细胞色素bc_1复合物的喇曼光谱研究

对提纯的细胞色素ｂｃ１复合物的氧化态和底物琥珀酸还原态两个样品进行了共振喇曼和富立叶喇曼光谱测定和比较。琥珀酸还原态与氧化态的共振谱比较明显有变化，而富立叶红外谱没有什么差别。说明呼吸链的电子传递体在氧化态与还原态交替变化进行电子传递时，蛋白总体构象不发生大的改变，而活性中心血红素辅基局部构象变化很大。

细胞色素bc_1复合物结晶的偏振拉曼光谱研究

本文报道了用５１４．５ｎｍ和４１３．１ｎｍ激光激发的细胞色素ｂｃ１复合物结晶的偏振显微共振拉曼光谱和用１０６４ｎｍ激光激发的近红外傅里叶变换偏振拉曼光谱。已观察到不同结晶取向和偏振的影响。结果表明，这些取向排列和偏振的影响和分子的对称性质和结晶的三维结构有关。它可能随着三维结构中子单元和还原中心的部位不同而改变。其对称性的不同与三维结构的不对称排列有关，也可归因于蛋白质环境电学上的不对称性。

细胞色素bc_1复合物结晶的显微共振拉曼光谱

细胞色素ｂｃ１复合物结晶的显微共振拉曼光谱何季平①岳文海①尤乃亭②李晓原②李五湖②陈震华③（①武汉工业大学材料研究与测试中心武汉４３００７０）（②香港科技大学化学系香港九龙清水湾）（③武汉大学化学系武汉４３００７２）ＭｉｃｒｏＲｅｓｏｎａｎｃｅＲａｍ...

细胞色素bc_1复合物与去脂的细胞色素bc_1复合物拉曼光谱研究

细胞色素ｂｃ１复合物与去脂的细胞色素ｂｃ１复合物拉曼光谱研究朱克莉潘平雪徐建兴（中国科学院生物物理所北京１００１０１）ＳｔｕｄｙｏｎＣｙｔｏｃｈｒｏｍｅｂｃ１ＣｏｍｐｌｅｘａｎｄＬｉｐｉｄ－ＤｅｐｌｅｔｅｄＣｙｔｏｃｈｒｏｍｅｂｃ１Ｃｏｍｐｌｅｘｗｉ...

细胞色素BC_1酶复合物抑制剂的对接研究

细胞色素BC1酶复合物是细胞呼吸和光合作用的重要组成部分,也是抑制病菌的重要靶标.细胞色素BC1酶复合物的抑制剂在近几年来的应用越来越广.为了得到活性更高的抑制剂,本文采用分子对接技术(DOCK4.0),对8个典型结构的此类抑制剂进行了对接,并通过分析结合能与活性的相关性,得到了较好的构效关系模型,相关系数R2=0.75.在此基础上,设计了4个新的抑制剂,均具有较高的预测活性.所建立的模型将为研究新的细胞色素BC1酶复合物抑制剂提供一定的理论指导.

细胞色素bc_1复合物的结晶和显微红外光谱研究

研究了一种简便的适于膜蛋白结晶的好方法,并已用这种方法得到了较大的牛心线粒体细胞色素bc_1复合物的红色晶体.它们封装在玻璃毛细管中放置在冰箱中其形状可长期保持不变.首次用显微Fourier变换红外光谱研究了细胞色素bc_1复合物结晶的结构.参照细胞色素c的红外光谱,对细胞色素bc_1复合物的红外特征频率进行了经验式的归属和指认.不同部位,不同取向结晶的红外频率和相对强度存在明显差异,说明这种膜蛋白结晶的红外光谱特征与其结构的对称性和取向有关.实验结果表明,细胞色素bc_1复合物结晶中存在着磷脂.膜蛋白可能以不对称方式跨接在线粒体膜的磷脂双层中.

