细胞角蛋白13通过PTEN抑制PI3K/AKT/mTOR通路增强鼻咽癌HNE1细胞放疗敏感性

目的:探讨细胞角蛋白13(cytokeratin 13,CK13)对鼻咽癌HNE1细胞放疗敏感性的影响及其作用机制。方法:将HNE1细胞分为对照组、anti-CK13#a组及anti-CK13#b组(敲减CK13)、对照组+西罗莫司处理组(100 nmol/L的西罗莫司处理1 h)、anti-CK13#a+西罗莫司处理组(100 nmol/L的西罗莫司处理1 h),经放疗处理(200 c Gy/min剂量照射5 min)后,用CCK-8法检测各组细胞的增殖能力,用流式细胞术检测各组细胞的凋亡率,q PCR法检测PI3K/AKT/mTOR信号通路相关基因PTEN的表达,WB法检测PI3K/AKT/mTOR信号通路相关蛋白的表达。结果:经放疗处理后,与对照组相比,敲减CK13后HNE1细胞增殖能力明显增强(P<0.01),细胞凋亡率明显降低(P<0.01);细胞中c-caspase-3和γH2AX的表达明显降低(均P<0.01)、p-AKT和p-S6K表达明显升高(P<0.01)、PTEN蛋白表达明显降低(P<0.01)。敲减CK13+西罗莫司(PI3K/AKT/mTOR信号通路抑制剂)处理可以回复敲减CK13导致的细胞增殖能力增强(P<0.05)和细胞凋亡率降低(P<0.01)。结论:敲减CK13通过下调PTEN蛋白水平进而增强PI3K/AKT/mTOR信号通路活性,最终降低HNE1细胞的放疗敏感性。

细胞角蛋白4和细胞角蛋白13在鼻腔-鼻窦鳞状细胞癌中的表达及临床意义

目的探讨鼻腔-鼻窦鳞状细胞癌(sinonasal s q u a m o u s c el l c a r c i n o m a,S NS C C)中细胞角蛋白13(cytokeratin13,CK13)、细胞角蛋白4(cytokeratin 4,CK4)的表达及与肿瘤临床特征的关系。方法应用免疫组化检测42例SNSCC标本(SNSCC组)及癌旁正常黏膜(对照组)中CK13、CK4的表达,应用图像分析仪比较其吸收度值(A值),进行统计学处理。结果 1CK13在对照组、SNSCC组中的阳性表达率为100.00%、30.95%,与肿瘤的分化程度及随访KPS评分呈正相关;2CK4在对照组、SNSCC组中的阳性表达率分别为100.00%、60.95%,与随访KPS评分呈正相关;随着T分级和临床分期的增加,阳性表达率减弱;随着分化程度的降低,阳性表达率依次减弱;在有、无淋巴结转移组织中的表达差异有统计学意义。结论对CK4、CK13进行检测,对SNSCC的预后判断具有重要意义。

糖皮质激素对鼻息肉中细胞角蛋白13表达的影响

目的：探讨细胞角蛋白13（CK13）在鼻息肉上皮细胞增生分化过程中的作用。方法选取慢性鼻-鼻窦炎（伴鼻息肉）患者60例。其中 A组30例患者，术前未应用糖皮质激素直接进行手术治疗，术中取下鼻息肉组织；B组30例患者应用糖皮质激素类药物治疗3～5 d后手术治疗，术中取下鼻息肉组织。C组10例为正常中鼻甲组织对照组。采用免疫组化（二步法）检测标本中CK13的表达。结果 A组CK13的阳性表达率高于B组，差异有统计学意义（χ2＝11．482，P＝0．009），C组正常中鼻甲组织上皮细胞未见CK13的阳性表达。结论（1）CK13在鼻息肉组织中不同上皮表达程度的差异，反映了 CK13在鼻息肉在发生发展过程中的动态变化；使用糖皮质激素治疗后鼻息肉组织中 CK13蛋白表达有所下降，说明糖皮质激素对鼻息肉的增生、分化有抑制作用。

