细胞色素P450家族成员21A2活性与非酒精性脂肪性肝病的关系

目的比较不同人群细胞色素P450家族成员21A2(CYP21A2)表达水平和氧合活性差异,并进一步探索CYP21A2活性缺陷与非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)以及NAFLD合并多囊卵巢综合征(PCOS)的相关性。方法选取2021年3月至2022年3月就诊于新疆医科大学第一附属医院消化内科的NAFLD患者400例,根据其是否合并PCOS,将其分为NAFLD组(n=200)和NAFLD+PCOS组(n=200);另选取同期健康女性志愿者为对照组(n=100)。采集3组研究对象的外周血样,采用反转录实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)和蛋白质印迹技术检测其全血CYP21A2 mRNA和蛋白表达水平;分离血清,测定脂代谢标志物甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)含量,氧合活性标志物过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化脂质(LPO)、丙二醛(MDA)、血红素加氧酶-1(HO-1)和髓过氧化物酶(MPO)含量;同时提取外周血DNA,用竞争性等位基因特异性PCR实验分析CYP21A2-rs772588285位点突变情况。结果相较于对照组,NAFLD组与NAFLD+PCOS组患者的CYP21A2 mRNA和蛋白表达水平均降低(P<0.05),但NAFLD组与NAFLD+PCOS组间差异无统计学意义(P>0.05);相较于对照组,NAFLD组和NAFLD+PCOS组TG、TC、LDL、LPO、MDA和MPO含量均增多(P<0.05),HDL、CAT含量降低(P<0.05),但NAFLD组与NAFLD+PCOS组间差异无统计学意义(P>0.05);此外,对照组和NAFLD组的CYP21A2基因rs772588285位点G/A基因型分布频率差异有统计学意义(P<0.05)。结论CYP21A2表达水平及氧合活性可能与NAFLD发病存在相关性,与NAFLD是否合并PCOS可能关系不大。

CYP27A1对肝细胞癌预后的影响及生物学作用

目的分析细胞色素P450家族27亚家族A成员1(CYP27A1)对肝细胞癌(HCC)预后的影响及生物学作用,并初步探讨其影响HCC生长的分子机制。方法基于癌症基因数据库(TCGA)分析CYP27A1在HCC中的表达情况及其与HCC患者预后的关系;基于CYP27A1表达量中位值,将样本分为CYP27A1高表达组(n=170)与CYP27A1低表达组(n=170),利用基因集富集分析(GSEA)分别对两组进行基因集富集分析;免疫荧光染色检测及数据库查找CYP27A1蛋白亚细胞定位;构建过表达CYP27A1质粒,转染HCC细胞MHCC-97H和HCCLM3,设置阴性对照组(转染空载质粒)与CYP27A1过表达组(转染过表达CYP27A1重组质粒)。采用CCK-8法、流式细胞仪、活性氧(ROS)荧光探针等检测过表达CYP27A1对HCC细胞活力、凋亡及ROS生成的影响;结合生物信息学分析CYP27A1与ROS生成相关基因及HCC增殖相关基因表达的相关性。结果与正常肝组织比较,HCC组织中CYP27A1 mRNA表达量明显降低(P<0.01)。CYP27A1表达与HCC患者性别、T分期、肿瘤分级和肿瘤分期有关(P<0.05)。CYP27A1低表达组总生存率明显低于高表达组(P<0.01)。GSEA富集分析结果显示,CYP27A1低表达组HCC“干性”亚类和“增殖”亚类基因集水平升高。在MHCC-97H和HCCLM3细胞中,CYP27A1主要定位于细胞核;在HepG2细胞中,CYP27A1主要定位于线粒体。与阴性对照组比较,过表达CYP27A1后,HCC细胞活力下降(P<0.01)、ROS水平降低(P<0.05),而细胞凋亡水平无明显改变(P>0.05)。CYP27A1与抑制ROS生成相关基因表达呈正相关(P<0.05),抑制ROS生成相关基因与HCC增殖相关基因表达呈负相关(P<0.05)。结论CYP27A1在HCC中呈低表达,下调CYP27A1可能通过促进ROS生成促进HCC恶性生长。

