SIX2在骨肉瘤组织中表达及其对细胞血管生成与阿霉素耐药逆转的影响

目的 探究SIX2在骨肉瘤组织中表达及其对细胞血管生成与阿霉素耐药逆转的影响。方法 收集2019年3月—2021年12月我院行骨肉瘤手术切除的105例患者的组织标本,免疫组化检测骨肉瘤组织中SIX2表达和微血管密度(MVD)计数;检测骨肉瘤组织中SIX2 mRNA表达水平。将人骨肉瘤细胞系MG-63分为MG-63组、si-NC A组、si-SIX2 A组,将通过阿霉素耐药得到的骨肉瘤阿霉素耐药细胞株MG-63/R分为MG-63/R组、si-NC B组和si-SIX2 B组。分别用MTT法、克隆实验、流式细胞术及Transwell法检测细胞耐药性、细胞增殖、细胞凋亡和细胞侵袭。结果 在骨肉瘤组织中,SIX2阳性表达会随着MVD值升高而增加(P<0.05)。骨肉瘤组织中SIX2阳性表达与TNM分期、软组织浸润和淋巴结远处转移相关(P>0.05)。与MG-63组相比,si-SIX A组细胞的血管形成能力明显降低(P<0.05);与MG-63/R组相比,si-SIX2 B组细胞IC50、细胞克隆数和细胞侵袭能力均显著降低,细胞凋亡能力明显增加,细胞耐药指数逆转倍数为2.51倍(P<0.05)。结论 SIX2在骨肉瘤组织中呈高表达,且随着SIX2表达的升高肿瘤血管生成能力也增加;抑制SIX2表达可有效抑制骨肉瘤组织的生成,逆转骨肉瘤细胞阿霉素耐药。

间歇性缺氧大鼠早期动脉粥样硬化中血管生成性T淋巴细胞的表达变化

目的:探讨慢性间歇性缺氧(chronic intermittent hypoxia,CIH)暴露下,发生早期动脉粥样硬化血管病变时,大鼠外周血中血管生成性T淋巴细胞(angiogenic T lymphocyte,Tang)水平的变化。方法:将健康成年Sprague Dawley(SD)大鼠随机分为2组:正常饲养组(RA组)和慢性间歇性缺氧组(IH组),其中IH组接受间歇性缺氧暴露,每天8 h,共6周。间歇性缺氧模式设定为:每2 min 1个循环,40 s内向仓内充入氮气使氧气浓度从21%降到8%并稳定20 s,然后充入正常空气使氧气浓度在40 s内恢复到21%并维持20 s。造模完成后,使用流式细胞法检测Tang及内皮祖细胞(endothelial progenitor cell,EPC)水平;ELISA法检测高密度脂蛋白胆固醇(high-density lipoprotein cholesterol,HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C)、总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglycerides,TG)及同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy);HE染色观察胸主动脉病理改变并测量动脉内中膜厚度(intima-media thickness,IMT)。结果:流式结果显示,与RA组相比,IH组小鼠Tang水平显著升高[(22.975±1.866)%vs.(15.713±1.746)%,P<0.001],EPC水平差异无统计学意义[(0.040±0.028)%vs.(0.028±0.012)%,P>0.05];HE染色结果显示,IH组小鼠IMT比RA组显著增厚[(121.275±30.896)μm vs.(84.075±7.452)μm,P<0.05];ELISA实验表明,与RA组比,IH组Hcy水平显著升高[(6.2±0.6)μmol/L vs.(5.5±0.6)μmol/L,P<0.05],但HDL-C、LDL-C、TC、TG水平差异无统计学意义。结论:CIH大鼠血管发生了动脉粥样硬化早期病变,同时Tang细胞水平升高,提示Tang细胞水平与早期动脉粥样硬化的发生发展有关。

人促血液血管细胞生成素的原核表达及兔抗体的制备

目的:表达人促血液血管细胞生成素(hemangiopoi-etin,HAPO)蛋白并制备兔抗HAPO抗体。方法:利用硫氧还原蛋白TrxA融合表达载体(pET32c),表达可溶性HAPO。表达的HAPO融合蛋白经亲和层析快速纯化,并通过Westernblot进行鉴定。以纯化的人HAPO免疫新西兰大白兔,制备抗体并测定其效价。结果:获得高效表达并纯化的HAPO蛋白。制备的兔抗人HAPO抗体的免疫双扩散的效价为1∶8。结论:建立了HAPO基因的原核表达载体和快速纯化体系并制备出兔抗HAPO的抗体,为研制检测HAPO的ELISA试剂盒奠定了基础。

