人类白细胞抗原-DQA1、细胞色素P4503A5*3基因多态性与特发性膜性肾病遗传易感性关联性研究

目的:探讨分析人类白细胞抗原(HLA)-DQA1、细胞色素P450(CYP)3A5*3基因多态性与特发性膜性肾病(IMN)遗传易感性的关联性。方法:将IMN患者62例作为研究组,另将健康者62例作为对照组。采用聚合酶链反应(PCR)技术和基因测序技术检测入组患者的HLA-DQA1(rs2187668)、CYP3A5*3(rs776746)基因型,判断各基因型与IMN患者的关系。结果:研究组中HLA-DQA1 rs2187668基因型AA占比高于对照组(P<0.05),基因型GG、AG占比低于对照组(均P<0.05);研究组等位基因A占比高于对照组(P<0.05)。研究组与对照组CYP3A5*3 rs776746不同基因型占比及等位基因占比比较无统计学差异(均P>0.05)。HLA-DQA1 rs2187668AA基因型IMN患者24 h尿蛋白量和血肌酐水平显著高于AG和GG型,肾小球滤过率显著低于AG和GG型(均P<0.05)。结论:HLA-DQA1 rs2187668位点的基因多态性与IMN的发生有关,AA基因型和等位基因A可增加IMN易感性。

非洛地平降压疗效与细胞色素P4503A4*1G基因的关系

目的探索轻中度原发性高血压患者细胞色素P4503A4*1G基因(CYP3A4*1G)不同表型对非洛地平疗效的影响。方法对2014年1月至2020年1月就诊的原发性高血压患者462例应用聚合酶链反应限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)进行CYP3A4*1G基因多态性检测,根据结果分为AA组(n=211)、GA组(n=171)、GG组(n=270),给予患者口服非洛地平治疗。在用药1个和6个月进行血压监测。对比各组患者血压水平,采用二元有序logistic回归分析CYP3A4*1G基因型、体质量指数(BMI)、高盐膳食、高脂血症及性别对非洛地平降压效果的影响。结果共有462例患者完成试验,不同基因型患者在药物治疗前的一般情况差异无统计学意义(P>0.05)。服药前AA、GA及GG基因型患者收缩压及舒张压差异无统计学意义(P>0.05),服药1个月后,AA型与GG型患者收缩压及舒张压差异有统计学意义(P<0.05);服药6个月后,AA、GA及GG型患者之间收缩压及舒张压差异有统计学意义(P<0.05)。二元有序logistic回归分析结果提示,患者CYP3A4*1G基因型与BMI独立影响非洛地平的降压疗效(均P<0.05)。结论CYP3A4*1G基因多态性与非洛地平降压疗效密切相关,结合基因多态性指导用药值得参考。

抵抗素基因启动子-420C/G、细胞色素P4501A1-MspI多态性与吸烟的交互作用对非酒精性脂肪性肝病的影响

目的:探讨抵抗素基因启动子-420C/G、细胞色素P4501A1-Msp I(CYP1A1-Msp I)基因多态性与吸烟的交互作用与非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的关系。方法:采用病例-对照研究的方法,以1 200例NAFLD患者及1 200例健康对照者的外周血白细胞为样本,利用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)技术分析了抵抗素基因启动子-420C/G和CYP1A1-Msp I基因多态性。结果:-420C/G(GG)基因型和CYP1A1-Msp I(m2/m2)基因型频率分布分别为49.75%、50.08%(病例组)和24.00%、24.25%(对照组),两者经χ2检验差异显著(P<0.01)。-420C/G(GG)基因型者患NAFLD的风险显著增加。CYP1A1-Msp I(m2/m2)基因型者患NAFLD的风险也显著增加。基因突变的协同分析发现-420C/G(GG)/CYP1A1-Msp I(m2/m2)基因型者在NAFLD组和对照组中的分布频率分别为39.83%和12.83%,两者经χ2检验有显著差异(P<0.01)。-420C/G(GG)/CYP1A1-Msp I(m2/m2)基因型者患NAFLD的风险显著增加。病例组的吸烟率显著高于对照组的吸烟率(P<0.01),吸烟与-420C/G(GG)和CYP1A1-Msp I(m2/m2)基因型均有交互作用。结论:-420C/G(GG)、CYP1A1-Msp I(m2/m2)基因型和吸烟是NAFLD的易患因素,基因多态性与吸烟的交互作用增加了NAFLD的发病风险。