细胞色素P4502E1稳定转染Flp-In^(TM)CHO细胞模型的建立

目的构建稳定表达细胞色素P450家族2亚家族E成员1(CYP2E1)的Flp-In^(TM)CHO细胞系,并进行药物相互作用筛选。方法利用Lipofectamine■2000转染试剂将pcDNA5/FRT-CYP2E1重组质粒和pcDNA5/FRT-空质粒-并转染Flp-In^(TM)CHO细胞,采用潮霉素B(500 mg/L)进行稳定性筛选、聚合酶链式反应(PCR)检测细胞中是否成功插入能够表达CYP2E1酶的目的基因、实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞中CYP2E1 mRNA和蛋白表达,采用对乙酰氨基酚(APAP)检测CYP2E1酶对APAP的毒性敏感性。结果与Flp-In^(TM)CHO空质粒组比较,PCR结果显示Flp-In^(TM)CHO-CYP2E1细胞分别在2000 bp、200 bp左右有CYP2E1酶目的基因的明显条带;qRT-PCR和Western blot结果显示,Flp-In^(TM)CHO-CYP2E1细胞的CYP2E1 mRNA和蛋白表达水平均明显增加(P<0.001);APAP检测结果显示CYP2E1酶对APAP的毒性敏感性也显著增强。结论成功构建了稳定表达CYP2E1的Flp-In^(TM)CHO细胞模型,且表达的CYP2E1酶对APAP的毒性敏感性增强。

细胞色素P450酶2C19基因多态性对TIPS术后患者服用氯吡格雷效果的影响

目的评估细胞色素P450酶2C19(CYP2C19)基因多态性对经颈静脉肝内门体分流术(TIPS)肝硬化患者术后服用氯吡格雷抗血小板治疗的影响。方法收集2013年1月至2014年12月接受TIPS术治疗的171例肝硬化患者临床资料。所有患者均于术中采集门静脉及肘静脉血液样本并行CYP2C19基因检测。术后每3个月临床随访,比较分析基因检测结果与临床随访结果。结果 110例TIPS术前无输血且术后规律服用氯吡格雷患者纳入本研究。术后平均服用氯吡格雷时间为192.4 d(31~517 d),门静脉血及肘静脉血基因检测结果一致,CYP2C19基因型为*1/*1有49例(44.5%)、*1/*2有27例(24.6%)、*1/*3有18例(16.4%)、*2/*2有11例(10.0%)、*2/*3有3例(2.7%)、*3/*3有2例(1.8%);随访显示慢代谢型基因携带患者分流道功能异常发生率为87.5%(14/16),较中等代谢型患者(20.0%,9/45,χ2=22.9,P=0.006)及快代谢型患者(8.2%,4/49,χ2=37.91,P=0.000 1)明显增高;Cox回归模型多变量分析提示CYP2C19慢代谢型基因变异,是分流道功能异常的重要预测因素(95%CI 1.80~9.03,P=0.000 7)。结论 CYP2C19慢代谢基因变异(*2/*2、*2/*3、*3/*3)是影响TIPS术后患者氯吡格雷治疗效果的重要因素之一,术前检测可为术后提供较为有效的抗血小板治疗方案。

CYP2D6基因分型影响因素研究进展

细胞色素P450家族2亚科D成员6(CYP2D6)是细胞色素P450酶家族中的重要药物代谢酶,是抗抑郁药物、抗精神病药物和阿片类镇痛药物等主要的代谢酶。CYP2D6基因位点的复杂性和诸多等位基因突变体造成了CYP2D6表型的多态性,目前已报道170余种等位基因突变体。CYP2D6酶活性变化很大,从无活性到超快代谢均存在,根据酶活性可将不同表型携带者分为超快代谢者、正常代谢者、中间代谢者和弱代谢者。随着个体化医疗的发展,CYP2D6基因分型试验可以辅助药物遗传学和基因分型技术的研究和临床应用。然而,由于CYP2D6基因存在复杂的突变,包括单核苷酸突变、插入、缺失、基因拷贝数变异和基因重组。CYP2D6基因不仅存在个体化差异,且在不同种族之间等位基因的频率也明显不同。另外,人体内同时存在与CYP2D6同源性很高的非功能性基因CYP2D7,通过基因检测分析CYP2D6表型是一项非常具有挑战性的工作。文章总结了CYP2D6基因的多态性和基因分型的复杂性,并分析了部分不同的基因型突变对CYP2D6基因分型的影响,以帮助临床通过基因分型方法对CYP2D6酶活性进行预测。

