稳定表达细胞色素P4502B6的Flp-In^(TM)CHO细胞系的建立及鉴定

目的构建稳定表达细胞色素P4502B6(CYP2B6)的Flp-In^(TM)CHO细胞系。方法将Flp-In^(TM)CHO细胞分为Flp-In^(TM)CHO组、Flp-In^(TM)CHO空载体组及Flp-In^(TM)CHO-CYP2B6组,通过Lipofectamine2000转染试剂,分别将pcDNA5/FRT空质粒和pcDNA5/FRT-CYP2B6重组质粒转染至Flp-In^(TM)CHO空载体组细胞和Flp-In^(TM)CHO-CYP2B6组细胞中,利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、蛋白免疫印迹(Western blot)及荧光素酶实验检测转染细胞中CYP2B6 mRNA水平、蛋白表达水平及活性,用四氮唑盐(MTS)测定转染CYP2B6的Flp-In^(TM)CHO细胞对环磷酰胺的毒性敏感性。结果与Flp-In^(TM)CHO组和Flp-In^(TM)CHO空载体组相比,Flp-In^(TM)CHO-CYP2B6组细胞中CYP2B6的mRNA和蛋白表达水平显著升高(P<0.01)、酶活性显著增加(P<0.001),对环磷酰胺的毒性敏感度显著增加(P<0.001)。结论成功构建稳定表达CYP2B6的Flp-In^(TM)CHO细胞系,为研究药物代谢和筛选毒性药物提供工具。

应用大鼠肝微粒体筛选对细胞色素P4502D6有抑制作用的中药

目的从17种中药(单体、提取物和注射液)中快速筛选出对细胞色素P4502D6(CYP2D6)亚型有抑制作用的中药,建立高通量筛选对CYP2D6有抑制作用中药的技术平台。方法取大鼠空白肝微粒体,分别加入17种中药,HPLC法测定大鼠肝微粒体中CYP2D6的探针药物右美沙芬(DM)的代谢率,通过代谢率降低的现象初步筛选出能抑制肝微粒体中CYP2D6代谢的药物。结果槲皮素、黄芩苷、厚朴提取物、清开灵注射液、盐酸川芎嗪注射液可明显降低DM的代谢率(P<0.01)。结论初步筛选出槲皮素、黄芩苷、厚朴提取物、清开灵注射液、盐酸川芎嗪注射液这5种中药可抑制肝微粒体CYP2D6酶活性。此方法可作为高通量筛选对CYP2D6活性有抑制作用中药的技术平台。

细胞色素P4502D6酶基因多态性与利培酮代谢的相关性研究

目的研究利培酮(抗精神分裂症药)在人体代谢过程与CYP2D6*10基因多态性的关系。方法不同CYP2D6*1/*1(n=5)、*1/*10(n=12)及*10/*10(n=6)基因型的健康志愿者,单次口服利培酮2 mg后,用LC-MS/MS方法测定血浆中利培酮及其活性代谢产物9-羟基利培酮浓度,研究利培酮药代动力学与CYP2D6*10基因型的相关性。结果CYP2D6*10/*10和CYP2D6*1/*10基因型与CYP2D6*1/*1基因型的受试者相比,利培酮的AUC0-∞分别增加811%和212%,2者比较差异非常显著(P<0.001);利培酮/9-羟基利培酮的AUC比值在各CYP2D6*10基因型间存在显著性差异(P<0.001)。结论CYP2D6*10 C188T突变使CYP2D6对利培酮的代谢活性降低,体内利培酮暴露量增加。

细胞色素P4502D6与药物代谢

细胞色素Ｐ４５０２Ｄ６（ＣＹＰ２Ｄ６）是一种重要的Ｐ４５０系氧化代谢酶，除参与代谢一些内源性物质和某些环境中毒性化合物外，主要是参与多种重要药物的代谢，如作用于心血管和中枢神经系统的药物。ＣＹＰ２Ｄ６参与代谢的药物占总Ｐ４５０代谢药物的３０％，同时对手性药物的代谢还呈现立体选择性。研究还发现ＣＹＰ２Ｄ６对药物的代谢呈现明显的个体和种族差异，引起这种差异的主要原因是ＣＹＰ２Ｄ６具有的基因多态性，此外还有一些非基因因素，如药物的影响等。目前，ＣＹＰ２Ｄ６的生物学特征已被基本确定，这将十分有助于对ＣＹＰ２Ｄ６的深入研究，从而为临床合理用药提供科学依据。