细胞色素P450 3A4基因C239S突变体稳定表达Flp-In^(TM)CHO细胞系的建立

目的构建稳定表达细胞色素P450家族3亚家族A成员4(CYP3A4)的C239S突变体(CYP3A4-C239S)的Flp-In^(TM)CHO细胞系。方法使用Lipofectamine2000转染试剂将pcDNA5/FRT-CYP3A4-C239S突变型重组质粒和pcDNA5/FRT-空质粒转染至Flp-In TM CHO细胞,潮霉素B(500 g/L)进行稳定筛选,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、蛋白质免疫印迹(Western blot)检测细胞中CYP3A4-C239S的mRNA和蛋白表达,采用黄曲霉素B1(AFB1)细胞毒性实验检测细胞活性。结果与Flp-In^(TM)CHO-空质粒组相比,Flp-In^(TM)CHO-3A4-C239S组的CYP3A4-C239S mRNA和蛋白表达水平均显著增加(P<0.001),AFB1细胞毒性实验显示,CYP3A4-C239S细胞组对AFB1的毒性敏感度显著增加(P<0.001)。结论成功构建了稳定表达CYP3A4-C239S的Flp-In^(TM)CHO细胞系,且为后续研究CYP3A4突变对药物代谢的影响支撑基础。

P15^(INK4B)高表达对人黑色素瘤细胞G1/S进程的阻滞及与MAPK信号相关性之初探

利用TdR-N_2O同步法分别获得P15高表达的MLIK6和表达空载体的MLC2的M期细胞和G_1期细胞,~3H-TdR掺入结果显示,与对照组细胞MLC2相比,实验组细胞MLIK6从G_1期进入S期时间延长2h,并且掺入强度明显减弱,DNA合成被抑制。进一步观察了P15^(INK4B)对G_1/S相关调控蛋白的影响,在M期细胞释放8h(晚G_1期细胞)后,与对照组MLC2细胞相比,实验组MLIK6细胞中CyclinD1,CyclinE,Cdk4,C-Myc蛋白水平均降低。相反,P27^(KIP1)的表达却上升。同时探讨了MAPK信号在P15^(INK4B)阻抑A375细胞G_1/S转换中的作用与相关性,结果显示晚G_1期的MLIK6细胞中ERK1,ERK2水平变化不大,而具有活性的P-ERK1和P-ERK2均表现出下降。上述实验表明,P15^(INK4B)可能通过作用于G_1期相关的周期调节蛋白和抑制ERK1和ERK2活性,阻滞G_1/S转换与抑制DNA合成。

细胞色素氧化酶P4504B1基因突变与膀胱癌遗传易感性的关系

目的:探讨细胞色素氧化酶P450(CYP)4B1基因突变与膀胱癌遗传易感性的关系。方法:应用PCR-单链构象多态性(PCR-SSCP)分析和直接测序分析,分别检测152例膀胱癌患者和150例非肿瘤同期住院患者CYP4B1的各个常见突变基因位点,分析基因突变对膀胱癌发病的影响。结果:膀胱癌组CYP4B1 C517T、AT881-882del+G993A+C1018T和C1123T突变基因型频率高于对照组(χ2=8.266、16.218和15.347,P<0.05);不同病理分级及临床分期膀胱癌患者间CYP4B1各突变基因型频率差异无统计学意义(P>0.05)。结论:携带CYP4B1C517T、AT881-882del+G993A+C1018T和C1123T突变基因型者更易患膀胱肿瘤。

pazopanib血药浓度个体差异与细胞色素P4503A4基因多态性的关系初探

目的:分析健康受试者口服pazopanib片后体内药代动力学(PK)规律,初步探讨pazopanib片PK个体差异的遗传学机制。方法:14例健康男性受试者分别在给药当天单次口服pazopanib片(200 mg)后,采集基线至96 h血液样本,用LC-MS/MS法测定服药后各时间点血药浓度,用WinNonlin 6.3软件计算药代动力学相关参数,采用SNapShot法测定细胞色素P4503A4(CYP3A4)基因多态性。结果:Cmax变化范围(7361.65-26081.00)ng/mL,平均值±标准差(15410.72±6366.21)ng/mL;tmax变化范围(1.50-4.00)h、平均值±标准差(2.50±0.83)h;AUC0-t变化范围(228013.55-775231.63)ng·mL-1·h,平均值±标准差(516279.90±175688.41)ng·mL-1·h。个体间Cmax、AUC相差达3倍以上,tmax可相差2倍以上;14例受试者CYP3A4(RS35599367)位点皆为野生型。结论:pazopanib片在中国健康男性志愿者中个体差异较大,未观察到CYP3A4(rs35599367)位点单核苷酸多态性,pazopanib个体间PK差异可能与其他药物代谢相关基因多态性有关。