CYP2A13/MRP2双表达Flp-In^TM CHO细胞系的建立

目的构建稳定表达细胞色素P450家族2亚家族A成员13(CYP2A13)和多药耐药相关蛋白2(MRP2)的双转染Flp-In^TM CHO细胞系.方法分别构建pCMV6-NEO-CYP2A13和pcDNA5-MRP2重组质粒.先将pCMV6-NEO-CYP2A13重组质粒转染至Flp-In^TM CHO细胞中,通过有限稀释法和4-甲基亚硝胺-1-3-呲啶基-1-丁酮(NNK)细胞毒性实验筛选CYP2A13活性较高的CYP2A13-Flp-In^TMCHO细胞.再将pcDNA5-MRP2转染至CYP2A13-Flp-In^TMCHO细胞中.用实时定量P眈CR、Western blot法和NNK细胞毒性实验,检测双转染细胞及正常细胞中CYP2AI3和MRP2的表达量及其活性,筛选稳定表达CYP2A13和MRP2的FlpInTMCHO细胞.结果相较于未转染细胞,CYP2AI3-Flp-In^TMCHO细胞的CYP2A13表达增加,NNK毒性敏感度增加;CYP2A13/MRP2-Flp-In^TM CHO细胞的CYP2A13和MRP2表达也明显增加.和CYP2AI3-Flp-In^TM CHO细胞相比,CYP2A13/MRP2-Flp-In^TM CHO细胞的CYP2A13表达量无明显差异,MRP2表达增加,NNK毒性敏感度明显降低.结论成功建立了CYP2A13和MR凹的双转染细胞模型,为呼吸道致癌物质原位激活研究奠定了基础.

携带CYP3A5*1对移植患儿他克莫司给药剂量、血药浓度、血药浓度/剂量值影响的Meta分析

目的系统评价携带细胞色素P450家族3亚家族A成员5(CYP3A5)*1对移植患儿他克莫司给药剂量、血药浓度和血药浓度/给药剂量(C/D)值的影响。方法计算机检索PubMed、Scopus、ISI Web of Science、ProQuest、中国知网、维普资讯中文期刊服务平台、万方数据知识服务平台,纳入携带CYP3A5*1(CYP3A5*1/*1或CYP3A5*1/*3)对移植患儿他克莫司给药剂量、血药浓度、C/D值影响的文献。评价文献质量及提取资料后,采用RevMan 5.3软件进行Meta分析。结果共纳入13篇文献进行Meta分析。Meta分析结果显示,在移植后第1、2、3、6、12个月时,CYP3A5*1携带者和非携带者的他克莫司给药剂量差异有统计学意义(P<0.05),其中携带者的他克莫司给药剂量更大;在移植后第1、2周和第1、2、6个月,CYP3A5*1携带者的他克莫司血药浓度低于CYP3A5*1非携带者(P<0.05);在移植后第1、2周和第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12个月,CYP3A5*1携带者的他克莫司C/D值低于CYP3A5*1非携带者(P<0.05)。结论在移植患儿中,CYP3A5*1携带者和非携带者移植后的他克莫司给药剂量、血药浓度和C/D值存在明显差异,其中CYP3A5*1携带者所需的他克莫司剂量更大。在给药前进行CYP3A基因多态性检测有助于预测个体所需剂量。