内蒙古地区蒙古族VKORC1-1639 G/A和CYP2C9基因多态性与华法林应用剂量关系的研究

目的探讨内蒙古地区蒙古族维生素K环氧化物还原酶复合物1(VKORC1)-1639 G/A及CYP2C9基因多态性分布特点及对华法林应用剂量的影响。方法选择300例蒙古族心房颤动病人(蒙古族组)和300例汉族心房颤动病人(对照组),PCRRFLP法检测两组VKORC1-1639 G/A及CYP2C9基因型分布,同时记录华法林剂量及国际标准化比值(INR)。计算不同VKORC1及CYP2C9基因型间平均校正华法林剂量。结果蒙古族组VKORC1-1639 AA、AG、GG基因型分布频率分别为78%、18%、4%;等位基因A和G频率分别为87%、13%。对照组VKORC1-1639 AA、AG、GG基因型分布频率分别为79%、19%、2%;等位基因A和G频率分别为86%、14%。蒙古族CYP2C9*1/*1型276例,CYP2C9*1/*3型24例。汉族CYP2C9*1/*1型279例,CYP2C9*1/*3型21例。不同VKORC1、CYP2C9基因型房颤病人华法林用量不同,VKORC1 AA型并CYP2C9*1/*1型和VKORC1 AG型并CYP2C9*1/*1型病人华法林日用量均高于VKORC1 AA型并CYP2C9*1/*3型病人;VKORC1 AG型并CYP2C9*1/*1型病人华法林用量高于VKORC1 AA型并CYP2C9*1/*1型病人,3组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论蒙古族与汉族基因型VKORC1-1639 G/A及CYP2C9一致,多态性均为VKORC1-1639 AA及CYP2C9*1/*1型均占多数,不同基因型影响个体间华法林的维持应用剂量。

检测VKORC1、CYP2C9^(*)3基因多态性指导急性肺血栓栓塞症患者华法林抗凝治疗的价值

目的探讨维生素K环氧化物还原酶复合物1(VKORC1)、细胞色素P450酶2C9^(*)3(CYP2C9^(*)3)基因多态性检测在指导急性肺血栓栓塞症(PTE)患者接受华法林抗凝治疗中的临床价值。方法回顾性收集2016年1月~2018年12月四川大学华西医院呼吸与危重症医学科住院接受华法林抗凝治疗的411例成人PTE患者为研究对象。根据是否行VKORC1、CYP2C9^(*)3基因多态性检测并据此制定华法林初始剂量及调整方案分为指导组(基因检测指导组,n=119)和对照组(常规处理组,n=292)。以开始使用华法林到国际标准化比值(INR)第一次达标(2-3)的时间(d)为主要观察指标;以稳定时(INR 2-3)的华法林维持剂量为次要观察指标,比较两组差异。随访两组自接受华法林抗凝开始到第6个月末时的不良反应。结果基因多态性,VKORC1以AA野生型多见(n=89,74.8%);其次为GA杂合突变型(n=29,24.4%);纯合突变GG型仅1例(0.8%)。CYP2C9^(*)3野生型(AA型)为106例(89.1%);杂合突变(AC型)13例(10.9%)。从两个基因多态性组合看,VKORC1 AA型合并CYP2C9^(*)3 AA型81例,占68.1%,即大部分患者两个基因均为野生型;其次为VKORC1 GA型合并CYP2C9^(*)3 AA型24例(20.2%);VKORC1、CYP2C9^(*)3均突变的5例(4.20%)。指导组INR达到目标范围的时间为(7.96±4.02)d,对照组INR达标的时间为(7.68±3.58)d,二者无统计学差异(P>0.05);指导组达到目标INR的华法林维持剂量为(5.30±0.99)mg,对照组的华法林维持剂量为(5.22±0.64)mg,二者无显著性差异(P>0.05)。两组患者出现死亡、大出血、新发血栓的不良事件发生率均无统计学意义(均P>0.05)。结论VKORC1、CYP2C9^(*)3基因多态性检测在指导急性PTE患者接受华法林抗凝治疗中的意义有限。

UQCRC1在结直肠癌组织中的表达及其与血清CEA的相关性

目的:探讨结直肠癌组织中泛醌-细胞色素c还原酶复合物核心蛋白1(UQCRC1)的表达及其与血清癌胚抗原(CEA)的相关性。方法:收集52例结直肠癌组织蜡块及37例癌旁组织蜡块,采用免疫组化SP法检测UQCRC1的表达水平,分析其表达与结直肠癌临床病理特征以及血清CEA值的相关性。结果:UQCRC1在癌组织中表达下调率为30.8%,在癌旁正常组织中表达下调率为10.8%,两者差异有统计学意义(χ2=4.94,P<0.05)。且其表达与结直肠癌淋巴结转移有关,伴有淋巴结转移的病人阴性表达率(45.5%)高于不伴有淋巴有转移的病人(20.0%),两者差异有统计学意义(P<0.05);癌组织中UQCRC1表达与术前血清CEA水平呈负相关(r=-0.300,P<0.05)。结论:UQCRC1在结直肠癌中的表达下调在肿瘤发生、发展中发挥重要作用,联合血清CEA可为结直肠癌的病情评估提供理论依据。

