稳定表达细胞色素P4502B6的Flp-In^(TM)CHO细胞系的建立及鉴定

目的构建稳定表达细胞色素P4502B6(CYP2B6)的Flp-In^(TM)CHO细胞系。方法将Flp-In^(TM)CHO细胞分为Flp-In^(TM)CHO组、Flp-In^(TM)CHO空载体组及Flp-In^(TM)CHO-CYP2B6组,通过Lipofectamine2000转染试剂,分别将pcDNA5/FRT空质粒和pcDNA5/FRT-CYP2B6重组质粒转染至Flp-In^(TM)CHO空载体组细胞和Flp-In^(TM)CHO-CYP2B6组细胞中,利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、蛋白免疫印迹(Western blot)及荧光素酶实验检测转染细胞中CYP2B6 mRNA水平、蛋白表达水平及活性,用四氮唑盐(MTS)测定转染CYP2B6的Flp-In^(TM)CHO细胞对环磷酰胺的毒性敏感性。结果与Flp-In^(TM)CHO组和Flp-In^(TM)CHO空载体组相比,Flp-In^(TM)CHO-CYP2B6组细胞中CYP2B6的mRNA和蛋白表达水平显著升高(P<0.01)、酶活性显著增加(P<0.001),对环磷酰胺的毒性敏感度显著增加(P<0.001)。结论成功构建稳定表达CYP2B6的Flp-In^(TM)CHO细胞系,为研究药物代谢和筛选毒性药物提供工具。

细胞色素P450 2D6氧化酶研究的表型分析及探针药物

近年来细胞色素P450酶(CYP450)的多态性已成为研究热点,而作为研究手段的表型分析及探针药物直接关系到研究的价值和意义。现综述CYP450 2D6氧化酶多态性研究的表型分析的影响因素及优缺点,并介绍几种探针药物,包括右美沙芬、美托洛尔、普罗帕酮、可待因、异喹胍、司巴丁的特点及其检测方法。

细胞色素氧化酶P4502C19基因多态检测联合血清肝素辅助因子Ⅱ对下肢动脉硬化闭塞症介入术后再狭窄的预测价值

目的探讨细胞色素氧化酶P4502C19(CYP2C19)基因多态检测联合血清肝素辅助因子Ⅱ(HCⅡ)对下肢动脉硬化闭塞症(ASO)介入术后再狭窄的预测价值。方法收集2017年1月至2021年5月于绵阳市第三人民医院行介入治疗的146例ASO患者的临床资料,根据随访期间再狭窄发生情况将其分为再狭窄组(n=27)和无再狭窄组(n=119)。收集患者性别、年龄、体重指数(BMI)、吸烟史、心脑血管病史、高同型半胱氨酸病史、病变血管支数、术前狭窄情况、支架植入情况、纤维蛋白原水平、总胆固醇水平、红细胞计数、CYP2C19基因多态性、HCⅡ活性,分析ASO介入术后再狭窄的影响因素。结果有吸烟史、支架植入、CYP2C19慢代谢型及HCⅡ活性均为ASO支架植入术后发生再狭窄的独立危险因素(P﹤0.05)。受试者工作特征(ROC)曲线结果显示,HCⅡ活性预测ASO支架植入术后再狭窄的截断值为95.80%,曲线下面积(AUC)为0.809(95%CI:0.719~0.900),灵敏度为74.80%,特异度为88.24%,Kappa=0.566。CYP2C19基因多态检测对ASO支架植入术后再狭窄的预测灵敏度为66.67%,特异度为89.07%,Kappa=0.537。联合检测对ASO支架植入术后再狭窄的预测灵敏度为96.30%,特异度为86.55%,Kappa=0.682。结论ASO介入术后再狭窄与吸烟史、支架植入情况、CYP2C19基因多态性及HCⅡ活性有关,CYP2C19基因多态性及HCⅡ活性检测均可用于预测ASO介入术后再狭窄,但联合检测可提高其诊断效能。