人黑色素瘤细胞系MTS1/p16CDDK4基因的突变

为了探讨p16基因在人肿瘤细胞系中的突变,采用PCR-SSCP分析和基因序列测定技术,对人黑色素瘤细胞系(Bowes)中p16基因的突变进行检测。结果显示,Bowes细胞的p16基因第二外显子扩增产物在聚丙烯酰胺凝胶中电泳异常,表明其基因序列存在点突变。核酸序列测定证实第341号核苷酸发生T→C的颠换。应用DNA重组技术构建的突变型p16基因重组质粒可作为基因探针用于检测p16基因的缺失。

细胞色素P450 3A4基因多态性及与肝癌易感性研究

目的 探讨细胞色素P450 3A4.(CYP3A4)基因的多态性与肝癌的关系。方法应用聚合酶链反应(PCR)、变性梯度凝胶电泳(DGGE)、单链构象多态(SSCP)和DNA测序技术,对84例肝癌患者和144例健康对照的CYP3A4基因的多态性进行了研究。结果通过对CYP3A4基因10个外显子的检测,发现2例肝癌患者的第7外显子第15742位核苷酸发生了A—G转换,使得第183位氨基酸残基由天冬酰胺转变为丝氨酸;发现第10内含子存在一单核苷酸多态,表现第20338位核苷酸发生了G→A转换。病例组G/G、G/A和A/A基因型频率分别为59.52％,36.90％和3.58％;对照组则为59.72％,33.33％和6.95％。两组比较没有统计学差异。结论CYP3A4基因可能高度保守,虽有突变,但属罕见。

转染重组质粒pBudCE4.1-CYP3A4-GSTA1的肝细胞系的建立及功能评价

目的:获得一株适合用于生物人工肝支持系统的细胞材料.方法:用已构建好的重组质粒pBudCE4.1-CYP3A4-GSTA1转染肝脏肿瘤细胞系C3A,用Zeocin筛选,所得细胞系命名为C3A-未优势化;通过qRT-PCR方法检测目的基因表达情况;对转染重组质粒的肝脏肿瘤细胞系C3A的合成、代谢、解毒等功能及性状进行综合评价.结果:成功构建了转染重组质粒pBudCE4.1-CYP3A4-GSTA1的细胞系;构建好的C3A-未优势化细胞系通过qRT-PCR方法检测其目的基因CYP3A4和GSTA1的表达量较正常C3A细胞系高;通过色谱法证明CYP3A4活性较正常C3A细胞系高;用免疫组织化学实验证实目的基因GSTA1的表达较正常C3A细胞系多;另外,对利多卡因的代谢能力亦高于正常C3A细胞.结论:构建的C3A-未优势化细胞系功能有所改善,有望成为生物人工肝系统的细胞材料.

CYP3A4* 1G基因多态性及功能的初步探讨

目的:采用双荧光素酶报告基因系统分析CYP3A4*1G多态性对CYP3A4基因转录活性的影响。方法:构建含CYP3A4*1G突变位点的荧光素酶基因表达载体,用Lipofectamine 2000转染HepG2细胞,化学发光法检测荧光素酶活性。结果:应用双荧光素酶报告基因系统检测显示,pGL3-promoter-A质粒转染后荧光素酶活性显著高于pGL3-promoter-G(P=0.022<0.05)。结论:CYP3A4*1G能够增强荧光素酶基因的表达,可能增强CYP3A4基因的转录活性。

青杨脊虎天牛CYP4G2基因片段的克隆、序列分析与表达

根据报道的十几种昆虫CYP4家族基因的氨基酸序列保守区域设计一对引物,利用RT-PCR技术扩增编码青杨脊虎天牛Xylotechus rusticus中肠细胞色素氧化酶CYP4G2蛋白的cDNA片段,构建原核表达载体pET-CYP4G2,将其转化入大肠杆菌Escherichia coli JM109中表达。序列分析结果表明,该基因（CYP4G2,GenBank登录号为EF429250）保守区域阅读框全长387bp,编码129个氨基酸残基,预测分子量和等电点分别为16.9kD和5.75;推导的氨基酸序列与已报道的昆虫CYP4家族氨基酸序列一致性较高（63%～86%）,且具有细胞色素氧化酶的典型特征。IPTG诱导后,SDS-PAGE电泳检测到一条22kD大小的外源蛋白,与预测融合蛋白的分子量大小相应。CO差光谱分析证明重组菌表达了有活性的pET-CYP4G2。

