阿托伐他汀对自发性高血压大鼠细胞色素P450羟化酶基因表达的影响

目的:评价阿托伐他汀对自发性高血压大鼠(SHR)血压和细胞色素P450羟化酶(CYP)4A1的调节作用。方法:18只SHR随机分为3组:SHR对照组、阿托伐他汀50mg组(HATV组)和10mg组(LATV组);6只Wistar-Kyoto大鼠(WKY)作为正常对照组。给药共10周,分别于给药前和给药后每2周测量大鼠尾动脉收缩压(SBP);RT-PCR、Western blotting法检测心、肝、肾及主动脉中CYP4A1 mRNA和蛋白质表达;并测定血脂含量。结果:用药前SHR各组SBP均显著高于WKY组(P<0.01);HATV组在给药后第6、8、10周和LATV组在给药后第10周SBP明显低于SHR对照组(P<0.05或P<0.01)。在CYP4A1 mRNA及其蛋白质表达中,SHR对照组4种组织均明显高于WKY组(P<0.01或P<0.05);给药10周后,HATV组心、肾及主动脉和LATV组肾和主动脉的表达均明显低于SHR对照组(P<0.01或P<0.05);同时,用药2组血脂水平亦明显低于SHR对照组(P<0.01或P<0.05)。结论:阿托伐他汀可下调CYP4A1基因的表达,这可能是其降低血压的作用机制之一。

细胞色素P450羟化酶代谢产物与高血压

细胞色素P450(Cytochrome P450,CYP)是一类结构中含有血红素的单链蛋白质,广泛存在于生物系统并有广泛的生物学活性,在动物体内可参与脂质、甾类的代谢.一氧化碳、一氧化氮可与其结构中的活性血红素铁结合,从而抑制CYP的酶活性[1-2].

细胞色素P450w-羟化酶抑制剂HET0016通过ERK1／2途径减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤

目的：细胞色素P450w-羟化酶在心肌缺血再灌注（MI／R）损伤中的作用尚不十分清楚。本课题研究HET0016[N-hydroxy-N＇-（4-butyl-2 methylphenyl）formamidine]，一种新的特异性细胞色素P450w-羟化酶抑制剂对MI／R损伤的保护作用，并探讨与丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路的关系。方法：采用大鼠MI／R模型，缺血30min，再灌注2h。将大鼠随机分为以下各组，每组6-8只：①假手术组；②模型对照组；③HET0016高低剂量给药组：在缺血前15min分别给0．1和1mg·kg-I HET0016静脉注射；⑤MAPK抑制剂组：在缺血前10min分别给予ERKl／2抑制剂PD98059（1 mg·kg-l，iv）、p38MAPK抑制剂SB203580（1mg·kg-1，iv）或JNK抑制剂SP600125（6mg·kg-1，ip）；⑥lmg·kg-1 HET0016＋MAPK抑制剂（PD98059，SB203580或SP600125）组。再灌结束后计算心肌梗死面积，测定LDH、CK和TnT水平。Westernblot检测心肌组织磷酸化ERKl／2、p38 MAPK及JNK蛋白表达水平。结果：①模型组较正常组大鼠血清LDH、CK和TnT分别升高6．43、4．13和9．7倍。HET0016剂量依赖性降低以上血清心肌酶谱水平；②HET0016高、低剂量组心肌梗死面积分别为（6．3±0．16）％和（10．3±0．2）％，与模型对照组（19.8±0．15）％比均有显著性差别；③PD98059可完全阻断HET00l6的作用，但SB20358和SP600125对其没有明显影响。④HET0016增加心肌组织磷酸化ERKl／2蛋白表达，但不影响磷酸化p38 MAPK及JNK蛋白表达。结论：HET0016通过抑制细胞色素P450w-羟化酶对大鼠MI／R损伤有保护作用，其机制与ERK1／2途径有关。

金银花香豆酸3-羟化酶基因LjC3H2的生物信息学分析

香豆酸3-羟化酶广泛存在于植物中,属于细胞色素P450家族的CYP98A亚家族。该酶能在植物苯丙素代谢中催化苯环C3位置的羟基化反应,是绿原酸生物合成的关键酶之一。本文以金银花香豆酸3-羟化酶基因LjC3H2为研究对象,采用生物信息学方法进行分析。结果表明,LjC3H2无信号肽,无跨膜结构域,偏亲水,定位于内质网上;二级结构以α螺旋为主,无规则卷曲较多。LjC3H2与其他植物同源蛋白氨基酸序列比对和系统发育分析表明,LjC3H2与蓟、桔梗的C3H亲缘关系较近,与同属于金银花的LjC3H亲缘关系较远;该蛋白的三级结构与细胞色素P450三级结构相似。

