中国人细胞色素P450IA1基因变异与吸烟相关性肺癌的风险

目的：探讨多环芳烃类致癌物代谢酶细胞色素Ｐ４５０ＩＡ１ 基因（ＣＹＰ１Ａ１） 多型性与中国人肺癌易感性的关系。方法：应用ＰＣＲＲＦＬＰ 方法，分析１５０ 例原发性肺癌和３９１ 例正常对照者ＣＹＰ１Ａ１ 基因的ｍ １、ｍ２ 和ｍ ４ 位点突变。以比值比（ＯＲ） 及其９５ ％ 可信区限（ＣＩ） 比较不同基因型与肺癌风险的关系，以及与吸烟的交互作用。结果：位于３＇端ＭｓｐＩ识别的位点（ ｍ１） 和位于第７ 外显子ＢｓｒＤＩ 识别的位点（ｍ２） 具多态性，而位于第７ 外显子由ＢｓａＩ识别的位点（ｍ ４） 未见有变异。ｍ１ 变异型等位频率在对照组中为０－３６，而在肺癌病例组中为０－４６ 。携带至少一个变异基因拷贝者发生肺癌的风险比携带野生基因型者高２ 倍（ＯＲ ２－３ ；９５％ ＣＩ１－９～２－９） 。分层分析发现，肺鳞癌患者中ｍ １ 变异基因型频率更高（０－４８） ，携带此种基因型者发生肺鳞癌的相对风险（ＯＲ） 为３－０（９５％ ＣＩ２－２ ～４－０） 。ｍ２ 变异与ｍ１变异密切关联，符合率达７６ ％ 。携带至少一个ｍ ２ 变异基因拷贝者的ＯＲ 为１－９ （９５％ ＣＩ１－６ ～２－４） 。此外，ＣＹＰ１Ａ１ｍ１ 变异与吸烟有明显的交互作用。

茶树细胞色素P450基因CYP71A26与CYP71B34的克隆及差异表达特征分析

利用NCBI茶树转录组数据库,以铁观音芽叶为材料,克隆了茶树细胞色素P450基因CYP71A26与CYP71B34的cDNA全长。CYP71A26与CYP71B34的cDNA全长分别为1 879 bp和1 764 bp,分别含有1 539 bp(编码513个氨基酸)和1 533 bp(编码511个氨基酸)的完整开发阅读框。氨基酸序列比对结果显示,CYP71A26与CYP71B34的同源性为42.47%,为2个亚家族基因。氨基酸结构分析表明,2个基因均具有植物P450的螺旋C(Helix C)、螺线I(Helix I)、螺线K(Helix K)、"Meander"区域序列和血红素结合域(Heme binding domain)的典型结构。进化树分析显示,CYP71A26与CYP71B34在分子进化树上分属两大分支,2个基因与其他物种亲缘关系的远近不同。三级结构模拟与功能域分析显示,CYP71A26与CYP71B34主要由N端的β折叠和C端的α螺旋结构组成,且2个基因均具有一个P450蛋白结构域(Pfamdomain)。荧光定量PCR结果表明,CYP71A26与CYP71B34基因在不同茶树害虫为害的叶片中,分别表现出上调和下调表达的现象。而在冷热环境下,CYP71A26与CYP71B34基因分别表现出下调和上调表达的现象。表明茶树CYP71A26与CYP71B34基因均参与了生物(害虫)与非生物(温度)的胁迫响应,但两个基因表达相反,参与环节可能相反。

