长链非编码RNA钾离子电压门控通道亚家族Q成员1重叠转录本1通过靶向miR-24-3p调控人牙周膜干细胞增殖和成骨分化

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)钾离子电压门控通道亚家族Q成员1重叠转录本1(KC‐NQ1OT1)对人牙周膜干细胞(hPDLSCs)增殖和成骨分化的影响及分子机制。方法分离培养正常牙周组织的hPDLSCs,矿化液诱导hPDLSCs成骨分化,研究下调lncRNA KCNQ1OT1、过表达miR-24-3p对hPDLSCs增殖、骨钙素(OCN)、骨桥蛋白(OPN)、碱性磷酸酶(ALP)的影响。实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测lncRNA KCNQ1OT1、miR-24-3p、OCN、OPN、ALP的表达水平;甲基噻唑基四唑(MTT)法检测细胞增殖能力;蛋白质印迹(Western blot)法检测蛋白表达;双荧光素酶报告实验检测lncRNA KCNQ1OT1和miR-24-3p的靶向关系。结果在hPDLSCs成骨诱导中,lncRNA KCNQ1OT1表达水平升高,miR-24-3p表达水平降低(P<0.05);下调lncRNA KCNQ1OT1表达,抑制细胞增殖,降低OCN、OPN和ALP的mRNA与蛋白表达水平(P<0.05)。lncRNA KCNQ1OT1靶向调控miR-24-3p,过表达miR-24-3p后,抑制细胞增殖,降低OCN、OPN和ALP的mRNA与蛋白表达水平(P<0.05)。抑制miR-24-3p可逆转下调lncRNA KCNQ1OT1对细胞增殖以及OCN、OPN和ALP的mRNA与蛋白表达水平的影响(P<0.05)。结论下调lncRNA KCNQ1OT1通过靶向上调miR-24-3p抑制hPDLSCs的增殖和成骨分化。

CYP27A1对肝细胞癌预后的影响及生物学作用

目的分析细胞色素P450家族27亚家族A成员1(CYP27A1)对肝细胞癌(HCC)预后的影响及生物学作用,并初步探讨其影响HCC生长的分子机制。方法基于癌症基因数据库(TCGA)分析CYP27A1在HCC中的表达情况及其与HCC患者预后的关系;基于CYP27A1表达量中位值,将样本分为CYP27A1高表达组(n=170)与CYP27A1低表达组(n=170),利用基因集富集分析(GSEA)分别对两组进行基因集富集分析;免疫荧光染色检测及数据库查找CYP27A1蛋白亚细胞定位;构建过表达CYP27A1质粒,转染HCC细胞MHCC-97H和HCCLM3,设置阴性对照组(转染空载质粒)与CYP27A1过表达组(转染过表达CYP27A1重组质粒)。采用CCK-8法、流式细胞仪、活性氧(ROS)荧光探针等检测过表达CYP27A1对HCC细胞活力、凋亡及ROS生成的影响;结合生物信息学分析CYP27A1与ROS生成相关基因及HCC增殖相关基因表达的相关性。结果与正常肝组织比较,HCC组织中CYP27A1 mRNA表达量明显降低(P<0.01)。CYP27A1表达与HCC患者性别、T分期、肿瘤分级和肿瘤分期有关(P<0.05)。CYP27A1低表达组总生存率明显低于高表达组(P<0.01)。GSEA富集分析结果显示,CYP27A1低表达组HCC“干性”亚类和“增殖”亚类基因集水平升高。在MHCC-97H和HCCLM3细胞中,CYP27A1主要定位于细胞核;在HepG2细胞中,CYP27A1主要定位于线粒体。与阴性对照组比较,过表达CYP27A1后,HCC细胞活力下降(P<0.01)、ROS水平降低(P<0.05),而细胞凋亡水平无明显改变(P>0.05)。CYP27A1与抑制ROS生成相关基因表达呈正相关(P<0.05),抑制ROS生成相关基因与HCC增殖相关基因表达呈负相关(P<0.05)。结论CYP27A1在HCC中呈低表达,下调CYP27A1可能通过促进ROS生成促进HCC恶性生长。

