细胞色素P450CYP2C9基因多态性对甲苯磺丁脲代谢动力学的影响

目的研究细胞色素P450CYP2C9基因多态性对甲苯磺丁脲代谢动力学的影响。方法用基因芯片对137名健康志愿者进行CYP2C9基因多态性检测,将受试者分为CYP2C9野生型、杂合突变型和纯合突变型3组,用高效液相色谱法检测甲苯磺丁脲在受试者体内的药物代谢动力学参数,统计分析各组间药代动力学性质差异。结果在137名受试者中发现了9个CYP2C91/3杂合型突变体和1个CYP2C93/3纯合型突变体,其余为野生型个体。将9名CYP2C91/3,1名CYP2C93/3以及随机抽取的10名野生型个体分组,以甲苯磺丁脲为探药进行药物代谢动力学研究。结果在杂合型突变个体组以及纯合型突变个体组中,甲苯磺丁脲的代谢率显著低于对照的野生型个体组。结论CYP2C9基因多态性对甲苯磺丁脲代谢具有显著影响并呈基因剂量效应,检测突变型个体对指导临床合理用药和个体化医疗具有重要意义。

黄酮类化合物对细胞色素P450 CYP1A2的抑制作用及其构效关系研究

利用本实验室已建立的体外肝微粒体模型,测定36个黄酮类单体化合物对人细胞色素P450 CYP1A2的抑制活性,并使用三维定量构效关系方法研究化合物的分子结构参数与其抑制活性之间的关系。CoMSIA模型证实黄酮类化合物的结构参数与其CYP1A2抑制活性存在明显的相关性(模型的相关系数R2为0.948),且有良好的预测能力(交叉验证相关系数q2为0.630),同时使用"留五法"证实模型的稳定性和可靠性。结果表明,相对于黄酮,α-萘黄酮的π-π共轭体系更有利于提高化合物的抑制活性。根据获得的模型的三维等势图,在α-萘黄酮基础上,6、3′、4′位引入带正电基团或是疏水基团,同时5位引入带负电基团,能有效改善化合物的CYP1A2抑制活性。

酒精性肝损伤大鼠细胞色素P450 CYP2E1和细胞色素P450 CYP3A的代谢活性

目的观察酒精性肝损伤对大鼠细胞色素P450CYP3A(CYP3A)和细胞色素P450CYP2E1(CYP2E1)代谢活性的影响。方法采用ig给予白酒制备大鼠酒精性肝损伤模型,检测血清中谷丙转氨酶(GPT)和谷草转氨酶(GOT)活性,采用HE染色法光镜下观测酒精对肝脏损伤程度。大鼠ip给予CYP3A探针药物咪达唑仑10mg·kg-1或ig给予CYP2E1探针药物氯唑沙宗50mg·kg-1后,采用高效液相色谱法测定不同时间点大鼠血浆中咪达唑仑和氯唑沙宗的血药浓度,并应用3P87软件计算其药代动力学参数,以考察CYP2E1和CYP3A的代谢活性的变化。大鼠ig给予氯唑沙宗80mg·kg-1后,热板方法测定大鼠添足次数和添足反射潜伏期。结果酒精性肝损伤可致大鼠肝小叶结构不清,肝索排列紊乱,肝细胞体积增大,呈弥漫性中度水变性,肝窦受压,大部分肝细胞胞浆内见大小不等的脂肪空泡;与正常对照组相比,酒精性肝损伤组大鼠GPT和GOT活性分别增加了16.0%和20.0%(P<0.05,P<0.01)。酒精性肝损伤致大鼠CYP2E1对探针药物氯唑沙宗的代谢活性增强,AUC,t1/2和cmax分别降低了38.0%,30.5%和35.0%(P<0.05);酒精肝损伤组大鼠氯唑沙宗镇痛效果明显降低;酒精性肝损伤致大鼠CYP3A对探针药物咪达唑仑的代谢活性增强,AUC,t1/2和cmax分别降低了122.6%,54.9%和56.9%(P<0.01,P<0.05)。结论酒精性肝损伤可使大鼠CYP2E1和CYP3A代谢活性增强。