CYPω-羟化酶／20—HETE通过上调VEGF和MMP-9表达促进非小细胞肺癌血管生成和转移

目的：肿瘤转移是非小细胞肺癌（Non--small cell lung cancer, NSCLC）患者的主要死因。

人肝细胞色素P450 2C8/9、2E1比活性测定

目的 建立甲苯磺丁脲羟化酶 (CYP2C8/ 9)和氯羟苯口恶唑 6 羟化酶 (CYP2E1)比活性的测定方法 ,为深入研究CYP45 0在药物代谢中的作用奠定基础。方法 从成人肝细胞中提取微粒体 ,测定其蛋白含量 ,以甲苯磺丁脲、氯羟苯口恶唑为底物 ,用HPLC以梯度洗脱法测定其代谢产物羟基甲苯磺丁脲及 6 羟基氯羟苯 口恶唑生成量 ,据此计算人肝细胞色素P45 0 (CYP45 0 )同工酶甲苯磺丁脲羟化酶 (CYP2C8/9)和氯羟苯 口恶唑 6 羟化酶 (CYP2E1)比活性。结果 于不同时间反复测定的CYP2C8/ 9、CYP2E1比活性无差异。结论 CYP2C8/ 9、CYP2E1的测定方法较为简单、稳定、重复性好 ,可用于新药筛选、安全性评价及肝脏病理学、毒理学研究。

中国汉族人细胞色素P_(450) _2D_6Ch基因特点研究

细胞色素Ｐ４５０２Ｄ６（ＣＹＰ２Ｄ６）基因的多态性是一种药物代谢的遗传变异，其表型分为强代谢型和弱代谢型。而且表型和基因的多态性存在明显的种族差异。本文利用ＰＣＲ－ＲＦＬＰ技术对１００名正常中国人ＣＹＰ２Ｄ６基因的Ｃｈ型突变特点做了分析，结果发现，在ＣＹＰ２Ｄ６基因的第１８８位点Ｃ→Ｔ的频率为０．５７，第４２６８位点Ｇ→Ｃ的频率为０．６６，而且Ｔ１８８／Ｔ１８８、Ｔ２９８８／Ｔ２９８８及Ｃ４２６８／Ｃ４２６８纯合子的比率分别为０．３２、０．０８和０．４２。与国外报道比较，发现中国人ＣＹＰ２Ｄ６基因的这两个位点的多态性分布规律与西方人有明显的不同。

17α-羟化酶/C_(17,20)-裂解酶(P450_(17α))抑制剂17-(取代吡唑、异噁唑基)雄烯衍生物的合成

在 1 7-( 3 -吡唑基 )和 1 7-( 5 -异噁唑基 )雄甾 -4 ,1 6-二烯 -3 -酮的吡唑基的 5 -位和异唑基的 3 -位引入取代基 ,设计并合成了 1 1个 1 7-(取代的吡唑基、异唑基 )雄烯衍生物 ,化合物的结构经 1H NMR,IR。

葛根素对鼠肝微粒体细胞色素P450的影响

目的:观察葛根素对鼠肝微粒体细胞色素P450(CYP)的影响。方法:实验动物分别腹腔注射生理盐水、苯巴比妥(40mg/kg.d)、葛根素(100和200 mg/kg.d),给药7d后,用分光光度法测定肝微粒体CYP和细胞色素b5(Cytb5)的含量,以及苯胺羟化酶(ANH)和氨基比林N-脱甲基酶(ADM)的活性。结果:苯巴比妥和葛根素均能显著缩短戊巴比妥钠对小鼠的催眠时间,显著提高小鼠肝脏指数、CYP含量,以及大鼠CYP和Cytb5含量,且以苯巴比妥组更为显著。苯巴比妥能非常显著地提高大鼠ANH和ADM活性,葛根素仅提高ADM活性,对ANH无明显影响。结论:葛根素对小鼠和大鼠肝微粒体CYP有诱导作用,但诱导能力显著弱于苯巴比妥。