中国人群细胞色素P4502D6基因多态性对曲马多药代动力学的影响

目的研究中国人群CYP2D6基因多态性对曲马多(镇痛药)药代动力学的影响。方法不同基因型中国健康志愿者随机分为4组:第1组CYP2D6*2W*10W,第2组:CYP2D6*2M*10W,第3组:CYP2D6*2M*10H,第4组:CYP2D6*2M*10M。各组单次口服曲马多100mg后,用高效液相色荧光检测法测定血和尿中曲马多及其M1代谢产物O-去甲基曲马多(M1)的浓度,研究不同基因型对曲马多药代动力学的影响。结果第2组曲马多及其M1的主要药代动力学参数与第1组相比没有显著性差异;第3组与第1组、第4组与第1组、第4组与第3组比较,主要药代动力学参数均有显著性差异(P<0.05),且呈基因剂量效应。结论CYP2D6*2对于曲马多的药代动力学过程没有影响;但CYP2D6*10可降低酶活性,且CYP2D6*10纯合子变异较杂合子变异对曲马多药代动力学的影响更大,呈基因剂量效应。

细胞色素P4502D6遗传多态性与帕罗西汀临床效应的相关性研究

目的：研究中国人细胞色素Ｐ４ ５０２Ｄ６（ＣＹＰ２Ｄ６）Ａ、Ｂ及Ｃｈ进行基因突变分析与帕罗西汀临床效应之间的关系。方法：采用ＰＣＲ－ＲＦＬＰ法对８５例抑郁症患者进行基因型分析，并分组用 ＨＡＭＤ和 ＴＥＳＳ评定患者治疗前，治疗 ４周和 ８周后的抑郁状态及药物不良反应，比较各基因型组患者采用帕罗西汀治疗的疗效和药物不良反应。结果：（１）ＣＹＰ２Ｄ６等位基因频率分别为：Ｗｔ（４９．５％），Ｃｈ（５０．０％），Ｂ（０．５％）。未检出Ａ等位基因。（２）不同基因型组患者治疗后ＨＡＭＤ评分显著降低；不同基因型患者之间治疗前 ＨＡＭＤ评分、治疗４周和 ８周后ＨＡＭＤ评分及减分率，以及ＴＥＳＳ评分之间的差异均无显著性意义；患者治疗前ＨＡＭＤ评分、治疗后ＨＡＭＤ评分及减分率、ＴＥＳＳ评分等均与年龄、性别、病程、ＣＹＰ２Ｄ６基因型、突变等位基因数目之间的相关性无显著性意义。结论：本研究未发现抑郁症患者ＣＹＰＺＤ６基因多态性与帕罗西汀临床效应之间存在相关性。

细胞色素P4502D6 C188T基因多态性与难治性抑郁症的关联

目的:探讨细胞色素P450(CYP)2D6 C188T基因多态性与难治性抑郁症及氟西汀合并小剂量利培酮治疗的疗效、不良反应的关联。方法:应用聚合酶链反应(PCR)扩增技术及限制性片段长度多态性(RFLP)测定92例难治性抑郁症患者及107名正常对照的CYP2D6 C188T基因多态性。其中59例患者接受氟西汀合并小剂量利培酮治疗6周,进一步分析不同疗效或不良反应患者的CYP2D6 C188T基因多态性。结果:难治性抑郁症患者与健康对照组CYP2D6C188T基因型及等位基因分布差异无统计学意义。36例有效患者的T等位基因频率(n=40,55.6%)高于23例无效患者的(n=14,30.4%),(χ2=7.14,P=0.01);33例有不良反应患者的T等位基因频率(n=46,69.7%)高于26例无不良反应患者的(n=26,50.0%),(χ2=4.74,P=0.03)。结论:CYP2D6 C188T基因多态性与难治性抑郁症无显著关联,但可能是影响利培酮对氟西汀增效作用以及两药联用的不良反应。