细胞色素C诱导HL-60细胞凋亡时bc1-2fas基因的表达

目的观察细胞色素C对急性髓系白血病M2型（AML-M2）（HL-60细胞）bc1-2、fas表达的影响，探讨细胞色素C诱导HL-60细胞凋亡的机制。方法将体外培养的HL-60细胞分成六组，细胞色素C终浓度分别为0（对照组）、9．375mg／L、18．75mg／L、37．5mg／L、75mg／L、150mg／L，用流式细胞仪检测细胞色素C对HL-60细胞的凋亡效应，用RT-PCR、westernblotting检测以凋亡为主的HL-60细胞中bc1-2、fas的表达水平。结果流式细胞仪检测表明细胞色素C终浓度分别为0、9．375mg／L、18．75mg／L、37．5mg／L时HL-60细胞是以凋亡效应为主的，bc1-2基因的mRNA和蛋白的表达随着细胞色素C浓度的增高而降低，fas基因的mRNA和蛋白的表达随着细胞色素C浓度的增高而增高，当细胞色素C浓度为75mg／L、150mg／L时，HL-60细胞是以坏死效应为主的。结论细胞色素C能够下调bc1-2mRNA及其蛋白的表达，上调fas mRNA及其蛋白的表达，从而可以诱导HL-60细胞的凋亡。

CYP2C9和VKORC1基因多态性对高龄非瓣膜性心房颤动病人华法林维持剂量的影响

目的探讨细胞色素P450(CYP)2C9与维生素K环氧化物还原酶复合物1(VKORC1)基因多态性对高龄非瓣膜性心房颤动病人华法林维持剂量的影响。方法选取40例≥80岁非瓣膜性心房颤动病人为研究对象,记录病人的性别、年龄及华法林稳定给药剂量。采用数字荧光分子杂交测序技术检测病人的CYP2C9及VKORC1基因型,根据国际华法林药物基因组联合会(IWPC)公式计算出病人的华法林服用理论剂量。结果男性病人与女性病人的华法林日均剂量差异无统计学意义[(2. 16±0. 75)mg比(2. 00±0. 47)mg,P> 0. 05]。CYP2C9-1075 A/C基因型中,AA型33例,CA型7例;AA型病人的华法林理论剂量明显高于CA型病人(P <0. 01);但两者的实际用量差异无统计学意义(P=0. 601)。VKORC1-1639 A/G基因型中,AA型33例,GA型7例;GA型病人的华法林理论剂量和实际用量均明显高于AA型病人(P <0. 05)。CYP2C9-1075 AA+VKORC1-1639 GA基因型病人的华法林实际用量明显高于CYP2C9-1075 CA+VKORC1-1639 AA基因型病人(P <0. 05),但其他组合基因型的华法林实际用量差异均无统计学意义(P> 0. 05)。结论 VKORC1基因多态性是影响高龄老人华法林维持剂量的重要遗传因素,可根据病人基因型的不同合理分配华法林剂量。

CYP2C9和VKORC1基因多态性对华法林剂量的影响研究

目的探究细胞色素氧化酶2C9(CYP2C9)基因和维生素K环氧化物还原酶复合物1基因(VKORC1)-1639 G/A多态性对华法林初始抗凝剂量的影响。方法 200例使用华法林患者,观察患者使用华法林5~7 d后凝血酶原时间(PT)和国际标准化比值(INR),记录患者服用华法林初次达标天数、总用量和平均每日用量,同时测定患者CYP2C9位点基因型(*1、*2、*3)和VKORC1-1639位点基因型(AA、AG、GG)。结果 CYP2C9*1、CYP2C9*2/*3 VKORC1-1639 AG/GG基因型患者初次达标天数分别为(14.47±1.52)、(9.77±0.91)d,总用量分别为(115.13±11.47)、(56.31±5.49)mg,平均每日用量分别为(5.22±0.53)、(4.36±0.44)mg, CYP2C9*1、CYP2C9*2/*3 VKORC1-1639 AA基因型患者初次达标天数分别为(9.24±0.94)、(5.37±0.52)d,总用量分别为(52.37±5.14)、(15.56±1.42)mg,平均每日用量分别为(3.02±0.35)、(3.21±0.36)mg;CYP2C9*1、CYP2C9*2/*3 VKORC1-1639 AG/GG基因型患者初次达标天数均长于CYP2C9*1、CYP2C9*2/*3 VKORC1-1639 AA基因型患者,总用量及平均每日用量均大于CYP2C9*1、CYP2C9*2/*3 VKORC1-1639 AA基因型患者,差异有统计学意义(P<0.05)。结论对于服用华法林的患者,对CYP2C9、VKORC1-1639基因多态性的测定具有重要指导价值,能帮助临床实施个体化用药,值得临床应用与推广。