褐飞虱细胞色素P450单加氧酶基因CYP4CE1的克隆及表达谱

为了解P450基因在褐飞虱Nilaparvata lugens适应水稻品种过程中的重要作用,利用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR),快速扩增cDNA末端(RACE)和长距离聚合酶链式反应(LD-PCR)技术,克隆了褐飞虱4龄若虫的CYP4家族的一个P450单加氧酶基因,被命名为CYP4CE1。该基因的全长cDNA序列(2160bp)含有一个1626bp的开放阅读框(ORF),编码541个氨基酸残基的蛋白质。通过GenBank数据库中的blastx搜索引擎进行同源性分析,结果表明CYP4CE1编码的蛋白与岸蟹Carcinus maenas的CYP4C39(GenBank登录号:JC8026)的相似性最高,两者的氨基酸序列同源性达43%;其次与热带蟑螂Blaberus discoidalis的CYP4C1(AAA27819)及黑腹果蝇Drosophilamelanogaster的CYP4C3(NP_524598)的相似性也较高,氨基酸序列同源性分别达42%。氨基酸序列比对表明该蛋白含有CYP4家族成员的所有保守特征序列,如螺旋K(E-R-P),氧结合结构域即螺旋I(AG-T),血红素结合区(PF-G--C-G-F)以及CYP4成员的特有特征序列(EVDTFMFEGHDTT)等。使用Northern杂交检测CYP4CE1随时间的表达变化,结果表明:与饲养于感虫水稻台中1号(Taichung Native1,TN1)上的若虫相比,在取食中度抗性水稻Minghui63(MH63)秧苗12,24,48,72h的各时间段的褐飞虱体内,该基因有2.1倍的过量表达且表达水平保持稳定。进一步通过Northern杂交检测该基因的组织表达特异性,结果显示:该基因在取食TN1秧苗的若虫脂肪体中表达量最高,在肠道组织及体壁中的表达水平较低;褐飞虱取食MH63秧苗24h后,该基因在体壁及脂肪体中的表达量略有上升(各约1.2倍),而在肠道组织中的表达量则大幅升高(约12倍)。肠道整体原位杂交表明,CYP4CE1在取食TN1秧苗的若虫的肠道组织及马氏管中均有本底水平的表达;若虫取食MH63秧苗后,该基因在上述肠道各区段表达水平明显增强。结果提示,在褐飞虱与水稻互作过程中CYP4CE1的重要功能之一可能是参与水稻有毒次生物质的代谢。

非酒精性脂肪肝大鼠肝细胞色素P450 1A1基因及表达变化的意义

目的研究非酒精性脂肪肝大鼠肝细胞色素P4501A1基因和表达变化及其意义。方法雄性Wistar大鼠40只,随机分为两组,正常对照组8只,高脂饮食组2、4、8、12各8只,紫外分光光度计法检测P4501A1活性(7乙氧异恶唑0脱乙基酶,EROD);免疫组织化学和Westernblot方法测定肝细胞色素P4501A1表达变化,逆转录聚合酶链反应测定肝细胞色素P4501A1mRNA表达变化。结果脂肪肝2、4、8和12周EROD活性分别为325.07±59.68、345.25±49.28、468.95±55.28和548.68±43.25nmol·mg-1·min-1,与正常对照组260.42±35.32nmol·mg-1·min-1比较明显增高(P<0.01),肝细胞色素P4501A1基因及蛋白表达随着脂肪肝程度的加重明显增强。结论非酒精性脂肪肝大鼠肝细胞色素P4501A1基因和表达变化与脂肪肝引起的肝脏损害程度密切相关。