携带CYP3A5*1对移植患儿他克莫司给药剂量、血药浓度、血药浓度/剂量值影响的Meta分析

目的系统评价携带细胞色素P450家族3亚家族A成员5(CYP3A5)*1对移植患儿他克莫司给药剂量、血药浓度和血药浓度/给药剂量(C/D)值的影响。方法计算机检索PubMed、Scopus、ISI Web of Science、ProQuest、中国知网、维普资讯中文期刊服务平台、万方数据知识服务平台,纳入携带CYP3A5*1(CYP3A5*1/*1或CYP3A5*1/*3)对移植患儿他克莫司给药剂量、血药浓度、C/D值影响的文献。评价文献质量及提取资料后,采用RevMan 5.3软件进行Meta分析。结果共纳入13篇文献进行Meta分析。Meta分析结果显示,在移植后第1、2、3、6、12个月时,CYP3A5*1携带者和非携带者的他克莫司给药剂量差异有统计学意义(P<0.05),其中携带者的他克莫司给药剂量更大;在移植后第1、2周和第1、2、6个月,CYP3A5*1携带者的他克莫司血药浓度低于CYP3A5*1非携带者(P<0.05);在移植后第1、2周和第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12个月,CYP3A5*1携带者的他克莫司C/D值低于CYP3A5*1非携带者(P<0.05)。结论在移植患儿中,CYP3A5*1携带者和非携带者移植后的他克莫司给药剂量、血药浓度和C/D值存在明显差异,其中CYP3A5*1携带者所需的他克莫司剂量更大。在给药前进行CYP3A基因多态性检测有助于预测个体所需剂量。

细胞色素P4502E1稳定转染Flp-In^(TM)CHO细胞模型的建立

目的构建稳定表达细胞色素P450家族2亚家族E成员1(CYP2E1)的Flp-In^(TM)CHO细胞系,并进行药物相互作用筛选。方法利用Lipofectamine■2000转染试剂将pcDNA5/FRT-CYP2E1重组质粒和pcDNA5/FRT-空质粒-并转染Flp-In^(TM)CHO细胞,采用潮霉素B(500 mg/L)进行稳定性筛选、聚合酶链式反应(PCR)检测细胞中是否成功插入能够表达CYP2E1酶的目的基因、实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞中CYP2E1 mRNA和蛋白表达,采用对乙酰氨基酚(APAP)检测CYP2E1酶对APAP的毒性敏感性。结果与Flp-In^(TM)CHO空质粒组比较,PCR结果显示Flp-In^(TM)CHO-CYP2E1细胞分别在2000 bp、200 bp左右有CYP2E1酶目的基因的明显条带;qRT-PCR和Western blot结果显示,Flp-In^(TM)CHO-CYP2E1细胞的CYP2E1 mRNA和蛋白表达水平均明显增加(P<0.001);APAP检测结果显示CYP2E1酶对APAP的毒性敏感性也显著增强。结论成功构建了稳定表达CYP2E1的Flp-In^(TM)CHO细胞模型,且表达的CYP2E1酶对APAP的毒性敏感性增强。

