海南省三亚地区蚊虫细胞融合病毒鉴定与分析

目的了解海南省三亚地区蚊虫携带细胞融合病毒现况。方法在2018-2019年蚊虫活动高峰期采集三亚地区蚊虫,前期运用高通量测序的方法获得了1份细胞融合病毒核酸序列,本研究根据已测序结果设计特异引物,通过RT-PCR扩增伊蚊细胞融合病毒目的片段及测序,检测蚊虫携带的细胞融合病毒阳性率,运用MEGA 7.0软件对所得病毒基因核酸序列与Genbank中已知细胞融合病毒参考序列进行遗传进化分析。结果共采集290只蚊虫,其中从224只白纹伊蚊中仅扩增得到1份细胞融合病毒(CFAV-NS3-SY1),致倦库蚊(26只)和三带喙库蚊(40只)均未检测到该病毒,蚊媒活动高峰期蚊虫带毒率为0.34%。该病毒NS3基因系统发育分析发现CFAV-NS3-SY1与分离自法国马赛的病毒株(AF411835)遗传关系最近,相似度为99.84%,因此可以将这株病毒界定为白纹伊蚊细胞融合病毒。结论三亚地区白纹伊蚊携带细胞融合病毒,应增加样本量持续开展蚊虫携带病原体监测。

细胞融合病毒全长cDNA克隆的构建与鉴定

目的分析细胞融合病毒基因组同源性,构建细胞融合病毒全长cDNA克隆,为进一步构建该病毒株的感染性全长cDNA克隆奠定基础。方法通过DNAstar和Mega7.0构建了细胞融合病毒的系统发生树,对其基因和氨基酸序列同源性进行分析比对。选取细胞融合病毒Galveston株的全基因序列,通过体外基因合成的手段获得覆盖病毒全基因的3个DNA片段,并分别克隆至p BR002载体。利用限制性内切酶和T4连接酶将分片段基因组连入pACNR载体,最终获得含有pACNR的细胞融合病毒Galveston全长cDNA克隆。根据Galveston病毒株基因组序列和pBR002载体的序列,利用DNAstar及Oligo6软件设计5对引物,用来对其连接处进行测序及鉴定。结果与结论构建了细胞融合病毒系统发生树,明确了其进化地位和其他黄病毒的同源性关系。构建出细胞融合病毒Galveston株全长cDNA克隆,经过酶切鉴定和序列测定表明所获得cDNA克隆为该病毒的全长序列。

合成环肽抑制HIV-1病毒介导的细胞融合的初步研究

目的鉴定合成环肽FJ-08是否抑制HIV-1病毒介导的细胞融合。方法固相合成环肽FJ-08(SACYWWHRLHCGGGS),将合成肽与BSA载体交联,ELISA检测交联物与源于HIV-1gp41N螺旋的合成肽N36结合,细胞融合抑制实验检测FJ-08抑制H9/HIVIIIB细胞与MT-2细胞的融合。结果ELISA鉴定表明FJ-08-BSA与N36肽结合。与无关肽比较,细胞融合抑制实验显示在2h内,80#g/ml的FJ-08肽具有抑制融合作用,呈现浓度依赖效应。结论FJ-08合成肽可抑制HIV-1介导的细胞融合。

新城疫病毒F蛋白七肽重复序列(HR)三螺旋HR212蛋白的抗体抑制病毒和细胞融合

膜融合是囊膜病毒侵染过程中的一个关键步骤,新城疫病毒(NDV)融合蛋白(F)中两个高度保守的七肽重复序列—HR1和HR2是病毒膜融合过程中的重要功能结构域,在膜融合不同时期表现出不同的构象,因此可能是产生中和抗体反应的潜在的靶目标．作者曾发现HR2多肽和稳定的三螺旋蛋白HR2-HR1-HR2(HR212)能够抑制新城疫病毒(NDV)与细胞的融合．文中证实HR212蛋白在家兔中能引发很强的免疫反应,所产生的抗体可识别HR1和HR2多肽序列,并能抑制NDV和鸡红细胞的血凝反应,以及抑制病毒和细胞的融合．研究结果说明NDV HR212复合体在作为病毒和细胞融合的抑制物的同时,所产生的抗体也可以阻断病毒的侵染．