连翘叶提取物通过PXR/CYP17A1影响孕马血清促性腺激素在肝脏的代谢

【目的】研究连翘叶提取物(Forsythia suspensa leaves extract,FSLE)对孕马血清促性腺激素(pregnant mare serum gonadotropin,PMSG)在肝脏中代谢的影响,改善在畜牧生产中因PMSG代谢缓慢而造成的氧化应激。【方法】采用半仿生酶醇法提取连翘叶有效成分,给予昆明雌鼠不同含量的FSLE进行动物体内试验;收集小鼠血清,进行酶联免疫吸附试验,检测各组小鼠血清中PMSG的质量浓度;采集小鼠肝脏组织,检测氧化应激指标谷胱甘肽、超氧化物歧化酶、丙二醛和过氧化氢的水平;采用Western-blot检测小鼠肝脏组织孕烷X受体(pregnane X receptor,PXR)和细胞色素酶P45017A1(cytochrome P45017A1,CYP17A1)蛋白的表达水平。【结果】FSLE可显著降低小鼠血清中PMSG的质量浓度,且可以减缓PMSG代谢引起的氧化应激。Western-blot结果显示:FSLE可显著下调小鼠肝组织中PXR和CYP17A1蛋白的表达。【结论】连翘叶提取物可能是通过下调肝脏中PXR和CYP17A1的表达减缓PMSG代谢引起的氧化应激。

灯盏花素注射液对鼠催眠、肝脏指数、肝微粒体细胞色素P450系及相关酶系的影响研究

目的观察灯盏花素注射液对鼠催眠时间、肝脏指数、肝微粒体细胞色素P450（CYP）、细胞色素b5（Cytb5）及苯胺羟化酶（ANH）、氨基比林N-脱甲基酶（ADM）活性的影响。方法采用随机方法将实验动物分为对照组、苯巴比妥（40mg）组、灯盏花素注射液25mg和50mg组，均每日给药1次，连用20d。观察各药对动物催眠时间的影响；计算肝脏指数；用双缩脲法测定肝微粒体蛋白质和CYP含量；用分光光度法测定肝微粒体CYP和Cytb5的含量及ANH、ADM的活性。结果①灯盏花素两个剂量组对小鼠催眠时间显著缩短，但缩短程度显著小于苯巴比妥组（P均〈0.01）。②灯盏花素两个剂量组小鼠肝脏指数及CYP含量均较对照组显著提高，且高剂量组更加明显，但提高程度显著小于苯巴比妥组（P〈0.05或P〈0.01）。③灯盏花素两个剂量组大鼠肝CYP和Cytb5含量均较对照组显著增加，尤以CYP含量增加更为显著，但增加程度明显小于苯巴比妥组（P〈0.05或P〈0.01）。与对照组比较，灯盏花素两个剂量组ANH活性未见明显变化（P均〉0.05），但能显著提高ADM活性（P均〈0.01）。苯巴比妥组ANH和ADM活性均显著升高，且明显高于灯盏花素两个剂量组（P〈0.05或P〈0.01）。结论灯盏花素注射液对鼠催眠时间、肝脏指数和肝微粒体CYP、Ctyb5、ANH、ADM有影响和诱导作用，但影响和诱导能力显著弱于苯巴比妥。

部分型17α-羟化酶缺陷症女性患者8例临床特点分析

目的:本研究旨在总结部分型17α-羟化酶缺陷症(p17-OHD)女性核型患者的临床表现、鉴别诊断及治疗策略。方法:本研究回顾性纳入了1997年至2020年期间北京协和医院临床诊断p17-OHD的患者中染色体核型为46,XX者,总结其临床表现和辅助检查。结果:8例p17-OHD患者的社会性别均为女性,首次就诊年龄11~36岁,就诊原因以月经异常为主。患者身高符合青春期及育龄女性水平,但阴毛、乳房发育均落后,外生殖器也全部呈现幼稚状态。性腺轴呈现高促性腺激素、高孕激素、低雌激素、低雄激素状态;促肾上腺激素释放激素升高。所有患者卵巢均增大伴囊性改变,其中6例漏诊该病的患者都曾于外院行卵巢囊肿剔除,且术后复发,明确诊断后口服避孕药(COC)治疗效果良好。结论:及时正确诊断p17-OHD能够尽早控制患者病情,避免不必要的手术,保护卵巢储备。