CYP4A11基因多态性与脑梗死的相关性研究

目的 评估CYP4A11基因多态性及其与脑梗死发病及梗死后血管事件的相关性。方法 采用基质辅助激光解吸附电离/飞行时间质谱法（MDLDI-TOF-MS）对396例脑梗死患者及378例对照者的CPYP4 A11rs2269231、CPYP4A11rs9333025、CYP4F2rs3093135及CYP4F2rs2108622 SNPs进行检测。并对所有的脑梗死患者随访12月。结果 脑梗死组CPYP4 A11rs9333025 GG基因型频率发布明显高于对照组（P〈0.001）。CPYP4 A11rs9333025 GG与脑梗死的发病密切相关（OR=1.82,95%CI：1.24~5.04,P=0.016）。rs9333025 GG基因型患者在随访期内脑梗死复发率及其他血管事件发生率明显高于rs9333025 AG基因型患者（P=0.04）。rs9333025 GG为脑梗死后血管事件发生的独立危险因素（RR=1.87,95%CI：1.16~5.36,P=0.003）。结论 rs9333025 GG基因型增加了脑梗死的易感性和脑梗死后血管事件发生的风险。

CYP3A4、PXR和IL-10基因多态性对43名中国健康受试者空腹及餐后口服氨氯地平药代动力学特征的影响

目的考察细胞色素P4503A4(CYP3A4)、孕烷X受体(PXR)和白介素-10(IL-10)的基因多态性对氨氯地平在43名中国健康受试者体内药代动力学过程的影响。方法本临床研究完成于2015年,并获得了医学伦理委员会的批准,招募43名男性受试者,对其CYP3A4(17776 A insertion、15820C>G、13989A>G)、PXR(24381A>C、3′UTR11193T>C、3′UTR10719G>A)、IL-10(1082G>A、819C>T、592C>A)9个突变点予以限制性片段长度多态性聚合酶链反应(PCR-RELP)方法进行基因分析,受试者口服10 mg氨氯地平后体内氨氯地平的血药浓度通过已建立并进行方法学确证的液相二级质谱(LC-MS/MS)方法测定获得。结果3个CYP3A4基因型、3个PXR基因型和3个IL-10基因型对氨氯地平在体内的药动学参数无明显影响(P>0.05)。餐后组氨氯地平的峰浓度(c_(max))、药时曲线下面积(AUC_(0-t))和AUC_(0-∞)高于空腹组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论CYP3A4、PXR和IL-10基因多态性对氨氯地平在43名中国健康受试者体内药代动力学过程无明显影响,而高脂高热量饮食会明显促进氨氯地平在人体的吸收。

CYP3A4,CYP3A5,MDR1基因多态性与他克莫司个体间差异相关性的研究进展

他克莫司是一种新型强效免疫抑制性大环内酯类抗生素,主要通过细胞色素P450(如CYP3A4和CYP3A5等)代谢,由P-糖蛋白进行转运。越来越多的研究发现CYP3A4,CYP3A5酶及P-糖蛋白的某些基因多态性可以影响他克莫司的药代和药效。现就CYP3A4,CYP3A5及P-糖蛋白的基因变异与他克莫司个体间差异相关性研究进行综述。

中国大陆汉族人群CYP3 A4基因变异分析

目的:研究中国大陆汉族人群中细胞色素P4503A4(CYP3A4)的基因变异及其分布。方法:140例血样本来自中国大陆25个省份的汉族人口,用聚合式酶链反应-非放射性单链构象多态性(PCR-SS-CP)-直接测序方法检测CYP3A4基因的变异。结果:中国大陆汉族人群存在CYP3A4基因内含子2T4127G变异。140例人群中有31人存在此变异,变异频率为22.1%。中国大陆汉族人群未发现CYP3A4基因13个外显子的变异。结论:中国大陆汉族人群CYP3A4基因存在内含子2的多态性分布,其基因变异不同于其他种族。

CYP3A和MDR1基因多态性对环孢素A药代动力学的影响

环孢素A(Cs A)属环状多肽化合物,作为基础免疫抑制剂广泛用于实体器官移植后的抗排斥反应,其主要经P-糖蛋白(P-gp)转运,细胞色素P450(CYP)3A酶代谢,CYP3A及多药耐药基因1(MDR1)的多态性可能影响CYP3A酶和P-gp的表达水平和生物活性,进而可能对Cs A的药代动力学过程产生影响。本文就CYP3A和MDR1基因多态性对Cs A药代动力学的影响进行综述,以期指导临床制定合理的个体化用药方案。