利培酮治疗与细胞色素P4502D6/C188T酶基因多态性的关联分析

目的 研究利培酮临床效应的个体差异与其代谢酶细胞色素P4 5 0 2D6 (cytochromeP4 5 02D6 ,CYP2D6 )酶基因多态性的相关性。方法 对 88例符合CCMD 3精神分裂症诊断标准的患者和 96例健康对照者作病例 -对照分析。精神分裂症患者给予利培酮治疗 8周 ,用阳性和阴性症状量表 (posi tiveandnegativesymptomscale ,PANSS)评分评价利培酮疗效。采用聚合酶链反应扩增及限制性片段长度多态性 (PCR RFLP)技术对CYP2D6exonⅠ的C188T位点突变进行检测 ,分析利培酮临床效应与其主要代谢酶CYP2D6 /C188T酶基因多态性的相关性。结果 中国上海地区人群的CYP2D6 /C188T突变率(弱代谢型 )为 36 .3% ,病例组和正常对照组间基因型频率总体分布比较无显著差异 (χ2 =1.15 ,df=2 ,P >0 .0 5 ) ,两组间的等位基因频率之间比较也无显著性差异 (χ2 =0 .78,df=1,P >0 .0 5 )。进行性别及有否家族史分组后分析 ,亦无差异存在 ,且CYP2D6 /C188T突变与利培酮临床效应之间并无相关性 (χ2 =1.12 ,df=2 ;χ2 =0 .0 3,df=1,P >0 .0 5 )。结论 未发现中国人CYP2D6 /C188T多态性与利培酮临床效应的个体差异有相关性。

细胞色素P4502D6酶基因多态性与抗精神病药临床效应

目前认为，细胞色素P4502D6酶（CYP2D6）基因多态性可能与精神分裂症的易感性无关。但CYP2D6酶参与绝大多数抗精神病药（尤其是利培酮、氟哌啶醇等）的代谢，进而影响药物疗效、副反应及药物之问的相互作用。因而研究CYP2D6基因多态性与其表型活性之间的关系，对于抗精神病药临床合理应用具有指导意义。

精神分裂症与细胞色素P4502D6基因多态性关联研究

目的:探测精神分裂症与细胞色素P4502D6基因多态性关系。方法:用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术分析92例精神分裂症患者的CYP2D6基因多态性,并以92例正常人作为对照。结果:在精神分裂症组和正常对照组中,等位基因C、T及基因型C/T,C/C,T/T的差异没有显著性(P>0.05)。结论:本组样本中CYP2D6基因多态性与精神分裂症不相关联。提示CYP2D6C188T突变可能不是导致精神分裂症发病的主要因素。

地塞米松注射液对大鼠细胞色素P4502D6的影响

目的观察地塞米松(激素类药物)注射液对大鼠细胞色素P4502D6(CYP2D6)亚型的影响。方法 SD大鼠,雌雄各半,随机分成2组,地塞米松组按50mg·kg-1尾静脉给药,对照组按10mL.kg-1尾静脉给生理盐水,给药7d后,每组给予氢溴酸右美沙芬注射液5mg·kg-1;按时间从大鼠眼静脉取血10次,血样处理后,用HPLC法同时测定大鼠血浆CYP2D6R探针药物右美沙芬及其代谢产物去甲右美沙芬浓度,用DAS2.0软件进行分析,求出其主要药代动力学参数。结果地塞米松组与对照组比较,对右美沙芬t1/2无显著性差异;而AUC0-t右美沙芬为(63.43±7.71)mg·mL-1.min,与对照组(41.07±4.63)mg.L-1.min比较有显著性差异(P<0.05)。结论地塞米松注射液对右美沙芬有一定诱导作用,可以促进合用药物的消除,从而加速其代谢。

ASA法测定细胞色素P4502D6酶缺陷等位基因CYP2D6E

目的 :建立细胞色素P4 50 2D6(CYP2D6)第 3 0 2 3位A→C突变造成CYP2D6酶活性缺陷的等位基因CYP2D6E的测定方法。方法 :利用等位基因特异扩增法 (ASA)为基本原理 ,设计两对引物分别扩增野生型等位基因和突变型等位基因。结果 :经 3 96例测定 ,发现 2例CYP2D6E与CYP2D6B的异突变型纯合子 ,其表现型均为慢代谢者。阳性对照说明本法重复性好 ,阴性对照显示本法无污染问题。结论 :本法比PCR -RFLP法更为快捷、更少污染。

