17α-羟化酶/C_(17,20)-裂解酶(P450_(17α))抑制剂17-(取代吡唑、异噁唑基)雄烯衍生物的合成

在 1 7-( 3 -吡唑基 )和 1 7-( 5 -异噁唑基 )雄甾 -4 ,1 6-二烯 -3 -酮的吡唑基的 5 -位和异唑基的 3 -位引入取代基 ,设计并合成了 1 1个 1 7-(取代的吡唑基、异唑基 )雄烯衍生物 ,化合物的结构经 1H NMR,IR。

金银花香豆酸3-羟化酶基因LjC3H2的生物信息学分析

香豆酸3-羟化酶广泛存在于植物中,属于细胞色素P450家族的CYP98A亚家族。该酶能在植物苯丙素代谢中催化苯环C3位置的羟基化反应,是绿原酸生物合成的关键酶之一。本文以金银花香豆酸3-羟化酶基因LjC3H2为研究对象,采用生物信息学方法进行分析。结果表明,LjC3H2无信号肽,无跨膜结构域,偏亲水,定位于内质网上;二级结构以α螺旋为主,无规则卷曲较多。LjC3H2与其他植物同源蛋白氨基酸序列比对和系统发育分析表明,LjC3H2与蓟、桔梗的C3H亲缘关系较近,与同属于金银花的LjC3H亲缘关系较远;该蛋白的三级结构与细胞色素P450三级结构相似。

18α-甘草酸二铵对大鼠肝脏细胞色素P450和II相酶的影响

目的 研究 18α 甘草酸二铵 (18α GL)对肝脏药物代谢酶的影响。方法 ♂Wistar大鼠ig 18α GL 12 5和 5 0mg·kg-1,分别给药 3 ,6和 12d ,对照组给等容量的溶媒。酶学测定肝微粒体细胞色素P45 0 (CYP) ,尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶 (GT)和谷胱甘肽巯基转移酶 (GST)活性。结果 18α GL抑制苯胺羟化酶 ,乙氧异唑脱乙基酶和红霉素脱甲基酶活性 ,抑制率分别可达 5 3 2 % ,47 3%和 34 3 % ;增加GT1(底物为 7 甲基 4 羟基 香豆素 ) ,GT2 (底物为 4 羟基联苯 )和GST活性 ,分别可达 2 9 9% ,70 3%和 48 3 %。结论 18α GL对大鼠肝微粒体I相酶(CYP2E1,CYP1A1和CYP3A)主要是抑制作用 ,对II相酶 (GT1,GT2 和GST)

2-十三烷酮对棉铃虫细胞色素P450的诱导作用

将 2 十三烷酮按 0 0 0 5 %～ 0 0 1% (重量比 )的浓度加到棉铃虫人工饲料中 ,连续诱导 3代 ,测定棉铃虫中肠和脂肪体中细胞色素P45 0 (cyt P45 0 )含量以及与标准配基 (正丁醇、吡啶、苯胺、环己烷 )形成的氧化型结合光谱。 2 十三烷酮诱导品系的中肠cyt P45 0与CO结合光谱的最大吸收峰在 44 9nm处 ,脂肪体cyt P45 0与CO结合光谱的最大吸收峰在 45 0 7nm处。中肠cyt P45 0除了在 45 0nm附近存在一个吸收峰外 ,在通入CO后依次在 414、 415、 418nm附近出现吸收峰 ,随后该峰消失 ,随着时间的推移 (第 31次扫描 )在 42 0nm处又开始出现一个弱吸收峰。 2 十三烷酮诱导品系的中肠、脂肪体cyt P45 0与 4种标准配基形成的差光谱与对照相比在峰型上存在着不同程度的差异。中肠cyt P45 0与正丁醇形成双峰双谷的光谱 ;脂肪体cyt P45 0与正丁醇形成的光谱最大吸收峰在 416 6 1nm处 ,波谷在 42 4 91nm处 ;中肠cyt P45 0和脂肪体cyt P45 0与吡啶形成的光谱为典型的Ⅱ型光谱 ,而与环己烷形成的光谱为不典型Ⅰ型光谱 ;中肠和脂肪体的cyt P45 0与苯胺形成典型的Ⅱ型光谱 ,最大吸收峰分别在 44 3 30和 42 8 92nm处 ,最小吸收分别在 40 2 30和 40 1 0