大鼠肝睾酮羟化酶体外诱导模型的建立

目的建立大鼠原代培养肝细胞微粒体睾酮羟化酶系列同工酶(CYP2A1,CYP2B1/2,CYP2C11,CYP3A1/2)的体外诱导模型。方法应用胶原酶原位灌流法分离大鼠肝细胞进行原代培养;用苯巴比妥钠(PB,1mmol·L-1)、地塞米松(Dex,10μmol·L-1)和β-萘酚黄酮(β-NF,50μmol·L-1)诱导培养肝细胞72 h,提取肝细胞微粒体,进行其肝CYP总量、肝微粒体蛋白含量和睾酮羟化酶比活性的测定。另外采用体内诱导方法,SD大鼠分别给予PB 80mg·kg-1,Dex50mg·kg-1和β-NF80mg·kg-1,ip,每天1次,连续5d,停药24h后制备肝微粒体进行上述指标的测定。结果在体外和体内实验中,PB,Dex和β-NF对肝微粒体蛋白含量、CYP总量和睾酮羟化酶同工酶活性均具有较高的诱导效应。PB对肝CYP总量在体外的诱导效应高于体内,对睾酮不同位置羟化作用的诱导效应体内外无显著性差异;Dex和β-NF对肝CYP总量及睾酮不同位置羟化作用的诱导效应体内外无显著性差异。结论大鼠肝睾酮羟化酶体外诱导模型可替代体内实验,用于药物代谢、新药安全性评价及其他外源性化合物代谢和毒性研究。

RNA干扰对雄激素合成关键酶17α-羟化酶/17,20裂解酶作用的实验研究

目的:探讨细胞色素P45017α-羟化酶/17,20裂解酶(CYP17)小干扰RNA(siRNA)对CYP17基因表达和多囊卵巢综合征(PCOS)卵泡膜细胞雄激素合成的抑制效果。方法:合成4条靶向CYP17基因的特异性siRNA和非特异性siRNA。将0.4μg携带报告基因增强型绿色荧光蛋白和CYP17基因的质粒和siRNA共转染入HeLa细胞,荧光显微镜观察及流式细胞术检测绿色荧光蛋白的表达反映对CYP17表达的影响,筛选抑制效果最佳的siRNA。卵泡膜细胞取自PCOS患者和非PCOS妇女各5例,将筛选出的最佳CYP17siRNA以最佳浓度转染人卵泡膜细胞,荧光定量实时逆转录多聚酶链反应检测CYP17mRNA的表达,并且检测培养液中CYP17作用产物雄烯二酮和前体孕酮水平。结果:siRNA1221处理后,HeLa细胞中外源性CYP17的表达显著降低,抑制率达50﹪,卵泡膜细胞中CYP17mRNA水平和雄烯二酮产生降低,但与对照组比较,统计学上无显著差异。结论:RNA干扰技术可能提供一种PCOS高雄激素基因治疗的新方法。

甘草紫杉烯5α-羟化酶cDNA的生物信息学分析

[目的]分析甘草紫杉烯5α-羟化酶(GuT5H)cDNA序列及其编码的蛋白质的结构特征。[方法]以甘草GuT5H全长cDNA为研究对象,运用生物信息学软件和网络工具预测其编码的蛋白质序列,并分析该蛋白质的结构、功能及分子进化特征。[结果]甘草GuT5H cDNA全长1692 bp,含有1428 bp的开放阅读框,编码475个氨基酸残基的蛋白质;该蛋白质与细胞色素P450家族紫杉烯5α-羟化酶(T5H)成员具有高度的序列一致性,分子进化上与同科植物大豆、苜蓿、鹰嘴豆的T5H关系最为密切。[结论]甘草GuT5H cDNA编码紫杉烯5α-羟化酶,属于细胞色素P450家族成员。

1例临床诊断为17-α羟化酶/17,20-裂解酶缺陷症患儿及其父母和哥哥的基因检测分析

目的了解17-α羟化酶/17,20-裂解酶缺陷症(17α-hydroxylase/17,20-lyasedeficiency,17OHD)患儿的基因变异及遗传情况。方法1例主要临床表现为双侧腹股沟区肿物、外生殖器女性化的假两性畸形患儿,临床诊断为17OHD,抽取患儿、患儿父母及哥哥的外周静脉血,采用高通量测序技术(High-ThroughputSequencing,HTS)进行全基因组外显子测序,分析患儿、患儿父母及哥哥的基因情况。结果患儿细胞色素P450c17酶基因(Cytochrome P450c17 enzymegene,CYP17A1 gene)第6外显子存在c.987delC(p.Tyr329fs)纯合突变;患儿父母及其哥哥均存在10号染色体CYP17A1基因第6外显子c.987delC(p.Tyr329fs)杂合突变。结论17OHD患儿存在10号染色体CYP17A1基因第6外显子c.987delC(p.Tyr329fs)纯合突变,其父母、哥哥均存在10号染色体CYP17A1基因第6外显子c.987delC(p.Tyr329fs)杂合突变。17OHD患儿的外显子突变遗传自父母。