细胞色素P450 1B1及COMT基因多态性与子宫内膜癌易感性及与mRNA表达关系的研究

目的探讨细胞色素P450 1B1及儿茶酚-O-甲基转移酶(catechol-O-methyltransferase,COMT)基因多态性对子宫内膜癌易感性的影响及与mRNA表达的相关性。方法采用(polymerase chain reaction-restrictionfragment length polymorphism,PCR-RFLP)方法检测122例子宫内膜腺癌患者和114例对照者CYP1B1基因119位、432位密码子和COMT基因158位密码子G→A位点的多态性。对其中36例患者采用反转录-聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)方法检测外周血淋巴细胞中CYP1B1和COMT mRNA的表达。结果 CYP1B1基因119位的突变型(T/T)基因型频率在病例组(8.2%)明显高于对照组(3.5%),432位多态性在病例组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。而COMT基因多态在绝经年龄<50岁组,合并杂合型(G/A)和突变型(A/A)与野生型(G/G)比较,病例组与对照组差异有统计学意义(P<0.05,OR=0.422)。野生型(G/G)型COMT mRNA的表达量低于杂合型(G/A)与突变型(A/A)COMT mRNA的表达量,比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 CYP1B1基因119位多态性与子宫内膜癌的发生有潜在的相关性,COMT基因多态与子宫内膜癌的发病风险存在相关性,绝经年龄越早,携带突变等位基因A个体的发病风险减低。所有多态中只有COMT基因第158位密码子多态影响COMT mRNA的表达。

烟草甲细胞色素P450还原酶基因的分子特征与表达模式分析

烟草甲Lasioderma serricorne是一种重要的仓储害虫,长期化学防治导致烟草甲已对多种传统熏蒸剂产生抗性,但其对新型熏蒸剂甲酸乙酯仍处于敏感水平。因此明确其体内细胞色素P450还原酶(cytochrome P450 reductase, CPR)对甲酸乙酯的代谢解毒功能,对开展该药剂的抗性监测及延缓抗性的发生发展具有重要意义。本研究旨在克隆烟草甲LsCPR基因,分析其分子特征和表达特性,为进一步明确其在烟草甲对甲酸乙酯解毒代谢过程中的作用奠定基础。利用RT-PCR技术克隆烟草甲LsCPR基因的开放阅读框(open reading frame, ORF);利用生物信息学软件分析LsCPR编码蛋白的结构、特征和系统进化关系。采用实时定量PCR技术检测LsCPR在烟草甲不同发育阶段(低龄幼虫、高龄幼虫、蛹、低龄成虫、高龄成虫)、幼虫不同组织(表皮、肠道、脂肪体和马氏管)以及甲酸乙酯熏蒸胁迫后的表达模式。烟草甲LsCPR基因的ORF为2 046 bp(GenBank登录号:MZ423209),编码681个氨基酸,具有典型的昆虫CPR基因FMN区域、NADPH区域和FAD等保守结构域。系统发育分析表明,烟草甲LsCPR与鞘翅目昆虫聚为一支,且与赤拟谷盗Tribolium castaneum CPR亲缘关系最近。LsCPR在烟草甲不同发育阶段均有表达,在高龄幼虫期的表达水平较高;在幼虫体内的表达部位主要在肠道,其次为脂肪体和马氏管,而在表皮的表达水平最低。LC_(10)、LC_(30)和LC_(50) 3种浓度的甲酸乙酯处理24 h后,烟草甲LsCPR表达量随着胁迫浓度升高而上调且显著高于对照;甲酸乙酯LC_(50)处理烟草甲不同时间(3、6、12、24和48 h)后,LsCPR基因上调表达,24 h时达到表达高峰。推测LsCPR是参与烟草甲代谢甲酸乙酯的候选基因。

