稳定表达细胞色素P4502B6的Flp-In^(TM)CHO细胞系的建立及鉴定

目的构建稳定表达细胞色素P4502B6(CYP2B6)的Flp-In^(TM)CHO细胞系。方法将Flp-In^(TM)CHO细胞分为Flp-In^(TM)CHO组、Flp-In^(TM)CHO空载体组及Flp-In^(TM)CHO-CYP2B6组,通过Lipofectamine2000转染试剂,分别将pcDNA5/FRT空质粒和pcDNA5/FRT-CYP2B6重组质粒转染至Flp-In^(TM)CHO空载体组细胞和Flp-In^(TM)CHO-CYP2B6组细胞中,利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、蛋白免疫印迹(Western blot)及荧光素酶实验检测转染细胞中CYP2B6 mRNA水平、蛋白表达水平及活性,用四氮唑盐(MTS)测定转染CYP2B6的Flp-In^(TM)CHO细胞对环磷酰胺的毒性敏感性。结果与Flp-In^(TM)CHO组和Flp-In^(TM)CHO空载体组相比,Flp-In^(TM)CHO-CYP2B6组细胞中CYP2B6的mRNA和蛋白表达水平显著升高(P<0.01)、酶活性显著增加(P<0.001),对环磷酰胺的毒性敏感度显著增加(P<0.001)。结论成功构建稳定表达CYP2B6的Flp-In^(TM)CHO细胞系,为研究药物代谢和筛选毒性药物提供工具。

姜黄素在大鼠和人肝微粒体中对细胞色素P4502C8活性的影响

目的分别在大鼠和人混合肝微粒体中考察姜黄素对瑞格列奈代谢的影响,从而考察姜黄素对细胞色素P4502C8(CYP2C8)活性的影响.方法分别建立大鼠和人肝微粒体体外孵育体系,将姜黄素与瑞格列奈于37℃水浴中共同孵育,用UPLC法测定肝微粒体中瑞格列奈的剩余浓度.在系列浓度的瑞格列奈进行孵育的条件下,绘制米氏曲线,得到瑞格列奈的米氏常数(K_(m))、最大反应速率(V_(max))和固有清除率(CL_(int)).在系列浓度的姜黄素进行孵育的条件下,测定肝微粒体中瑞格列奈的减少量并计算半数抑制浓度(IC_(50)),考察姜黄素对瑞格列奈代谢的影响.结果瑞格列奈在大鼠和人肝微粒体中孵育的K_(m)值分别为(51.41±18.29)和(5.66±2.76)μmol·L^(-1),V_(max)分别为(47.29±7.81)和(1.71±0.38)μmol·min^(-1)·mg^(-1),CL_(int)分别为0.92和3.31 mL^(-1)·min^(-1)·mg^(-1).姜黄素对瑞格列奈在大鼠和人肝微粒体中均具有明显的抑制作用,IC_(50)值分别为9.87和0.31μmol·L^(-1).结论姜黄素可显著抑制瑞格列奈在大鼠和人肝微粒体中的代谢,提示两药合用时具有发生相互作用的风险,且姜黄素与其他经CYP2C8代谢的药物合用时也应谨慎.

细胞色素氧化酶P4502C19基因多态检测联合血清肝素辅助因子Ⅱ对下肢动脉硬化闭塞症介入术后再狭窄的预测价值

目的探讨细胞色素氧化酶P4502C19(CYP2C19)基因多态检测联合血清肝素辅助因子Ⅱ(HCⅡ)对下肢动脉硬化闭塞症(ASO)介入术后再狭窄的预测价值。方法收集2017年1月至2021年5月于绵阳市第三人民医院行介入治疗的146例ASO患者的临床资料,根据随访期间再狭窄发生情况将其分为再狭窄组(n=27)和无再狭窄组(n=119)。收集患者性别、年龄、体重指数(BMI)、吸烟史、心脑血管病史、高同型半胱氨酸病史、病变血管支数、术前狭窄情况、支架植入情况、纤维蛋白原水平、总胆固醇水平、红细胞计数、CYP2C19基因多态性、HCⅡ活性,分析ASO介入术后再狭窄的影响因素。结果有吸烟史、支架植入、CYP2C19慢代谢型及HCⅡ活性均为ASO支架植入术后发生再狭窄的独立危险因素(P﹤0.05)。受试者工作特征(ROC)曲线结果显示,HCⅡ活性预测ASO支架植入术后再狭窄的截断值为95.80%,曲线下面积(AUC)为0.809(95%CI:0.719~0.900),灵敏度为74.80%,特异度为88.24%,Kappa=0.566。CYP2C19基因多态检测对ASO支架植入术后再狭窄的预测灵敏度为66.67%,特异度为89.07%,Kappa=0.537。联合检测对ASO支架植入术后再狭窄的预测灵敏度为96.30%,特异度为86.55%,Kappa=0.682。结论ASO介入术后再狭窄与吸烟史、支架植入情况、CYP2C19基因多态性及HCⅡ活性有关,CYP2C19基因多态性及HCⅡ活性检测均可用于预测ASO介入术后再狭窄,但联合检测可提高其诊断效能。