1,3,8-三羟基-5-甲氧基口山酮对细胞色素P450酶的抑制作用

目的:在人肝微粒体中研究1,3,8-三羟基-5-甲氧基山口山酮(1,3,8-trihydroxy-5-methoxyx-anthone,TMX)对细胞色素P450酶(CYP450s)的抑制作用。方法:研究加入TMX后,微粒体内主要药物代谢酶活性的变化情况。微粒体孵化体系中各探针药物及其代谢产物的含量用高效液相色谱法测定,酶活性用探针药物的代谢产物浓度与母药浓度的比值表示。结果:加入TMX前后CYP1A2,CYP2C9,CYP2C19,CYP2E1,CYP3A4活性改变[均值(95%可信区间)]分别为2.95×10-3(2.03×10-3,3.88×10-3),3.14×10-2(1.87×10-2,4.42×10-2),2.27×10-3(-1.4×10-2,1.81×10-2),7.72×10-2(-0.83×10-2,0.2374),-0.2548(-2.9802,2.4707)。CYP1A2,CYP2C9的活性变化差异有统计学意义。结论:10μmol/L的TMX在体外对CYP1A2和CYP2C9有显著性抑制作用,对CYP2C19,CYP2E1和CYP3A4的抑制作用并不明显。

转染细胞色素P450表氧化酶基因对TNF-α损伤大鼠内皮依赖性血管舒张反应的保护作用及机制研究

目的研究过度表达表氧化酶基因,增加内源性EETs的产生是否对TNF-α损伤大鼠内皮依赖性血管舒张反应具有保护作用,并初步从对血管VCAM-1表达的影响探讨其机制。方法将携带细胞色素P450表氧化酶基因的真核表达载体pCB6质粒导入大鼠体内,2周后经静脉给予TNF-α,6 h后观察去甲肾上腺素预收缩的主动脉血管环对乙酰胆碱的舒张反应,并以western blot 检测血管中VCAM-1蛋白质的表达情况。结果 TNF-α降低了主动脉环对乙酰胆碱的舒张反应, CYP2C11、CYP2J2和CYPF87V基因转染使得这种被TNF-α降低的血管舒张反应增强。TNF-α增加了血管VCAM-1表达,CYP2C11、CYP2J2和CYPF87V基因转染使得这种被TNF-α诱导的VCAM-1表达减少。结论CYP2C11、CYP2J2和CYPF87V基因能提高了血管对舒血管物质的反应性。本研究提示,通过上调体内表氧化酶基因表达水平提高内源性EETs浓度可减轻炎症介导的血管损伤,这为研究动脉粥样硬化的防治提供了新的思路。

细胞色素P450 2E1抑制剂DDC上调人星状细胞基质金属蛋白酶-1表达

目的细胞色素P450 2E1(CYP2E1)可以诱导肝星状细胞合成I型胶原增加,而此效应可被CYP2E1抑制剂阻断,但其机制仍不清楚。本研究旨在研究CYP2E1抑制剂DDC可能的抗纤维化机制。方法将稳定表达CYP2E1的人肝细胞系C3A-CYP2E1与人星状细胞系LX-2共培养,并给予CYP2E1抑制剂DDC处理。DDC处理24h后收取共培养上清及LX-2细胞。ELISA检测共培养上清中前I型胶原含量,半定量PCR及实时荧光定量PCR测定LX-2细胞中基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、I型胶原和基质金属蛋白酶抑制因子-1(TI MP-1)的相对转录水平。结果 ELISA结果显示,与未加DDC的对照组相比,DDC处理组共培养上清中的前I型胶原含量下降,差异具有统计学意义。半定量PCR及实时荧光定量PCR均显示,与未加DDC的对照组相比,DDC处理组LX-2细胞中MMP-1的相对转录水平明显增加,差异具有统计学意义;而I型胶原和TIMP-1的相对转录水平无明显改变。结论 CYP2E1抑制剂DDC主要通过上调MMP-1的表达,以发挥其抑制I型胶原合成的作用,而对I型胶原和TI MP-1的转录无明显影响。

