细胞角蛋白基因13在喉鳞状细胞癌中缺失和表达的研究

为了探讨细胞角蛋白基因 13(Cytokeratin 13,CK13)在喉癌发生中的作用 ,在CK13基因内部及附近选择 5个微卫星引物进行杂合性丢失 (lossofheterozygosity,LOH)分析 ,于DNA水平间接检测 72例喉鳞状细胞癌患者中该基因的缺失 ,应用NorthernBlot检测 16例喉鳞癌患者的配对肿瘤及癌旁正常组织中CK13基因的表达差异 :同时应用CK13蛋白单克隆抗体对不同分化程度的喉鳞癌组织进行免疫组化染色。结果表明 :5个STR位点均存在LOH ,其中D17S196 4E、D17S2 0 92、D17S791、D17S16 6 5及D17S80 8位点的LOH频率分别为 18.0 3%、2 8.13%、2 7.4 2 %、39.6 8%和 34.85 % ,其中D17S16 6 5位点的LOH频率最高 ,至少一个位点出现LOH的病例高达 77.78% (5 6 / 72 ) ,杂合性丢失与临床分期、淋巴结转移无显著相关 ,但与肿瘤分化程度高低相关 (P <0 .0 5 )。Northernblot结果表明 :16例喉鳞癌患者CK13基因在正常组织中的表达比肿瘤组织显著增强 ,免疫组化结果也显示CK13蛋白在正常组织或高分化肿瘤中的表达明显高于低分化者 ,且存在显著差异 (P <0 .0 1)。证实CK13基因可能在喉鳞状细胞癌的发生中具有重要作用 。

口腔鳞癌与正常黏膜中细胞角蛋白基因13的表达

目的:研究细胞角蛋白基因13(cytokeratin13,CK13)在口腔鳞状细胞癌(oralsquamouscellcarcinoma,OSCC)组织中的表达及意义。方法:用RT-PCR方法检测30例OSCC患者肿瘤组织及其配对的正常黏膜中CK13mRNA的表达,同时用免疫组化方法检测CK13蛋白在OSCC及正常黏膜标本中的表达。所得数据采用Fisher确切概率计算法进行统计学处理。结果:RT-PCR检测结果表明,CK13mRNA在27例OSCC中的表达较其对照黏膜表达下调,平均下调4.2倍;免疫组化染色结果显示,CK13蛋白在正常口腔黏膜与肿瘤组织之间、高分化OSCC与中、低分化OSCC之间的表达差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:在OSCC的发生、发展中,CK13基因的转录和表达水平发生明显变化,可能存在转录后水平的表达调控。CK13在OSCC分类诊断中有应用价值。

细胞角蛋白13基因联合放疗对人鼻咽癌细胞株的作用

目的观察CK13基因对人鼻咽癌HNE1细胞株放疗敏感性的影响。方法将HNE1细胞株分为HNE1-CK13A、HNE1-CK13B、HNE1-pEGFP-N1、HNE1四组,经放疗后进行Western blotting及凋亡坏死率的检测。结果转染了CK13基因的HNE1细胞株在放疗后比对照组的凋亡坏死率多,且随着放射剂量的增大,凋亡率也随之提高。结论 CK13基因对人鼻咽癌HNE1细胞株的放疗起协同作用,为HNE1细胞株的放射增敏剂。

维甲酸诱导后CK13基因在鼻咽癌中的表达研究

目的探讨维甲酸(retinoic acids,RA)对鼻咽癌细胞株HNE1生长及表型的作用,同时观察维甲酸诱导鼻咽癌细胞株HNE1后细胞角蛋白基因13(cytokeratin 13,CK13)表达情况。方法应用细胞培养的方法观察维甲酸诱导鼻咽癌细胞株HNE1细胞的生长状况,利用Northern杂交技术分析维甲酸诱导鼻咽癌细胞株HNE1后CK13基因的表达。结果维甲酸能显著抑制鼻咽癌细胞的生长,抑制的强度取决于维甲酸的浓度和诱导持续时间,当维甲酸的浓度为1×10-4 M/L时,前4天下降约50％,第5天开始细胞停止增殖,细胞数逐渐减少,细胞逐渐老化死亡。维甲酸处理后的鼻咽癌细胞从典型的多边形变成扁平、细长,类似纤维细胞的形态。维甲酸诱导后的鼻咽癌细胞中CK13基因的表达明显上调,且与维甲酸的浓度有关。结论维甲酸能促进鼻咽癌细胞的分化,可能是通过上调CK13基因的表达而实现的。