细胞色素P4502C8和细胞色素P4502J2基因多态性与中国汉族散发性阿尔茨海默病的相关性研究

目的：探讨细胞色素P450氧化酶（CYP）2C8和2J2基因多态性与中国汉族散发性阿尔茨海默病（ AD）的相关性。方法收集206例AD患者及256例健康对照的外周血标本，用全血基因组的提取试剂盒提取基因组的DNA，采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（ MALDI－TOF－MS）的方法，对CYP2C8（rs1058932，rs2275622）、CYP2J2（rs1155002，rs2271800）基因多态性进行检测。结果候选4个多态性的基因型和等位基因的频率分布在2组间比较差异均无统计学意义（ P＞0.05）。分别对CYP2C8／2J2的两个SNPs位点构建单体型， CYP2C8的单体型 C －T 与 AD 组呈正相关（ P ＜0.001， OR ＝2.57，95％CI：1.97～3.35）。结论 CYP2C8（rs1058932，rs2275622）单体型C－T增加了中国汉族散发性AD的发病风险。

细胞色素P4502D6 C188T基因多态性与难治性抑郁症的关联

目的:探讨细胞色素P450(CYP)2D6 C188T基因多态性与难治性抑郁症及氟西汀合并小剂量利培酮治疗的疗效、不良反应的关联。方法:应用聚合酶链反应(PCR)扩增技术及限制性片段长度多态性(RFLP)测定92例难治性抑郁症患者及107名正常对照的CYP2D6 C188T基因多态性。其中59例患者接受氟西汀合并小剂量利培酮治疗6周,进一步分析不同疗效或不良反应患者的CYP2D6 C188T基因多态性。结果:难治性抑郁症患者与健康对照组CYP2D6C188T基因型及等位基因分布差异无统计学意义。36例有效患者的T等位基因频率(n=40,55.6%)高于23例无效患者的(n=14,30.4%),(χ2=7.14,P=0.01);33例有不良反应患者的T等位基因频率(n=46,69.7%)高于26例无不良反应患者的(n=26,50.0%),(χ2=4.74,P=0.03)。结论:CYP2D6 C188T基因多态性与难治性抑郁症无显著关联,但可能是影响利培酮对氟西汀增效作用以及两药联用的不良反应。

利培酮治疗与细胞色素P4502D6/C188T酶基因多态性的关联分析

目的 研究利培酮临床效应的个体差异与其代谢酶细胞色素P4 5 0 2D6 (cytochromeP4 5 02D6 ,CYP2D6 )酶基因多态性的相关性。方法 对 88例符合CCMD 3精神分裂症诊断标准的患者和 96例健康对照者作病例 -对照分析。精神分裂症患者给予利培酮治疗 8周 ,用阳性和阴性症状量表 (posi tiveandnegativesymptomscale ,PANSS)评分评价利培酮疗效。采用聚合酶链反应扩增及限制性片段长度多态性 (PCR RFLP)技术对CYP2D6exonⅠ的C188T位点突变进行检测 ,分析利培酮临床效应与其主要代谢酶CYP2D6 /C188T酶基因多态性的相关性。结果 中国上海地区人群的CYP2D6 /C188T突变率(弱代谢型 )为 36 .3% ,病例组和正常对照组间基因型频率总体分布比较无显著差异 (χ2 =1.15 ,df=2 ,P >0 .0 5 ) ,两组间的等位基因频率之间比较也无显著性差异 (χ2 =0 .78,df=1,P >0 .0 5 )。进行性别及有否家族史分组后分析 ,亦无差异存在 ,且CYP2D6 /C188T突变与利培酮临床效应之间并无相关性 (χ2 =1.12 ,df=2 ;χ2 =0 .0 3,df=1,P >0 .0 5 )。结论 未发现中国人CYP2D6 /C188T多态性与利培酮临床效应的个体差异有相关性。