细胞色素P450氧化酶系中CYP2D6的相关研究和进展

CYP2D6在临床药物代谢中有重要作用，本文综述了CYP2D6的结构位置，药物代谢；探讨精神分裂症与CYP2D6的关系，CYP2D6的基因多态性和药物代谢。

应用大鼠肝微粒体筛选对细胞色素P4502D6有抑制作用的中药

目的从17种中药(单体、提取物和注射液)中快速筛选出对细胞色素P4502D6(CYP2D6)亚型有抑制作用的中药,建立高通量筛选对CYP2D6有抑制作用中药的技术平台。方法取大鼠空白肝微粒体,分别加入17种中药,HPLC法测定大鼠肝微粒体中CYP2D6的探针药物右美沙芬(DM)的代谢率,通过代谢率降低的现象初步筛选出能抑制肝微粒体中CYP2D6代谢的药物。结果槲皮素、黄芩苷、厚朴提取物、清开灵注射液、盐酸川芎嗪注射液可明显降低DM的代谢率(P<0.01)。结论初步筛选出槲皮素、黄芩苷、厚朴提取物、清开灵注射液、盐酸川芎嗪注射液这5种中药可抑制肝微粒体CYP2D6酶活性。此方法可作为高通量筛选对CYP2D6活性有抑制作用中药的技术平台。

细胞色素P4502D6酶基因多态性与利培酮代谢的相关性研究

目的研究利培酮(抗精神分裂症药)在人体代谢过程与CYP2D6*10基因多态性的关系。方法不同CYP2D6*1/*1(n=5)、*1/*10(n=12)及*10/*10(n=6)基因型的健康志愿者,单次口服利培酮2 mg后,用LC-MS/MS方法测定血浆中利培酮及其活性代谢产物9-羟基利培酮浓度,研究利培酮药代动力学与CYP2D6*10基因型的相关性。结果CYP2D6*10/*10和CYP2D6*1/*10基因型与CYP2D6*1/*1基因型的受试者相比,利培酮的AUC0-∞分别增加811%和212%,2者比较差异非常显著(P<0.001);利培酮/9-羟基利培酮的AUC比值在各CYP2D6*10基因型间存在显著性差异(P<0.001)。结论CYP2D6*10 C188T突变使CYP2D6对利培酮的代谢活性降低,体内利培酮暴露量增加。

细胞色素P4502D6与药物代谢

细胞色素Ｐ４５０２Ｄ６（ＣＹＰ２Ｄ６）是一种重要的Ｐ４５０系氧化代谢酶，除参与代谢一些内源性物质和某些环境中毒性化合物外，主要是参与多种重要药物的代谢，如作用于心血管和中枢神经系统的药物。ＣＹＰ２Ｄ６参与代谢的药物占总Ｐ４５０代谢药物的３０％，同时对手性药物的代谢还呈现立体选择性。研究还发现ＣＹＰ２Ｄ６对药物的代谢呈现明显的个体和种族差异，引起这种差异的主要原因是ＣＹＰ２Ｄ６具有的基因多态性，此外还有一些非基因因素，如药物的影响等。目前，ＣＹＰ２Ｄ６的生物学特征已被基本确定，这将十分有助于对ＣＹＰ２Ｄ６的深入研究，从而为临床合理用药提供科学依据。

中国人群细胞色素P4502D6基因多态性对曲马多药代动力学的影响

目的研究中国人群CYP2D6基因多态性对曲马多(镇痛药)药代动力学的影响。方法不同基因型中国健康志愿者随机分为4组:第1组CYP2D6*2W*10W,第2组:CYP2D6*2M*10W,第3组:CYP2D6*2M*10H,第4组:CYP2D6*2M*10M。各组单次口服曲马多100mg后,用高效液相色荧光检测法测定血和尿中曲马多及其M1代谢产物O-去甲基曲马多(M1)的浓度,研究不同基因型对曲马多药代动力学的影响。结果第2组曲马多及其M1的主要药代动力学参数与第1组相比没有显著性差异;第3组与第1组、第4组与第1组、第4组与第3组比较,主要药代动力学参数均有显著性差异(P<0.05),且呈基因剂量效应。结论CYP2D6*2对于曲马多的药代动力学过程没有影响;但CYP2D6*10可降低酶活性,且CYP2D6*10纯合子变异较杂合子变异对曲马多药代动力学的影响更大,呈基因剂量效应。

