照62例，制定统一调查表进行调查，用PCR检测CYP2E1基因多态性，用GHAFS测定血清硒。结果：CYP2E13种基因型在病例组与对照组的总体分布无统计学意义（X^2=1.578，P=0．454），CYP2E1多态性单独作用时与肺癌危险性关系无统计学意义（P〉0．05）；血清硒水平低（〈0．109mg／L）联合CYP2E1 C1C1基因型时OR为9．86（95％CI=1．13～85．99）。结论：CYP2E1基因单独作用与广州地区肺癌关系不明显，但血清硒水平低与CYP2E1 C1C1基因型之间存在协同作用，使肺癌发生的危险性显著增加。

2-十三烷酮诱导棉铃虫(Helicoverpa armigera)细胞色素P450 CYP6B6时空表达规律的研究

植物次生物质2-十三烷酮能够诱导棉铃虫细胞色素P450 CYP6B6基因的过量表达,以6龄棉铃虫(Helicoverpa armigera)幼虫为对象,研究2-十三烷酮对棉铃虫细胞色素P450 CYP6B6的诱导作用,并对其表达规律进行了初探。分别采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和免疫组化的方法,分析棉铃虫在终浓度为10 mg·g-1的2-十三烷酮胁迫下,不同时间及不同组织部位CYP6B6基因在mRNA水平和蛋白水平上的表达变化规律。qRTPCR结果显示:用添加了2-十三烷酮的人工饲料饲喂棉铃虫不同时间后,在头壳中CYP6B6 mRNA的表达量一直低于对照组,到48 h时与对照组具有显著差异(t4=15.32,P=0.000 1);在脂肪体中随着时间的推移,表达量呈升高趋势,在36 h已过量表达(t4=7.627,P=0.001 6);在24 h时体壁和中肠组织的表达量分别较对照组提高了2.06倍和7.16倍,之后表达量均呈现先降低后升高的趋势,且在48 h时达到最大。免疫组化结果显示:在棉铃虫幼虫组织中发现CYP6B6蛋白在体壁、脂肪体、中肠中均有表达,相比之下在体壁中表达量较高。该研究为深入了解棉铃虫P450 CYP6B6的表达调控机制及其参与杀虫剂抗性的研究奠定了基础。

厚朴酚与和厚朴酚对药物代谢酶CYP2C19活性影响

目的了解厚朴的主要成分厚朴酚与和厚朴酚对人体最主要的药物代谢酶CYP2C19活性的抑制作用,以预测中药-药物相互作用可能性。方法采用肝微粒体孵育法,以奥美拉唑为CYP2C19的活性探针药物,采用液相色谱-质谱联用法测定代谢产物5-羟基奥美拉唑的浓度,计算代谢产物的初始生成速率,比较加入不同浓度的厚朴酚、和厚朴酚或空白溶剂(pH值7.4磷酸盐缓冲液)时代谢产物的初始生成速率。结果厚朴酚与和厚朴酚对CYP2C19抑制作用的IC50值分别为0.527μmol/L和0.841μmol/L,抑制常数(Ki)分别为0.449μmol/L和0.702μmol/L,厚朴酚与和厚朴酚对CYP2C19抑制作用类型均为非竞争性抑制。结论厚朴中厚朴酚与和厚朴酚均对CYP2C19活性有明显的抑制作用,可能导致药物相互作用。