抑郁症患者细胞色素P4502C19基因型对阿米替林血药浓度及其去甲基代谢的影响

目的 探讨中国人的CYP2C19基因型对阿米替林血药浓度及其去甲基代谢的影响。方法 采用多聚酶链式反应和限制性片段长度多态性分析测定 5 9例汉族抑郁症患者CYP2C19的基因型。高效液相色谱紫外检测法测定阿米替林及去甲替林的稳态血浆浓度。结果 5 9例患者检测出 4种CYP2C19基因型 :wt/wt型 (n =4 ) ,wt/m1型 (n =4 9) ,m1/m1型 (n =4 ) ,m1/m2型 (n =2 )。基因m1频率为 0 5 ,基因m2频率为 0 0 17。单位剂量阿米替林及去甲替林的稳态血药浓度有明显个体差异 ,分别相差 31倍和 2 6倍。CYP2C19不同基因型的单位剂量阿米替林浓度差异无显著性意义 (P >0 0 5 ) ;单位剂量去甲替林血浓度wt/m1型与m1/m1型相比 [(0 6 4± 0 4 4 ) μg·L-1·mg-1比 (0 18± 0 0 8) μg·L-1·mg-1) ]有显著性差异 (P <0 0 5 ) ,其他分型之间比较无显著性差异 (P >0 0 5 )。阿米替林 /去甲替林浓度比值大小依次为 :wt/wt型 1 0 5± 0 2 8,wt/m1型 1 4 5± 0 81,m1/m1型 4 5 9± 1 4 4 ;wt/wt型和wt/m1型与m1/m1型相比均有极显著性差异 (P <0 0 1) ,wt/wt型与wt/m1型相比无显著性差异 (P >0 0 5 )。结论 在中国汉族抑郁症患者中 ,CYP2C19介导的阿米替林去甲基代谢表现出基因剂量效应倾向 。

细胞色素P4502C19基因多态性对NSTE-ACS患者血小板反应性及临床预后的影响

目的探讨细胞色素P4502C19(CYP2C19)基因多态性与非ST段抬高急性冠脉综合征(NSTE-ACS)患者服用氯吡格雷后血小板反应性的关系,并评价不同基因型对NSTE-ACS患者预后的影响。方法连续纳入接受PCI治疗的NSTE-ACS患者462例,依据CYP2C19基因型,分为快代谢型(CYP2C19*1/*1)、中间代谢型(CYP2C19*1/*2、CYP2C19*1/*3)和慢代谢型(CYP2C19*2/*2、CYP2C19*2/*3)。采用流式细胞术测定的血小板反应指数(PRI)和光比浊法测定的血小板聚集率(PAG)两种方法来评价患者在服用氯吡格雷后的血小板反应性。全部患者随访2年,以全因死亡、支架内再狭窄、急性支架内血栓形成、再发急性心肌梗死定义为主要不良心血管事件(MACE),采用Cox回归分析评价CYP2C19基因型、PRI、PAG等指标对MACE的预测能力。结果快代谢型158例、中间代谢型246例、慢代谢型58例。快代谢型、中间代谢型、慢代谢型PRI分别为48.6±10.5、56.7±12.6、65.3±11.4,PAG分别为67.4±8.5、71.9±8.2、78.4±6.1,三者两两比较P均<0.01。快代谢型、中间代谢型、慢代谢型MACE发生率分别为2.5%、9.8%、43.1%,三者两两比较P均<0.01。Cox回归分析显示,PRI(HR:1.05,95%CI:1.03~1.07,P<0.01)和CYP2C19基因型(HR:1.84,95%CI:1.09~3.12,P<0.05)为MACE的独立预测因子。结论CYP2C19基因型与NSTE-ACS患者服用氯吡格雷后的血小板反应性相关,慢代谢型可作为NSTE-ACS患者预后不良的预测指标。