细胞色素P450 CYP2C9＊3对格列本脲和氯诺昔康中国人体药代动力学的影响

目的研究人体内细胞色素P4502C9酶突变等位基因CYP2C93对格列本脲和氯诺昔康药代动力学的影响。方法采用PCRRFLP方法对83名无血源关系的受试者进行CYP2C93等位基因的筛查,基因型为CYP2C91/3(n=7)和1/1(n=11)的受试者分别参加了格列本脲和氯诺昔康的人体药代动力学试验。采用LC/MS/MS法分别测定受试者口服格列本脲(2.5mg)和氯诺昔康(8mg)后不同时刻血浆中格列本脲和氯诺昔康的浓度。结果两组受试者口服格列本脲后,CYP2C91/3组AUC0∞显著增加,为CYP2C91/1组的1.5倍,CL/F降低了40%;两组受试者口服氯诺昔康后,CYP2C91/3组AUC0∞亦显著增加,为CYP2C91/1组的2.2倍,CL/F降低了55%。结论CYP2C9酶的突变等位基因CYP2C93对格列本脲和氯诺昔康的药代动力学有显著性影响。

淡色库蚊细胞色素P450 CYP4E2r6基因的克隆、表达及鉴定

目的克隆并表达鉴定淡色库蚊细胞色素P450(CYP4E2r6)基因。方法根据昆虫细胞色素P450氨基酸保守序列设计一对简并引物,采用RT-PCR,从淡色库蚊四龄幼虫mRNA中扩增出目的基因片段。产物经T-A克隆、测序、比对,在抗性品系高表达的CYP4E2r6亚克隆入原核表达载体pGEX-6P1,在大肠杆菌BL21中进行原核表达,将细菌总蛋白进行SDS-PAGE及Westernblot鉴定。结果14个阳性克隆中9个为CYP4新序列,由GenBank登录上网(GenBank/NCBICB074944-51、CB270837,2003年);经鉴定属CYP4家族CYP4H、CYP4E、CYP4J亚家族;CYP4E2r6基因已成功表达。结论获得的CYP4E2r6融合表达蛋白为进一步研究CYP4基因与抗药性之间的关系奠定基础。

细胞色素P450 CYP2E1酶构型特征及其表达调控机制的研究进展

细胞色素P450CYP2E1酶参与代谢活化及失活多种前毒物、前致癌物和少数药物。在细胞色素P450超家族中,CYP2E1具有易介导自由基生成引发氧化应激反应的特征。CYP2E1表达水平可能是机体对环境和工业毒物或致癌物敏感程度的重要因素。研究表明,CYP2E1可被多种内、外源性物质所调控,并且CYP2E1的药理和毒理学功能与其以蛋白构型为基础的代谢行为密切相关。本文综述了CYP2E1基因多态性、酶构型特征与其代谢活性间的关系,并分析了其区别于其他细胞色素P450亚型的表达调控机制。

细胞色素P450 2J2在细胞模型中具有抗动脉粥样硬化作用

目的通过在离体培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)以及人外周单核细胞来源的泡沫细胞模型上过表达细胞色素P450 2J2(CYP2J2),探讨CYP2J2对动脉粥样硬化的影响。方法构建p LVX-IRES-Zs Green1-CYP2J2慢病毒载体,感染HUVEC及人外周单核细胞来源的泡沫细胞,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot分别检测CYP2J2在细胞内的表达情况。离体培养HUVEC分为空白对照组、空载体组(p LV组)和CYP2J2基因过表达组(p LV-CYP2J2组),通过MTS法分别于转染后的12、24、48、72 h测定细胞的增殖情况,通过Transwell实验检测48 h后的细胞迁移能力。另外,采用密度梯度离心法从冠心病患者外周血中分离出单核细胞,以50 nmol/L佛波酯刺激48 h使之转化为巨噬细胞,然后加入终浓度为80 mg/L的氧化型低密度脂蛋白使之转化为泡沫细胞;细胞亦分为空白对照组、p LV组和p LV-CYP2J2组,培养48 h后收集细胞,然后通过油红O染色观察细胞内脂滴变化,通过总胆固醇测定试剂盒检测细胞内总胆固醇的含量。结果 RT-PCR、Western blot结果显示,p LV-CYP2J2病毒感染后,HUVEC以及泡沫细胞中CYP2J2的mRNA和蛋白表达均显著升高。与空白对照组、p LV组相比,p LVCYP2J2处理显著增强了HUVEC在24、48、72 h的细胞增殖能力以及在48 h的细胞迁移能力,而对12 h的细胞增殖则无统计学差异。在人外周单核细胞来源的泡沫细胞模型中,p LV-CYP2J2处理显著降低了泡沫细胞的数量、泡沫细胞内油红脂滴的数量以及总胆固醇的含量。结论 CYP2J2基因过表达可促进HUVEC的细胞增殖和迁移,降低人外周单核细胞来源的泡沫细胞形成,提示CYP2J2具有抗动脉粥样硬化的作用。