细胞色素P450 3A4~* 1G与腺苷三磷酸结合转运蛋白G超家族成员2基因多态性对羟氯喹血药浓度的影响

目的探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者体内细胞色素P450(CYP)450 3A4与腺苷三磷酸结合转运蛋白G超家族成员2(ABCG2)基因多态性对羟氯喹(HCQ)血药浓度的影响。方法收集46例系统性红斑狼疮患者羟氯喹全血药物浓度测定数据,通过Sanger法测定患者的CYP3A4~*1G(rs2242480)与ABCG2(rs2231142)基因型,分析每个基因的多态性对羟氯喹血药浓度的影响。结果患者CYP3A4~*1G各基因型组中,野生纯合子(~*1/~*1)组、突变杂合子(~*1/~*1G)组、突变纯合子(~*1G/~*1G)组的羟氯喹血药浓度分别为(807.2±455.9),(705.4±331.9)和(229.5±89.8)ng·mL^(-1),依次降低。GG组和GA组较AA组的羟氯喹血药浓度差异均有统计学意义(均P<0.05)。ABCG2基因的野生纯合子(GG)组、突变杂合子(GT)组和突变纯合子(TT)组的羟氯喹血药浓度分别为(732.2±424.4),(764.5±371.9)和(271.0±148.5)ng·mL^(-1),各基因型组之间的羟氯喹血药浓度差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论 CYP3A4~*1G等位基因突变可使羟氯喹血药浓度降低,而ABCG2等位基因突变对羟氯喹的血药浓度无明显影响。

小鼠CYP2R1的异源表达及其对癌细胞增殖的差异性作用

细胞色素P450(cytochrome P450,CYP450)是一类血红素氧化酶。细胞色素P450家族2亚家族R成员1(cytochrome P450 family 2 subfamily R member 1,CYP2R1)是一种主要在肝组织中表达的维生素D羟化酶。目前,对于小鼠CYP2R1蛋白质的结构、物化特性和病理机制的理了解仍十分有限。本研究结合基因克隆和生物信息学分析,获得小鼠CYP2R1基因CDS序列及其生物学特征。随后,利用pcDNA3.1-CYP2R1真核表达载体,通过细胞划痕、MTT分析、real-time qPCR方法检测异源表达CYP2R1对肺癌细胞A549、胃癌细胞7901、肝癌细胞HepG2以及正常细胞HEK293T细胞的迁移、增殖和细胞周期基因表达的影响,探明其对癌细胞增殖的作用。结果显示,由C57BL/6小鼠肝组织的CYP2R1基因,序列长度1506 bp,其中,CDS 468 bp。其编码的155个氨基酸,与其他11个物种间的同源性均较高,其三级结构与人CYP2R1略有不同。构建的pcDNA3.1-CYP2R1真核表达载体,可在体外培养细胞中提高CYP2R1基因mRNA表达105倍以上,蛋白质水平提高约30倍。值得注意的是,异源表达CYP2R1在癌细胞增殖中的作用具有差异性,其中,CYP2R1通过显著降低细胞周期蛋白基因CyclinD1(P<0.05)和Caspase3(P<0.01),而抑制7901细胞的增殖。该研究结果为进一步探索CYP2R1的生物学作用,特别是在分析其对癌细胞增殖方面提供了基础研究数据,并为进一步明确CYP2R1在癌症相关治疗中的重要意义奠定了理论基础。

