细胞色素P450s酶系催化除草剂代谢的研究进展

综述了细胞色素P450s酶系催化的单加氧反应机理,细胞色素P450s酶系在酰胺类、三氮苯类、磺酰脲类、脲类、苯氧羧酸类等除草剂的活性或降解代谢中的催化反应。讨论了研究细胞色素P450s酶系代谢作用在除草剂选择性、抗药性机理,抗除草剂作物的培育以及除草剂安全剂的解毒机理等方面的意义。

细胞色素P450-RhFRED人工融合酶的研究进展与应用

来自于红球菌Rhodococcus sp.NCIMB 9784的P450RhF是一个自给自足型的细胞色素P450酶,它的血红素结构域主要负责控制酶的底物特异性,P450还原酶伴侣蛋白RhFRED与细胞色素P450血红素结构域天然融合在一起,电子主要从蛋白分子内转移到P450血红素结构域。依据融合型P450RhF自给自足的特性,有学者利用P450RhF的还原伴侣蛋白RhFRED,与其它P450构建人工融合酶P450-RhFRED,来实现多种细胞色素P450基因的功能表达。基于此建立的P450-Rh-FRED融合文库对未知功能P450的催化功能探索有很大意义,P450-RhFRED融合酶技术也可用于开发已知细胞色素P450酶的工业应用。

长链非编码RNA LINC00987通过细胞色素P450途径促进AML细胞凋亡的机制研究

目的:探讨长链非编码RNA LINC00987在抗肿瘤药物诱导的急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)细胞凋亡中的作用及分子机制。方法:通过RT-qPCR检测AML中的LINC00987表达水平。构建稳定敲减LINC00987基因的Molm13细胞(shLINC00987),通过Annexin V/PI检测LINC00987低表达对阿糖胞苷诱导AML细胞凋亡的影响。对LINC00987共表达基因进行信号通路富集,分析LINC00987的表达对细胞色素家族基因的影响。结果:与健康对照组相比,lncRNA LINC00987在AML细胞系和AML病人标本中均显著降低,而在抗AML治疗后缓解组中高表达;此外,低表达LINC00987与AML患者预后不良有关。抗肿瘤药物阿糖胞苷、阿霉素、三氧化二砷和维奈托克可显著诱导AML细胞系Molm13和MV411的LINC00987表达。下调LINC00987的表达可抑制阿糖胞苷诱导的Molm13细胞凋亡。进一步研究发现,LINC00987共表达基因可富集于细胞色素P450(cytochrome,P450,CYP450)介导的氧化应激通路/网络,且LINC00987的表达与CYP450家族基因CYP11B1、CYP2U1和CYP2C9的表达水平呈正相关。下调LINC00987的表达则可抑制阿糖胞苷诱导的CYP11B1、CYP2U1和CYP2C9的mRNA表达。结论:LINC00987可以作为AML的预后标志物,其可能通过CYP450介导的氧化应激途径促进阿糖胞苷诱导的AML细胞凋亡。

细胞色素P4501A1、谷胱甘肽S-转移酶基因多态性和急性淋巴细胞白血病的关系研究

目的探讨广西地区生物代谢酶细胞色素P4501A1（CYP1A1）、谷胱甘肽S-转移酶MI（GSTM1）、谷胱甘肽S-转移酶TI（GSTT1）基因多态性和急性淋巴细胞白血病（ALL）发病的关系。方法采用病例对照研究方法，应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR—RFLP）技术对88例ALL患者以及120例健康对照者的CYPIA1MSP1多态、GSTM1和GSTT1等基因的多态分布进行分析。结果ALL组的CYP1A1基因MSP1多态纯合子突变型（C型）的频率与对照组差异有显著性（P〈0．05）．携带C型的个体患ALL的危险度比杂合子突变型（B型）与野生型（A型）个体的高（OR=1．97，95％CI：1．06～3．64）。ALL组中单一的GETM1或GSTT1缺失型分布频率与对照组相比差异无显著性（P〉0．05）。同时携带CYPIA1C型和GSTM1、GSTT1缺失型的联合基因型个体患ALL的风险增加（OR=2．20，95％CI：1．15～4．22）。结论CYP1A1基因MSP1多态C型与ALL的易感性可能有关；单一的GSTM1或GSTT1缺失型与ALL易感性可能无关。同时携带CYPIA1C型和GSTM1、GSTT1缺失基因型可能是ALL发病的易感因素之一。

细胞色素P450和谷胱甘肽S-转移酶遗传多态性与肿瘤化疗药物代谢关系研究进展

化疗是目前大多数肿瘤治疗的主要治疗手段之一,手术前或术后化疗可以延长肿瘤患者复发和生存时间。药物代谢酶基因多态性影响其酶的活性,导致不同个体对化疗药物毒副反应和疗效存在个体差异。现就药物代谢酶CYPs和GSTs多态性及其酶活性与化疗药物代谢关系研究现状作一综述。