阿托伐他汀对自发性高血压大鼠血压和细胞色素P450表氧化酶2C11基因表达的影响

目的 研究阿托伐他汀降低自发性高血压大鼠（SHR）血压的作用是否与其调节细胞色素P450表氧化酶2C11（CYP2C11）基因表达的作用有关。方法 18只SHR随机分为SHR模型组、阿托伐他汀50和10mg·kg^-1组；6只Wistar-Kyoto大鼠（WKY）作为正常对照组。阿托伐他汀ig给药，每日1次，共10周。分别于给药前和给药后每2周测量大鼠尾动脉收缩压（SBP）；RT-PCR和Westem印迹法分别检测心、肝、肾及主动脉组织中CYP2C11 mRNA和蛋白质表达；ELISA方法检测尿液中14，15-二氢二十碳三烯酸（DHET）含量；并测定血脂含量。结果 阿托伐他汀50mg·kg^-1组在给药后第6～10周和10mg-kg^-1组在给药后第10周SBP明显低于SHR模型组。在CYP2C11 mRNA和蛋白质表达中，SHR模型组心、肾和主动脉均明显高于WKY组；给药10周后，阿托伐他汀50mg·kg^-1组的4种组织和10mg·kg^-1组的心、肾和主动脉的表达明显高于SHR模型组。治疗前SHR各组尿液中DHET的含量均显著高于WKY组，给药后阿托伐他汀50mg·kg^-1组的含量明显高于SHR模型组；同时，阿托伐他汀50mg·kg^-1组血脂水平明显低于SHR模型组。结论 阿托伐他汀可上调CYP2C11基因的表达，并增加其代谢产物表氧化二十碳三烯酸。这可能是其降低血压的作用机制之一。

多环芳烃受体基因与细胞色素P4501 A1/1 B1基因表达的调控

目的 在体外人神经细胞瘤细胞株 (SK N AS)中 ,以二恶英 (TCDD)、三甲基胆蒽 (3 MC)作为诱导化合物 ,探讨多环芳烃受体 (AHR、ARNT)基因与细胞色素P45 0 1A1/1B1(CYP1A1、CYP1B1)基因表达的调控 ,并研究其剂量反应关系和时间反应关系。方法 用常规的细胞培养方法 ,用二甲基亚砜 (DMSO)、5 0、5 0 0、10 0 0nmol/LTCDD和 0 1、1 0、10 0μmol/L 3 MC处理细胞 12h、2 4h、48h、72h ,利用提纯RNA和合成cDNA的药盒 ,合成cDNA ,然后通过逆转录聚合酶反应(RT PCR)表达AHR、ARNT和CYP1A1、CYP1B1基因 ,以 β actin作为内对照 ,分析不同处理剂量、时间时基因表达的强度。结果 4种基因在SK N AS中都有基本的表达 ,TCDD在 5 0 0nmol/L以上 ,染毒处理 48h、72h ,对AHR、ARNT及CYP1A1基因表达都有上调作用 ;5 0nmol/L组在染毒处理 72h后对AHR基因表达 ,5 0 0和 10 0 0nmol/L组分别在染毒处理 72h和 48h时对CYP1B1基因表达也有上调作用 ;3 MC 1 0、10 0 μmol/L在染毒 72h后对AHR、ARNT、CYP1A1基因表达有上调作用 ,其中 10 0 μmol/L组在染毒 48h后就有上调作用 ,但对CYP1B1基因表达上调仅仅在 10 0 μmol/L染毒 48h组。结论 本研究结果提示 ,TCDD、3 MC两种多环芳烃类化合物在SK N AS中 。

细胞色素P450IA1基因多态性与结直肠癌易感性的关系

目的探讨细胞色素P450IA1(CYPIA1)基因MspⅠ多态性与结直肠癌易感性的关系。方法应用聚合酶链反应—限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术分别对75例结直肠癌患者、80例结肠息肉患者和100例健康对照者的CYPIA1基因3’端限制性内切酶MspⅠ多态性进行检测,分别计算其三种基因型(A、B和C型)的频率,并进行统计学分析。结果CYPIA1 MspⅠ多态位点各基因型的分布频率在结直肠癌患者、结肠息肉患者和健康对照者中分别为:基因型A50.2%、57.5%和65.0%;基因型B26.2%、21.3%和21.0%;基因型C23.6%、21.2%和14.0%,三者各基因型分布的差异无统计学意义(P>0.05)。结论CYPIA1MspⅠ位点多态性与结直肠癌易感性无显著相关性。

携细胞色素P4501A1cDNA的高表达型重组载体构建及转基因细胞系的

携细胞色素Ｐ４５０１Ａ１ｃＤＮＡ的高表达型重组载体构建及转基因细胞系的建立董海涛，吴健敏，余应年，朱丽君（浙江医科大学病理生理学教研室及医学分子生物学实验室杭州３１００３１）构建具高效、稳定、持续表达细胞色素Ｐ４５０基因产物的细胞系对建立更符合体内状...