稳定表达CYP2A13和CYP2A13/POR的Flp-In CHO重组细胞系的构建

目的分别构建稳定表达细胞色素P450家族2亚家族A成员13(cytochrome P450 family 2 subfamily A member 13,CYP2A13)的Flp-In CHO细胞系(CYP2A13-CHO)和稳定表达CYP2A13和细胞色素P450氧化还原酶(POR)的Flp-In CHO细胞系(CYP2A13-POR-CHO),并从中筛选代谢活性较好的细胞系。方法课题组前期通过慢病毒转染构建了稳定表达POR的Flp-In CHO细胞系(POR-Flp-In CHO)。该文构建了pcDNA5/FRT-CYP2A13重组质粒,利用Lipofectamine^(TM) 2000转染试剂将pcDNA5/FRT-CYP2A13重组质粒分别转染到Flp-In CHO细胞和POR-Flp-In CHO细胞中。通过荧光定量PCR(qRT-PCR)、Western blot和黄曲霉素B1(AFB1)/4-甲基亚硝胺-1-3-吡啶基-1-丁酮(NNK)细胞毒实验来检测CYP2A13的表达及其活性,并比较了CYP2A13-CHO和CYP2A13-POR-CHO两种重组细胞系的代谢活性。结果与未转染的细胞相比,CYP2A13-CHO和CYP2A13-POR-CHO的CYP2A13 mRNA和蛋白的表达量均明显增加。且与CYP2A13-POR-CHO相比,CYP2A13-CHO细胞对AFB1、NNK的敏感度更高。结论建立了稳定表达CYP2A13且代谢活性较好的CYP2A13-CHO细胞系,为后续筛选能被CYP2A13代谢活化的前致癌物提供了工具。

镧离子和酸根离子在镧盐诱导HepG2细胞特定基因表达改变中的作用

目的探究镧离子(La^(3+))与酸根离子(SO_(4)^(2-),Cl^(-)和NO_(3)^(-))在镧盐诱导Hep G2细胞特定基因表达改变中的作用。方法分别将含有La_(2)(SO_(4))_(3)0.71 mmol·L^(-1)、La Cl_(3)1.41 mmol·L^(-1)、La(NO_(3))_(3)1.41 mmol·L^(-1)、H_(2)SO_(4)2.12 mmol·L^(-1)、HCl 4.23 mmol·L^(-1)和HNO_(3)4.23 mmol·L^(-1)的培养液在CO_(2)培养箱中进行酸碱平衡1 h,p H值可恢复到7.25,随后分别处理对数生长期Hep G2细胞48 h。采用CCK-8试剂盒检测受试物对细胞存活率的影响。采用实时荧光定量PCR(RT-q PCR)检测丙氨酰氨基肽酶(ANPEP)、细胞色素P450家族1A1(CYP1A1)、氧化固醇结合蛋白样7(OSBPL7)、CYP3A5、钙电压门控通道辅助亚单位γ4(CACNG4)、双特异性磷酸酶4(DUSP4)、Ras蛋白特异性鸟嘌呤核苷酸释放因子1(RASGRF1)和CYP17A1 m RNA表达水平。结果CCK-8法检测结果显示,与细胞对照组比较,3种镧盐和HCl处理组细胞存活率均降低(P<0.01),而H_(2)SO_(4)和HNO_(3)处理组细胞存活率均未见明显改变。RT-q PCR结果显示,与细胞对照组比较,La_(2)(SO_(4))_(3),LaCl_(3)和La(NO_(3))_(3)均可诱导Hep G2细胞ANPEP,CYP1A1,OSBPL7,CYP3A5,CACNG4,DUSP4,RASGRF1和CYP17A1等8个基因m RNA表达上调(P<0.05);SO_(4)^(2-)诱导ANPEP和CYP1A1表达(P<0.05);Cl^(-)诱导CYP1A1表达(P<0.05);NO_(3)^(-)诱导ANPEP和CYP3A5 m RNA表达,而抑制CYP1A1和CACNG4 m RNA表达(P<0.05)。归因分析发现,La_(2)(SO_(4))_(3)和LaCl_(3)的La^(3+)均能诱导Hep G2细胞上述8个基因m RNA表达上调(P<0.05),但对CYP1A1,CYP3A5,DUSP4和CYP17A1m RNA表达的诱导作用低于La_(2)(SO_(4))_(3)(P<0.05),对CYP3A5和RASGRF1 m RNA表达的诱导作用低于LaCl_(3)(P<0.05);La(NO_(3))_(3)的La^(3+)虽能诱导上述8个基因m RNA表达上调,但ANPEP m RNA的表达上调无统计学意义,且对CYP3A5和CYP17A1 m RNA表达的诱导作用低于La(NO_(3))_(3)(P<0.05)。此外,3种镧盐的La^(3+)对ANPEP,OSBPL7,CYP3A5,CACNG4,DUSP4,RASGRF1和CYP17A1等7个基因m RNA表达的诱导作用彼此间亦存在差异(P<0.05)。结论La^(3+)与酸根离子SO_(4)^(2-),Cl^(-)和NO_(3)^(-)均可诱导Hep G2细胞特定基因m RNA表达的改变,La_(2)(SO_(4))_(3),LaCl_(3)和La(NO_(3))_(3)对Hep G2细胞基因m RNA表达的影响是La^(3+)与酸根离子SO_(4)^(2-),Cl^(-)和NO_(3)^(-)共同作用的结果,不应仅归因于La^(3+)。