肾功能不全患者细胞色素P4502D6酶的基因多态性分析

目的研究肾功能不全患者细胞色素P4502D6酶的CYP2D6*10等位基因的基因多态性。方法采用5引物单管聚合酶链反应扩增CYP2D6*10等位基因,对103例肾功能不全患者的细胞色素P4502D6酶基因型进行分析。结果 103例肾功能不全患者的CYP2D6*10等位基因频率为49.51%,其中33例(32.04%)为野生型(C/C),32例(31.07%)为突变型(T/T),其余38例(36.89%)为杂合子型(C/T),与健康汉族人群比较差异有显著意义(P<0.05)。C等位基因频率为50.5%,T等位基因频率为49.5%。结论 CYP2D6*10等位基因是影响肾功能不全的一个因素。

CYP2D6基因分型影响因素研究进展

细胞色素P450家族2亚科D成员6(CYP2D6)是细胞色素P450酶家族中的重要药物代谢酶,是抗抑郁药物、抗精神病药物和阿片类镇痛药物等主要的代谢酶。CYP2D6基因位点的复杂性和诸多等位基因突变体造成了CYP2D6表型的多态性,目前已报道170余种等位基因突变体。CYP2D6酶活性变化很大,从无活性到超快代谢均存在,根据酶活性可将不同表型携带者分为超快代谢者、正常代谢者、中间代谢者和弱代谢者。随着个体化医疗的发展,CYP2D6基因分型试验可以辅助药物遗传学和基因分型技术的研究和临床应用。然而,由于CYP2D6基因存在复杂的突变,包括单核苷酸突变、插入、缺失、基因拷贝数变异和基因重组。CYP2D6基因不仅存在个体化差异,且在不同种族之间等位基因的频率也明显不同。另外,人体内同时存在与CYP2D6同源性很高的非功能性基因CYP2D7,通过基因检测分析CYP2D6表型是一项非常具有挑战性的工作。文章总结了CYP2D6基因的多态性和基因分型的复杂性,并分析了部分不同的基因型突变对CYP2D6基因分型的影响,以帮助临床通过基因分型方法对CYP2D6酶活性进行预测。

金鸡菊苷与CYP3A4/CYP2D6的结合特性和稳定性

采用光谱分析和计算机模拟技术研究金鸡菊苷与CYP3A4/CYP2D6的结合特性和稳定性.结果表明:金鸡菊苷以静态猝灭为主、动态猝灭为辅的方式猝灭细胞色素P450同工酶(CYPs)的固有荧光;金鸡菊苷与CYP3A4的结合力大于与CYP2D6的结合力;金鸡菊苷与CYPs发生相互作用形成复合物;金鸡菊苷与CYPs结合,导致CYPs二级结构发生改变;金鸡菊苷主要通过氢键和范德华力与CYPs结合;金鸡菊苷与两种CYPs形成的复合物稳定.

人细胞色素P4502D64个单核苷酸突变株活性及其与药物相互作用的体外研究

目的探讨单核苷酸替换对人细胞色素P450CYP2D6酶活性及其与药物相互作用的影响。方法体外构建CYP2D6野生株(WT)和G169R、P34S、E410K、V7M等4个单核苷酸突变株的表达载体并在酿酒酵母中诱导表达,裂解并提取各酶的蛋白微粒体,用蛋白质印迹法验证其表达,再分别测定各酶代谢底物丁夫洛尔和3-[2-(N,N二乙基-N-甲铵)乙基]-7-甲氧基-4-甲基香豆素(AMMC)的米氏常数(Km)和最大酶促反应速度(Vmax)。以AMMC为底物对CYP2D6WT和V7M、G169R进行高通量药物抑制实验,所选药物包括已知的2D6抑制剂(奎尼丁、舍曲林)、底物(氯丙嗪、氟西汀、阿米替林)和既非抑制剂又非底物的化合物(酮康唑、曲格列酮),求得不同药物对不同酶的半数抑制浓度(IC50)。结果蛋白质印迹法检测显示各酶均表达良好。CYP2D6WT代谢丁呋洛尔和AMMC的Km值分别为19.22、2.06μmol·L-1,Vmax值分别为154.53、21.60pmol·min-1·mg-1,Vmax/Km值分别为8.04、11.49μl·min-1·mg-1。与CYP2D6WT比较,V7M代谢2种底物的Vmax值均要高得多(P<0.05),G169R和E410K均稍低,而P34S都要低很多(P<0.05);各突变株的Km值也发生了或多或少的改变。药物对CYP2D6WT和V7M和G169R的抑制程度排序均为奎尼丁>氯丙嗪>氟西汀>阿米替林>舍曲林>酮康唑/曲格列酮;药物对V7M和G169R的IC50值与CYP2D6WT的IC50值比值,奎尼丁分别为0.88和0.80,氯丙嗪0.54和0.80,氟西汀0.65和1.02,阿米替林0.85和0.71,舍曲林0.43和0.74。结论CYP2D6部分单核苷酸突变株的酶动力学特征与野生株有明显差异,单核苷酸替换可导致酶对药物抑制的敏感性发生变化。