检测细胞色素P-450基因族中CYP1A1基因表达的一个简捷方法(英文)

NMR1系雄性小鼠被用来研究肺微粒体细胞色素P450家族中一个同功基因CYP1A1在香烟烟雾的诱导下表达.双轮回‘聚合酶链式反应’(PCR)和‘反向转录酶-聚合酶链式反应’(RT-PCR)被用来检测基因CYP1A1的转录水平.代表CYP1A1蛋白活性的7-乙氧基试卤灵-0-去乙基酶(EROD)的活性被用来检测基因CYP1A1的表达.双轮回‘聚合酶链式反应’(PCR)和‘反向转录酶-聚合酶链式反应’(RT-PCR)被用来检测基因CYP1A1的转录水平.测试结果表明在吸入香烟烟雾的情况下,小鼠肺微粒体EROD的活性和基因CYP1A1的转录水平是同步增加的.这个结果不同于以前在同样实验条件的一个自相矛盾的结果,即在CYP1A1蛋白增加时,基因CYP1A1的转录水平却是下降或不变.这说明本文所使用的方法可能要优于以前的实验方法.

甜菜碱对酒精性肝病大鼠肝细胞色素P450 2E1基因和蛋白表达的影响

目的：观察甜菜碱对酒精性肝病（ALD）模型大鼠肝细胞色素P4502E1（CYP 2E1）基因和蛋白表达的影响。方法：建立大鼠酒精性肝病模型后，分别以甜菜碱不同剂量（200～800 mg/kg）治疗4周，观察肝组织的病理形态学改变；采用RT-PCR和免疫组化法检测CYP 2E1基因和蛋白表达水平，并分别用硫代巴比妥酸法（TBA法）和黄嘌吟氧化酶法测定肝组织丙二醛（MDA）的含量和超氧化物歧化酶（SOD）的活力。结果：甜菜碱高、中剂量组能显著减少肝脂质的沉积和炎症细胞的浸润；RT-PCR和免疫组化结果证明甜菜碱能显著抑制酒精性肝病CYP 2E1基因和蛋白的表达，同时肝内MDA和SOD含量恢复到接近正常。结论：甜菜碱能显著抑制酒精性肝病CYP 2E1基因和蛋白的表达，具有防止酒精性肝病的作用。

化学诱导剂对培养细胞CytP450IA1基因mRNA水平诱导及肝组织该

化学诱导剂对培养细胞ＣｙｔＰ４５０ＩＡ１基因ｍＲＮＡ水平诱导及肝组织该基因基础表达水平的研究余应年，董海涛，吴健敏（浙江医科大学病理生理教研室及医学分子生物学实验室杭州３１００３１）细胞色素Ｐ４５０ＩＡ１（ＣｙｔＰ４５０ＩＡ１）基因表达可被多环芳烃类...