细胞角蛋白13在全反式维甲酸和三氧化二砷诱导分化人口腔鳞癌细胞系KB中的表达

目的研究细胞角蛋白(cytokertin,CK)13及其基因在全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)和三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)诱导分化人口腔未分化鳞癌细胞系KB中的表达和意义。方法采用MTT法观察ATRA和As2O3对KB细胞的敏感程度,Western blot法和RT-PCR法观察KB细胞经ATRA和As2O3诱导分化后的CK13和CK13-mRNA的表达。结果MTT法显示ATRA和As2O3的IC50分别为35.9×10-6mol/L和1.55×10-6mol/L,As2O3对KB细胞药物化学敏感性比ATRA高;Western blot法显示ATRA和As2O3对KB细胞诱导分化后24h CK13无表达,48h CK13出现弱表达,72h CK13出现明显的表达;RT-PCR法显示ATRA和As2O3对KB细胞诱导分化后24h CK13-mRNA表达明显升高,48h达到高峰,72h出现下降的趋势,并且CK13-mRNA的表达变化提前于CK13的表达。结论CK13可作为口腔鳞癌诱导分化标记物和判断临床口腔鳞癌诱导分化疗效的指标。

细胞角蛋白13在上颌骨术后囊肿上皮鳞状化生过程中的表达

目的 :探讨细胞角蛋白 13(Cytokeratin13,CK13)在上颌骨术后囊肿上皮鳞状化生过程中的表达。方法 :利用单克隆CK13(DE- K13)抗体 ,应用免疫组化技术检测了 CK13在 10 4例上颌骨术后囊肿上皮中的表达。结果 :CK13在上颌骨术后囊肿的纤毛上皮表达呈阴性 ;在同时存在纤毛上皮与鳞状上皮的混合型上皮的基底上层表达呈弱阳性 ;CK13在部分鳞状上皮的基底上层及表层表达为阳性 ;在另一部分鳞状上皮的全层呈强阳性表达。CK13着色强度以及分布范围存在显著性差异(P<0 .0 1)。结论

食管鳞癌中细胞角蛋白13的表达及临床意义

目的研究细胞角蛋白13(CK13)在食管鳞癌组织中的表达及临床意义。方法应用免疫组织化学SP法检测51例临床手术切除的食管癌标本及相应的食管黏膜标本中CK13的表达。结果 CK13在正常食管黏膜的表达为86.3%(44/51)、食管癌为31.4%(16/51),差异有统计学意义(P<0.01);CK13在高分化、中低分化鳞癌阳性表达为10例(19.6%)、6例(0.8%),在Ⅰ、Ⅱ期和Ⅲ、Ⅳ期中阳性表达分别为11例(21.6%)和5例(4.2%);在未浸润外膜和浸润外膜的鳞癌组织中阳性表达分别为12例(23.5%)和4例(7.8%),差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 CK13在食管癌呈低表达,检测CK13在食管癌中的表达有利于对食管癌患者的诊断和预后进行评估。

细胞角蛋白13基因联合放疗对人鼻咽癌细胞株的作用

目的观察CK13基因对人鼻咽癌HNE1细胞株放疗敏感性的影响。方法将HNE1细胞株分为HNE1-CK13A、HNE1-CK13B、HNE1-pEGFP-N1、HNE1四组,经放疗后进行Western blotting及凋亡坏死率的检测。结果转染了CK13基因的HNE1细胞株在放疗后比对照组的凋亡坏死率多,且随着放射剂量的增大,凋亡率也随之提高。结论 CK13基因对人鼻咽癌HNE1细胞株的放疗起协同作用,为HNE1细胞株的放射增敏剂。

反义细胞角蛋白13基因对人鼻咽癌HNE1细胞移植瘤放疗敏感性的影响

目的观察反义细胞角蛋白13(cytokeratin 13,CKl3)基因对鼻咽癌人嗜中性细胞弹性蛋白酶1(human neutrophil elastase,HNE1)细胞移植瘤放疗敏感性的影响。方法将HNE1细胞株分为A组(未经处理)、B组(转染慢病毒空载体),C组(转染慢病毒反义CK13a)和D组(转染慢病毒反义CK13b)共4组建立相应动物模型,放疗后采用流式细胞仪、免疫组化、PCR、Tunel法及Westernblotting检测。结果细胞周期检测发现转染慢病毒质粒的C组和D组在放疗后与对照组比较G2/M期阻滞时间显著延长;免疫组化结果显示C组和D组移植瘤中CK13表达下降;Tunel法检测细胞凋亡坏死率发现C组和D组细胞凋亡率明显降低;Western blotting检测发现caspase-3凋亡标志物下降。PCR检测发现CDC25mRNA水平明显降低。结论反义CK13基因通过调控细胞周期和凋亡可降低鼻咽癌HNE1移植瘤的放疗敏感性,并与caspase-3凋亡途径和CDC25信号通路相关。