细胞色素P450 3A4~* 1G与腺苷三磷酸结合转运蛋白G超家族成员2基因多态性对羟氯喹血药浓度的影响

目的探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者体内细胞色素P450(CYP)450 3A4与腺苷三磷酸结合转运蛋白G超家族成员2(ABCG2)基因多态性对羟氯喹(HCQ)血药浓度的影响。方法收集46例系统性红斑狼疮患者羟氯喹全血药物浓度测定数据,通过Sanger法测定患者的CYP3A4~*1G(rs2242480)与ABCG2(rs2231142)基因型,分析每个基因的多态性对羟氯喹血药浓度的影响。结果患者CYP3A4~*1G各基因型组中,野生纯合子(~*1/~*1)组、突变杂合子(~*1/~*1G)组、突变纯合子(~*1G/~*1G)组的羟氯喹血药浓度分别为(807.2±455.9),(705.4±331.9)和(229.5±89.8)ng·mL^(-1),依次降低。GG组和GA组较AA组的羟氯喹血药浓度差异均有统计学意义(均P<0.05)。ABCG2基因的野生纯合子(GG)组、突变杂合子(GT)组和突变纯合子(TT)组的羟氯喹血药浓度分别为(732.2±424.4),(764.5±371.9)和(271.0±148.5)ng·mL^(-1),各基因型组之间的羟氯喹血药浓度差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论 CYP3A4~*1G等位基因突变可使羟氯喹血药浓度降低,而ABCG2等位基因突变对羟氯喹的血药浓度无明显影响。

微小RNA-643靶向下调细胞色素P450家族成员11B1促进小儿骨肉瘤增殖的临床分析及细胞与小鼠机制研究

目的:探讨微小RNA(miR)-643调控细胞色素P450家族成员11B1(CYP11B1)对小儿骨肉瘤增殖的临床与机制研究。方法:收集2017年6月至2018年3月天津市天津医院收治的18例小儿骨肉瘤患者,年龄(12.04±2.68)岁,男12例,女6例,同期收集18例性别和年龄配对的健康儿童。应用Lipofectamine 2000介导转染细胞株,共分为五组:空载组,正常生长组,miR-643模拟物组,miR-643抑制剂组,CYP11B1抑制剂组,每组重复3次。实时定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测miR-643相对表达量,蛋白质印迹法(Western blot)检测CYP11B1蛋白表达水平,细胞增殖与毒性(CCK-8)法检测细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞凋亡能力,小鼠体内实验探究miR-643对肿瘤体积的影响。多组间比较采用单因素方差分析,两两比较采用t检验。结果:与健康者(0.53±0.06)比较,骨肉瘤患者(3.24±0.81)血清miR-643表达水平显著增高(P<0.05)。在24、48、72 h时,与空载组[吸光度(A)值0.36±0.04、0.44±0.03、0.56±0.05]和正常生长组(0.35±0.06、0.45±0.04、0.58±0.07)比较,miR-643模拟物组(0.51±0.05、0.75±0.07、0.93±0.06)MG-63细胞的增殖能力显著增强(P<0.05),miR-643抑制剂组(0.24±0.05、0.28±0.06、0.33±0.06)增殖能力明显受到抑制(P<0.05)。与空载组[(7.65±0.47)%]和正常生长组[(7.80±0.51)%]比较,miR-643模拟物组[(3.12±0.22)%]MG-63细胞的凋亡能力显著下降(P<0.05),miR-643抑制剂组[(24.32±2.25)%]凋亡能力显著增高(P<0.05)。与空载组(1.04±0.06)和正常生长组(0.98±0.05)MG-63细胞CYP11B1蛋白水平比较,miR-643模拟物组(0.41±0.04)和CYP11B1抑制剂组(0.45±0.05)均显著下降(P<0.05),miR-643抑制剂组(1.64±0.13)显著增高(P<0.05)。皮下注射稳定转染sh-miR-643的MG-63细胞小鼠的肿瘤平均体积为[(621.74±38.63)mm 3],显著低于对照组[(1104.36±57.01)mm 3,t=4.017,P<0.01]。结论:miR-643可促进骨肉瘤MG-63细胞增殖并抑制其凋亡,其机制与调控靶基因CYP11B1密切相关。