苹果蠹蛾细胞色素P450基因CYP332A19和CYP337B19的克隆及表达分析

【目的】本研究旨在通过克隆苹果蠹蛾Cydia pomonella细胞色素P450基因CYP332A 19和CYP337B 19,并对其进行序列和表达分析,以更好地了解这两个P450基因在植物次生物质解毒方面的作用,为进一步的功能研究提供依据。【方法】采用本地BLAST搜索苹果蠹蛾转录组数据库获得细胞色素P450基因cDNA序列,采用RT-PCR技术克隆目的基因的编码区。利用生物信息学软件分析目的基因的序列特征及与其他近缘物种的P450基因的系统进化关系。采用RT-qPCR技术测定目的基因在苹果蠹蛾不同发育阶段(卵、1-5龄幼虫、蛹和成虫)、4龄幼虫不同组织(头部、表皮、脂肪体、中肠和马氏管)以及4龄幼虫分别取食添加0.1%香豆素和0.5%槲皮素的人工饲料2 d后的表达水平。【结果】克隆获得苹果蠹蛾细胞色素P450基因CYP332A 19(GenBank登录号:MF574708)和CYP337B 19(GenBank登录号:MF574697)的全长cDNA序列,开放阅读框(ORF)分别长1518和1491 bp,分别编码505和496个氨基酸,其蛋白质分子量分别为58.586和57.734 kD,理论等电点分别为8.99和7.61。结构域分析显示,CYP332A 19和CYP337B 19中均包含包括血色素结合区在内的5个保守的细胞色素P450结构域。系统发育树显示,苹果蠹蛾CYP332A 19与苹淡褐卷蛾Epighyas postvittana CYP332A 9等CYP332A基因聚在一枝,而CYP337B 19与稻纵卷叶螟Cnaphalocrocis medinalis CYP337B 12和六星灯蛾Zygaena filipendulae CYP337B 11等CYP337B基因聚在另一枝。RT-qPCR分析结果表明,CYP332A 19和CYP337B 19在苹果蠹蛾幼虫期的表达水平高于卵期的,分别在4龄幼虫脂肪体和中肠中的表达量最高。取食分别含0.1%香豆素和0.5%槲皮素的人工饲料2 d后,4龄幼虫体内的CYP332A 19和CYP337B 19相对表达量显著高于对照组(取食含2%DMSO的人工饲料)。【结论】CYP332A 19和CYP332B 19分别在苹果蠹蛾幼虫脂肪体和中肠中高表达,且在取食含香豆素和槲皮素的人工饲料的苹果蠹蛾幼虫体内表达量升高,说明这两个基因可能参与苹果蠹蛾对外源物质的解毒代谢过程。本研究的结果有助于我们了解苹果蠹蛾对寄主次生物质解毒代谢机理,为苹果蠹蛾防治提供新思路。

梨小食心虫细胞色素P450 CYP6AE123基因的克隆及表达分析

细胞色素P450是昆虫体内一类代谢外源物质重要的酶系。为了解梨小食心虫细胞色素P450基因的分子特性及在阿维菌素代谢中的作用,对转录组数据库检索细胞色素P450基因、全长克隆,并对其进行生物信息学分析;并采用RT-qRCR测定目的基因在梨小食心虫不同发育阶段、不同组织及不同浓度阿维菌素处理成虫后的表达量。结果表明,通过克隆结果获得1个梨小食心虫细胞色素P450基因CYP6AE123的全长cDNA序列,开放阅读框(ORF)长1524 bp,编码507个氨基酸;其二级结构表明,该基因编码的蛋白主要由α螺旋和无规则卷曲组成;系统发育分析表明,此基因与苹果蠹蛾、小线角木蠹蛾、棉铃虫的氨基酸序列一致性分别高达83.67%、57.39%、52.61%。RT-qPCR分析结果表明,CYP6AE123在成虫期和5龄幼虫期的表达量较高,且在成虫脂肪体和中肠中有较高的表达。高浓度阿维菌素(179.66μg/mL)处理梨小食心虫后基因表达量显著增加,表明该基因可能在成虫对阿维菌素的解毒代谢中发挥重要作用。研究结果可为进一步通过RNAi进行功能验证提供理论依据。