CK13基因与EB病毒DNA在鼻咽癌中的表达及临床意义

目的探讨细胞角蛋白基因１３ （Ｃ １３）和ＥＢ病毒ＤＮＡ在人鼻咽癌（ＮＰＣ）组织中的表达及其意义。方法应用 Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交对３２例 ＮＰＣ和 ８例慢性鼻咽炎（ＣＩＮＥ）组织进行ＣＫ１３ｍＲＮＡ水平检测，同时应用ＰＣＲ方法进行ＥＢ病毒ＤＮＡ检测。结果ＣＫ１３基因在鼻咽炎组织中高表达，在ＮＰＣ组织中的表达显著下调，下调的频率达６５．６３％（２１／３２）。结论ＮＰＣ组织的分化可能与ＣＫ１３基因的表达下调有关。

CK13基因与鳞状细胞癌的研究进展

细胞角蛋白(cytokeratin CK)是角质细胞中的主要骨架蛋白,多分布于上皮细胞,起着维持上皮组织连续性及完整性的作用。研究发现细胞角蛋白(CK)具有极高的保守性和组织分化特异性,与上皮细胞的增殖分化密切相关。目前已得到证实的细胞角蛋白有20多种,其中CK13是鳞状上皮分层和分化标记[1,2]。鳞状细胞癌(squamous cell carcinoma,SCC)简称鳞癌,是发生在皮肤、附属器或黏膜的恶性肿瘤,主要是由上皮组织的恶变引起。

AP1反应元件的确定及在细胞角蛋白13基因表达调控中的作用

目的 确定细胞角蛋白 13(cytokeratin 13,CK13)基因 5′旁侧 - nt.199～ - nt.192碱基CTGAATCA反应元件的类型及其在 CK13基因表达调控中的作用。方法 采用报告基因分析的方法 ,构建 CK13基因 5′旁侧 5 13bp全片段、- nt.2 0 7～ +nt.6 3与氯霉素乙酰转移酶报告基因增强子载体的重组体 ,并采用 PCR定点诱变技术 ,构建与 - nt.2 0 7～ +nt.6 3同样长短 ,但 - nt.198和 - nt.197的 T、G分别定点诱变为 A、T的氯霉素乙酰转移酶报告基因增强子载体的重组体 ,通过脂质体介导的转染技术导入He L a细胞 ,检测各重组体报告基因的瞬间表达 ,确定 CK13基因 5′旁侧 - nt.199～ - nt.192碱基CTGAATCA在 CK13基因表达调控中的作用 ;并采用凝胶滞留试验及竞争性凝胶滞留试验验证 CK13基因 5′旁侧中 CTGAATCA反应元件的类型。结果 凝胶滞留试验及竞争性凝胶滞留试验证实 CK13基因5′旁侧 - nt.199～ - nt.192碱基 CTGAATCA反应元件是 AP1反应元件 ,它促进 CK13基因的表达。结论CK13基因 5′旁侧起始密码子上游 - nt.199～ - nt.192的碱基 CTGAATCA是 AP1反应元件 ,而不是c AMP反应元件 ,它可增进 CK13基因 5′旁侧的转录活性。

CK13基因5′旁侧的初步功能分析

目的 探讨细胞角蛋白 13(cytokeratin13,CK13)基因表达调控的机理 ,研究 CK13基因 5′旁侧不同基序对其转录活性的影响。 方法 采用分子克隆结合报告基因分析的方法 ,构建 CK 13基因 5′旁侧 5 13bp内不同基序与氯霉素乙酰转移酶 (chloramphenicol acetyltransferase,CAT)报告基因增强子载体p CAT的重组体 ,通过脂质体介导的转染技术导入 He L a细胞 ,检测各报告基因载体 CAT的相对活性。 结果 CK13基因 5′旁侧起始密码子 ATG上游 - nt.32 5～ - nt.2 0 7间 119bp中具有某种抑制子元件 ,-nt.2 0 6～ - nt.94间 113bp中具有某种增强子元件。 结论 CK13基因 5′旁侧 5 13bp内存在促进及抑制CK13基因表达的反应元件 ,进一步定位这些顺式反应元件并研究与之相互作用的反式作用因子 ,可望阐明 CK13基因表达调控及组织特异性表达的详细机理。