复方曲肽注射液对细胞色素P450酶活性的体内外影响

目的考察复方曲肽注射液对细胞色素P450(CYP450)酶活性的体内外影响。方法将人肝微粒体与复方曲肽注射液(体积分数0.05%~10%)和CYP1A2、CYP2B6、CYP2C8、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6、CYP3A4的特异性探针底物共孵育30 min,采用超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)技术检测相应代谢产物的生成量,并计算半数抑制浓度(IC_(50));将人原代肝细胞与复方曲肽注射液(体积分数0.05%~10%)或CYP1A2、CYP2B6、CYP3A4阳性诱导剂共孵育48 h后,采用实时荧光定量聚合酶链式反应法测定上述酶mRNA的相对表达量(即诱导倍数)。将雄性SD大鼠随机分为对照组(生理盐水+CYP1A2、CYP2B6、CYP2C8、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6、CYP3A4探针底物8、2、1、1、10、10、8 mg/kg)和实验组(复方曲肽注射液0.9 mL/kg+CYP1A2、CYP2B6、CYP2C8、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6、CYP3A4探针底物8、2、1、1、10、10、8 mg/kg),每组6只,采用Cocktail探针药物法,以UPLC-MS/MS技术为手段,检测各探针底物的药动学参数。结果经0.05%~10%复方曲肽注射液处理后,人肝微粒体中CYP2B6、CYP2C8、CYP2C19的活性无明显变化,未能拟合出IC50;CYP1A2、CYP2C9、CYP2D6、CYP3A4的IC50分别为419.90%、97.78%、176.00%、19.42%;经0.05%~10%复方曲肽注射液处理后,人原代肝细胞(批号MHK)中CYP3A4mRNA的平均诱导倍数为4.88(且有2个浓度点的平均诱导倍数>2);经复方曲肽注射液干预后,CYP2C8、CYP2C9、CYP2C19底物的AUC0-t、AUC0-∞均显著升高,CYP2C8、CYP2C19底物的CL均显著降低,CYP2C9酶底物的t1/2显著延长(P<0.05)。结论复方曲肽注射液对人肝微粒中CYP1A2、CYP2B6、CYP2C8、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6、CYP3A4活性无明显的体外抑制作用,对人原代肝细胞中CYP3A4mRNA的表达有体外诱导作用,对大鼠CYP2C8、CYP2C9、CYP2C19活性有体内抑制作用。

植物细胞色素P450酶系的研究进展及其与外来物质的关系

植物细胞色素P45 0是分子量为 40— 60KD、结构类似的一类血红素 硫铁蛋白。它以可溶性和膜结合两种形态存在于植物细胞内 ,可催化多种化学反应 ,在防御植物免受有害物质侵害方面具有重要作用。目前已克隆 90多个植物细胞色素P45 0基因。本文概述了植物P45 0基因表达调控与环境、发育、组织特异性关系的研究进展。认为植物P45

氟喹诺酮类药物对大鼠肝微粒体细胞色素P450酶系的影响

目的比较4种氟喹诺酮类药物[左氧氟沙星(LVFX)、加替沙星(GTFX)、莫西沙星(MXFX)、帕珠沙星(PZFX)]对大鼠肝微粒体细胞色素P450(CYP450)酶系的影响。方法 30只雄性Wistar大鼠随机分为空白对照组、LVFX组(LV组)、GTFX组(GT组)、MXFX组(MX组)、PZFX组(PZ组),每组6只,给药方案为120mg/(kg.d),尾静脉注射给药,连续7d。末次给药后24h处死动物,差速离心法制备肝微粒体混悬液,Lowry法测定肝微粒体蛋白浓度,分光光度法检测肝微粒体CYP450酶系的含量及活性,并采用单因素方差分析进行统计。结果与空白对照组比较,MX组和GT组大鼠肝重明显降低(P<0.01,P<0.05),LV组、GT组和MX组大鼠肝微粒体蛋白浓度明显增加(P<0.01),LV组和GT组CYP450含量增加(P<0.05,P<0.01),GT组细胞色素b5(Cytb5)含量增加(P<0.05)。肝微粒体NADPH-CytC还原酶活性测定结果显示,给药组与空白对照组差异无统计学意义(P>0.05)。氨基吡啉-N-脱甲基酶活性测定结果显示,LV组、GT组和MX组酶活性与空白对照组比较差异均有统计学意义(P<0.01)。红霉素-N-脱甲基酶活性测定结果显示,与空白对照组比较,GT组酶活性降低,MX组酶活性升高,差异有统计学意义(P<0.01)。大鼠肝微粒体CYP450酶系亚家族活性检测结果显示,与空白对照组比较,LV组、MX组和PZ组7-苄基香豆素脱烃酶(BROD)活性升高(P<0.01),GT组7-甲氧基香豆素脱烃酶(MROD)活性降低(P<0.05)、7-苯基香豆素脱烃酶(PROD)活性增加,PZ组PROD活性降低(P<0.01),4种药物均可使乙氧基香豆素脱烃酶(EROD)活性增加(P<0.01)。结论 4种氟喹诺酮类药物对CYP450酶系均有肯定作用,对不同的酶其作用效果不同,从影响范围来看,GTFX、MXFX、LVFX和PZFX的作用依次减小。