CYP3A4基因多态性对羟考酮抑制腰椎手术后疼痛的影响

目的:观察细胞色素P4503A4酶(CYP3A4)基因多态性对羟考酮抑制腰椎手术后疼痛的影响。方法:静吸复合全身麻醉下行腰椎手术患者150例,ASAⅠ或Ⅱ级,按照术前CYP3A4基因型检测结果分成3组:野生型纯合子(CYP3A4*1/*1,n=80)标记为AA组,突变杂合子(CYP3A4*1/*1G,n=60)标记为GA组,突变纯合子(CYP3A4*1G/*1G,n=10)标记为GG组。所有患者均于手术完成前30 min静脉推注羟考酮5 mg,同时予以静脉泵镇痛。于术后10 min(T_(0))、6 h(T_(1))、12 h(T_(2))和24 h(T_(3))进行疼痛强度数字评估量表(NRS)评分,同时抽取静脉血2 ml测定血浆皮质醇(Cor),记录术后24 h羟考酮的使用剂量、患者自控静脉镇痛(PCIA)按压次数、无效按压次数和不良反应(恶心、呕吐和呼吸抑制)的发生情况,同时计算术后24 h内时间加权平均动脉压(TWA-MAP)和时间加权平均心率(TWA-HR)。结果:(1)与AA组比较,GA和GG组患者在各时间点的疼痛强度NRS评分降低,在T_(1)、T_(2)、T_(3)时间点血浆Cor水平也降低(P<0.05)。(2)与AA组比较,GA和GG组PCIA按压次数和无效按压次数减少(P<0.05),羟考酮的总使用量也减少(P<0.05),恶心呕吐的发生率也明显降低(P<0.05);但3组间呼吸抑制的发生率差异无统计学意义(P>0.05)。(3)与AA组比较,GA和GG组TWA-MAP和TWA-HR明显降低(P<0.05)。结论:CYP3A4基因多态性是影响羟考酮镇痛效果的遗传因素。

子宫内膜异位症与细胞色素P4501A1基因A4889G突变的相关性

目的 探讨细胞色素 P4 5 0 1A1(cytochrome P4 5 0 1A1,CYP1A1)基因 A4 889G突变与子宫内膜异位症 (endometriosis,EM)的遗传易感性的关系。方法 采用等位基因特异性聚合酶链反应的方法 ,研究了 76例 EM患者和 80名正常对照 CYP1A1基因 A4 889G位点碱基突变。两组均为广东籍汉族妇女。结果 CYP1A1基因 A4 889G位点等位基因 A、G在 EM组和对照组分布的差异有显著性 (χ2 =7.4 98,P<0 .0 1) ,其中等位基因 G使患 EM的相对危险度提高了 1.95 7倍。CYP1A1基因 A4 889G位点各基因型分布在两组间差异有显著性 (χ2 =6 .915 ,P<0 .0 5 ) ,GG基因型与 AA基因型相比患 EM的危险度高3.4 37倍 (χ2 =5 .4 30 ,P<0 .0 5 )。结论 CYP1A1基因 A4 889G突变等位基因与 EM有一定的关联 ,突变基因型增加了 EM的发病风险。

细胞色素P450 3A4~* 1G与腺苷三磷酸结合转运蛋白G超家族成员2基因多态性对羟氯喹血药浓度的影响

目的探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者体内细胞色素P450(CYP)450 3A4与腺苷三磷酸结合转运蛋白G超家族成员2(ABCG2)基因多态性对羟氯喹(HCQ)血药浓度的影响。方法收集46例系统性红斑狼疮患者羟氯喹全血药物浓度测定数据,通过Sanger法测定患者的CYP3A4~*1G(rs2242480)与ABCG2(rs2231142)基因型,分析每个基因的多态性对羟氯喹血药浓度的影响。结果患者CYP3A4~*1G各基因型组中,野生纯合子(~*1/~*1)组、突变杂合子(~*1/~*1G)组、突变纯合子(~*1G/~*1G)组的羟氯喹血药浓度分别为(807.2±455.9),(705.4±331.9)和(229.5±89.8)ng·mL^(-1),依次降低。GG组和GA组较AA组的羟氯喹血药浓度差异均有统计学意义(均P<0.05)。ABCG2基因的野生纯合子(GG)组、突变杂合子(GT)组和突变纯合子(TT)组的羟氯喹血药浓度分别为(732.2±424.4),(764.5±371.9)和(271.0±148.5)ng·mL^(-1),各基因型组之间的羟氯喹血药浓度差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论 CYP3A4~*1G等位基因突变可使羟氯喹血药浓度降低,而ABCG2等位基因突变对羟氯喹的血药浓度无明显影响。