氯虫苯甲酰胺诱导甜菜夜蛾细胞色素P450基因上调表达

【目的】明确氯虫苯甲酰胺对甜菜夜蛾Spodoptera exigua（Hübner）细胞色素P450基因的诱导表达作用。【方法】采用O-脱乙基香豆素法研究了低剂量氯虫苯甲酰胺处理对甜菜夜蛾幼虫中肠P450s酶活性的影响,应用Realtime PCR方法测定了其对P450基因（CYP9A9,CYP4G37,CYP4S11和CYP6B）和NADPH细胞色素P450还原酶基因（HQ852049）表达的影响。【结果】氯虫苯甲酰胺对甜菜夜蛾P450酶及相关基因的诱导作用均表现出时间效应和剂量效应,。甜菜夜蛾4龄幼虫取食0.02 mg/kg氯虫苯甲酰胺饲料至5龄,在蜕皮后6-36 h内,其P450s酶活性增加为对照组的1.90-2.92倍,诱导效应高于0.01 mg/kg氯虫苯甲酰胺处理组（其P450s酶活性为对照组的1.11-1.62倍）。同时,0.02 mg/kg氯虫苯甲酰胺处理组甜菜夜蛾中肠P450基因CYP9A9,CYP4G37和CYP6B mRNA的相对表达量分别上升为对照组的1.97-3.95,2.46-4.29及1.53-4.48倍,NADPH细胞色素P450还原酶基因HQ852049的相对表达量亦增加为对照的1.85-4.08倍。【结论】结果提示,氯虫苯甲酰胺可能通过诱导3种P450基因及细胞色素P450还原酶基因HQ852049基因mRNA的上调表达而增强了甜菜夜蛾幼虫中肠P450s酶活性。

昆虫细胞色素P450基因的多样性、进化及表达调控

细胞色素P450单加氧酶(cytochrome P450 monooxygenases,P450s)是由多个功能相关的亚铁血红素-硫醇盐蛋白基因组成的一个基因超家族,在各种内源和外源物质的代谢中起着主要作用。目前GenBank中注册的昆虫P450基因序列已超过1000个,其中双翅目占序列总数的74%,鳞翅目占序列总数的16%。而昆虫P450基因序列已克隆的全长序列中大部分属于CYP4和CYP6家族,两个家族成员分别占总数的20%和45%。利用GenBank中现已注册的昆虫P450基因的cDNA全长序列进行比对并绘制进化树,揭示不同种类昆虫P450的亲缘关系。结果显示基于P450基因的昆虫部分目的进化关系与大部分先前依据其他分子数据或形态分类学得到的昆虫系统进化关系基本吻合。现有研究表明,细胞色素P450基因的表达可能受顺式作用元件(cis-acting element)、反式作用因子(trans-acting factor)或两者共同调控,调控可能涉及转录增强的转录机制或mRNA稳定性增加的转录后机制。

细胞色素P450 3A5和多药耐药基因1基因多态性在肾移植患者他克莫司血药浓度监测中的应用

目的 :研究细胞色素P4 5 0 3A5 (CYP3A5 )和多药耐药基因 1 (MDR1 )基因多态性对他克莫司 (FK5 0 6 )血药浓度的影响 ,探讨FK5 0 6在不同个体间吸收、代谢差异的基因背景 ,建立个体化用药的药物代谢遗传学监控体系。 方法 :观察 1 1 8例肾移植术后常规使用FK5 0 6 +霉酚酸酯 +强的松三联免疫抑制治疗的成年患者 ,记录体重 ,FK5 0 6剂量 ,术后第 7天、术后 1个月和术后 3个月的FK5 0 6全血谷浓度等指标。采用PCR 限制性长度多态性的方法检测CYP3A5 1 / 3和MDR1 3435位点C/T多态性 ,比较不同基因型之间FK5 0 6的浓度 /剂量比的差异。 结果 :CYP3A5基因为 1 / 1、 1 / 3和 3/ 3型的患者数分别有 1 2、36和 70例。 1 / 1型和 1 / 3型患者的FK5 0 6浓度 /剂量比明显低于 3/ 3型的患者 (术后第 7天分别为 32 8± 1 7 7,4 1 6± 1 5 8,1 0 2 3± 5 1 2 ;术后 1个月分别为 33 1± 7 5 ,4 6 4± 1 2 9,1 0 3± 4 7 5 ;术后 3个月分别为 35 3± 2 0 9,5 9 0± 2 0 6 ,1 5 0± 85 3;P均 <0 0 0 1 ) , 1 / 1纯合子患者的血药浓度略低于 1 / 3杂合子 ,具有统计学意义 (术后第 7天P >0 0 5 ,术后 1个月和 3个月P <0 0 1 )。动态观察MDR1基因型与FK5 0 6血药浓度之间无明显相关性。 结论 :?