重组腺相关病毒介导的细胞色素P450表氧化酶基因对TNF-α诱导人脐静脉内皮细胞炎症的影响

目的研究过度表达细胞色素P450表氧化酶基因引起内源性EETs产生增加是否能抑制由TNF—α诱导的内皮炎症。方法以携带三种不同表氧化酶基因的重组腺相关病毒rAAV- CYP2C11、rAAV—CYP2J2和rAAV—CYPF87V转染人脐静脉内皮细胞,然后再以TNF—α干预,来研究它们对内皮VCAM-1的表达及外周血单核细胞PBMC与内皮细胞粘附的影响。结果TNF-α诱导了 HUVEC中VCAM-1蛋白质的表达,rAAV—CYP2C11、rAAV—CYP2J2能明显抑制TNF-α的这一作用。 TNF-α诱导了PBMC与HUVEC的粘附(100±0．0％ vs 620．1±65．3％),rAAV-CYP2C11、rAAV- CYP2J2能明显抑制TNF-α的这一作用(分别为120．3±33．4％ vs 387．7±27．4％．131．0±28．7％ vs 535．0±69．7％)。结论CYP2C11和CYP2J2基因具有显著的保护内皮细胞、对抗炎症介质介导的内皮损伤的作用。

细胞色素P450/环氧-二十碳三烯酸系统与心肌缺血/再灌注损伤

近年细胞色素P450(CYP450)及代谢产物环氧-二十碳三烯酸(EETs)在心肌缺血/再灌注损伤中的作用受到重视。该系统有可能通过对氧自由基生成、钙超载、白细胞激活、一氧化氮、ATP敏感性钾通道、丝裂原激活的蛋白激酶等多靶点影响心肌缺血/再灌注损伤的程度,表现为加重还是减轻损伤与机体状态有关。鉴于心肌缺血及再灌注激活CYP450/EETs系统,探讨影响CYP450/EETs作用的因素,尤其是确定其保护作用的特征及信号转导机制,将进一步阐明心肌缺血/再灌注损伤的发病机制,为防治该类疾病提出新的思路。本文仅就CYP450/EETs系统改变与心肌缺血/再灌注损伤关系做一综述。

缺血后处理对在体大鼠缺血-再灌注心肌细胞色素P450表氧化酶2J3/环氧二十碳三烯酸系统的影响

目的观察缺血后处理拮抗心肌缺血-再灌注损伤时内源性细胞色素P450表氧化酶2J3/环氧二十碳三烯酸(CYP2J3/EET)系统的变化。方法复制在体大鼠心肌缺血-再灌注损伤及缺血后处理模型。雄性Wistar大鼠(250～300)g随机分为三组:假手术组(Sham)、缺血-再灌注组(I-R)、缺血后处理组(IPo)。动脉插管测定心功能指标,采用TTC染色法测定心肌梗死范围,采用RT-PCR法检测心脏细胞色素P450表氧化酶亚型2J3(CYP2J3)mRNA表达,采用Western blot方法测定心肌组织CYP2J3蛋白水平的变化,高效液相色谱法测定11,12-EET含量。结果与I-R组相比IPo组左室收缩末压(LVESP)、左室内压最大上升/下降速率(±LVdp/dtmax)均显著升高;心肌梗死面积减少20.76%(P<0.01);与Sham组及I-R组相比IPo组CYP2J3 mRNA、CYP2J3蛋白及11,12-EET含量明显升高(P<0.05)。结论IPo可减轻在体心肌I-R损伤同时上调心脏CYP2J3/EET系统;提示CYP2J3/EET系统可能与IPo拮抗心脏I-R损伤作用相关。