细胞色素P4502D6遗传多态性与帕罗西汀临床效应的相关性研究

目的：研究中国人细胞色素Ｐ４ ５０２Ｄ６（ＣＹＰ２Ｄ６）Ａ、Ｂ及Ｃｈ进行基因突变分析与帕罗西汀临床效应之间的关系。方法：采用ＰＣＲ－ＲＦＬＰ法对８５例抑郁症患者进行基因型分析，并分组用 ＨＡＭＤ和 ＴＥＳＳ评定患者治疗前，治疗 ４周和 ８周后的抑郁状态及药物不良反应，比较各基因型组患者采用帕罗西汀治疗的疗效和药物不良反应。结果：（１）ＣＹＰ２Ｄ６等位基因频率分别为：Ｗｔ（４９．５％），Ｃｈ（５０．０％），Ｂ（０．５％）。未检出Ａ等位基因。（２）不同基因型组患者治疗后ＨＡＭＤ评分显著降低；不同基因型患者之间治疗前 ＨＡＭＤ评分、治疗４周和 ８周后ＨＡＭＤ评分及减分率，以及ＴＥＳＳ评分之间的差异均无显著性意义；患者治疗前ＨＡＭＤ评分、治疗后ＨＡＭＤ评分及减分率、ＴＥＳＳ评分等均与年龄、性别、病程、ＣＹＰ２Ｄ６基因型、突变等位基因数目之间的相关性无显著性意义。结论：本研究未发现抑郁症患者ＣＹＰＺＤ６基因多态性与帕罗西汀临床效应之间存在相关性。

基于细胞色素氧化酶CYP2D6的何首乌肝细胞毒性及相关成分研究

目的探究何首乌及其主要成分对人肝细胞L02中细胞色素氧化酶CYP2D6 mRNA表达的影响以及抑制CYP2D6活性或表达对何首乌肝细胞毒性的影响及相关成分辨识。方法利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)确定何首乌水提物(Polygoni Multiflori Radix,PMR)及其主要成分对L02细胞CYP2D6 mRNA表达的影响;使用CYP2D6抑制剂奎尼丁初步探究PMR对CYP2D6低活性L02细胞系的细胞毒作用;构建CYP2D6沉默的L02细胞系L02-shCYP2D6,进一步研究L02细胞中CYP2D6表达降低对PMR及其主要成分肝细胞毒性的影响;可能的肝细胞毒性成分与人肝微粒体进行体外孵育,通过考察加入不同CYP450酶特异性抑制剂对其代谢消除率的影响,探究影响其代谢的主要CYP450酶。结果在实验浓度下,PMR和芦荟大黄素(AE)对CYP2D6 mRNA表达有显著抑制作用(P<0.01),大黄素(EM)无明显影响,2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷(TSG)仅在高浓度有一定激活作用,其余浓度无影响;PMR联合奎尼丁作用于L02细胞,发现PMR在高浓度下对L02细胞有一定毒性(P<0.01),各浓度抑制剂与之联用后均明显加重了其肝细胞毒性(P<0.01);PMR及其主要成分作用于CYP2D6敲低的L02细胞系,除TSG在高浓度下提升了肝细胞毒性外(P<0.01),PMR、EM、AE在实验浓度范围内肝细胞毒性均显著增加(P<0.01);人肝微粒体体外孵育实验显示,CYP2D6为EM、AE重要的代谢酶。结论PMR能够抑制肝细胞中CYP2D6的表达,而CYP2D6的低活性或低表达能够加重PMR肝细胞毒性,其中主要的毒性成分为EM和AE。