三种杀虫剂亚致死剂量对草地贪夜蛾细胞色素P450基因表达的影响

【目的】为明确杀虫剂亚致死剂量对草地贪夜蛾Spodoptera frugiperda细胞色素P450基因表达的影响。【方法】本研究采用叶片浸渍法测定了3种杀虫剂[氯虫苯甲酰胺、甲氨基阿维菌素苯甲酸盐和苏云金杆菌Bacillus thuringiensis(Bt)]对草地贪夜蛾2龄幼虫的毒力,以及通过实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR, RT-qPCR)技术测定了这3种杀虫剂亚致死剂量(LC10)处理后48 h时草地贪夜蛾2龄幼虫16个P450基因的表达量。【结果】氯虫苯甲酰胺、甲氨基阿维菌素苯甲酸盐和Bt对草地贪夜蛾2龄幼虫的LC10值分别为0.931, 0.283和1 089.688 mg/L。2龄幼虫受LC10氯虫苯甲酰胺胁迫后,13个P450基因(CYP4G75,CYP6AB12,CYP6B50,CYP321A7,CY321A8,CYP321A9,CYP321A10,CYP321B1,CYP337B5,CYP9A59,CYP9A58,CYP6AE44及CYP6AE43)表达上调,其中CYP6AE44表达量为对照的34.60倍;2龄幼虫受LC10甲维盐胁迫后,11个P450基因(CYP4G75,CYP6AB12,CYP321A7,CY321A8,CYP321A9,CYP321A10,CYP321B1,CYP337B5,CYP9A58,CYP6AE44及CYP6AE43)表达上调,其中CYP321B1表达量为对照的28.70倍;2龄幼虫受LC10Bt胁迫后,11个P450基因(CYP4G75,CYP6AB12,CYP6AN4,CYP321A7,CY321A8,CYP321A9,CYP321A10,CYP321B1,CYP337B5,CYP6AE44及CYP6AE43)表达上调,其中CYP6AE44表达量为对照的40.80倍。【结论】草地贪夜蛾2龄幼虫的多个P450基因受这3种杀虫剂亚致死剂量处理后表达上调,其中CYP4G75,CYP6AB12,CYP321A7,CY321A8,CYP321A9,CYP321A10,CYP321B1,CYP321B5,CYP6AE44及CYP6AE43均能被这3种杀虫剂诱导表达。

棉铃虫细胞色素P450 CYP6B7基因的克隆与融合表达

细胞色素P450CYP6B7被推测与棉铃虫Helicoverpa armigera对拟除虫菊酯类杀虫剂的抗性有关,但至今尚无CYP6B7参与杀虫剂代谢方面的直接证据。为揭示CYP6B7的代谢功能,作者以棉铃虫幼虫基因组DNA为模板,以CYP6B7基因设计特异性引物,扩增出包含321bp内含子的CYP6B7基因。用反向PCR的方法消除内含子,获得包含完整的CYP6B7基因的开放阅读框。将CYP6B7基因与pMAL-c2X载体连接,并转化E.coliTB1细胞,在IPTG诱导下,CYP6B7能与载体基因编码的麦芽糖结合蛋白(MBP)在大肠杆菌中融合表达,表达产物经直链淀粉(amylose)柱亲和层析分离洗脱后,得到SDS-PAGE电泳纯的融合蛋白。