3-氨基苯二酰肼发光法在微粒体和重组细胞色素P450酶系中的毒理学应用(英文)

本文分别从微粒体和重组细胞色素P450酶系水平,研究了3-氨基苯二酰肼(luminol)化学发光在毒理学中的应用。研究结果表明luminol化学发光法不仅可用于P450酶系活力的测定,也可用来检测反应体系中由外来化合物代谢转化而产生的自由基。自由基清除剂SOD、过氧化氢酶和二甲亚砜对多种重组酶系的化学发光均有不同程度的淬灭作用,其中以SOD作用最强,其抑制率为93～100％。44种外来化合物的重组酶系化学发光的测定结果表明,已知在代谢转化过程中形成自由基的化合物,其化学发光强度明显增强,如四氯化碳、三氯甲烷、四氯乙烯等;经代谢转化后毒作用增强的化合物,其发光强度有的增强,如二硫化碳、苯、甲苯、甲基对硫磷等,有的不变或减弱,如对硫磷、苯胺、马拉硫磷等;毒作用与代谢转化关系不很密切的化合物,其发光强度与对照比较无变化或减弱,如氨基比林等,多环芳烃类和亚硝胺类致癌物的发光强度,除3-甲基胆蒽、二甲基亚硝胺外,均无明显变化。

棉铃虫细胞色素P450 CYP9A12基因5′-上游区的克隆及序列分析

细胞色素P450基因CYP9A12的过量表达已被证实与棉铃虫Heliocverpa armigera对拟除虫菊酯的抗性相关。为探明棉铃虫CYP9A12基因的表达调控机理,根据棉铃虫CYP9A12基因cDNA全长的5′-末端核苷酸序列,采用基因组步移方法,获得CYP9 A12的5′-上游区序列(总长为3575bp)。与cDNA序列进行比对,表明在起始密码子上游3bp处有一长为2124bp的内含子。利用NNPP分析软件预测出转录起始位点,与根据CYP9A12全长cDNA序列推测的结果是一致的。TFSEARCH 1.3软件分析转录因子结合位点的结果显示,该序列不仅包含启动子的核心结构序列——TATA-box和CAAT-box,亦包含多个转录因子结合位点,如GATA-1,CdxA,Dfd等。本研究结果为深入研究棉铃虫CYP9A12的表达调控机制及其参与杀虫剂抗性的分子机理奠定了一定基础。

基于细胞色素P450单加氧酶介导的4-甲酚氧化降解途径的天麻素生物合成

为实现天麻素的微生物异源生产,将谷氨酸棒状杆菌中4-甲酚降解相关基因cre HIJEFD和药用植物红景天来源的尿苷二磷酸糖基转移酶基因ugt分别克隆至载体pRSFDuet-1和p ACYCDuet-1,转化大肠杆菌后获得重组菌株S1.在S1中诱导关键酶表达后,外源添加4-甲酚,生物转化后对产物进行定性和定量分析.最终以5mmol/L 4-甲酚为底物,重组菌株S1在30℃诱导培养48 h后转化产物中有天麻素生成,产量达到1.5 mmol/L,摩尔转化率为30.3%.本研究实现了从4-甲酚到天麻素的生物转化,可为芳烃化合物降解与天然药物分子生物合成相偶联提供新的思路,并且具有一定的产业化应用前景.