AP1反应元件的确定及在细胞角蛋白13基因表达调控中的作用

目的 确定细胞角蛋白 13(cytokeratin 13,CK13)基因 5′旁侧 - nt.199～ - nt.192碱基CTGAATCA反应元件的类型及其在 CK13基因表达调控中的作用。方法 采用报告基因分析的方法 ,构建 CK13基因 5′旁侧 5 13bp全片段、- nt.2 0 7～ +nt.6 3与氯霉素乙酰转移酶报告基因增强子载体的重组体 ,并采用 PCR定点诱变技术 ,构建与 - nt.2 0 7～ +nt.6 3同样长短 ,但 - nt.198和 - nt.197的 T、G分别定点诱变为 A、T的氯霉素乙酰转移酶报告基因增强子载体的重组体 ,通过脂质体介导的转染技术导入He L a细胞 ,检测各重组体报告基因的瞬间表达 ,确定 CK13基因 5′旁侧 - nt.199～ - nt.192碱基CTGAATCA在 CK13基因表达调控中的作用 ;并采用凝胶滞留试验及竞争性凝胶滞留试验验证 CK13基因 5′旁侧中 CTGAATCA反应元件的类型。结果 凝胶滞留试验及竞争性凝胶滞留试验证实 CK13基因5′旁侧 - nt.199～ - nt.192碱基 CTGAATCA反应元件是 AP1反应元件 ,它促进 CK13基因的表达。结论CK13基因 5′旁侧起始密码子上游 - nt.199～ - nt.192的碱基 CTGAATCA是 AP1反应元件 ,而不是c AMP反应元件 ,它可增进 CK13基因 5′旁侧的转录活性。

细胞角蛋白(CK)13在鼻腭囊肿衬里上皮中的表达及其意义

目的研究细胞角蛋白(CK)13在鼻腭囊肿衬里上皮中变化的规律和其表达的意义。方法对经临床和病理诊断的36例鼻腭囊肿的衬里上皮进行常规HE染色和免疫组化染色,检测CK13在鼻腭囊肿上皮中的表达。结果CK13在鼻腭囊肿的纤毛上皮表达呈阴性;在纤毛柱状与鳞状上皮细胞的混合型上皮的中间层表达呈弱阳性;CK13在部分鳞状上皮的基底层、中间层或表层表达为阳性;鳞状上皮的全层呈强阳性。结论在纤毛柱状上皮细胞中出现化生鳞状上皮细胞时,同时表达CK13;CK13随着纤毛柱状上皮向鳞状上皮化生程度的逐渐增强而逐渐增多;CK13可作为判断鼻腭囊肿上皮鳞状化生的标志和检测化生程度。根据纤毛柱状上皮向鳞状上皮化生过程中细胞形态的变化和CK13的表达,推测鳞状上皮细胞是由纤毛柱状上皮化生而来。

细胞角蛋白基因13在喉鳞状细胞癌中缺失和表达的研究

为了探讨细胞角蛋白基因 13(Cytokeratin 13,CK13)在喉癌发生中的作用 ,在CK13基因内部及附近选择 5个微卫星引物进行杂合性丢失 (lossofheterozygosity,LOH)分析 ,于DNA水平间接检测 72例喉鳞状细胞癌患者中该基因的缺失 ,应用NorthernBlot检测 16例喉鳞癌患者的配对肿瘤及癌旁正常组织中CK13基因的表达差异 :同时应用CK13蛋白单克隆抗体对不同分化程度的喉鳞癌组织进行免疫组化染色。结果表明 :5个STR位点均存在LOH ,其中D17S196 4E、D17S2 0 92、D17S791、D17S16 6 5及D17S80 8位点的LOH频率分别为 18.0 3%、2 8.13%、2 7.4 2 %、39.6 8%和 34.85 % ,其中D17S16 6 5位点的LOH频率最高 ,至少一个位点出现LOH的病例高达 77.78% (5 6 / 72 ) ,杂合性丢失与临床分期、淋巴结转移无显著相关 ,但与肿瘤分化程度高低相关 (P <0 .0 5 )。Northernblot结果表明 :16例喉鳞癌患者CK13基因在正常组织中的表达比肿瘤组织显著增强 ,免疫组化结果也显示CK13蛋白在正常组织或高分化肿瘤中的表达明显高于低分化者 ,且存在显著差异 (P <0 .0 1)。证实CK13基因可能在喉鳞状细胞癌的发生中具有重要作用 。