CYP2A13/MRP2双表达Flp-In^TM CHO细胞系的建立

目的构建稳定表达细胞色素P450家族2亚家族A成员13(CYP2A13)和多药耐药相关蛋白2(MRP2)的双转染Flp-In^TM CHO细胞系.方法分别构建pCMV6-NEO-CYP2A13和pcDNA5-MRP2重组质粒.先将pCMV6-NEO-CYP2A13重组质粒转染至Flp-In^TM CHO细胞中,通过有限稀释法和4-甲基亚硝胺-1-3-呲啶基-1-丁酮(NNK)细胞毒性实验筛选CYP2A13活性较高的CYP2A13-Flp-In^TMCHO细胞.再将pcDNA5-MRP2转染至CYP2A13-Flp-In^TMCHO细胞中.用实时定量P眈CR、Western blot法和NNK细胞毒性实验,检测双转染细胞及正常细胞中CYP2AI3和MRP2的表达量及其活性,筛选稳定表达CYP2A13和MRP2的FlpInTMCHO细胞.结果相较于未转染细胞,CYP2AI3-Flp-In^TMCHO细胞的CYP2A13表达增加,NNK毒性敏感度增加;CYP2A13/MRP2-Flp-In^TM CHO细胞的CYP2A13和MRP2表达也明显增加.和CYP2AI3-Flp-In^TM CHO细胞相比,CYP2A13/MRP2-Flp-In^TM CHO细胞的CYP2A13表达量无明显差异,MRP2表达增加,NNK毒性敏感度明显降低.结论成功建立了CYP2A13和MR凹的双转染细胞模型,为呼吸道致癌物质原位激活研究奠定了基础.

稳定表达CYP2A13和CYP2A13/POR的Flp-In CHO重组细胞系的构建

目的分别构建稳定表达细胞色素P450家族2亚家族A成员13(cytochrome P450 family 2 subfamily A member 13,CYP2A13)的Flp-In CHO细胞系(CYP2A13-CHO)和稳定表达CYP2A13和细胞色素P450氧化还原酶(POR)的Flp-In CHO细胞系(CYP2A13-POR-CHO),并从中筛选代谢活性较好的细胞系。方法课题组前期通过慢病毒转染构建了稳定表达POR的Flp-In CHO细胞系(POR-Flp-In CHO)。该文构建了pcDNA5/FRT-CYP2A13重组质粒,利用Lipofectamine^(TM) 2000转染试剂将pcDNA5/FRT-CYP2A13重组质粒分别转染到Flp-In CHO细胞和POR-Flp-In CHO细胞中。通过荧光定量PCR(qRT-PCR)、Western blot和黄曲霉素B1(AFB1)/4-甲基亚硝胺-1-3-吡啶基-1-丁酮(NNK)细胞毒实验来检测CYP2A13的表达及其活性,并比较了CYP2A13-CHO和CYP2A13-POR-CHO两种重组细胞系的代谢活性。结果与未转染的细胞相比,CYP2A13-CHO和CYP2A13-POR-CHO的CYP2A13 mRNA和蛋白的表达量均明显增加。且与CYP2A13-POR-CHO相比,CYP2A13-CHO细胞对AFB1、NNK的敏感度更高。结论建立了稳定表达CYP2A13且代谢活性较好的CYP2A13-CHO细胞系,为后续筛选能被CYP2A13代谢活化的前致癌物提供了工具。