人促血液血管细胞生成素对内皮细胞粘附功能的影响

目的研究人促血液血管细胞生成素(HAPO)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)粘附功能的影响。方法采用结晶紫粘附实验、流式细胞术和半定量RT-PCR方法检测HUVEC的粘附性和粘附分子CD54、CD102、CD106、CD31、CD62E和CD62P的表达。结果HAPO以剂量依赖性方式增加HUVEC的总粘附性。HAPO能显著促进HUVEC表面粘附分子CD106和CD62E表达,并呈时间依赖性。HAPO作用HUVEC6h后,CD106和CD62E的阳性率分别为(80·83±2·22)%和(22·77±2·59)%,是各自对照组的2·10倍和5·84倍,且转录水平和蛋白质水平一致。CD106和CD62E的最高转录水平分别为对照组的1·86倍和6·16倍。结论HAPO可能对造血干/祖细胞归巢有一定促进作用。

血液血管细胞生成素对胎儿骨髓造血和内皮干细胞作用的研究

目的研究人血液血管细胞生成素(hemangiopoietin,HAPO)对胎儿骨髓细胞的作用,探讨其生物学特性。方法采用细胞液体培养、半固体培养、MTT方法、免疫荧光标记流式细胞仪测定、免疫组化、显微镜观察照相等方法。结果在液体培养3周的胎儿骨髓单个核细胞中,HAPO组中出现了大量小而圆的早期造血细胞,其中CD34+细胞含量比对照组高20%,对照组CD34+细胞为1.25×105个,而HAPO组CD34+细胞为3.93×106个。取胎儿骨髓悬浮造血细胞进行半固体培养,对照组不能形成CFU-GEMM,而HAPO组形成CFU-GEMM数达到(11.0±2.6)个;HAPO也协同SCF、IL-3、GM-SCF等生长因子促进集落形成,CFU总数是对照组2.6倍,CFU-GEMM数HAPO组是对照组2.1倍。MTT方法发现,HAPO对胎儿骨髓基质细胞也有促增殖作用,HAPO可使基质细胞增长21%;液体培养的胎儿骨髓基质细胞中,有内皮特异性标志的细胞均增高;在甲基纤维素半固体培养中HAPO使胎儿骨髓内皮细胞的集落数增高,并出现条索状排列的集落,有促进血管形成的趋势。进一步证明HAPO可直接促进CD34+KDR+细胞的增殖。结论HAPO对骨髓造血和血管内皮干细胞均有刺激增殖作用。

免疫相关的巨噬细胞和髓样血管生成细胞在视网膜新生血管发生发展中的作用

视网膜新生血管是许多致盲性眼病主要的病理学改变,病因复杂,发病机制尚未阐明,治疗棘手。近年来大量研究证实,免疫相关的巨噬细胞和髓样血管生成细胞在其发生发展中发挥着重要作用,本文对此进行相关综述。

巨噬细胞移动抑制因子、血管生成素-2、血管内皮生长因子在子宫内膜异位症中的意义

目的：观察巨噬细胞移动抑制因子（MMIF）、血管生成素-2（Ang -2）、血管内皮生长因子（VEGF）在子宫内膜异位症（EMs）检测中的临床意义。方法选取2011年1月至2014年6月经病理确诊的 EMs 患者98例，为异位内膜组。按照美国生殖协会分期标准（R - AFS）分期分为Ⅰ期26例、Ⅱ期29例、Ⅲ期22例和Ⅳ期21例；按照痛经评分0~1分57例和2~3分42例。选择同期确诊的良性肿瘤患者30例为在位内膜组。同时选择同期体检的健康妇女30例，为健康对照组。观察各组血清 MMIF、VEGF 和 Ang -2水平，以及 MMIF、VEGF 和 Ang -2水平与 EMs 分期和痛经评分的关系。结果异位内膜组和在位内膜组的 MMIF、VEGF 和 Ang -2水平明显高于正常对照组（ P 〈0.01），而异位内膜组的 MMIF、VEGF 和 Ang -2水平明显高于在位内膜组（ P 〈0.01）。EMs 患者的 MMIF、VEGF 和 Ang -2水平随着r - AFS 分期级别和痛经评分的升高而升高（ P 〈0.05或 P 〈0.01）。结论 MMIF、VEGF 和 Ang -2参与了 EMs 的发生和发展，有望成为 EMs 诊断和靶向治疗提供新的思路。