微小RNA-643靶向下调细胞色素P450家族成员11B1促进小儿骨肉瘤增殖的临床分析及细胞与小鼠机制研究

目的:探讨微小RNA(miR)-643调控细胞色素P450家族成员11B1(CYP11B1)对小儿骨肉瘤增殖的临床与机制研究。方法:收集2017年6月至2018年3月天津市天津医院收治的18例小儿骨肉瘤患者,年龄(12.04±2.68)岁,男12例,女6例,同期收集18例性别和年龄配对的健康儿童。应用Lipofectamine 2000介导转染细胞株,共分为五组:空载组,正常生长组,miR-643模拟物组,miR-643抑制剂组,CYP11B1抑制剂组,每组重复3次。实时定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测miR-643相对表达量,蛋白质印迹法(Western blot)检测CYP11B1蛋白表达水平,细胞增殖与毒性(CCK-8)法检测细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞凋亡能力,小鼠体内实验探究miR-643对肿瘤体积的影响。多组间比较采用单因素方差分析,两两比较采用t检验。结果:与健康者(0.53±0.06)比较,骨肉瘤患者(3.24±0.81)血清miR-643表达水平显著增高(P<0.05)。在24、48、72 h时,与空载组[吸光度(A)值0.36±0.04、0.44±0.03、0.56±0.05]和正常生长组(0.35±0.06、0.45±0.04、0.58±0.07)比较,miR-643模拟物组(0.51±0.05、0.75±0.07、0.93±0.06)MG-63细胞的增殖能力显著增强(P<0.05),miR-643抑制剂组(0.24±0.05、0.28±0.06、0.33±0.06)增殖能力明显受到抑制(P<0.05)。与空载组[(7.65±0.47)%]和正常生长组[(7.80±0.51)%]比较,miR-643模拟物组[(3.12±0.22)%]MG-63细胞的凋亡能力显著下降(P<0.05),miR-643抑制剂组[(24.32±2.25)%]凋亡能力显著增高(P<0.05)。与空载组(1.04±0.06)和正常生长组(0.98±0.05)MG-63细胞CYP11B1蛋白水平比较,miR-643模拟物组(0.41±0.04)和CYP11B1抑制剂组(0.45±0.05)均显著下降(P<0.05),miR-643抑制剂组(1.64±0.13)显著增高(P<0.05)。皮下注射稳定转染sh-miR-643的MG-63细胞小鼠的肿瘤平均体积为[(621.74±38.63)mm 3],显著低于对照组[(1104.36±57.01)mm 3,t=4.017,P<0.01]。结论:miR-643可促进骨肉瘤MG-63细胞增殖并抑制其凋亡,其机制与调控靶基因CYP11B1密切相关。

实时荧光PCR用于CYP2C19基因多态性检测的性能验证

目的评价实时荧光聚合酶链反应(PCR)检测细胞色素P450家族成员2C19(CYP2C19)基因多态性的精密度、准确度和检测限。方法采用实时荧光PCR对基因型为*1/*1、*1/*2、*1/*3和*1/*17的DNA样本分别作批内重复扩增10次,以评价方法的精密度;比较实时荧光PCR与Sanger测序法的检测结果,以评价方法的准确性;对2倍梯度稀释的DNA样本(基因型为*1/*1、*1/*2、*1/*3和*1/*17)进行实时荧光PCR扩增,以评价方法的最低检测限。结果批内重复10次的分型检测结果完全一致,所有PCR的Ct值变异系数(CV)均<2.5%;实时荧光PCR的分型结果与Sanger测序法结果的符合率为100%(20/20),其中*1/*17型1例、*1/*1型3例、*1/*2型5例、*1/*3型5例、*2/*2型4例、*2/*3型2例;实时荧光PCR的最低检测限为1.875 ng/μL DNA。结论实时荧光PCR的基因分型结果稳定、可靠,适用于医学实验室CYP2C19基因多态性的检测。