Cocktail探针药物法评价玄参对大鼠细胞色素P450酶的影响

采用Cocktail探针药物法研究玄参对大鼠4种细胞色素P450(CYP3A4、CYP2D6、CYP2C9和CYP1A2)活性的影响.24只健康雄性SD大鼠(Sprague-Dawley rat)随机分为三组:A组为多剂量组,连续7 d给予150 mg/kg玄参.B组为单剂量组,第7 d给予150 mg/kg玄参.C组为对照组.第7 d,各组在给予玄参30 min后,再给予4种探针药物的混合溶液,其中咪达唑仑3 mg/kg、美托洛尔20 mg/kg、氯沙坦5 mg/kg、非那西汀5 mg/kg,分别用以评价CYP3A4、CYP2D6、CYP2C9和CYP1A2的活性.根据设定的时间点收集大鼠血浆样品,处理后的样品采用超高效液相色谱-串联质谱(UHPLC-MS/MS)法测定样品中4种探针药物的浓度.结果可见,玄参对大鼠体内氯沙坦和非那西汀的药代动力学参数无显著影响.单剂量的玄参导致咪达唑仑代谢减慢,多剂量给予的玄参显著诱导美托洛尔代谢.玄参对CYP2C9和CYP1A2的酶活性无明显影响,可以抑制CYP3A4或诱导CYP2D6的酶活性.

疏肝消脂胶囊对非酒精性脂肪肝大鼠肝组织细胞色素P450-2E1的影响

目的观察疏肝消脂胶囊对非酒精性脂肪肝(NAFLD)大鼠肝组织细胞色素P450-2E1(cytochromeP450 2E1,CYP2E1)的影响。方法用高脂乳剂灌胃7周建立NAFLD大鼠模型,于灌胃第3周末形成高脂血症后,给予疏肝消脂胶囊和复方蛋氨酸胆碱片4周后,观察大鼠一般情况,组织病理检测肝细胞脂肪变性程度,采用酶联免疫法检测肝组织匀浆中CYP2E1的含量。结果各药物组肝组织CYP2E1水平较模型组显著降低(P<0.01);各药物组肝细胞脂肪变性程度较模型组显著减轻(P<0.01)。结论疏肝消脂胶囊能有效降低NAFLD肝组织中CYP2E1水平,这可能是其防治NAFLD的机制之一。

烟碱对4-(N-甲基-亚硝胺)-1-(3-吡啶基)-1-丁酮和N′-亚硝基去甲烟碱体外细胞色素P4502A13酶促代谢反应的抑制作用

目的研究烟碱对4-(N-甲基-亚硝胺)-1-(3-吡啶基)-1-丁酮(NNK)和N-亚硝基去甲烟碱(NNN)的体外代谢激活是否产生抑制作用。方法分别以NNK和NNN为底物,采用体外重组酶细胞色素P450酶(CYP450)2A13体系进行孵育,以HPLC-MS-MS检测NNK和NNN及其代谢产物,建立体外孵育NNK和NNN的酶促反应动力学曲线,分析烟碱对其酶促动力学参数的影响。结果 CYP4502A13酶催化NNK生成4-羰基-4-(3-吡啶基)-丁醛(OPB),4-羟基-1-(3-吡啶基)-1-丁酮(HPB)和4-羰基-4-(3-吡啶基)-氧代丁酸(OPBA),该酶催化NNN生成HPB,OPB和4-羟基-4-(3-吡啶基)-氧代丁酸(HA)。烟碱加入NNK反应液中,生成OPB,HPB和OPBA的Km值分别增加到7.4,13.1和11.0μmol·L^(-1),Vmax值保持不变。烟碱加入NNN反应液中,生成HPB,HA和OPB的Km值分别增加到35.46,16.51和28.19μmol·L^(-1),Vmax值保持不变。结论烟碱对CYP4502A13酶催化NNK和NNN的代谢反应具有竞争性抑制作用。

雷斯青霉NADPH-细胞色素P450还原酶基因的克隆及生物信息学分析

工业上利用丝状真菌雷斯青霉(Penicillium raistrickii)转化生产高效避孕药孕二烯酮的关键中间体15α–羟基左旋乙基甾烯双酮.已知参与雷斯青霉甾体转化反应的关键酶为P450羟化酶,该羟化酶体系由细胞色素P450羟化酶和NADPH–细胞色素P450还原酶(CPR)组成,但有关其15α–羟基化反应的分子基础尚不清楚.根据转录组测序数据库,通过RT-PCR扩增克隆了一个雷斯青霉NADPH-细胞色素P450还原酶基因.该基因的开放阅读框为2,082,bp,编码694个氨基酸的多肽链,预测的蛋白相对分子质量为7.63×104,具有CPR蛋白的典型结构域(FMN结合域、FAD和NADPH结合域).NCBI BLAST结果显示雷斯青霉CPR与意大利青霉(P.,italicum)NADPH–细胞色素P450还原酶具有较高的同源性,一致性为93%.