人血液血管细胞生成素的胎肝免疫印记检测

目的:制备一种新蛋白——人血液血管细胞生成素(hemangiopoietin,HAPO)的单克隆抗体,检测其在胎肝中的表达。方法:杂交瘤方法制备抗HAPO的单克隆抗体;非竞争酶联免疫吸附实验测定抗体的相对亲和力;蛋白G亲和层析纯化腹水中的抗体,免疫印记方法检测胎肝中天然HAPO的表达。结果:所获单抗分别为IgG1及IgM,其轻链均为κ。三株IgG1亚类单抗的相对亲和力分别为3.06×109mol/L,6.07×108mol/L和1.71×1010mol/L。亲和纯化后抗体的纯度达99%以上。胎肝中在蛋白水平上可以检测到HAPO的表达,天然HAPO的分子量接近于重组HAPO的分子量。结论:人胚胎肝组织中在蛋白水平上可以检测到HAPO的表达。

人促血液血管细胞生成素的高效表达和快速纯化

目的构建人促血液血管细胞生成素(HAPO)的表达载体,获得纯化的HAPO蛋白并研究其生物学功能。方法通过PCR方法扩增人HAPO基因,克隆于不同的原核表达载体,ITPG诱导融合蛋白表达。NTA层析柱纯化融合蛋白,再经肠激酶裂解融合蛋白,阳离子交换层析纯化,得到纯化的重组蛋白。用培养的MO7e和ECV-304细胞检测蛋白活性。结果HAPO可在pET32C中,获得稳定高效的可溶性表达。在E coli BL21(DE3)中,HAPO表达量可占菌体总蛋白的10%左右。重组蛋白80%是以可溶性蛋白形式存在。NTA层析柱纯化得到的HAPO融合蛋白,再经肠激酶裂解,阳离子交换层析纯化,得到90%以上纯度的重组HAPO蛋白,并且具有良好的生物学活性。结论得到具有90%以上纯度的重组HAPO蛋白,而且,对MO7e和ECV-304细胞具有促增殖的作用。我们获得了纯化的人重组HAPO蛋白,为进一步研究其功能及临床应用打下基础。

血管生成性T淋巴细胞与动脉粥样硬化危险因素相关性研究进展

血管生成性T淋巴细胞(Tang)是一类T细胞亚群,表面标志物包括CD3、CD31、CXCR4,通过诱导缺血组织新生血管形成和激活损伤血管再内皮化维持血管平衡。血液中血管生成性T淋巴细胞的水平与年龄、血脂异常、糖尿病、体力活动减少及睡眠呼吸暂停低通气综合征等动脉粥样硬化的危险因素相关,可能参与动脉粥样硬化的发生发展。

孕中晚期子痫前期患者血清抗米勒管激素、整合素β1水平与子宫螺旋动脉血流参数及血管内皮细胞损伤指标的相关性

目的:探讨孕中晚期子痫前期患者血清抗米勒管激素(AMH)、整合素β1(ITGβ-1)水平与子宫螺旋动脉血流参数、血管内皮细胞(VEC)损伤指标的相关性。方法:选取2019年3月-2021年3月本院收治的孕中晚期子痫前期患者96例为观察组,产前检查健康孕妇96例为对照组,检测血清AMH、ITGβ-1、子宫螺旋动脉血流参数(PI、RI、S/D)、内皮祖细胞(EPCs)及血管生成性T细胞(Tang),并分析其相关性。结果:观察组AMH(1.62±0.15 ng/ml)、ITGβ-1(0.05±0.02)水平均低于对照组(2.44±0.17 ng/ml、0.18±0.03),子宫螺旋动脉血流参数水平均高于对照组,EPCs(0.08±0.03)%、Tang(47.31±8.57)%水平均低于对照组(0.16±0.05)%、(53.61±7.95)(均P<0.05);AMH、ITGβ-1水平与子宫螺旋动脉血流参数均呈负相关,与VEC损伤指标均呈正相关(均P<0.05)。结论:孕中晚期子痫前期患者血清AMH、ITGβ-1水平异常变化,且与子宫螺旋动脉血流参数及VEC损伤指标均相关。