细胞色素P4502D6 C188T基因多态性与难治性抑郁症的关联

目的:探讨细胞色素P450(CYP)2D6 C188T基因多态性与难治性抑郁症及氟西汀合并小剂量利培酮治疗的疗效、不良反应的关联。方法:应用聚合酶链反应(PCR)扩增技术及限制性片段长度多态性(RFLP)测定92例难治性抑郁症患者及107名正常对照的CYP2D6 C188T基因多态性。其中59例患者接受氟西汀合并小剂量利培酮治疗6周,进一步分析不同疗效或不良反应患者的CYP2D6 C188T基因多态性。结果:难治性抑郁症患者与健康对照组CYP2D6C188T基因型及等位基因分布差异无统计学意义。36例有效患者的T等位基因频率(n=40,55.6%)高于23例无效患者的(n=14,30.4%),(χ2=7.14,P=0.01);33例有不良反应患者的T等位基因频率(n=46,69.7%)高于26例无不良反应患者的(n=26,50.0%),(χ2=4.74,P=0.03)。结论:CYP2D6 C188T基因多态性与难治性抑郁症无显著关联,但可能是影响利培酮对氟西汀增效作用以及两药联用的不良反应。

限制性片段长度多态性聚合酶链反应法检测人细胞色素氧化酶2D6药物代谢相关基因位点多态性

目的建立测定人细胞色素氧化酶2D6(CYP2D6)基因多态性的限制性片段长度多态性聚合酶链反应(polymerase chain reaction restriction fragment length polymorphism,PCR RFLP)检测方法。方法通过增加PCR扩增体系中DNA模板上样体积、降低引物浓度以及减少限制性内切酶的用量等方法改进、优化实验条件,建立以PCR RFLP法为基础的肝药酶CYP2D6基因型检测方法。结果采用PCR RFLP法能够检测CYP2D6?2、CYP2D6?10和CYP2D6?14基因型,且过程简便,经济实用。结论该方法检测CYP2D6药物代谢相关基因位点基因型具有简便、高效、准确和经济的特点,可在临床及实验室推广使用。

利培酮治疗与细胞色素P4502D6/C188T酶基因多态性的关联分析

目的 研究利培酮临床效应的个体差异与其代谢酶细胞色素P4 5 0 2D6 (cytochromeP4 5 02D6 ,CYP2D6 )酶基因多态性的相关性。方法 对 88例符合CCMD 3精神分裂症诊断标准的患者和 96例健康对照者作病例 -对照分析。精神分裂症患者给予利培酮治疗 8周 ,用阳性和阴性症状量表 (posi tiveandnegativesymptomscale ,PANSS)评分评价利培酮疗效。采用聚合酶链反应扩增及限制性片段长度多态性 (PCR RFLP)技术对CYP2D6exonⅠ的C188T位点突变进行检测 ,分析利培酮临床效应与其主要代谢酶CYP2D6 /C188T酶基因多态性的相关性。结果 中国上海地区人群的CYP2D6 /C188T突变率(弱代谢型 )为 36 .3% ,病例组和正常对照组间基因型频率总体分布比较无显著差异 (χ2 =1.15 ,df=2 ,P >0 .0 5 ) ,两组间的等位基因频率之间比较也无显著性差异 (χ2 =0 .78,df=1,P >0 .0 5 )。进行性别及有否家族史分组后分析 ,亦无差异存在 ,且CYP2D6 /C188T突变与利培酮临床效应之间并无相关性 (χ2 =1.12 ,df=2 ;χ2 =0 .0 3,df=1,P >0 .0 5 )。结论 未发现中国人CYP2D6 /C188T多态性与利培酮临床效应的个体差异有相关性。