miR-378在小鼠酒精性肝细胞损伤中作用的研究

目的探讨乙醇刺激对小鼠肝细胞中miR-378、细胞色素P450家族成员2E1(CYP2E1)、过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPAR-α)表达的影响,以及miR-378对小鼠酒精性肝细胞损伤的作用。方法培养小鼠正常肝细胞系AML12,分别转染过表达miR-378病毒、抑制miR-378病毒和阴性对照病毒,均用100μmoL/L乙醇刺激24 h,分别设为正常组、乙醇组、过表达miR-378+乙醇组、抑制miR-378+乙醇组和乙醇+阴性对照组。采用实时荧光定量PCR法检测各组细胞中miR-378表达水平,采用蛋白质印迹法检测各组细胞中CYP2E1、PPAR-α蛋白表达水平。检测各组细胞中氧化应激水平指标还原性谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)表达水平。采用MTT法检测各组细胞的活力。结果乙醇组细胞中miR-378表达水平较正常组显著降低(P<0.05)。与乙醇组相比,过表达miR-378+乙醇组细胞中CYP2E1蛋白表达水平显著降低(P<0.05),PPAR-α蛋白表达水平显著升高(P<0.05);而抑制miR-378+乙醇组细胞中CYP2E1蛋白表达水平显著升高(P<0.05),PPAR-α蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。与乙醇组相比,过表达miR-378+乙醇组细胞中GSH表达水平显著升高(P<0.05),MDA表达水平显著降低(P<0.05);而抑制miR-378+乙醇组细胞中GSH表达水平显著降低(P<0.05),MDA表达水平显著升高(P<0.05)。与乙醇组相比,过表达miR-378+乙醇组细胞活力显著增强(P<0.05),而抑制miR-378+乙醇组细胞活力显著减弱(P<0.05)。结论miR-378表达升高可减轻乙醇对小鼠肝细胞的损伤,这可能是与miR-378通过调控CYP2E1、PPAR-α表达来影响脂质代谢、改善氧化应激及增强细胞活力有关。

CYP2C19基因多态性与难治性精神分裂症的关系

目的探讨细胞色素P450家族成员2C19(CYP2C19)基因多态性与难治性精神分裂症的关系。方法选取108例难治性精神分裂症患者,90例非难治性精神分裂症患者,分别记为难治组和非难治组。检测CYP2C19基因多态性,并分为广泛代谢型(EM),中间代谢型(IM)和慢代谢型(PM)。对比难治组和非难治组患者临床资料和CYP2C19基因多态性代谢情况。Logistic回归分析影响难治性精神分裂症的相关因素。结果难治组病程,简明精神科量表(BPRS)评分,阳性和阴性症状量表(PANSS)评分,临床大体印象量表严重程度量表(CGI-S)评分及泌乳素(Prolactin,PRL)水平高于非难治组(P<0.05),CYP2C19基因EM占比低于非难治组(P<0.05),IM,PM占比则高于非难治组(P<0.05)。多因素分析结果显示:CGI-S评分,PRL,CYP2C19基因为IM/PM均为难治性精神分裂症的危险因素(P<0.05)。结论CYP2C19基因多态性与精神分裂症难治性相关,IM,PM型精神分裂症难治性的风险较高。

