Tapasin对HLA-E细胞表面表达的影响

目的 :探索伴侣分子Tapasin对HLA E分子细胞表面表达的影响。方法 :体外构建HLA EcDNA的逆转录病毒表达载体 ,并通过感染的方法将其转入Tapasin阴性的T2细胞系 ,利用流式细胞术检测HLA E分子在靶细胞表面的表达情况。结果 :外源HLA E基因在Tapasin阴性的T2细胞表面获得表达 (74 13% ) ,而对照细胞及经空载体转染的T2细胞表面未检测到HLA E分子的表达。结论 :HLA E分子的细胞表面表达也存在TAP非依赖的方式。

牛IgG2 Fc受体在COS-7细胞表面的稳定表达

将牛IgG2 Fc受体(boFcγ2R)编码区cDNA亚克隆到真核表达载体pcDNA3的巨细胞病毒启动子下游,构建了重组表达质粒pc3bo2R;以重组质粒转染COS-7细胞,用玫瑰花环试验检测boFcγ2R在转染细胞表面的表达,通过G418抗性筛选和连续克隆化,在转染细胞表面稳定表达了boFcγ2R受体分子,转染细胞的玫瑰花环形成率达90%。最后获得稳定表达boFcγ2R受体分子的COS-7转染细胞系,为受体的功能研究提供了良好的技术平台。

皮质醇对整合素家族细胞粘附分子CD11a/CD18、CD11b/CD18在大鼠急性坏死性胰腺炎合并多器官损伤白细胞表面表达的影响

我们应用流式细胞术检测了整合素家族细胞粘附分子CD11a/CD18和CD11b/CD18在大鼠急性坏死性胰腺炎(ANP)合并多器官损伤的模型血中白细胞表面的表达,探讨皮质醇在ANP合并多器官损伤中的作用及其机制.

里氏木霉细胞表面表达系统的构建

【目的】烟曲霉(Aspergillus fumigatus)的AfMp1p是一种通过糖基磷脂酰肌醇(glycosylphosphatidylinositol,GPI)修饰定位于细胞壁上的蛋白,其细胞壁定位信号位于蛋白质的C末端。里氏木霉(Trichoderma reesei)是一种重要的工业生产菌种。构建里氏木霉的细胞表面表达系统具有十分重要的意义。【方法】我们将AfMp1p的细胞壁定位GPI信号肽和烟曲霉几丁质酶AfChiB1的N端信号肽分别与绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的C末端和N末端融合并转化里氏木霉。本文首先对木霉遗传转化系统进行了优化;随后通过Real-time PCR和蛋白定量,对GFP融合蛋白在里氏木霉中不同时期的表达情况进行了研究;最后对里氏木霉表达的GFP融合蛋白进行细胞定位研究。【结果】荧光观察结合Western blot的结果表明,在平台期中期和后期,带有GPI信号的GFP融合蛋白定位于细胞壁。【结论】烟曲霉来源的GPI信号可被里氏木霉识别,本论文所构建的表达系统可用于外源蛋白在里氏木霉中的细胞壁定位表达。

癌细胞表面表达人绒毛膜促性腺激素的免疫荧光检测

目的筛选可供体外和动物体内肿瘤抑制试验的候选癌细胞株。方法通过间接免疫荧光法,用兔抗人绒毛膜促性腺激素(hCG)多克隆免疫球蛋白(IgG)和小鼠抗hCG单克隆免疫球蛋白(IgG),对人结(直)肠癌细胞(HCT15、HCT116、KM12、WiDr、LoVo、LS-174)、前列腺癌细胞(PC3)、小细胞肺癌细胞(A549)的细胞表达hCG情况进行检测。结果被检的8个癌细胞株均对兔抗hCG多克隆免疫球蛋白(IgG)呈阳性反应。其中4株结(直)肠癌细胞(HCT115、HCT116、Lo-Vo、LS-174)和小细胞肺癌(A549)能被小鼠抗hCG单克隆免疫球蛋白染色。结论这5株能与小鼠抗hCG单克隆免疫球蛋白结合的细胞株都适用于以后的肿瘤杀伤试验。