氧固醇7α羟化酶的生理作用及相关研究进展

氧固醇7α羟化酶(CYP7B1)是生物体内广泛分布的一类酶。CYP7B1在不同组织中通过作用于不同底物,可以产生多种生理功能,包括促进胆固醇生成胆汁酸、代谢体内冗余的氧固醇激素、调节雌激素受体介导的信号通路、调节免疫系统等。有研究表明CYP7B1的缺陷与遗传性痉挛性截瘫、先天性肝衰竭等疾病有直接联系。本文重点介绍CYP7B1的生理功能及相关的研究进展。

孕马血清促性腺激素对小鼠肝脏组织CYP17A1和PXR表达的影响

旨在了解孕马血清促性腺激素(pregnant mare serum gonadotropin,PMSG)对小鼠肝脏细胞色素P45017A1(cytochrome P45017A1,CYP17A1)和孕烷X受体(pregnane X receptor,PXR)表达的影响。将48只雌性昆明系小鼠随机分为PMSG处理组和对照组,PMSG组小鼠腹腔注射PMSG 10 IU,注射后12、24、48 h处死12只小鼠,采血分离血清并采集肝脏组织样本;对照组腹腔注射等体积生理盐水,在注射后12、24、48 h时采集4只小鼠的血液和肝脏组织样本。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清PMSG含量,苏木精-伊红染色(HE)观察PMSG对肝脏组织的影响,RT-qPCR和Western blot检测肝脏组织CYP17A1和PXR表达水平,免疫组织化学染色检测CYP17A1和PXR在肝脏组织中的定位。结果显示,PMSG注射后12 h小鼠血清中PMSG含量显著升高(P<0.05),24 h和48 h时逐渐降低,但仍显著高于NC组(P<0.05);PMSG注射后12、24、48 h时,肝脏细胞水泡变性明显;注射PMSG后肝脏组织中CYP17A1和PXR基因和蛋白表达均显著下调(P<0.05);CYP17A1和PXR主要定位于肝索肝实质细胞质中。研究结果证明,PMSG能够显著抑制肝脏CYP17A1和PXR表达。

花生四烯酸细胞色素P450ω羟化酶Cyp4a14基因敲除对骨骼肌损伤后再生的影响

本研究旨在探讨花生四烯酸细胞色素P450ω羟化酶CYP4A14在骨骼肌损伤后再生中的作用及其机制。在野生型(wildtype,WT)对照小鼠和Cyp4a14基因敲除(Cyp4a14 knockout,A14^(-/-))小鼠胫骨前肌注射心脏毒素(cardiotoxin,CTX)制备骨骼肌损伤模型。损伤后0、3、5和15天取双侧胫骨前肌,麦胚凝集素(wheat germ agglutinin,WGA)染色和天狼猩红染色观察损伤骨骼肌再生和纤维化程度,免疫组织化学染色观察细胞增殖相关蛋白Ki-67和巨噬细胞标志蛋白Mac-2的表达,real-time PCR检测骨骼肌中再生相关基因和炎症相关基因的表达。结果显示,损伤后15天时A14^(-/-)小鼠的新生肌纤维横截面面积显著小于WT小鼠(P<0.05),间质纤维化多于WT小鼠(P<0.05)。损伤后5天时A14^(-/-)小鼠骨骼肌中Ki-67^(+)增殖细胞的比例少于WT小鼠,与肌母细胞分化相关基因Myod1和Myog的表达也显著低于WT小鼠(P<0.05)。损伤后3天时A14^(-/-)小鼠骨骼肌中CD45和CD11b基因mRNA表达水平以及Mac-2^(+)巨噬细胞比例显著低于WT小鼠(P<0.05),同时巨噬细胞分泌的促进肌母细胞增殖和分化的细胞因子IL-1β、IGF-1和SDF-1的表达也显著低于WT小鼠(P<0.05)。这些结果表明花生四烯酸细胞色素P450ω羟化酶CYP4A14在骨骼肌损伤后再生的过程中发挥重要作用。