供受体CYP3A5基因型对肝移植术后早期他克莫司谷浓度的影响作用及其临床意义

目的:回顾性分析治疗药物浓度监测(TDM)策略下,供受体CYP3A5 rs776746基因分型对肝移植术后早期他克莫司谷浓度的影响作用及其临床意义。方法:根据入选标准收集2015年1月到2019年3月上海市第一人民医院肝移植患者125例,临床资料包括术后28天的临床药理学参数、肝功能以及随访新发糖尿病(new onset diabetes mellitus,NODM)情况。应用定量PCR技术对供体和受体细胞色素P450家族成员3A5(CYP3A5)基因rs776746位点进行分型。结果:术后第一周他克莫司谷浓度中位数(median trough concentration,Ct_(med))、谷浓度最大值(maximum trough concentration,Ct_(max))分别为(8.3±7.0)ng/mL、(11.2±12.9)ng/mL。供体和受体联合CYP3A5基因分型可将患者分为4个亚组:供体和受体均为AA/AG组、供体AA/AG+受体GG组、供体GG+受体AA/AG组、供体GG+受体GG组。各亚组患者术后第一周Ctmed、Ct_(max)均有统计学差异(P<0.01)。接收者操作特征(ROC)分析显示Ct_(max)可预测NODM,曲线下面积(AUC)为0.7168(P=0.0005),最佳诊断阈值浓度为14.4 ng/mL;而Ctmed对NODM没有预测价值(P=0.1936)。多因素Logistic回归分析显示,Ct_(max)异常过高(大于等于14.4 ng/mL,OR:17.796,P=0.014)和术前血糖水平(OR:5.076,P=0.043)、术前总胆固醇水平(OR:3.752,P=0.022)、术后激素治疗(OR:12.846,P=0.015)为NODM发生的独立危险因素。供受体CYP3A5基因型对Ct_(max)有显著影响,四个亚组肝移植术后早期Ct_(max)大于等于14.4 ng/mL患者分别为14.70%(5/34)、33.33%(12/36)、61.11%(11/18)、78.57(22/28),四组间比较均有统计学差异(P<0.0001)。结论:TDM结合供受体CYP3A5 rs776746基因分型指导肝移植患者个体化用药有助于减少Ct_(max)异常过高和NODM发生。

小鼠CYP2R1的异源表达及其对癌细胞增殖的差异性作用

细胞色素P450(cytochrome P450,CYP450)是一类血红素氧化酶。细胞色素P450家族2亚家族R成员1(cytochrome P450 family 2 subfamily R member 1,CYP2R1)是一种主要在肝组织中表达的维生素D羟化酶。目前,对于小鼠CYP2R1蛋白质的结构、物化特性和病理机制的理了解仍十分有限。本研究结合基因克隆和生物信息学分析,获得小鼠CYP2R1基因CDS序列及其生物学特征。随后,利用pcDNA3.1-CYP2R1真核表达载体,通过细胞划痕、MTT分析、real-time qPCR方法检测异源表达CYP2R1对肺癌细胞A549、胃癌细胞7901、肝癌细胞HepG2以及正常细胞HEK293T细胞的迁移、增殖和细胞周期基因表达的影响,探明其对癌细胞增殖的作用。结果显示,由C57BL/6小鼠肝组织的CYP2R1基因,序列长度1506 bp,其中,CDS 468 bp。其编码的155个氨基酸,与其他11个物种间的同源性均较高,其三级结构与人CYP2R1略有不同。构建的pcDNA3.1-CYP2R1真核表达载体,可在体外培养细胞中提高CYP2R1基因mRNA表达105倍以上,蛋白质水平提高约30倍。值得注意的是,异源表达CYP2R1在癌细胞增殖中的作用具有差异性,其中,CYP2R1通过显著降低细胞周期蛋白基因CyclinD1(P<0.05)和Caspase3(P<0.01),而抑制7901细胞的增殖。该研究结果为进一步探索CYP2R1的生物学作用,特别是在分析其对癌细胞增殖方面提供了基础研究数据,并为进一步明确CYP2R1在癌症相关治疗中的重要意义奠定了理论基础。

CYP2D6基因分型影响因素研究进展

细胞色素P450家族2亚科D成员6(CYP2D6)是细胞色素P450酶家族中的重要药物代谢酶,是抗抑郁药物、抗精神病药物和阿片类镇痛药物等主要的代谢酶。CYP2D6基因位点的复杂性和诸多等位基因突变体造成了CYP2D6表型的多态性,目前已报道170余种等位基因突变体。CYP2D6酶活性变化很大,从无活性到超快代谢均存在,根据酶活性可将不同表型携带者分为超快代谢者、正常代谢者、中间代谢者和弱代谢者。随着个体化医疗的发展,CYP2D6基因分型试验可以辅助药物遗传学和基因分型技术的研究和临床应用。然而,由于CYP2D6基因存在复杂的突变,包括单核苷酸突变、插入、缺失、基因拷贝数变异和基因重组。CYP2D6基因不仅存在个体化差异,且在不同种族之间等位基因的频率也明显不同。另外,人体内同时存在与CYP2D6同源性很高的非功能性基因CYP2D7,通过基因检测分析CYP2D6表型是一项非常具有挑战性的工作。文章总结了CYP2D6基因的多态性和基因分型的复杂性,并分析了部分不同的基因型突变对CYP2D6基因分型的影响,以帮助临床通过基因分型方法对CYP2D6酶活性进行预测。