细胞色素P450酶系及其在毒理学上的应用

综述了细胞色素P450酶系在生物有机体中催化代谢外来化合物的作用及影响因素。作为生物体内的混合功能氧化酶系统的重要组成部分,Cyt P450酶系(Cytochrome P450)在毒理学上的意义是作为早期预警系统来监测和预报环境污染状况的。在实际应用中,常以动物(多以鱼作为实验材料)肝脏中P450酶系的诱导作为评价多环芳烃、多氯联苯、二(?)(?)、石油烃类环境污染状况的最灵敏的生物学反应之一。对P450作为生化指标的优点和局限性也进行了探讨。

细胞色素P450酶系体外药物代谢研究方法进展

目的综述细胞色素P450(CYP 450)酶影响药物代谢的体外研究方法。方法参考国内外文献,对与药物代谢相关的CYP酶亚型、CYP酶种属差异、CYP酶体外反应体系、药物主要代谢酶的确认方法及体外CYP酶的抑制和诱导,进行分类、归纳和整理。结果与结论CYP 450在药物代谢中具有重要作用,药物代谢研究是新药评价体系中重要的一部分。

细胞色素P450酶系与除草剂代谢

细胞色素P45 0是广泛存在于动物、植物和微生物体内的一类具有混合功能的血红素氧化酶系。它不但能够催化苯丙烷类、萜类化合物和脂肪酸等内源性物质的生物合成 ,而且参与许多外源性物质包括除草剂等的生物氧化。综述了代谢除草剂的细菌、哺乳动物和植物细胞色素P45 0酶系 ,概述了细胞色素P45 0酶系参与除草剂代谢的作用方式 :脱烷基化作用、环甲基化羟基化作用和芳环的羟基化作用等。这些细胞色素P45 0酶系在培育除草剂抗性作物。

细胞色素P450和谷胱甘肽硫转移酶基因多态性与喉癌发生及临床预后的关系

目的 探讨代谢酶细胞色素P4 5 0 (cytochromeP4 5 0 ,CYP1A1)和谷胱甘肽硫转移酶(glutathioneS transferase ,GSTM1)基因多态性与国人喉癌的发生及临床预后的关系。方法 采用病例 对照研究的方法 ,以 89例喉癌患者及 16 4例非癌对照者的外周血白细胞为样本 ,利用聚合酶链反应(polymerasechainreaction ,PCR)技术分析了Ⅰ相代谢酶CYP1A1和Ⅱ相代谢酶GSTM1基因多态性。结果 喉癌组中CYP1A1的 3种基因型野生型 (wild type ,W)、杂合型 (wildnee +mutation ,MW )、突变型(mutate type ,M)各占 37 1%、2 7 0 %、36 0 % ,明显高于对照组 (χ2 =12 30 ,P <0 0 5 )。喉癌组中GSTM1缺失 (- )基因型频率 (5 6 2 % )高于对照组 (χ2 =4 6 1,P <0 0 5 )。联合基因型CYP1A1与GSTM1基因多态性的比较 ,则携带CYP1A1W和GSTM1(- ) ,CYP1A1MW和GSTM1(- ) ,CYP1A1M和GSTM1非缺失 (+)基因型者患喉癌的风险度分别为 1 4 2 (95 %可信区间 0 6 2～ 3 2 2 ) ,1 6 7(95 %可信区间 0 7～ 4 0 3) ,2 5 5 (95 %可信区间 1 0～ 6 5 4 ) ,而携带CYP1A1M和GSTM1(- )基因型个体患喉癌的风险度最高 ,为 4 0 2 (95 %可信区间 1 6 5～ 9 79)。吸烟与喉癌的发生有关 ,CYP1A1突变型及GSTM1缺失型与吸烟有协同作用 ,并与发病时?

