细胞色素氧化酶P4502C19基因多态检测联合血清肝素辅助因子Ⅱ对下肢动脉硬化闭塞症介入术后再狭窄的预测价值

目的探讨细胞色素氧化酶P4502C19(CYP2C19)基因多态检测联合血清肝素辅助因子Ⅱ(HCⅡ)对下肢动脉硬化闭塞症(ASO)介入术后再狭窄的预测价值。方法收集2017年1月至2021年5月于绵阳市第三人民医院行介入治疗的146例ASO患者的临床资料,根据随访期间再狭窄发生情况将其分为再狭窄组(n=27)和无再狭窄组(n=119)。收集患者性别、年龄、体重指数(BMI)、吸烟史、心脑血管病史、高同型半胱氨酸病史、病变血管支数、术前狭窄情况、支架植入情况、纤维蛋白原水平、总胆固醇水平、红细胞计数、CYP2C19基因多态性、HCⅡ活性,分析ASO介入术后再狭窄的影响因素。结果有吸烟史、支架植入、CYP2C19慢代谢型及HCⅡ活性均为ASO支架植入术后发生再狭窄的独立危险因素(P﹤0.05)。受试者工作特征(ROC)曲线结果显示,HCⅡ活性预测ASO支架植入术后再狭窄的截断值为95.80%,曲线下面积(AUC)为0.809(95%CI:0.719~0.900),灵敏度为74.80%,特异度为88.24%,Kappa=0.566。CYP2C19基因多态检测对ASO支架植入术后再狭窄的预测灵敏度为66.67%,特异度为89.07%,Kappa=0.537。联合检测对ASO支架植入术后再狭窄的预测灵敏度为96.30%,特异度为86.55%,Kappa=0.682。结论ASO介入术后再狭窄与吸烟史、支架植入情况、CYP2C19基因多态性及HCⅡ活性有关,CYP2C19基因多态性及HCⅡ活性检测均可用于预测ASO介入术后再狭窄,但联合检测可提高其诊断效能。

长链非编码RNA LINC00987通过细胞色素P450途径促进AML细胞凋亡的机制研究

目的:探讨长链非编码RNA LINC00987在抗肿瘤药物诱导的急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)细胞凋亡中的作用及分子机制。方法:通过RT-qPCR检测AML中的LINC00987表达水平。构建稳定敲减LINC00987基因的Molm13细胞(shLINC00987),通过Annexin V/PI检测LINC00987低表达对阿糖胞苷诱导AML细胞凋亡的影响。对LINC00987共表达基因进行信号通路富集,分析LINC00987的表达对细胞色素家族基因的影响。结果:与健康对照组相比,lncRNA LINC00987在AML细胞系和AML病人标本中均显著降低,而在抗AML治疗后缓解组中高表达;此外,低表达LINC00987与AML患者预后不良有关。抗肿瘤药物阿糖胞苷、阿霉素、三氧化二砷和维奈托克可显著诱导AML细胞系Molm13和MV411的LINC00987表达。下调LINC00987的表达可抑制阿糖胞苷诱导的Molm13细胞凋亡。进一步研究发现,LINC00987共表达基因可富集于细胞色素P450(cytochrome,P450,CYP450)介导的氧化应激通路/网络,且LINC00987的表达与CYP450家族基因CYP11B1、CYP2U1和CYP2C9的表达水平呈正相关。下调LINC00987的表达则可抑制阿糖胞苷诱导的CYP11B1、CYP2U1和CYP2C9的mRNA表达。结论:LINC00987可以作为AML的预后标志物,其可能通过CYP450介导的氧化应激途径促进阿糖胞苷诱导的AML细胞凋亡。

细胞色素P450-RhFRED人工融合酶的研究进展与应用

来自于红球菌Rhodococcus sp.NCIMB 9784的P450RhF是一个自给自足型的细胞色素P450酶,它的血红素结构域主要负责控制酶的底物特异性,P450还原酶伴侣蛋白RhFRED与细胞色素P450血红素结构域天然融合在一起,电子主要从蛋白分子内转移到P450血红素结构域。依据融合型P450RhF自给自足的特性,有学者利用P450RhF的还原伴侣蛋白RhFRED,与其它P450构建人工融合酶P450-RhFRED,来实现多种细胞色素P450基因的功能表达。基于此建立的P450-Rh-FRED融合文库对未知功能P450的催化功能探索有很大意义,P450-RhFRED融合酶技术也可用于开发已知细胞色素P450酶的工业应用。