红花注射液对大鼠细胞色素P450 2D6亚型的抑制作用

目的研究红花注射液对大鼠细胞色素P450 2D6亚型(CYP2D6)的影响。方法利用探针药物右美沙芬(DM),高效液相色谱法测定各实验组(对照组,红花注射液0.9、1.8、3.6 mL/kg组)大鼠体内尿液中与体外肝微粒体温孵系统中DM的代谢率,考察红花注射液对大鼠CYP2 D6活性的影响。结果体内实验和体外实验中,红花注射液1.8和3.6 mL/kg组DM的代谢率均明显低于对照组(P<0.05、0.01);抑制实验中,体外肝微粒体温孵系统中红花注射液组和西咪替丁组DM的代谢率明显低于空白组(P<0.05);含红花生药量为30 mg/mL时红花注射液组DM的代谢率与西咪替丁(0.6 mg/mL)时DM的代谢率相近,抑制能力相当;红花注射液的IC50为10.64 mg/mL。结论红花注射液对大鼠CYP2D6有显著的抑制作用。

中国健康人群与精神分裂症患者细胞色素P450 2C19/P450 2D6遗传多态性的比较

目的探讨中国健康人群与精神分裂症患者细胞色素P450 2C19(CYP2C19)/P450 2D6(CYP2D6)遗传多态性的相关性。方法应用PCR与DNA测序相结合的方法,对88名符合ICO-10诊断标准的精神分裂症患者和283名健康志愿者进行了CYP2C19基因多态性分析。同时用此方法对87名精神分裂症患者与93名健康志愿者进行了CYP2D6的基因多态性分析。根据CYP2C19*2(G681A)将精神分裂症患者和健康志愿者基因型分为3组(G/G,G/A,A/A);同样方法将CYP2C19*3(G636A)和CYP2D6(C100T)基因型各分为3组。结果在CYP2C19的检测中,健康志愿者中共检测到6个基因型,在精神分裂症患者中检测到7个基因型。2组间等位基因型差异没有统计学意义(CYP2C19*2χ2=4.954,P>0.05;CYP2C19*3χ2=2.334,P>0.05)。但发现精神分裂症患者突变型纯合子A/A的基因型频率明显高于健康志愿者。在CYP2D6(C100T)的基因型和等位基因型检测中,精神分裂症患者和健康志愿者组间的基因型和等位基因差异无统计学意义(χ2=0.202,P>0.05;χ2=0.066,P>0.05)。结论中国精神分裂症患者与健康人群在细胞色素氧化酶CYP2C19/CYP2D6遗传多态性上差异无统计学意义,CYP2C19*2的突变型纯合子可能是中国精神分裂症患者的一个易感因素。

细胞色素P450 2D6与吸烟所致肺癌易感性的关系研究

细胞色素P450 2D6(CYP2D6)是肝脏中重要的Ⅰ相代谢酶,参与烟草中特异性亚硝胺类如4-甲基亚硝胺-1,3-吡啶基-1-丁酮(NNK)及烟碱的代谢,可能涉及吸烟引起的肺癌变过程。对其生物学特性、结构功能和基因多态与肺癌易感性的关系等方面的研究,有助于深入理解CYP2D6基因多态性对个体肺癌易感性的重要影响,并从基因-环境交互作用的角度,更好地进行危险度评价。

细胞色素P450 2D6氧化酶研究的表型分析及探针药物

近年来细胞色素P450酶(CYP450)的多态性已成为研究热点,而作为研究手段的表型分析及探针药物直接关系到研究的价值和意义。现综述CYP450 2D6氧化酶多态性研究的表型分析的影响因素及优缺点,并介绍几种探针药物,包括右美沙芬、美托洛尔、普罗帕酮、可待因、异喹胍、司巴丁的特点及其检测方法。