LncRNA KCNQ1OT1靶向miR-9-5p对口腔癌细胞黏附性及活性的影响

目的探究长链非编码RNA钾电压门控通道亚家族Q成员1反向转录物1(LncRNA KCNQ1OT1)靶向miR-9-5p对口腔鳞状细胞癌细胞黏附性及活性的影响。方法体外培养口腔癌SCC25细胞,分别转染LncRNA KCNQ1OT1阴性对照、LncRNA KCNQ1OT1 siRNA、miR-9-5p阴性对照、miR-9-5p siRNA、LncRNA KCNQ1OT1 siRNA和miR-9-5p siRNA,分别记为KCNQ1OT1-NC组、KCNQ1OT1组、miR-9-5p-NC组、miR-9-5p组,KCNQ1OT1+miR-9-5p组及口腔癌组;采用RT-PCR检测各组细胞的LncRNA KCNQ1OT1及miR-9-5p水平,MTT法检测细胞吸光度(OD)值,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western blot检测细胞中CD44S及CD44V5蛋白表达;通过双荧光素酶报告证实LncRNA KCNQ1OT1与miR-9-5p靶向关系。结果KCNQ1OT1组LncRNA KCNQ1OT1水平低于口腔癌组(P<0.05),miR-9-5p组miR-9-5p水平低于口腔癌组(P<0.05);与口腔癌组相比,KCNQ1OT1组、miR-9-5p组、KCNQ1OT1+miR-9-5p组细胞OD值、CD44S及CD44V5蛋白降低,细胞凋亡率升高(P<0.05),且以KCNQ1OT1+miR-9-5p组效果最为显著(P<0.05);双荧光素酶报告结果显示,miR-9-5p是LncRNA KCNQ1OT1的靶基因。结论LncRNA KCNQ1OT1可通过调控miR-9-5p表达从而降低口腔鳞状细胞癌细胞黏附性,抑制口腔鳞状细胞癌细胞增殖,诱导其凋亡。

老年慢性心力衰竭肺部感染危险因素及与CYP27B1-1260基因多态性的关联

目的 探究老年慢性心力衰竭(CHF)患者肺部感染危险因素及与细胞色素P450家族成员27B1(CYP27B1)-1260基因多态性的关联。方法 选取2020年5月-2023年5月河南大学淮河医院收诊的老年CHF患者305例临床资料,将59例发生和246例未发生肺部感染的患者分别纳入感染组与非感染组。收集临床资料,通过Logistic回归法分析老年CHF患者肺部感染的危险因素。采用限制性片段长度多态性聚合酶链反应(PCR-RFLP)检测两组CYP27B1-1260基因多态性。结果 305例老年CHF患者中有59例发生肺部感染(占19.34%);有糖尿病、慢性阻塞性肺疾病及侵入性操作、心功能Ⅲ~Ⅳ级是老年CHF患者肺部感染的危险因素(P<0.05);感染组CYP27B1-1260rs10877012位点CC基因型与C等位基因频率高于非感染组,AA基因型与A等位基因频率低于非感染组(P<0.05)。结论 老年CHF患者肺部感染的发生与糖尿病、慢性阻塞性肺疾病、心功能分级、侵入性操作有关,且CYP27B1-1260基因多态性与老年CHF患者肺部感染的病情进展相关。