血管内皮生长因子过表达对肺癌生成及转归的影响

目的研究血管内皮生长因子(VEGF)在非小细胞肺癌的阳性表达影响肺癌进展和预后的作用机制。方法应用免疫组化SABC染色法检测40例原发性支气管肺癌标本中VEGF的阳性表达、微血管密度(MVD)计数,评价VEGF和MVD的关系、VEGF与非小细胞肺癌临床病理参数之间的关系。结果VEGF在非小细胞肺癌组织中呈现阳性高表达,其含量及阳性表达与肿瘤大小和淋巴结转移密切相关。肿瘤直径越大、已有淋巴结转移,则VEGF含量和表达越高。在VEGF表达阳性的癌组织中MVD值明显高于VEGF阴性表达的肺癌组织,差异具有统计学意义。结论VEGF通过调节和诱导肺癌微血管的生成而促进非小细胞肺癌的发展,它可作为评估非小细胞肺癌恶性程度、淋巴结转移潜能和预后的重要监测指标之一。

炎性反应及血管生成相关指标与子痫前期相关性研究

目的探讨晚期糖基化终末产物(AGE)、晚期糖基化终末产物受体(RAGE)、内皮祖细胞(EPC)、血管生成性T淋巴细胞(Tang)与子痫前期的相关性。方法选择2013年12月至2015年6月该院收治的子痫前期患者50例,按病情程度分为轻度子痫前期组(Ⅰ组,28例)和重度子痫前期组(Ⅱ组,22例)。以健康产妇30例作为对照组。检测产妇外周血及新生儿脐血AGE、RAGE、EPC、Tang水平。结果Ⅱ组产妇外周血AGE、RAGE水平高于Ⅰ组和对照组,Ⅰ组高于对照组(P<0.05);Ⅱ组产妇外周血Tang、EPC水平低于Ⅰ组和对照组,Ⅰ组低于对照组(P<0.05)。Ⅱ组脐血AGE、RAGE水平高于Ⅰ组和对照组,Ⅰ组高于对照组(P<0.05);Ⅱ组脐血Tang、EPC水平低于Ⅰ组和对照组,Ⅰ组低于对照组(P<0.05)。子痫前期患者外周血AGE与RAGE、Tang与EPC呈正相关,AGE与Tang、EPC呈负相关,RAGE与Tang、EPC呈负相关(P<0.05);患者外周血与新生儿脐血AGE、RAGE、Tang及EPC均呈正相关(P<0.05)。结论 AGE、RAGE、Tang、EPC在子痫前期产妇外周血及新生儿脐血中呈异常表达,AGE、RAGE、Tang、EPC水平与子痫前期发病密切相关。

中药复方抗肿瘤血管生成研究简况

肿瘤生长和转移依赖于肿瘤血管形成,病机可归纳为"虚、毒、痰、瘀",治疗有扶正培本、活血化瘀、软坚散结、化痰祛湿、清热解毒等。中药复方可抑制血管内皮生长因子(VEGF),阻断血管内皮细胞迁移、增殖和肿瘤血管生成;抑制血管内皮细胞的生成或促其凋亡;抑制血管外基质降解,目前研究比较明确的是抑制基质金属蛋白酶家族、参麦注射液、平调饮、肺岩宁方、扶正抗癌汤等;其他小柴胡汤等。尚缺乏从微观辨证角度认识中药复方与血管生成关系研究;期望临床实践与实验室研究紧密结合,宏观辨证基础上筛选更有效的中药复方,微观角度验证,丰富中医药族,如基质金属蛋白酶-2(MMP-2);提高内源性或外源性血管生成抑制因子浓度;抑制促血管生成因子的细胞表面受体等。常见中药复方活血化瘀类有瘀毒清、艾迪注射液、桃红四物汤、血府逐瘀汤等;软坚散结类,改良莪术汤、鳖甲煎丸、乌三颗粒、消痰散结方、清热解毒类方、六神丸、清香散等;益气扶正类,参七汤抗肿瘤血管生成的理论内涵。