急性髓细胞性白血病细胞表面CD分子表达及临床意义研究

目的探讨急性髓细胞性白血病(AML)细胞表面CD分子的表达情况。方法采用CD45分子作为靶目标抗原,应用多参数流式细胞术检测300例AML患者细胞表面的CD分子,分析患者的免疫表型。结果以表达百分比﹥20%作为阳性,300例AML患者的CD抗原表达均不相同,cyt-MPO、CD33、CD117和CD38表达最强,为强阳性(80%~100%)。以CD抗原表达>60%为阳性,结果显示:CD33、CD117、CD13、cyt-MPO四种抗原阳性表达的患者,阳性细胞所占的比例高于其他抗原,差异有统计学意义(P﹤0.05)。CD15/CD64、CD15/CD33和CD33/CD64抗原的阳性表达比较,差异均有统计学意义(P﹤0.05);CD33/cyt-MPO抗原的阳性表达比较,差异无统计学意义(P﹥0.05)。结论 AML细胞表面的CD抗原表达具有差异性,CD13、cyt-MPO、CD33、CD117呈高表达。CD分子在AML细胞中阳性表达的差异性可为治疗提供有价值的线索。

大鼠心脏移植淋巴细胞多基因差异表达及淋巴细胞表面蛋白分子的表达时相比较

目的建立大鼠异体异位心脏移植动物模型,观察心脏移植前后淋巴细胞多基因表达和CD4、CD8分子表达及环孢素A对其影响。方法 SD大鼠为供体,Wistar大鼠为受体,分为心脏移植对照组和环孢素A干预两组。移植前、移植后24 h、3 d、7 d、10 d和12 d测定外周血淋巴细胞CD4、CD8分子表达、荧光差异显示分析淋巴细胞编码基因表达水平。结果 (1)移植组:7个基因差异表达,比同组的CD4和CD8分子开始正调表达的时间提前24 h;(2)环孢素A组外周血淋巴细胞的基因表达水平发生变化的有5个基因差异表达;(3)环孢素A组2.3-bisphosphoglycerate比对照组的第一个正调表达时相至少晚24 h,环孢素A还可抑制心脏移植后7 d内外周血淋巴细胞对gig18基因的转录;移植后24 h内,环孢素A组外周血淋巴细胞Na-通道蛋白基因正调表达。结论淋巴细胞多基因差异表达及与表面蛋白分子表达时相比较对于深入研究移植排斥反应机制和环孢素A的作用机制具有一定的意义。

中性粒细胞CD64研究进展及在感染性疾病中的应用

CD64是相对分子质量为72 000的穿膜糖蛋白,属免疫球蛋白（Ig）超家族成员,是高亲和力的IgG受体,可直接与IgG结合并在体内达到饱和。它主要分布在单核细胞、巨噬细胞及树突状细胞等抗原递呈细胞表面,而在外周血的中性粒细胞表面表达水平低[1]。CD64是连接细胞免疫和体液免疫的纽带,在细胞吞噬清除免疫复合物、抗原递呈和释放炎症介质中起到关键作用[2]。大量的研究显示中性粒细胞CD64是一项高敏感、

循环纤维细胞与肺部疾病

循环纤维细胞是一类外周血中骨髓来源的间充质祖细胞,其细胞表面表达造血细胞、单核细胞和成纤维细胞系的三种细胞标记,参与组织应对损伤和破坏后的反应。根据近年来大量动物实验的研究,循环纤维细胞的分化、迁移以及功能提示其在以慢性炎症和大量胶原沉积为特征的疾病中起着重要作用。

自然杀伤细胞与病毒感染性疾病的研究进展

自然杀伤细胞（natural killer cells。NK细胞）是机体重要的天然免疫细胞．根据NK细胞表面表达CD16和CD56分子水平的差别可将之分为3个亚群：

慢性乙型肝炎患者IL-8及其受体表达

慢性乙型肝炎是一种由乙型肝炎病毒（HBV）介导,以肝脏局部多种炎性细胞浸润为特征的慢性感染性疾病.趋化因子是一种结构功能类似、具有趋化吸引和活化作用的小分子蛋白多肽.趋化因子受体是在炎症细胞和结构细胞表面表达的具有七次跨膜域的受体,当趋化因子与相应受体结合后,形成非一一对应的网络系统,在局部抗病毒和炎症反应中起重要作用.