细胞色素氧化酶P4502C19的研究进展

细胞色素氧化酶P4502C19(CYP2C19)又称S-美芬妥英羟化酶,其活性在人群分布中呈明显的遗传多态性。全文就近几年P4502C19的检测方法,基因多态性分子机制,基因多态性与药物和肿瘤易患性的关系等研究进展作一综述。

细胞色素P4502D6酶基因多态性与抗精神病药临床效应

目前认为，细胞色素P4502D6酶（CYP2D6）基因多态性可能与精神分裂症的易感性无关。但CYP2D6酶参与绝大多数抗精神病药（尤其是利培酮、氟哌啶醇等）的代谢，进而影响药物疗效、副反应及药物之问的相互作用。因而研究CYP2D6基因多态性与其表型活性之间的关系，对于抗精神病药临床合理应用具有指导意义。

精神分裂症与细胞色素P4502D6基因多态性关联研究

目的:探测精神分裂症与细胞色素P4502D6基因多态性关系。方法:用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术分析92例精神分裂症患者的CYP2D6基因多态性,并以92例正常人作为对照。结果:在精神分裂症组和正常对照组中,等位基因C、T及基因型C/T,C/C,T/T的差异没有显著性(P>0.05)。结论:本组样本中CYP2D6基因多态性与精神分裂症不相关联。提示CYP2D6C188T突变可能不是导致精神分裂症发病的主要因素。

地塞米松注射液对大鼠细胞色素P4502D6的影响

目的观察地塞米松(激素类药物)注射液对大鼠细胞色素P4502D6(CYP2D6)亚型的影响。方法 SD大鼠,雌雄各半,随机分成2组,地塞米松组按50mg·kg-1尾静脉给药,对照组按10mL.kg-1尾静脉给生理盐水,给药7d后,每组给予氢溴酸右美沙芬注射液5mg·kg-1;按时间从大鼠眼静脉取血10次,血样处理后,用HPLC法同时测定大鼠血浆CYP2D6R探针药物右美沙芬及其代谢产物去甲右美沙芬浓度,用DAS2.0软件进行分析,求出其主要药代动力学参数。结果地塞米松组与对照组比较,对右美沙芬t1/2无显著性差异;而AUC0-t右美沙芬为(63.43±7.71)mg·mL-1.min,与对照组(41.07±4.63)mg.L-1.min比较有显著性差异(P<0.05)。结论地塞米松注射液对右美沙芬有一定诱导作用,可以促进合用药物的消除,从而加速其代谢。

ASA法测定细胞色素P4502D6酶缺陷等位基因CYP2D6E

目的 :建立细胞色素P4 50 2D6(CYP2D6)第 3 0 2 3位A→C突变造成CYP2D6酶活性缺陷的等位基因CYP2D6E的测定方法。方法 :利用等位基因特异扩增法 (ASA)为基本原理 ,设计两对引物分别扩增野生型等位基因和突变型等位基因。结果 :经 3 96例测定 ,发现 2例CYP2D6E与CYP2D6B的异突变型纯合子 ,其表现型均为慢代谢者。阳性对照说明本法重复性好 ,阴性对照显示本法无污染问题。结论 :本法比PCR -RFLP法更为快捷、更少污染。

肾功能不全患者细胞色素P4502D6酶的基因多态性分析

目的研究肾功能不全患者细胞色素P4502D6酶的CYP2D6*10等位基因的基因多态性。方法采用5引物单管聚合酶链反应扩增CYP2D6*10等位基因,对103例肾功能不全患者的细胞色素P4502D6酶基因型进行分析。结果 103例肾功能不全患者的CYP2D6*10等位基因频率为49.51%,其中33例(32.04%)为野生型(C/C),32例(31.07%)为突变型(T/T),其余38例(36.89%)为杂合子型(C/T),与健康汉族人群比较差异有显著意义(P<0.05)。C等位基因频率为50.5%,T等位基因频率为49.5%。结论 CYP2D6*10等位基因是影响肾功能不全的一个因素。