纳米金对裸鼠肝癌HIF-1α和VEGFmRNA表达及肿瘤血管的影响

目的观察纳米金(goldnano particles,GNP)对裸鼠H22肝癌缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor,HIF-1α)、血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达及肿瘤血管的影响。方法 Balb/c裸鼠14只,肝癌造模后,随机分两组,每组7只实验动物。GNP组:从肿瘤内注入GNP(浓度为500 nmol/L)溶液0.2 ml;对照组:用等量0.9%氯化钠溶液处理,连续用药7d。超声多谱勒分析肿瘤血管形态,测量肿瘤血管直径和血液灌注量;处死裸鼠时测量肿瘤体积,原位杂交检测HIF-1αmRNA及VEGF mRNA表达。结果(1)GNP组肿瘤体积(0.935±0.129)cm3较对照组(1.573±0.247)cm3下降(P<0.05)。(2)GNP组肿瘤血管直径(0.6397±0.1548)mm及血液灌注量(1.171±0.241)cm3较对照组血管直径(1.1000±0.3247)mm和血液灌注量(2.357±0.408)cm3减少(P<0.05)。(3)GNP组裸鼠肝癌组织HIF-1αmRNA(15.3±7.4)%、VEGF mRNA(23.7±9.5)%,均较对照组[(67.2±13.1)%,(70.3±14.6)%]明显降低(P<0.05)。结论 GNP可以使裸鼠肝癌血管形态趋于正常,降低肿瘤血液灌注;抑制HIF-1αmRNA、VEGF mRNA表达,抗肿瘤生长。

人胃癌组织中巨噬细胞移动抑制因子和VEGF的表达及其临床意义

目的:检测巨噬细胞移动抑制因子(macrophage migration inhibitory factor,MIF)和VEGF在胃癌组织中的表达,分析其与胃癌临床病理特征之间的关系。方法:选取河南大学淮河医院2008—2013年手术切除的89例胃癌组织与2013年手术切除的新鲜胃癌及癌旁标本4对,分别采用免疫组织化学法和Western boltting方法检测胃癌组织及其癌旁组织中MIF和VEGF的表达,结合临床资料分析其表达水平与胃癌临床病理特征之间的关系。结果:MIF和VEGF在胃癌中的表达率分别为88.8%和50.6%,而在癌旁组织中均无表达。胃癌组织中MIF(0.87±0.29 vs 0.23±0.14,P<0.05)和VEGF(0.89±0.23vs 0.34±0.21,P<0.05)相对表达量均显著高于癌旁组织。MIF和VEGF表达水平在不同年龄、性别组间无显著差异,而在不同分化程度和TNM临床分期组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论:MIF和VEGF在胃癌组织中呈高表达,且可能与胃癌的分化程度和TNM临床分期有关。

重组人血管内皮抑制素治疗恶性胸腔积液的研究进展

恶性胸腔积液(MPE)是由恶性肿瘤胸腔转移或原发性胸腔恶性肿瘤所致。MPE形成的分子机制非常复杂,其中血管内皮细胞生成因子(VEGF)发挥了重要的作用。VEGF是重组人血管内皮抑制素(恩度)抗血管生成作用的靶点之一。本文就近年来有关MPE以及恩度治疗MPE的转化、临床研究进展进行综述。

口腔鳞状细胞癌中miRNA调控机制的研究进展

口腔鳞状细胞癌(OSCC)是人类最常见的癌症之一,其病死率与肿瘤的增殖、侵袭和转移息息相关,而微RNA(miRNA)在OSCC增殖、侵袭和转移过程中起重要作用。miRNA通过调控OSCC中肿瘤细胞、免疫细胞、上皮细胞、血管生成细胞以及癌相关成纤维细胞等的生物学过程,促进或抑制OSCC的增殖、侵袭和转移。单独miRNA对OSCC的影响是目前的主要研究热点,尚未形成相关的体系或网络。因此,深入研究OSCC相关的miRNA,对探索OSCC中各类细胞的作用机制及调控网络,诊断、监测、治疗与预防OSCC具有重要意义。