花生四烯酸细胞色素P450表氧化酶代谢产物环氧二十碳三烯酸生物学作用

对于花生四烯酸经细胞色素P450表氧化酶作用生成的环氧二十碳三烯酸(EETs),最初在心血管及肾脏系统中被广泛研究,并发现EETs的舒张血管、抑制血小板的聚集、抑制血管平滑肌细胞的炎症反应及平滑肌细胞的迁移、增强纤维蛋白的溶解等作用,为预防及治疗许多心血管疾病如高血压、动脉粥样硬化等提供了新的研究方向。近来研究发现EETs具有促进机体肿瘤细胞的增殖、迁移等作用,其有可能使EET成为肿瘤治疗的新靶点。深入研究EETs的生物学作用及其作用机制,将为临床治疗某些疾病提供新的思路。

缺血后处理对在体大鼠缺血-再灌注心肌细胞色素P450表氧化酶2J3/环氧二十碳三烯酸系统的影响

目的观察缺血后处理拮抗心肌缺血-再灌注损伤时内源性细胞色素P450表氧化酶2J3/环氧二十碳三烯酸(CYP2J3/EET)系统的变化。方法复制在体大鼠心肌缺血-再灌注损伤及缺血后处理模型。雄性Wistar大鼠(250～300)g随机分为三组:假手术组(Sham)、缺血-再灌注组(I-R)、缺血后处理组(IPo)。动脉插管测定心功能指标,采用TTC染色法测定心肌梗死范围,采用RT-PCR法检测心脏细胞色素P450表氧化酶亚型2J3(CYP2J3)mRNA表达,采用Western blot方法测定心肌组织CYP2J3蛋白水平的变化,高效液相色谱法测定11,12-EET含量。结果与I-R组相比IPo组左室收缩末压(LVESP)、左室内压最大上升/下降速率(±LVdp/dtmax)均显著升高;心肌梗死面积减少20.76%(P<0.01);与Sham组及I-R组相比IPo组CYP2J3 mRNA、CYP2J3蛋白及11,12-EET含量明显升高(P<0.05)。结论IPo可减轻在体心肌I-R损伤同时上调心脏CYP2J3/EET系统;提示CYP2J3/EET系统可能与IPo拮抗心脏I-R损伤作用相关。

细胞色素P450氧化还原酶缺乏症试管助孕1例

细胞色素P450氧化还原酶缺乏症(cytochrome P450 oxidoreductase deficiency,PORD)是先天性肾上腺皮质增生症(congenital adrenal hyperplasia,CAH)中罕见的类型,为细胞色素P450氧化还原酶(cytochrome P450 oxidoreductase,POR)基因纯合或杂合变异引起的常染色体隐性遗传病。

稳定表达人细胞色素P450氧化还原酶(POR)的Flp-In^(TM) CHO细胞系的建立

目的建立稳定表达人细胞色素P450氧化还原酶(POR)的Flp-In^(TM) CHO细胞系,为进一步建立稳定双表达人POR与人细胞色素P450(CYP)的细胞系奠定基础。方法构建POR重组慢病毒并感染Flp-In^(TM) CHO细胞,荧光显微镜观察绿色荧光蛋白表达,挑选转染细胞进行嘌呤霉素筛选和单克隆培养,以获得稳定转染细胞株。利用丝裂霉素C(MMC)细胞毒实验、实时荧光定量PCR和Western blot法检测细胞POR的表达,获得稳定表达POR的Flp-In^(TM) CHO-POR细胞株。构建稳定双表达POR和CYP2C19的Flp-In^(TM) CHO-POR细胞(Flp-In^(TM) CHO-POR-2C19)和单表达CYP2C19的Flp-In^(TM) CHO细胞(Flp-In^(TM) CHO-2C19),并用环磷酰胺(CPA)测定CYP2C19酶活性。结果与感染阴性对照病毒的Flp-In^(TM) CHO细胞相比,感染POR重组慢病毒的Flp-In^(TM) CHO细胞MMC代谢活性升高,POR mRNA和蛋白的表达水平增加,说明获得了可稳定表达POR的Flp-In^(TM) CHO-POR细胞。与Flp-In^(TM) CHO细胞相比,Flp-In^(TM) CHO-2C19的CPA代谢活性无显著差异,而Flp-In^(TM) CHO-POR-2C19的CPA代谢活性增加且明显高于Flp-In^(TM) CHO-2C19细胞。结论成功建立了稳定表达POR且可进一步用于CYP转基因细胞构建的Flp-In^(TM) CHO-POR细胞系。