口腔鳞癌与正常黏膜中细胞角蛋白基因13的表达

目的:研究细胞角蛋白基因13(cytokeratin13,CK13)在口腔鳞状细胞癌(oralsquamouscellcarcinoma,OSCC)组织中的表达及意义。方法:用RT-PCR方法检测30例OSCC患者肿瘤组织及其配对的正常黏膜中CK13mRNA的表达,同时用免疫组化方法检测CK13蛋白在OSCC及正常黏膜标本中的表达。所得数据采用Fisher确切概率计算法进行统计学处理。结果:RT-PCR检测结果表明,CK13mRNA在27例OSCC中的表达较其对照黏膜表达下调,平均下调4.2倍;免疫组化染色结果显示,CK13蛋白在正常口腔黏膜与肿瘤组织之间、高分化OSCC与中、低分化OSCC之间的表达差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:在OSCC的发生、发展中,CK13基因的转录和表达水平发生明显变化,可能存在转录后水平的表达调控。CK13在OSCC分类诊断中有应用价值。

细胞角蛋白(CK)13在含牙囊肿衬里上皮的表达

目的研究纤毛柱状上皮向鳞状上皮化生时细胞角蛋白13的表达,探讨其表达在上皮化生方面的意义。方法取54侧含牙囊肿和6例鼻腭管囊肿。分别采用细胞角蛋白13单克隆抗体进行免疫组织化学染色、HE染色和RT-PCR方法研究细胞角蛋白13基因的表达。结果54例含牙囊肿中,46例为复层鳞状上皮细胞衬里。CKl3均呈阳性表达;8例混合性上皮衬里。其中的鳞状上皮细胞部分CKl3也呈阳性表达;纤毛柱状上皮部分和6例鼻腭管囊肿的纤毛柱状上皮细胞均呈阴性表达。RT-PCR结果显示细胞角蛋白13基因在复层鳞状上皮中表达最强。在混合性上皮中表达减弱,在纤毛柱状上皮中表达极弱。结论细胞角蛋白13基因(CKl3-mRNA)在纤毛柱状上皮、混和性上皮和复层鳞状上皮三种不同上皮村里中均有表达,但表达强度不同,呈由弱到强的变化。在鳞状上皮细胞中细胞角蛋白13呈强阳性表达;在纤毛柱状上皮细胞中细胞角蛋白13呈阴性;可是,当纤毛柱状上皮中出现鳞状上皮细胞时,可见细胞角蛋白13呈阳性表达,因而,细胞角蛋白13是纤毛柱状上皮细胞向鳞状上皮细胞化生过程中的标志性产物。但是有待进一步验证。

细胞角蛋白7、8和10/13在不同级别宫颈病变中的表达及意义

目的探讨细胞角蛋白(CK)7、CK8和CK10/13在宫颈疾病中的表达情况,分析其在宫颈疾病诊断中的价值。方法子宫颈低级别鳞状上皮内瘤变(LSIL)50例(LSIL组),子宫颈高级别鳞状上皮内瘤变(HSIL)50例(HSIL组),宫颈鳞癌(SCC)50例(SCC组),采用免疫组化Envision法检测3组宫颈病变组织中CK7、CK 8和CK 10/13的表达情况。结果CK7、CK8及CK10/13在LSIL组、HSIL组及SCC组中的表达率差异均有统计学意义(均P<0.01)。LSIL组CK7、CK8及CK10/13表达率与HSIL组及SCC组差异均有统计学意义(均P<0.05),HSIL组CK7及CK8表达率与SCC组差异均有统计学意义(均P<0.05),HSIL组与SCC组CK10/13表达率差异无统计学意义(P>0.05)。结论 CK7、CK8的表达和CK10/13的表达缺失是宫颈疾病进展的标志物。

CK18和CK13在含有纤毛柱状细胞的根端囊肿衬里上皮中的表达

目的:探讨细胞角蛋白CK13和CK18在含有纤毛柱状细胞的根端囊肿衬里上皮中的表达意义。方法:利用单克隆CK18和CK13抗体,采用免疫组化SP法检测32例含有纤毛柱状细胞的根端囊肿衬里上皮中CK13和CK18的表达情况。结果:CK18在此32例含纤毛柱状上皮细胞的根端囊肿衬里中呈现3种表达形式:①伴随纤毛柱状上皮细胞呈连续带状表达在根端囊肿衬里上皮的表层;②呈片段状表达在根端囊肿衬里上皮中;③呈零星散在状表达于衬里上皮细胞中。CK13表达在根端囊肿衬里上皮的鳞状细胞中。一部分基底细胞层细胞和上皮片断既不表达CK18,也不表达CK13。结论:根端囊肿衬里上皮中除含有鳞状细胞外还含有以多种形式分布存在的纤毛柱状细胞及可能处于化生过渡阶段的细胞或上皮发生细胞。根端囊肿衬里上皮中存在着多种细胞类型为根端囊肿的发生机制及组织来源的进一步研究探讨提供了一定的依据。