柔嫩艾美耳球虫Cytbc1基因的克隆、序列分析及重组表达

为研究柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)细胞色素bc 1复合物(cytochrome bc1,Cytbc1)的生化特性,本研究对其基因进行了克隆和原核表达。根据EupathDB已公布的E.tenella Houghton株Cytbc1基因序列(Contig ID:ETH 00007855)设计特异性引物,运用RT-PCR方法扩增EtCytbc1基因序列,并将其克隆到表达载体pCold43a中,构建重组质粒pCold43a-EtCytbc1,经测序鉴定正确后,将其转化感受态细胞E.coli Rosetta(DE3),并进行IPTG诱导表达。结果表明,EtCytbc1的ORF序列(687bp),编码228个氨基酸;重组菌pCold43a-EtCytbc1能成功诱导表达,pCold43a表达部分可溶性蛋白,表达产物纯化后可用于酶生化特性分析。柔嫩艾美耳球虫Cytbc1基因的成功克隆表达为该酶的功能研究奠定了基础。

基因导向华法林个体化治疗

人体对药物的反应存在巨大的个体差异,体重相近的两个人给予相同剂量的药物,他们各自的血浆药物浓度水平可能相差10倍以上。药物相互作用、药物与食物相互作用、性别、年龄、疾病状态(即肾脏和肝脏的功能)以及妊娠都可能引发药物反应的个体差异。遗传因素也可能起到了重要作用,因为每个个体对药物的反应具有高度可再现性。药物基因组学是研究遗传性及获得性基因变异对药物反应作用的一门学科。证实影响药物吸收、代谢以及作用(在受体水平时)的遗传机制,使个体化治疗成为可能,使药物疗效最优化,药物的毒性最小化。本研究将以华法林为例,综述华法林药物基因组学的研究现状,为临床合理用药提供依据。

可用于抗性治理杀菌剂Fenpicoxamid

Fenpicoxamid是陶氏益农公司联合日本明治制药株式会社发现,为吡啶酰胺类杀菌剂,是从链霉菌属放线菌517–02发酵液分离的天然抗菌化合物UK-2A(图1)的羧甲基醚衍生物[1]。此物质主要用于谷物作物,但也可用于其他作物。吡啶酰胺类是谷物杀菌剂市场中具有新颖生化作用机制的杀菌剂,与甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂作用于线粒体Qo位点不同,其作用于Qi位点,抑制线粒体电子传递链细胞色素bc1复合体的活性,与甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂没有交互抗性,对抗甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂和三唑类等其他类杀菌剂的真菌有优异的防效,是抗性管理的新的强有力工具。

VKORC1-1639 G/A、CYP2C9~*3基因多态性对华法林使用剂量的影响

目的基于VKORC1-1639 G/A及CYP2C9^*3的基因多态性初步探讨华法林的使用剂量。方法收集2016年10月—2018年2月进行华法林用药指导相关基因检测的100例患者,记录患者基本信息(身高、体质量等)。采用数字荧光分子杂交检测VKORC1-1639 G/A,CYP2C9^*3的基因型分布,并结合患者年龄、身高、体质量等,根据国际华法林药物基因组学联合会(IWPC)公式计算患者华法林理论剂量。结果VKORC1-1639 G/A AA、AG、GG基因型实际频率分别为84%,15%,1%;等位基因A,G频率分别为91.5%,8.5%。CYP2C9^*3 AA型、AC型、CC型实际频数分别为91%,9%,0%;等位基因A,C频率分别为95.5%,4.5%。不同VKORC1-1639 G/A、CYP2C9^*3基因型华法林理论用量不同,VKORC1-1639 G/A AA型并CYP2C9^*3 AA型和VKORC1-1639 G/A AG型并CYP2C9^*3 AA型患者华法林剂量均高于VKORC1-1639 G/A AA型并CYP2C9^*3 AC型患者;VKORC1-1639 G/A AG型并CYP2C9^*3 AA型患者华法林用量高于VKORC1-1639 G/A AA型并CYP2C9^*3 AA型患者,3组间两两比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论华法林代谢相关基因的基因多态性为VKORC1-1639 G/A AA及CYP2C9^*3 AA型占多数,表明VKORC1-1639 G/A基因突变率高,CYP2C9^*3基因突变率较低,且两者多态性影响个体间华法林的理论剂量。