老年慢性心力衰竭肺部感染危险因素及与CYP27B1-1260基因多态性的关联

目的 探究老年慢性心力衰竭(CHF)患者肺部感染危险因素及与细胞色素P450家族成员27B1(CYP27B1)-1260基因多态性的关联。方法 选取2020年5月-2023年5月河南大学淮河医院收诊的老年CHF患者305例临床资料,将59例发生和246例未发生肺部感染的患者分别纳入感染组与非感染组。收集临床资料,通过Logistic回归法分析老年CHF患者肺部感染的危险因素。采用限制性片段长度多态性聚合酶链反应(PCR-RFLP)检测两组CYP27B1-1260基因多态性。结果 305例老年CHF患者中有59例发生肺部感染(占19.34%);有糖尿病、慢性阻塞性肺疾病及侵入性操作、心功能Ⅲ~Ⅳ级是老年CHF患者肺部感染的危险因素(P<0.05);感染组CYP27B1-1260rs10877012位点CC基因型与C等位基因频率高于非感染组,AA基因型与A等位基因频率低于非感染组(P<0.05)。结论 老年CHF患者肺部感染的发生与糖尿病、慢性阻塞性肺疾病、心功能分级、侵入性操作有关,且CYP27B1-1260基因多态性与老年CHF患者肺部感染的病情进展相关。

CYP2C19慢代谢型和HMGB1及YKL-40预测冠脉介入治疗术后感染的临床价值

目的分析老年冠心病患者冠脉介入治疗术后感染现况及细胞色素P450家族成员2C19(CYP2C19)慢代谢型、高迁移率族蛋白(HMGB1)、甲壳质酶蛋白40(YKL-40)联合预测价值。方法将2020年3月-2023年3月锦州医科大学附属第一医院收治的205例冠脉介入治疗患者纳入研究,其中术后感染55例纳入感染组,无术后感染150例纳入非感染组,分析术后感染病原菌分布,比较两组患者CYP2C19慢代谢型占比及血清HMGB1、YKL-40水平,绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析CYP2C19慢代谢型、HMGB1、YKL-40对术后感染的预测价值。结果205例老年冠心病冠脉介入治疗患者,术后感染55例,感染发生率为26.83%;共分离病原菌69株,其中革兰阴性菌占比71.01%;感染组CYP2C19慢代谢型占比、血清HMGB1、YKL-40水平高于非感染组(P<0.05);ROC曲线分析显示,CYP2C19慢代谢型、HMGB1、YKL-40联合对老年冠心病患者冠脉介入治疗术后感染的预测价值更高,曲线下面积(AUC)为0.924。结论老年冠心病患者冠脉介入治疗术后感染发生风险较高,病原菌以革兰阴性菌为主,CYP2C19慢代谢型、HMGB1、YKL-40水平与术后感染发生相关。

CYP2E1 Rsa Ⅰ/Pst Ⅰ多态性与亚洲人肺癌发病风险的关系

细胞色素P450 2E1（CYP2E1）是细胞色素P450基因家族中的重要成员,参与亚硝胺等前致癌物在体内的代谢活化.CYP2E1基因具有多态性,其中Rsa Ⅰ/Pst Ⅰ基因多态性与肺癌的危险性关系目前尚未明确,各地研究结果不一致.我们通过检索Pub Med,Embase,Web of Science和CNKI数据库中相关研究的文献,提取相关数据,采用荟萃分析量分析CYP2E1多态性与肺癌发生风险.

基于快速CYP2C19基因检测的颈内动脉重度狭窄患者双联抗血小板治疗1例报道

本文报道了一例老年女性院内卒中患者的临床诊疗过程。该患者于肛肠外科手术后2 d突发急性缺血性卒中,经影像学检查确诊为右侧颈内动脉起始部重度狭窄。在接受了1个月的卒中二级预防药物治疗后,择期行血管内治疗。术前该患者进行了快速细胞色素P450酶家族2亚家族C成员19(cytochrome P450 family 2 subfamily C member 19,CYP2C19)基因检测,结果为中间代谢型,提示应用氯吡格雷的效果可能不佳。基于这一检测结果调整抗血小板治疗方案,选择替格瑞洛联合阿司匹林作为替代治疗。治疗后,患者病情稳定,预后较好。本病例报道提示,在非轻型卒中患者中,快速CYP2C19基因检测可帮助选择抗血小板治疗策略,改善患者预后。