细胞色素P450 2J2基因启动子区单核苷酸多态性与高血压及脑卒中的相关性

目的研究中国汉族人细胞色素P450 2J2(CYP2J2)基因启动子区CYP2J2*7(G-50T)多态性分布频率及其与高血压和脑卒中的相关性。方法采用聚合酶链反应-限制性内切酶片段长度多态(PCR-RFLP)方法,对260例脑卒中患者、364例原发性高血压(EH)患者及年龄、性别与之相近的243例健康对照者进行CYP2J2*7多态性分析。结果脑卒中组、EH组及正常对照组CYP2J2*1(野生型)等位基因频率分别为0.963,0.962和0.957;CYP2J2*7等位基因频率分别为0.037,0.038和0.043。CYP2J2*7等位基因频率与高血压和脑卒中无明显相关性(P>0.05)。三组之间3种等位基因型分布频率无明显差异(均P>0.05),其中CYP2J2*1三组分别为92.69%、92.86%和91.36%;CYP2J2*7/*1分别为6.92%、6.87%和8.64%;CYP2J2*7分别为0.38%、0.27%和0。结论CYP2J2*7等位基因频率与高血压和脑卒中无明显相关性。

锰中毒对鸡肝脏细胞色素P450酶系及CYP2H1 mRNA转录水平的影响

本研究旨在探讨锰对公鸡肝脏细胞色素P450酶系的影响。50日龄海兰褐公鸡400只,随机分为4组,分别在饲料中添加0、600、900、1 800 mg.kg-1MnCl2建立亚慢性锰中毒模型,于30、60、90 d采取肝脏检测肝微粒体细胞色素P450酶系活性以及CYP2H1基因转录水平的变化。结果显示,细胞色素P450、b5含量,氨基吡啉-N-脱甲基酶(AND)和苯胺-4-羟化酶(AH)活性在各个时间点随染锰剂量的增加,基本呈降低趋势,且高剂量组均极显著(P<0.01)低于正常组,低、中剂量组有高于正常组的情况。NADPH-细胞色素C还原酶(CR)和红霉素-N-脱甲基酶(ERND)的活性的变化规律不明显,30和60 d NADPH-细胞色素C还原酶活性呈降低趋势,而90 d时呈升高趋势,且高剂量组极显著(P<0.01)高于正常组。红霉素-N-脱甲基酶在30 d时呈升高趋势,60和90 d时呈波动性降低变化,且高剂量组均极显著(P<0.01)低于正常组。在各个时间点,CYP2H1 mRNA的转录水平除30 d低、高剂量组,60 d中剂量组,90 d低剂量组高于正常组外,其他组均低于正常组。结果提示,锰中毒可影响鸡肝脏细胞色素P450酶系以及CYP2H1 mRNA的转录水平。

以咖啡因为代谢探针测定细胞色素P450 CYP2A6活性

Aim To establish a HPLC method for determining five major metabolites of caffeine in the urine,5-acetylamino-6-formylamino-3-methyluracil(AFMU),1-methylxanthine(1X),1-methyluric acid(1U),1,7-dimethyluric acid(17U) and 1,7-dimethylxanthine(17X) and assess the activity of cytochrome P-450 CYP2A6.Methods The contents of five major metabolites of caffeine in the urine were determined by RP-HPLC method.Frequency distribution histogram was drawn by calculating the 17U/(AFMU+1X+1U+17X+17U) and then evaluated the activity of CYP2A6.Results The frequency distribution histograms of CYP2A6 approximately indicated three distinct groups,the cut of point is 0.23 between fast metabolizer and intermediate type.And the cut of point is 0.15 between slow metabolizer and intermediate type.Conclusion The method is simple and rapid,suitable for the determination of metabolites of caffeine in urine.The method can be used to assay the activity of CYP2A6.

人类细胞色素酶P4502J2的研究进展

多年来 ,对细胞色素酶P4 5 0的研究主要集中在其代谢外源性药物和毒物的方面。然而它在内源性物质 ,如类固醇、胆固醇、激素、脂肪酸和维生素等的代谢转化中也起了很重要的作用。CYP2J就是这样一种主要代谢内源性物质花生四烯酸的细胞色素酶P4 5 0超家族。人体内的CYP2J2在不久前被发现 ,它与疾病的相关性正引起研究者广泛的兴趣。本文就人类CYP2J2的组织分布、生理作用、编码基因及其基因突变等方面的研究进展作一简要综述。