氯吡格雷抵抗细胞色素P4502C19基因多态性与复发性缺血性脑卒中的相关性研究

目的研究氯吡格雷抵抗细胞色素P4502C19（CYP2C19）基因多态性与复发性缺血性脑卒中的相关性。方法选取2015年4月至2017年3月天津市南开医院收治的38例复发性缺血性脑卒中患者，按照使用氯吡格雷后是否有抵抗将患者分为抵抗组（13例）和非抵抗组（25例）。分析2个单核苷酸多态性（SNPs）的等位基因频率和基因型频率，检测两组2个SNPs的分布情况。结果CYP2C19（636G〉A，rs4986893）和CYP2C19（681G〉A，rs4244285）等位基因和基因频率符合Hardy—Weinberg平衡（P〉0．05）。非抵抗组CYP2C19＊2（rs4244285）GG型分布率显著高于抵抗组（68．00％比30．77％，P〈0．05），GA＋AA型分布率显著低于抵抗组（32．00％比69．23％，P〈0．05），两组CYP2C19＊3（rs4986893）GG型（76．00％比92．31％）、AG＋AA型（24．00％比7．69％）分布率比较差异均无统计学意义（均P〉0．05）。结论氯吡格雷抵抗CYP2C19基因多态性和复发性缺血性脑卒中密切相关。

药物代谢酶细胞色素P4502C9研究进展

P4 5 0 2C9是人体中重要的药物代谢酶。P4 5 02C9基因编码区的多态性造成氨基酸序列的变化 ,主要包括P4 5 0 2C9 2和P4 5 0 2C9 3两种突变体 ,变异纯合子对P4 5 0 2C9底物的代谢能力明显降低。P4 5 0 2C9的底物包括甲苯磺丁脲、苯妥英、S 法华令、氟西汀、洛沙坦等。P4 5 0 2C9可被利福平诱导 。

细胞色素氧化酶P4502C9基因多态性与冠心病及血脂水平的关系

目的探讨细胞色素氧化酶P450 2C9(CYP2C9)基因多态性与冠心病和血脂水平的相关性。方法应用聚合酶链反应和基因测序方法,检测218例经冠状动脉造影确诊冠心病或有明确心肌梗死的患者及200例经冠状动脉造影排除冠心病的对照者的CYP2C9基因型,并对突变基因型者和野生基因型者的血脂按常规方法测定并进行比较分析。结果冠心病组突变型CYP2C9*3基因发生率显著高于非冠心病对照组(P<0.05),突变型CYP2C9*3基因型者和野生型CYP2C9*1基因型者血脂水平差异无统计学意义。结论CYP2C9基因多态性与冠心病的发生可能相关,但未发现与血脂水平有相关性。

中国人群华法林药效与细胞色素P4502C9基因多态性关系的系统评价和荟萃分析

目的评价中国人群华法林(抗凝药)药效与CYP2C9基因多态性的关系。方法计算机检索相关中英文数据库,共纳入6篇回顾性研究(n=571)。用Re-view Manager4.2.9软件进行荟萃分析。结果突变型组较野生型纯合子组华法林平均日剂量低0.93mg[WMD合并=-0.93,95%CI(-1.31,-0.56),P<0.00001];同时,抗凝治疗的过量发生率也较高(P=0.0001)。纳入研究间比较具有异质性(P=0.02,I2=62.1%);敏感性分析表明,结果较为稳定可信。结论携带CYP2C9*2和/或*3突变者,华法林平均日剂量较低,出血风险较高。

用探药甲苯磺丁脲评价丹参片对健康人体内细胞色素P4502C9的影响

目的用探药甲苯磺丁脲研究丹参片(抗心脑血管病中成药)对健康受试者体内细胞色素P4502C9的影响。方法采用随机开放2周期试验设计,12例健康受试者口服丹参片14d(1日3次,每次4片)的前后,单剂量口服甲苯磺丁脲0.5g,以LC-MS测定给药后不同时间点甲苯磺丁脲和4-羟基甲苯磺丁脲的血浆浓度,计算口服丹参片前后的主要药代动力学参数,并进行配对t检验。结果口服丹参片前后,甲苯磺丁脲Cmax、t1/2、CL/F和AUC0-36及4-羟基甲苯磺丁脲Cmax、t1/2和AUC0-36,经配对t检验差异均无显著意义。结论口服丹参片14d对人体内细胞色素P4502C9无诱导和抑制作用。

细胞色素氧化酶P4502C19的研究进展

细胞色素氧化酶P4502C19(CYP2C19)又称S-美芬妥英羟化酶,其活性在人群分布中呈明显的遗传多态性。全文就近几年P4502C19的检测方法,基因多态性分子机制,基因多态性与药物和肿瘤易患性的关系等研究进展作一综述。