细胞色素P450酶诱导和抑制效应高通量筛选系统研究进展

细胞色素P450酶(CYP450)活性的诱导或抑制,是引起临床药物代谢性相互作用的主要作用机制。目前确定候选药物出现此类相互作用可能性的主要方法是通过体外CYP450诱导和抑制潜能的快速筛选。现从CYP450诱导机制、目前发展的综合活性筛选系统和诱导筛选系统、抑制效应筛选系统以及硅上虚拟筛选系统等几个方面,对CYP450诱导和抑制效应高通量筛选系统的研究进展作一综述。

细胞色素P450酶在香精香料绿色生物合成中的应用

细胞色素P450酶是一类含亚铁血红素的蛋白超家族,来源广泛,几乎存在于所有的生命形式中。P450酶被誉为“黄金催化剂”,主要参与生物体内源物质合成、异源物质代谢及天然产物的生物合成,具有底物谱广、催化反应类型多样、催化立体专一性强等优点,使得它们在药物/毒物代谢、工程化生物合成等方面受到越来越多的关注。其中,P450酶可以实现常温、常压、中性条件下特定惰性C-H键选择性羟化,在高附加值精细化学品的生物合成中具有重要应用价值。本文介绍了P450选择性羟化的催化机制及几种常见的P450电子传递系统,并结合蛋白质工程与代谢工程,以柠檬烯含氧衍生物、诺卡酮、檀香醇、4-羟基异佛尔酮、大环内酯麝香等高附加值化合物的生物合成为例,综述了单酶催化的生物转化或全细胞从头合成的方式在天然香精香料生物合成中的探索与应用,探讨其面临的挑战并展望了其应用前景。

细胞色素P450酶代谢N-亚硝胺类化合物的反应机理研究

细胞色素P450酶在生物体内分布广泛,在有机污染物的代谢中发挥重要作用。N-亚硝胺类化合物(N-nitrosamines,NAs)在P450酶的初始催化作用下,所生成的亲电化合物易于与DNA加合,从而可能产生致畸变和致癌毒性。本研究对21种NAs的α-C上的C—H键解离能(bond dissociation energy,BDE_(C-H))和P450酶介导的α-羟基化反应的氢提取活化能(ΔE^*)进行密度泛函理论计算模拟,探讨链状和环状NAs的BDE_(C-H)和ΔE^*的规律。计算结果表明,链状NAs的BDE_(C-H)为83.8~91.6 kcal·mol^(-1)(1 kcal=4.1859 kJ),ΔE*为8.3~15.9 kcal·mol^(-1)(1 kcal=4.1859 kJ);环状NAs的BDE_(C-H)为74.4~88.6 kcal·mol^(-1)(1 kcal=4.1859 kJ),ΔE*为8.7~15.1 kcal·mol^(-1)(1 kcal=4.1859 kJ)。建立的NAs反应性模型经多元线性回归(MLR)拟合后表明模型的稳健性良好,链状NAs模型的可决系数(R^(2))=0.9,平均绝对误差(MAE)=0.8 kcal·mol^(-1)(1 kcal=4.1859 kJ),环状NAs模型的R^(2)=0.9,MAE=1.0 kcal·mol^(-1)(1 kcal=4.1859 kJ)。同时,以甲基乙烯基亚硝胺为例,理论预测P450酶代谢的环氧化反应和羟基化反应的区域选择性,从动力学和热力学角度表明2种反应均可发生。本研究开发了一种计算成本小的P450酶代谢NAs作用机制的方法,从而为NAs环境健康风险评估提供理论基础。

人细胞色素P450 1A1与谷胱甘肽S-转移酶的融合蛋白及其抗体的制备

采用融合蛋白技术原核表达 CYP1 A1 (第 2 4 1- 381个氨基酸 )与谷胱甘肽 S-转移酶 (GST)的融合蛋白作为抗原 ,用于制备 CYP1 A1多克隆抗体 .根据正反重组质粒 p GEX/ 1 A1表达的融合蛋白大小不同的原理 ,直接表达筛选得到正向重组质粒p GEX/ 1 A1 .通过优化表达条件 ,提高了目的蛋白的表达水平 .包涵体蛋白经制备型聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE)分离 ,获含纯化融合蛋白 GST- 1 A1的 PAGE凝胶 .直接用含 GST- 1 A1的凝胶悬液免疫 BALB/ c小鼠 ,自腹水中获取 CYP1 A1多克隆抗体 (1 A1 p Ab) . 1 A1 p Ab用切胶纯化的融合蛋白GST- 2 B6交叉吸收 ,蛋白 A- Sepharose亲和层析柱来纯化 .用切胶纯化的融合蛋白 GST- 1 A1及 GST-2 B6的免疫印迹反应初步鉴定 1 A1 p Ab的特异性 .纯化的 1 A1 p Ab对融合蛋白 GST- 1 A1反应特异性较强 ,但仍对 GST- 2 B6有弱交叉反应 .