细胞色素P450表氧化酶2J2基因G312R多态性与脑卒中的关系

目的探讨我国汉族人群细胞色素P450表氧化酶2J2(CYP2J2)基因G312R多态性与脑卒中的关系。方法选择脑卒中病例180例和性别、年龄相匹配的健康人群190例,采用PCR-RFLP方法进行CYP2J2基因G312R多态性分析。结果370例均为野生型,未发现杂合子和突变后纯合子。结论CYP2J2基因G312R突变不是我国部分人群缺血性脑卒中、脑出血发病的遗传危险因素。

缺血后处理对在体大鼠缺血-再灌注心肌细胞色素P450表氧化酶2J3/环氧二十碳三烯酸系统的影响

目的观察缺血后处理拮抗心肌缺血-再灌注损伤时内源性细胞色素P450表氧化酶2J3/环氧二十碳三烯酸(CYP2J3/EET)系统的变化。方法复制在体大鼠心肌缺血-再灌注损伤及缺血后处理模型。雄性Wistar大鼠(250～300)g随机分为三组:假手术组(Sham)、缺血-再灌注组(I-R)、缺血后处理组(IPo)。动脉插管测定心功能指标,采用TTC染色法测定心肌梗死范围,采用RT-PCR法检测心脏细胞色素P450表氧化酶亚型2J3(CYP2J3)mRNA表达,采用Western blot方法测定心肌组织CYP2J3蛋白水平的变化,高效液相色谱法测定11,12-EET含量。结果与I-R组相比IPo组左室收缩末压(LVESP)、左室内压最大上升/下降速率(±LVdp/dtmax)均显著升高;心肌梗死面积减少20.76%(P<0.01);与Sham组及I-R组相比IPo组CYP2J3 mRNA、CYP2J3蛋白及11,12-EET含量明显升高(P<0.05)。结论IPo可减轻在体心肌I-R损伤同时上调心脏CYP2J3/EET系统;提示CYP2J3/EET系统可能与IPo拮抗心脏I-R损伤作用相关。

一步法分析细胞色素P450 2D6酶活性缺陷等位基因CYP2D6A和CYP2D6B

目的：ＣＹＰ２Ｄ６Ａ和ＣＹＰ２Ｄ６Ｂ是引起细胞色素Ｐ４５０２Ｄ６（ＣＹＰ２Ｄ６）酶活性缺陷的最主要的等位基因，对ＣＹＰ２Ｄ６Ａ和ＣＹＰ２Ｄ６Ｂ的检测可准确（＞９２％）预测ＣＹＰ２Ｄ６慢代谢者。本研究利用等位基因特异扩增法，建立了一步ＰＣＲ法测定ＣＹＰ２Ｄ６Ａ和ＣＹＰ２Ｄ６Ｂ等位基因。方法：等位基因特异扩增法分析ＣＹＰ２Ｄ６Ａ和ＣＹＰ２Ｄ６Ｂ等位基因；右美沙芬作为探针药物测定表型。结果：经１３０例测定，说明本法更为快捷、更少污染。结论：本法的建立为该项测定应用于临床。

细胞色素P4502E1(CYP2E1)与胃癌遗传易感性

为探讨细胞色素P4502E1(CYP2E1)基因变化与胃癌易感的关系,采用病例—对照分子流行病学研究方法和多聚酶链反应技术—限制性片段长度多态性(PCR—RFLP),对142例胃癌患者和167例正常对照者CYP2E1基因RsaⅠ酶切位点进行多态性分析。结果显示胃癌患者和正常对照人群在基因型和等位基因频率上均无显著的统计学差异;我国人群CYP2E1 RsaⅠ酶切位点多态性的分布频率与日本人群相近,与欧美人群差异较大。

ASA法测定细胞色素P4502D6酶缺陷等位基因CYP2D6E

目的 :建立细胞色素P4 50 2D6(CYP2D6)第 3 0 2 3位A→C突变造成CYP2D6酶活性缺陷的等位基因CYP2D6E的测定方法。方法 :利用等位基因特异扩增法 (ASA)为基本原理 ,设计两对引物分别扩增野生型等位基因和突变型等位基因。结果 :经 3 96例测定 ,发现 2例CYP2D6E与CYP2D6B的异突变型纯合子 ,其表现型均为慢代谢者。阳性对照说明本法重复性好 ,阴性对照显示本法无污染问题。结论 :本法比PCR -RFLP法更为快捷、更少污染。