鸡黑素皮质素受体3真核表达载体及突变型的构建和表达

试验旨在构建鸡黑素皮质素受体3(c MC3R)基因的真核表达载体,并在人源胚胎肾细胞(HEK293T)观察目的基因的表达情况。从新鲜鸡血液提取全基因组DNA,并以其为模板,聚合酶链式反应(PCR)扩增目的基因编码区。凝胶纯化回收目的基因,用限制性内切酶Eco RⅠ和XbaⅠ目的基因和真核表达载体pc DNA3.1(+),并将双酶切后的目的基因定向插入表达载体中。经酶切和测序正确后加入c-myc标签。单点突变构建pc DNA3.1(+)-myc/MC3R突变型,用脂质体法将重组质粒pc DNA3.1(+)-myc/MC3R分别瞬时转染入HEK293T细胞中,流式细胞仪检测野生型和突变型的细胞表面表达和胞内总表达。结果表明,成功构建了鸡MC3R基因野生型和四个突变型(M54L、G104S、L151R和S183S)的真核表达载体,突变型与野生型在HEK293T细胞中的表面表达和胞内总表达没有显著性差异,研究结果为进一步研究c MC3R功能奠定基础。

卡介苗接种效果与树突状细胞表达的特异性表面分子重复序列区基因多态性的关系

目的分析汉族婴儿接种卡介苗(BCG)后的免疫效果,探讨树突状细胞表达的特异性表面分子(DC-SIGN)编码第4外显子多拷贝重复序列区(简称DC-SIGN重复序列区基因)多态性与BCG接种效果的关系。方法收集200例符合以下入选条件的汉族婴儿作为研究对象:1.出生24 h内在出生医院接种BCG;2.BCG接种后12周在指定医疗机构进行结核菌素纯蛋白衍生物(PPD)试验;3.排除早产儿接种、伴随感染和漏接种后补接种等情况;4.获得婴儿监护人的知情同意。采集150例BCG接种后PPD试验阳性婴儿(PPD阳性组)和50例BCG接种后PPD阴性婴儿(PPD阴性组)的外周静脉血,通过全血基因组DNA抽提、基因片断的PCR扩增和琼脂糖电泳分析DC-SIGN重复序列区基因多态性,探讨BCG接种效果与DC-SIGN编码基因多态性的关系。结果在200例BCG接种后PPD阳性和PPD阴性汉族婴儿中,存在6型和7型2种DC-SIGN序列区基因型,分别组成7/7野生型纯合子(197例,占98.5%)或6/7变异型(3例,占1.5%)。150例PPD阳性婴儿的DC-SIGN重复序列区基因均为7/7(100.0%),50例PPD阴性组的DC-SIGN重复序列区基因中,47例为7/7纯合子(94.0%),3例为6/7杂合子(6.0%)。二组比较差异有统计学意义(2χ=9.137 1,P<0.05)。结论汉族婴儿DC-SIGN重复序列区基因以7/7野生型纯合子为主,BCG接种失败(PPD阴性)汉族婴儿存在6/7变异型杂合子。DC-SIGN重复序列区基因变异可能是导致BCG接种失败的原因之一。

基于PD-1靶点的免疫诊断和治疗策略

肿瘤免疫治疗已成为继肿瘤手术、放疗和化疗同等重要的第四种肿瘤治疗模式。基于对肿瘤生物学和免疫学原则的不断深入研究，提高抗肿瘤细胞免疫功能、消除肿瘤细胞对免疫细胞抑制性因素，已发展为免疫治疗的重要策略。细胞程序性死亡－1（ Programmed Death 1，PD－1）是近年来发现的负性刺激分子之一，为Ⅰ型跨膜糖蛋白，分子大小为55 kD，属于CD28型家族，作为抑制分子表达于活化的T细胞和B细胞表面。肿瘤细胞表面表达和分泌细胞程序性死亡配体－1（ Programmed Death 1 Ligand， PD－L1），PD－L1与肿瘤浸润淋巴细胞表面的PD－1分子结合后，会抑制T、B淋巴细胞的活性，是肿瘤细胞逃避机体免疫的主要原因之一［1］。因此在肿瘤免疫治疗中，基于PD－1为靶点的免疫治疗药物成为研发的热点。现就PD－1／PD－L1通路在免疫调节中的作用及其在免疫治疗方面的研究进展进行综述。

不同剂量的氯吡格雷对介入术后P选择蛋白的影响

P选择蛋白是一种在激活细胞表面表达的黏着分子,它能介导激活的上皮细胞或血小板与白细胞之间的反应。P选择蛋白在动脉粥样硬化斑处表达增加,在不稳定型心绞痛病人中也发现这种蛋白分子具有高血浆水平。P蛋白与组织发生血栓性炎症有明显的相关性。因此我们推测大剂量的氯吡格雷也能有效减少血浆P蛋白的水平。