细胞色素氧化酶P450 3A4基因联合环磷酰胺的体外抗肿瘤效应

目的克隆细胞色素氧化酶P4503A4(CYP3A4)基因,构建真核表达质粒并导入K562细胞进行表达,研究CYP3A4联合环磷酰胺(CPA)的体外抗肿瘤效应。方法利用RT-PCR从人肝细胞中克隆CYP3A4基因,构建重组真核表达载体。脂质体法导入K562细胞,RT-PCR和Western blot检测CYP3A4基因在K562细胞中的表达并筛选稳定转染的细胞克隆。MTT法检测CYP3A4联合CPA对肿瘤细胞的抑制作用。结果成功克隆CYP3A4基因并构建了真核表达质粒pcDNA3.1/myc-HisA(+)-CYP3A4。RT-PCR和Western blot分别显示转基因组的CYP3A4 mRNA和蛋白质表达水平均显著高于转空载体组和对照组。MTT示转基因组IC50值为1.09016mmol/L,明显低于转空载体组和对照组。酶诱导剂和抑制剂分别能够减低和增高转基因组IC50。结论CYP3A4体外具有联合CPA的抗肿瘤作用,这种作用能够被CYP3A4相应的诱导剂和抑制剂增强或减低。

菲和芘对蚯蚓(Eisenia fetida)细胞色素P450和抗氧化酶系的影响

研究了菲和芘在单一低剂量污染胁迫下对蚯蚓(Eisenia fetida)体内细胞色素P450酶系和抗氧化酶系的影响.通过滤纸接触染毒法,检测蚯蚓细胞色素P450含量以及超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)和过氧化氢酶(CAT)的活性.结果表明,在供试浓度范围内,蚯蚓体内细胞色素P450含量和三种抗氧化酶活性均对毒物产生了不同程度的响应.菲和芘在蚯蚓体内的代谢诱发了细胞色素P450总含量的增加,且在此过程中有活性氧自由基产生.不同酶对毒性效应响应的域值不同,其敏感性大小为:P450>SOD(POD)>CAT.根据四个指标对污染物浓度响应的域值不同,可将四者联合应用互为补充作为一套生物标记物体系,以满足污染物不同暴露浓度下土壤的毒理诊断,增强指示的敏感性和有效性.

肝细胞微粒体的制备和细胞色素P450氧化酶活性测定

目的：为测定人肝细胞微粒体细胞色素Ｐ４５０氧化酶的活性。方法：用差速离心法制备３例人肝细胞微粒体。结果：细胞色素Ｐ４５０的含量为０．５２３±０．００５ｎｍｏｌ·ｍｇ－１；细胞色素ｂ５为０．２８５±０．０２５ｎｍｏｌ·ｍｇ－１；氨基比林Ｎ－脱甲基酶的活力为０．５±０．６ｎｍｏｌ·ｍｇ－１；乙基吗啡Ｎ－脱甲基酶活力为０．９８±０．０８ｎｍｏｌ·ｍｇ－１。结论：Ｐ４５０酶活性影响因素较多，个体差异大。临床用药时应考虑患者的个体情况。

细胞色素P450氧化酶基因多态性对药物代谢影响的研究进展

细胞色素P450氧化酶是人体内的一种重要代谢酶,它能代谢和/或活化许多种药物、前致癌物、前毒物和致变剂。细胞色素P450氧化酶的基因具有遗传多态性,在人类存在等位基因的突变体。本文从基因结构、底物和影响其活性的因素、遗传多态性的分子机制等方面综述细胞色素P450氧化酶的研究进展。

苯并(a)芘对双齿围沙蚕抗氧化酶活性和细胞色素P450基因表达的影响

在实验室条件下,利用诱导试验分析了不同浓度苯并(a)芘[B(a)P]对双齿围沙蚕Perinereis aibuhitensis(体质量为1.5 g±0.5 g)细胞色素P450基因表达和肌肉组织抗氧化酶活性的影响。结果表明:双齿围沙蚕细胞色素P450基因表达与B(a)P诱导浓度和诱导时间呈正相关,随着诱导浓度的增加和暴露时间的延长,表达量逐步上调;超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)活性均随B(a)P诱导时间的延长而逐步升高,其中SOD酶活性随B(a)P浓度的增加出现抑制,CAT和GPx酶活性则与B(a)P浓度呈正相关。

细胞色素氧化酶P450及其遗传多态性

细胞色素氧化酶P45 0是药物代谢中的一个重要的酶系。近年来 ,对细胞色素P45 0氧化酶与药物氧化代谢多态性的关系进行了研究。CYP2C19与CYP2D6等在表型和基因型水平上均发现存在氧化代谢多态性 ,并对其分子机制有了深入的了解 ,而CYP2C9,CYP1A1等其他酶可能存在多态性 ,但其分子机制尚不清楚。本文综述了这些P45 0酶的底物 ,种族差异 ,遗传多态性 。