细胞色素P450 CYP2D6*10B缺陷等位基因与利培酮治疗效应的关系

目的探讨CYP2D6*10B缺陷等位基因与利培酮治疗效应的关系。方法采用等位基因的特异性扩增法,根据是否含有突变型CYP2D6*10B缺陷等位基因将70例精神分裂症患者分为野生型等位基因的纯合型(w/w)组(16例),突变型等位基因的纯合型(m/m)组(16例)以及野生型和突变型等位基因的杂合型(m/w)组(38例),观察3组患者利培酮4～6mg/d治疗6周后疗效与不良反应。采用阳性和阴性症状量表(PANSS)评价疗效,副反应量表(TESS)和锥体外系不良反应量表(RSESE)评定药物不良反应。PANSS减分率≥30%为有效。结果治疗6周后,有效者58例。有效组w等位基因频率(0.43)明显低于无效组(0.83),有效组的m等位频率(0.57)明显高于无效组(0.17)。自第4周起,m/w,m/m型PANSS减分值明显多于w/w型。3种基因型患者组间不良反应差异无统计学意义。结论利培酮治疗携带CYP2D6*10B缺陷等位基因患者的疗效优于治疗野生型等位基因患者的疗效。CYP2D6*10B缺陷等位基因与利培酮不良反应无关联。

地非三唑对大鼠肝细胞细胞色素P450 CYP1A1/2的诱导作用

目的试从mRNA表达水平阐明地非三唑对鼠肝微粒体中细胞色素P450 CYP1A1/2的诱导机制。方法给SD大鼠腹腔注射地非三唑,采用Tr-izol法提取大鼠肝脏RNA,用RT-PCR测定经地非三唑处理1,2及4d的鼠肝中细胞色素P450 CYP1A1,CYP1A2 mRNA的表达水平。结果地非三唑处理不同时间的鼠肝细胞中细胞色素P450CYP1A1,CYP1A2 mRNA的表达水平比空白对照组明显增加,空白对照组CYP1A1吸光度比值为0.270±0.040,诱导1,2及4d的吸光度比值分别为0.343±0.055,0.417±0.045及0.603±0.083;空白对照组的CYP1A2吸光度比值为0.613±0.189,而诱导1,2及4d的吸光度比值分别为1.510±0.226,3.057±0.518及4.120±0.458。随着诱导时间的增加,细胞色素P450 CYP1A1及CYP1A2 mRNA的表达也逐步增加,诱导时间与表达水平之间存在一定的线性关系,相关系数分别为0.9984和0.9563。结论地非三唑对细胞色素P450 CYP1A1/2 mRNA表达具有诱导作用。

棉铃虫细胞色素P450基因CYP9A17v2核心启动子区缺失分析

CYP9A17v2的过量表达与棉铃虫Helicoverpa armigera对拟除虫菊酯类杀虫剂的抗性相关。为了研究CYP9A17v2表达调控机制,对CYP9A17v2核心启动子区域的功能进行了分析;构建了含荧光素酶报告基因和CYP9A17v2启动子不同长度缺失片段(-1095～+43)的重组质粒,转染Sf9细胞瞬时表达后用双荧光素酶报告基因检测系统检测启动子活性。功能分析结果表明:所有的7个缺失片段均具有启动子活性,-197～+43启动子区域的转录活性最高。在CYP9A17v2基因5′-调控区-197～-113区域内可能存在转录增强因子的结合位点,而在-1095～-197区域内可能存在转录抑制因子的结合位点。本研究为探索棉铃虫CYP9A17v2过量表达的转录调控机理奠定了重要基础。

芝麻细胞色素P450超家族的成员鉴定及SiCYP703A2的功能验证

细胞色素P450(CYP450)超家族广泛参与初生和次生代谢物质的生物合成,其中CYP703家族基因参与拟南芥、水稻等的花药发育。本研究利用生物信息学方法,从芝麻基因组中鉴定出303个CYP450基因,发现它们分为9个家族簇(clan),43个基因家族,随机分布于16个连锁群中。CYP703家族是71 Clan的成员之一,为了解芝麻CYP703家族的功能,克隆并分析了其家族基因SiCYP703A2。系统进化分析表明,SiCYP703A2与拟南芥CYP703A2聚为一类,它们的氨基酸序列一致性为77%。表达分析表明,SiCYP703A2在芝麻的花蕾组织中高量表达,同时在花药发育的四分体阶段表达水平较高。拟南芥中超量表达后发现,SiCYP703A2超表达植株荚果变短、花粉活力降低,花药扫描电镜观察显示花粉壁表面出现不规则突起,花粉壁结构异常。此外,荧光定量PCR结果显示,多个花粉壁发育基因在SiCYP703A2超表达植株的花药中异常表达。这些结果表明,超量表达SiCYP703A2会导致转基因拟南芥花粉壁出现缺陷,导致育性降低,推测SiCYP703A2在花粉粒和花粉壁的形成中发挥作用。