转入人细胞色素P450-3A4基因的CHL细胞可代谢活化异环磷酰胺

环境污染物的致癌、致突变效应以及肿瘤化疗诱发第二肿瘤的风险是人们普遍关注的问题。大多数化学致癌物本身不具活性，必须在体内经过代谢活化才能诱发肿瘤。细胞色素Ｐ４５０（ＣＹＰ）同功酶系在外来化合物的代谢活化中起主要作用，可是目前用于遗传毒理学研究的建株细...

艾司西酞普兰抗抑郁疗效与细胞色素酶P450 2C19基因及5-羟色胺转运体基因多态性关联性分析

目的:探索艾司西酞普兰抗抑郁疗效与细胞色素酶P450 2C19基因(CYP2C19)及5-羟色胺转运体基因(5-HTTLPR)多态性关联性。方法:给予51例抑郁症患者艾司西酞普兰10～20 mg/d单药治疗4周;以治疗前后汉密尔顿抑郁量表24项(HAMD-24)减分率> 50%为有效。应用聚合酶链反应技术检测CYP2C19基因、5-羟色胺转运体基因(5-HTTLPR)多态性,并分析其与艾司西酞普兰有效性的关系。结果:CYP2C19及5-HTTLPR各基因型间艾司西酞普兰治疗的有效率比较差异无统计学意义(χ2=0. 166,P=1. 000;χ2=2. 000,P=0. 217); CYP2C19各基因型患者的不良反应发生率比较差异有统计学意义(χ2=16. 115,P <0. 001),低代谢型患者不良反应发生率明显高于其他型; Logistic回归分析显示艾司西酞普兰抗抑郁疗效与年龄(B=-0. 192,P=0. 009)和病程(B=-0. 170,P=0. 011)相关。结论:CYP2C19、5-HTT基因多态性不影响艾司西酞普兰抗抑郁的疗效。

茵陈蒿汤对非酒精性脂肪性肝病大鼠细胞色素氧化酶P450-2E1影响研究

目的探讨细胞色素氧化酶 P450-2E1(CYP2E1)在非酒精性脂肪性肝病大鼠中的作用机制,以及茵陈蒿汤对非酒精性脂肪肝病的治疗效果。方法把50只SD大鼠用随机法分成空白对照组15只和实验组35只,空白对照组大鼠饲喂普通饲料,实验组大鼠饲喂改良以后的高脂饲料,并且进行非酒精性脂肪肝病大鼠造模,饲喂24周。待造模成功后,将剩余的实验组大鼠随机分为3组,非酒精性脂肪肝组、辛伐他汀对照组(SVT)和茵陈蒿汤组,每组10只,对大鼠进行灌胃,给予相应的药物治疗,6周后处死大鼠,检测大鼠的低密度脂蛋白胆固醇(LDL-c)含量、肝质量、三酰甘油(TG)、体质量、肝指数、总胆固醇(TC),使用PCR检测肝组织中CYP2E1的表达。结果与空白对照组比较,非酒精性脂肪肝组大鼠的TG、LDL-c、体质量、肝指数、肝质量、TC、CYP2E1的表达均升高(P<0.05);与非酒精性脂肪肝组比较,SVT组、茵陈蒿汤组大鼠各项指标及CYP2E1表达均降低(P<0.05);与SVT组比较,茵陈蒿汤组各项指标及CYP2E1表达均降低(P<0.05)。结论茵陈蒿汤可通过调节大鼠CYP2E1的表达水平,减轻脂质异常代谢,降低组织炎症反应,改善肝功能,保护肝组织。