苯并(a)芘对蚯蚓细胞色素P450和抗氧化酶影响

研究了苯并(a)芘(BaP)低剂量污染胁迫下对蚯蚓(Eisenia fetida)体内细胞色素P450酶系和抗氧化酶系的影响。通过滤纸接触染毒法,按指数递增设计暴露质量浓度为10-6到10-2mg·mL-1,染毒时间48h,检测指标分别为蚯蚓细胞色素P450含量、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)和过氧化氢酶(CAT)活性。结果表明,在供试质量浓度范围内,蚯蚓体内P450含量和SOD活性与苯并(a)芘污染胁迫存在明显的响应关系,POD活性在BaP的最大暴露质量浓度下(10-2mg·mL-1)被显著诱导,而CAT活性对BaP暴露无明显的指示作用。这表明,BaP的代谢过程诱发了蚯蚓体内P450含量的增加,同时又抑制了SOD酶活性,从而使生物体对活性氧自由基的防御能力下降而更易受到毒害,这可能是BaP对生物体毒性作用的机制之一。

细胞色素P450花生四烯酸表氧化酶在人肿瘤组织及肿瘤细胞系中的特异性表达

背景与目的:细胞色素P450花生四烯酸表氧化酶(cytochrome P450 arachidonic acid epoxygenase 2J2,CYP2J2)作为花生四烯酸的新型代谢途径,在人体中的生物学及病理生理学意义还远未被认识和阐明。本研究主要探讨CYP2J2基因在人类肿瘤组织及肿瘤细胞系中的表达及其意义。方法:采用RT-PCR、Western blot和免疫组化法检测CYP2J2在130例不同类型的人癌组织及相应的癌旁正常组织,4例炎性假瘤组织以及8种常见人源肿瘤细胞系和两种非肿瘤细胞系中的表达情况。结果:CYP2J2在78%(101例)的癌组织中特异性高表达,而癌旁正常组织未能检测到CYP2J2表达,而且CYP2J2 mRNA和蛋白表达水平呈高度的相关性(r=0.613,P<0.01)。同样,免疫组化结果分析发现78%肿瘤组织中有CYP2J2表达,而癌旁正常组织及4例炎性假瘤均阴性。此外还发现CYP2J2主要在肿瘤细胞中表达,而周围的炎性细胞及间质组织均无CYP2J2表达。8种肿瘤细胞中均高表达CYP2J2,而非肿瘤细胞系则无CYP2J2表达。结论:CYP2J2在肿瘤细胞中选择性高表达,CYP2J2可能是肿瘤发生发展的一个标志物。

野桑蚕细胞色素P450氧化酶活性测定及CYP9家族基因的诱导转录

采用酶标板酶活性动力学法检测了氯氰菊酯诱导苏大野桑蚕中肠和脂肪体的PNOD活性。结果表明:氯氰菊酯诱导24 h,脂肪体、中肠PNOD活性分别增加了18.7%,12.2%。根据野桑蚕CYP9A20基因(GenBank登录号:FJ378716)、CYP9A21基因(GenBank登录号:FJ265741)、CYP9A22基因(GenBank登录号:EF535806)和CYP9G3基因片段设计引物,用半定量RT-PCR方法分析了氯氰菊酯诱导野桑蚕CYP9家族基因的表达水平。结果表明,氯氰菊酯诱导24 h,CYP9A21基因在中肠的mRNA表达量是对照的2.1倍,CYP9A20,CYP9A21,CYP9G3基因在脂肪体的mRNA表达量是对照的1.9,3.5,1.4倍。推测野桑蚕CYP9A21等基因的过量表达可能导致野桑蚕对氯氰菊酯氧化解毒代谢的增强。

细胞色素氧化酶P4502C9基因多态性与冠心病及血脂水平的关系

目的探讨细胞色素氧化酶P450 2C9(CYP2C9)基因多态性与冠心病和血脂水平的相关性。方法应用聚合酶链反应和基因测序方法,检测218例经冠状动脉造影确诊冠心病或有明确心肌梗死的患者及200例经冠状动脉造影排除冠心病的对照者的CYP2C9基因型,并对突变基因型者和野生基因型者的血脂按常规方法测定并进行比较分析。结果冠心病组突变型CYP2C9*3基因发生率显著高于非冠心病对照组(P<0.05),突变型CYP2C9*3基因型者和野生型CYP2C9*1基因型者血脂水平差异无统计学意义。结论CYP2C9基因多态性与冠心病的发生可能相关,但未发现与血脂水平有相关性。