CK13基因与鳞状细胞癌的研究进展

细胞角蛋白(cytokeratin CK)是角质细胞中的主要骨架蛋白,多分布于上皮细胞,起着维持上皮组织连续性及完整性的作用。研究发现细胞角蛋白(CK)具有极高的保守性和组织分化特异性,与上皮细胞的增殖分化密切相关。目前已得到证实的细胞角蛋白有20多种,其中CK13是鳞状上皮分层和分化标记[1,2]。鳞状细胞癌(squamous cell carcinoma,SCC)简称鳞癌,是发生在皮肤、附属器或黏膜的恶性肿瘤,主要是由上皮组织的恶变引起。

维甲酸诱导后CK13基因在鼻咽癌中的表达研究

目的探讨维甲酸(retinoic acids,RA)对鼻咽癌细胞株HNE1生长及表型的作用,同时观察维甲酸诱导鼻咽癌细胞株HNE1后细胞角蛋白基因13(cytokeratin 13,CK13)表达情况。方法应用细胞培养的方法观察维甲酸诱导鼻咽癌细胞株HNE1细胞的生长状况,利用Northern杂交技术分析维甲酸诱导鼻咽癌细胞株HNE1后CK13基因的表达。结果维甲酸能显著抑制鼻咽癌细胞的生长,抑制的强度取决于维甲酸的浓度和诱导持续时间,当维甲酸的浓度为1×10-4 M/L时,前4天下降约50％,第5天开始细胞停止增殖,细胞数逐渐减少,细胞逐渐老化死亡。维甲酸处理后的鼻咽癌细胞从典型的多边形变成扁平、细长,类似纤维细胞的形态。维甲酸诱导后的鼻咽癌细胞中CK13基因的表达明显上调,且与维甲酸的浓度有关。结论维甲酸能促进鼻咽癌细胞的分化,可能是通过上调CK13基因的表达而实现的。

CK13基因与EB病毒DNA在鼻咽癌中的表达及临床意义

目的探讨细胞角蛋白基因１３ （Ｃ １３）和ＥＢ病毒ＤＮＡ在人鼻咽癌（ＮＰＣ）组织中的表达及其意义。方法应用 Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交对３２例 ＮＰＣ和 ８例慢性鼻咽炎（ＣＩＮＥ）组织进行ＣＫ１３ｍＲＮＡ水平检测，同时应用ＰＣＲ方法进行ＥＢ病毒ＤＮＡ检测。结果ＣＫ１３基因在鼻咽炎组织中高表达，在ＮＰＣ组织中的表达显著下调，下调的频率达６５．６３％（２１／３２）。结论ＮＰＣ组织的分化可能与ＣＫ１３基因的表达下调有关。

CK13基因5′旁侧的初步功能分析

目的 探讨细胞角蛋白 13(cytokeratin13,CK13)基因表达调控的机理 ,研究 CK13基因 5′旁侧不同基序对其转录活性的影响。 方法 采用分子克隆结合报告基因分析的方法 ,构建 CK 13基因 5′旁侧 5 13bp内不同基序与氯霉素乙酰转移酶 (chloramphenicol acetyltransferase,CAT)报告基因增强子载体p CAT的重组体 ,通过脂质体介导的转染技术导入 He L a细胞 ,检测各报告基因载体 CAT的相对活性。 结果 CK13基因 5′旁侧起始密码子 ATG上游 - nt.32 5～ - nt.2 0 7间 119bp中具有某种抑制子元件 ,-nt.2 0 6～ - nt.94间 113bp中具有某种增强子元件。 结论 CK13基因 5′旁侧 5 13bp内存在促进及抑制CK13基因表达的反应元件 ,进一步定位这些顺式反应元件并研究与之相互作用的反式作用因子 ,可望阐明 CK13基因表达调控及组织特异性表达的详细机理。