遗传因素对华法林维持剂量影响的研究现状

华法林是最常应用的口服抗凝药物之一。许多研究已证实华法林维持剂量的个体差异与基因型密切相关,尤其是细胞色素P450 2C9(CYP2C9)和维生素K环氧化物还原酶复合物1(VKORC1)的基因型对华法林的影响受到广泛认同;尽管还有其他很多基因型被报道与华法林剂量有关,但其具体影响结论不一。研究发现纳入基因信息和临床数据的剂量计算公式可预测华法林的维持剂量,由于目前已开展的临床试验结果不一,其实用性亦受到质疑。下一步研究需要更大样本量及多中心的研究,以期进一步阐释遗传与非遗传因素对华法林剂量的影响,同时对已构建的模型进行验证或构建新模型,提高对华法林个体差异的解释百分比。

基因多态性预测华法林维持剂量的研究进展

华法林是最常应用的口服抗凝药物之一。许多研究已证实华法林维持剂量的个体差异与细胞色素P450 2C9(CYP2C9)和维生素K环氧化物还原酶复合物1(VKORC1)的基因型密切相关。纳入基因信息和临床数据的剂量计算公式可预测华法林的维持剂量。但目前已开展的临床试验结果不一,对其实用性提出了质疑。虽然现有证据并不支持采用基因型分析指导华法林维持剂量,但在有条件的机构针对特定族群开展基因型检测也不失为一种合理的选择。目前正在进行的试验有望提供更多数据,下一步研究需要在剂量公式中纳入适用于少数人群的变量。所有这些工作将进一步完善临床应用基因型检测指导华法林剂量这一新型的治疗模式。

过表达线粒体铁蛋白在由6-OHDA诱导的帕金森模型中的保护机制的研究

帕金森病是一种和年龄相关的神经退行性疾病,其特征是多巴胺能神经元的特异性退行性病变。一些神经毒剂如6-羟多巴胺(6-OHDA)

基于基因多态性初步分析华法林的使用

基于VKORC1-1639 G/A及CYP2C9~*3的基因多态性初步探讨华法林的使用,收集2016年10月2018年2月至该院进行华法林用药指导相关基因检测的100例患者,记录患者基本信息(身高、体重等)。采用数字荧光分子杂交(DFMH1)检测VKORC1-1639 G/A,CYP2C9~*3的基因型分布,并结合患者年龄、身高、体重等,根据国际华法林药物基因组学联合会(IWPC)公式计算患者华法林初始剂量。VKORC1-1639 G/A AA、AG、GG基因型实际频率分别为84%,15%,1%;等位基因频率A(91. 5%),G(8. 5%)。CYP2C9~*3 AA型、AC型、CC型实际频数分别为91%,9%,0%;等位基因频率A(95. 5%),C(4. 5%)。不同VKORC1-1639 G/A、CYP2C9基因型华法林用量不同,VKORC1-1639 G/A AA型并CYP2C9~*1/~*1型和VKORC1-1639 G/A AG型并CYP2C9~*1/~*1型患者华法林剂量均高于VKORC1-1639 G/A AA型并CYP2C9~*1/~*3型患者; VKORC1-1639 G/A AG型并CYP2C9~*1/~*1型患者华法林用量高于VKORC1-1639 G/A AA型并CYP2C9~*1/~*1型患者,3组比较,差异有统计学意义(P <0. 05)。华法林代谢相关基因的基因多态性为VKORC1-1639 G/A AA及CYP2C9~*1/~*1型占多数,表明VKORC1-1639 G/A基因突变率高,CYP2C9~*3基因突变率低,且其多态性影响个体间华法林的使用剂量,但不同性别个体间华法林初始剂量大致为3 mg/d。