孤儿核受体NR4A1表达对氧-葡萄糖剥夺诱导培养大鼠小脑颗粒神经元凋亡的影响

目的探讨孤儿核受体NR4A1表达对氧一葡萄糖剥夺（oxygen．glucose deprivation，OGD）诱导培养大鼠小脑颗粒神经元凋亡的影响及其可能机制。方法大鼠小脑颗粒细胞原代培养7～8d后给予OGD处理。应用四甲基偶氮唑蓝法检测细胞活性，流式细胞术检测细胞凋亡率，蛋白质印迹法检测NR4A1、胱天蛋白酶-3和细胞色素c蛋白表达，实时定量聚合酶链反应检测NR4A1 mRNA表达。用编码NR4A1的慢病毒载体转染大鼠小脑颗粒神经元，并检测转染大鼠小脑颗粒神经元OGD后凋亡率以及细胞色素c和胱天蛋白酶-3表达。结果随着OGD时间的延长，培养大鼠小脑颗粒神经元活性显著性降低，凋亡率显著性增高，NR4A1mRNA和蛋白以及胱天蛋白酶-3和细胞色素c蛋白表达均显著性上调。转染NR4A1的大鼠小脑颗粒神经元过表达NR4A1，OGD后凋亡率显著性降低，胱天蛋白酶-3和细胞色素C蛋白表达显著性下调。结论NR4A1过表达能通过下调胱天蛋白酶-3和细胞色素c表达减少OGD诱导的大鼠小脑颗粒神经元凋亡。

1例21-羟化酶缺陷症伴高血压患者的临床及基因变异分析

1临床资料患者男,30岁,因发现血压升高3年,血压控制差1个月于2012年6月25日就诊于杭州市红十字会医院(我院)内分泌科。2009年9月23日体检发现血压升高(152/110 mm Hg, 1 mm Hg=0.133 kPa),当时无头痛头晕,无心悸、胸闷,无手抖、多汗,无肢软乏力等症状,在某省级附属医院心内科就诊,查血压170/108 mm Hg, 心率88次/min, 化验示血常规、甲状腺功能均正常。

有柄石韦中坝巴酸的通淋作用研究

目的研究黔产有柄石韦Pyrrosia petiolosa中坝巴酸的通淋作用。方法犬肾小管上皮细胞(MDCK)给予100μmol/L坝巴酸孵育24 h,MTT法检测坝巴酸对MDCK细胞活力以及脂多糖诱导的MDCK炎症模型细胞活力的影响。雄性昆明种小鼠随机分为正常组、模型组及坝巴酸低、高剂量(10、20 mg/kg)组和肾石通(4.5 g/kg)组,除正常组外,其余各组每日ig 1%乙二醇和1%NH_(4)Cl连续造模30 d,造模同时ig药物,末次给药后取小鼠尿液和肾脏,采用苏木素-伊红(HE)染色法检测肾组织病理变化;采用钙离子检测试剂盒检测尿钙、肾钙含量。利用Auto Dock软件对坝巴酸和过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator activated receptorγ,PPARG)、WNK赖氨酸缺乏蛋白激酶1(WNK lysine deficient protein kinase 1,WNK1)、钙感应受体(calcium sensing receptor,CASR)、细胞色素P450家族24亚家族A成员1(cytochrome P450 family 24 subfamily A member 1,CYP24A1)蛋白进行分子对接并分析对接结果。结果体外实验结果显示,与正常组相比,100μmol/L坝巴酸对MDCK细胞活力无明显影响;在30 mg/mL脂多糖诱导的炎症细胞模型中,坝巴酸可以显著提高MDCK细胞活力(P<0.05)。体内实验结果显示,各给药组小鼠肾组织炎性细胞浸润得到改善,肾组织损伤评分显著降低(P<0.05);坝巴酸低剂量组和肾石通组小鼠肾钙含量较模型组显著降低(P<0.05),尿钙含量显著升高(P<0.05)。分子对接结果显示,PPARG、WNK1、CASR、CYP24A1蛋白与坝巴酸的分子对接能均小于-21 kJ/mol,对接效果均较好。结论黔产有柄石韦中坝巴酸具有较好的抗炎、抑制肾钙蓄积的作用,其通淋活性机制与PPARG、WNK1、CASR、CYP24A1蛋白的结合活性有关。