细胞色素P450花生四烯酸表氧化酶对肿瘤细胞增殖的影响

背景与目的:细胞色素P450(cytochrome P450,CYP)花生四烯酸表氧化酶对内皮细胞具有促进增殖、抑制凋亡的作用。本研究主要探讨CYP表氧化酶对肿瘤细胞增殖的影响,并初步探讨其影响细胞增殖的相关信号转导机制。方法:用重组腺相关病毒(recombinant adeno-associated virus,rAAV)介导CYP花生四烯酸表氧化酶基因CYP2J2(cytochrome P450 2J2)、CYPF87V(cytochrome P450 F87V)和反义CYP2J2基因分别转染A549、Tca-8113、HepG2、Ncl-H4464种肿瘤细胞,采用MTT法、细胞计数法和流式细胞术分析CYP表氧化酶对肿瘤细胞增殖的影响;并用Western blot法检测转染前后Tca-8113细胞中表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)、ERK1/2和Akt磷酸化水平;最后将转染rAAV-CYP2J2、rAAV-CYPF87V、rAAV-antiCYP2J2和rAAV-GFP的Tca-8113细胞分别接种至裸鼠皮下,观察皮下移植瘤的生长情况。结果:转染CYP2J2和CYPF87V后,A549、Tca-8113、HepG2和Ncl-H446细胞的细胞增殖数分别是相应未转染细胞的1.7倍和2.0倍、1.4倍和1.5倍、1.6倍和1.8倍、2.2倍和2.0倍;转染反义CYP2J2阻断细胞自身CYP2J2表达后,上述4种细胞增殖显著减低。流式细胞术结果显示转染CYP表氧化酶基因的肿瘤细胞中S/G2/M期细胞增加了210%。Western blot结果显示,转染CYP2J2基因后,EGFR、ERK1/2和Akt磷酸化水平分别为未转染细胞的2倍、2.3倍和2.4倍,同时PI3K表达水平也上调为未转染细胞的1.9倍;相反,转入反义CYP2J2基因明显抑制这些蛋白的磷酸化和表达。在体皮下移植瘤实验结果显示,转染rAAV-CYP2J2、rAAV-CYPF87V组裸鼠皮下移植瘤出现的时间(分别为5.8d和6.0d)明显较对照组和转染rAAV-GFP组(分别为8.4d和8.6d)短;而转染反义rAAV-CYP2J2组移植瘤生长缓慢,出现时间也明显较长(约10d)。结论:CYP花生四烯酸表氧化酶能促进肿瘤细胞的增殖,其机制可能与激活EGFR、ERK1/2和PI3K/Akt途径密切相关。

细胞色素P450氧化酶MSP1基因对有机溶剂的易感性与新生儿出生体重的影响

目的 观察在有机溶剂暴露情况下母亲和新生儿细胞色素 P45 0氧化酶 MSP1基因易感性对新生儿出生体重的影响。方法 采用流行病学现况调查方法 ,使用统一调查表 ,由经过培训的调查员在北京燕山某医院对 1997～ 1998年入院分娩的 792个母婴对进行调查。结果 采用自由效应模型 ,将母亲文化程度、年龄、被动吸烟、倒班、生育史、孕前身高、体重、新生儿性别、孕周混杂因素放入回归模型进行调整 ,发现 AG(母亲 ) - AG(新生儿 )基因型其新生儿出生体重(- 6 4.6± 2 9)显著低于其它各组基因型。进一步分析发现 AG(母亲 ) - AG(新生儿 )基因型在有机溶剂暴露情况下 ,可以使新生儿出生体重显著降低 (- 10 7.9± 34 .2 )。可见 AG(母亲 ) - AG(新生儿 )基因型可能是有机溶剂暴露的易感基因。结论 在这组人群中新生儿出生体重受遗传因素的影响 ,同时 ,母亲、婴儿

担载金属卟啉模拟细胞色素P-450的催化丙烯环氧化

制备了SiO2化学键合金属卟啉Mn（TPP）Cl，Mn（TDCPP）Cl的担载配合物催化剂，并与单氧给体次氯酸钠（NaClO）构造了细胞色素P－450单加氧酶模拟体系，并考察了该体系的反应性能及其影响因素．金属卟啉经化学修饰的SiO2担载之后，由于表面官能团与金属中心的轴向配位及刚性载体SiO2对金属卟啉在载体表面很好的位置分离作用，使得金属卟啉的抗氧化性及稳定性显著增加，表现出优良的催化丙烯环氧化反应性能．