细胞色素P4502C9酶活性测定探针的分析

P450 2C9是人体中重要的药物代谢酶。P450 2C9基因编码区的多态性造成氯基酸序列的变化,主要包括P450 2C9*2和P450 2C9*3两种突变体,变异纯合子对P450 2C9底物的代谢能力明显降低。目前常用的P450 2C9的探药包括甲苯磺丁脲、华法令和洛沙坦等,各种探药在检测方法、不良反应和灵敏度方面各有优缺点。

细胞色素P4502C19基因多态性的研究进展

细胞色素P4 5 0 2C19(CYP2C19)是一种重要的肝微粒体酶 ,它的遗传多态性影响着许多临床药物的氧化代谢 .

细胞色素P4502C19中间及慢代谢型的老年患者冠状动脉介入术后不同抗凝治疗的预后观察

目的:本研究是观察细胞色素P4502C19(CYP2C19)基因型的中间及慢代谢型的老年(≥75岁)急性冠状动脉综合征(ACS)患者经皮冠状动脉介入治疗(PCI)术后三种抗凝治疗的临床预后。方法:筛选2018年8月至2019年8月,于我院住院的98例经检测为CYP2C19中间及慢代谢型的PCI术后老年ACS患者(≥75岁),分为三组(阿司匹林+氯吡格雷1组,阿司匹林+替格瑞洛2组和阿司匹林+氯吡格雷+西洛他唑3组),对所有患者随访1年,观察三组患者主要心脑血管不良事件(MACCE)及出血发生率。结果:在主要终点中,三组的MACCE事件发生率,差异无统计学意义。对于次要终点和出血事件,2组的非致死性心肌梗死发生率低于1组(P=0.048),但轻微出血风险高于1组(P=0.044)。3组与1组相比,也有降低非致死性心肌梗死的趋势(P=0.062)且不增加出血风险。结论:对于CYP2C19中间及慢代谢基因型的老年ACS患者,PCI术后的抗凝治疗可采用个体化给药。

耐药肺癌细胞caspase8、bcl-2、细胞色素C及bcl-2 mRNA的异常表达

目的探讨肺癌细胞耐药性与凋亡蛋白caspase8、bcl-2、细胞色素C及bcl-2 mRNA异常表达的关系。方法培养肺癌A 549耐药株(A 549R)和敏感株(A 549S),采用逆转录聚合酶链反应技术(RT-PCR)对两株细胞bcl-2 mRNA进行扩增并作琼脂糖电泳,设-βactin为内对照比较其表达水平;W estern B lot法检测caspase8、bcl-2、细胞色素C蛋白表达并比较两株细胞中上述蛋白质表达水平。结果A 549S凋亡启动蛋白caspase8及细胞色素C的表达高于A 549R(P<0.05),而bcl-2蛋白表达低于后者(P<0.05);bcl-2 mRNA表达相对丰度分别为:A 549S 8.74±1.81,A 549R 10.29±2.92,差异无统计学意义(P>0.05)。结论bcl-2的过度表达可能使caspase8和细胞色素C蛋白表达降低从而造成细胞耐药,但bcl-2的这种过度表达可能是在转录或其后的过程而非基因水平发生。

细胞色素P4502C9基因多态性对健康人体内格列喹酮药代动力学的影响

目的研究细胞色素CYP2C9基因多态性对中国人体内格列喹酮药物代谢动力学的影响。方法用RELP-PCR方法对38名健康受试者进行CYP2C9基因多态性检测,并按不同CYP2C9基因型进行分组,用高效液相色谱-荧光检测法测定受试者体内格列喹酮的血药浓度并计算相应的药代动力学参数,比较不同基因型受试者间药代动力学参数的差异。结果在38名健康受试者中,发现3名CYP2C9*1/*3杂合突变型个体与35名CYP2C9*1/*1野生型个体;未发现CYP2C9*3/*3纯合突变型个体。随机抽取的17名野生型个体与3名杂合突变型个体在给予格列喹酮60 mg后,发现杂合突变型个体AUC0-t、AUC0-∞、CL/F分别相当于野生型个体的1.854,1.787,0.554倍。结论 CYP2C9基因多态性对格列喹酮的药代动力学有显著影响,CYP2C9*1/*3突变型个体临床应适当调整给药剂量。