细胞角蛋白14和P16在宫颈病变组织中的表达及其诊断价值

目的探讨细胞角蛋白14(CK14)和P16在宫颈病变组织中的表达及其病理诊断价值。方法应用免疫组化En Vision法检测30例正常宫颈、40例宫颈低级别鳞状上皮内病变、40例宫颈高级别鳞状上皮内病变及30例宫颈鳞状细胞癌组织中CK14和P16的表达。结果 CK14在正常宫颈、低级别鳞状上皮内病变、高级别鳞状上皮内病变和宫颈鳞状细胞癌组织中阳性表达率分别为86.7%、67.5%、40.0%、26.7%,前2组的阳性表达率明显高于后2组,差异均有统计学意义(P均<0.05)。P16在正常宫颈、低级别鳞状上皮内病变、宫颈高级别鳞状上皮内病变和宫颈鳞状细胞癌组织中阳性表达率分别为6.7%、42.5%、65.0%、86.7%,前2组的阳性表达率明显低于后2组,差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论随着宫颈疾病的进展,CK14表达升高,而P16表达降低,两者联合检测可为宫颈癌前病变的分级和宫颈癌早期诊断提供客观依据。

细胞角蛋白14在牙齿软组织萌出通道中的组织学定位

目的牙齿萌出时,源于成釉器的缩余釉上皮与口腔上皮细胞融合为上皮团形成牙齿的软组织萌出通道,本研究对细胞角蛋白14在这一过程中的表达进行组织学定位,从而探讨其可能作用。方法不同发育期SPF级BALB/c小鼠9只。循环内固定后分别双侧下颌骨10%EDTA脱钙30d,常规脱水包埋,近远中向5μm连续切片,行苏木精-伊红和免疫组化染色。PV免疫组化两步法检测细胞角蛋白14和细胞增殖核抗原在各组织的表达。结果牙齿萌出过程中口腔上皮对细胞角蛋白14呈现时空特异性表达,非牙齿萌出部位的口腔上皮仅基底层阳性表达细胞角蛋白14,而萌出牙齿冠方的口腔上皮阳性表达则较广泛;缩余釉上皮在牙齿萌出过程中始终阳性表达细胞角蛋白14,而且伴随缩余釉上皮和口腔上皮融合的发生,缩余釉上皮的外层细胞和口腔上皮的基底层和基底上层细胞呈现细胞角蛋白14强阳性表达。结论细胞角蛋白14与牙齿萌出软组织通道的形成密切相关,可作为缩余釉上皮相关研究的上皮性标记物。

Vps4b基因敲除鼠上皮根鞘中细胞角蛋白14和增殖细胞核抗原的表达

目的研究Vps4b基因突变对上皮根鞘(HERS)中细胞角蛋白14(CK14)和增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响。方法取出生后(P)5、9、11、15、19d的小鼠的双侧下颌组织,石蜡包埋后获得下颌第一磨牙组织切片,通过免疫组织化学方法比较CK14和PCNA在正常小鼠与Vps4b基因敲除小鼠HERS中的表达情况。结果正常小鼠P5d开始形成HERS,PCNA在HERS细胞中强阳性表达;P9d,HERS结构连续,PCNA在HERS细胞中阳性表达;P11d,一小部分HERS开始断裂,PCNA在HERS细胞中弱阳性表达;P15d,HERS继续断裂,PCNA在牙根表面HERS细胞中弱阳性表达;P19d,牙根达到生理长度,PCNA仅在牙根末端HERS细胞中阳性表达。基因敲除小鼠与正常小鼠相比,P5d同样形成HERS结构,然而其断裂在P9d就开始出现,P19d牙根表面仅存少量HERS碎片,根尖发育不成熟,PCNA表达强度下降。结论Vps4b基因突变可能通过改变HERS中CK14和PCNA的表达,从而导致牙根发育异常。

成束蛋白和细胞角蛋白14在多种肿瘤组织中的表达及其鉴别诊断意义

目的 揭示成束蛋白（fascin）和细胞角蛋白14（CK14）在不同器官的相同或不同组织学类型癌组织中的表达规律,探讨其鉴别诊断的应用价值.方法 构建450例不同器官的相同或不同组织学类型癌组织芯片,用免疫组化方法检测fascin和CK14的表达情况.结果 fascin在食管、肺、喉、宫颈和外生殖器的鳞癌中弥漫高表达,阳性率分别为90.0%、90.0%、96.7%、78.6%和89.7%,在肺腺癌、胃腺癌、结直肠腺癌、肝细胞癌、胰腺导管腺癌、乳腺浸润性导管癌、甲状腺乳头状癌、子宫宫内膜样腺癌、卵巢浆液性囊腺癌和肾透明细胞癌中表达阳性率分别为38.0%、23.3%、14.3%、10.3%、73.3%、13.3%、6.7%、60.0%、66.7%和10.0%;在鳞癌和其他组织学类型肿瘤中的表达差异有统计学意义（P＜0.001）.CK14在食管、肺、喉、宫颈和外生殖器鳞癌中表达阳性率分别为76.7%、36.7%、83.3%、60.7%和96.3%,而在肺腺癌、胃腺癌、结直肠腺癌、肝细胞癌、胰腺导管腺癌、乳腺浸润性导管癌、甲状腺乳头状癌、子宫宫内膜样腺癌、卵巢浆液性囊腺癌和肾透明细胞癌中表达阳性率分别为13.3%、13.3%、20.7%、41.4%、46.7%、6.7%、40.0%、13.3%、20.0%和6.7%;在鳞癌和其他组织学类型肿瘤中的表达差异有统计学意义（P＜0.001）.fascin与CK14联合,在鳞癌中任一蛋白阳性率,与在其他组织学类型肿瘤中的表达差异均有统计学意义（P＜0.001）.结论 fascin和CK14在多器官鳞癌呈高表达,在其他组织学类型肿瘤呈较低表达.联合检测fascin和CK14的表达,可用于鳞癌的诊断和鉴别诊断.

成束蛋白、细胞角蛋白14在食管鳞癌中的表达

目的检测和分析食管鳞癌组织、癌旁正常鳞状上皮及食管鳞癌细胞系中成束蛋白(fascin)和细胞角蛋白14(CK14)的表达情况,探讨这两种细胞骨架蛋白及相关蛋白在食管鳞癌发生发展中可能的作用及在食管鳞癌诊断中的应用前景。方法收集116例食管鳞癌组织标本,构建组织芯片。用免疫组化方法检测鳞癌组织与癌旁正常鳞状上皮中成束蛋白、CK14的表达情况,并分析它们与临床病理特征、预后的关系及两种蛋白之间的相关关系。用 Western 印迹方法检测12种食管鳞癌细胞系中成束蛋白、CK14的表达情况,并分析它们与生长和侵袭特点的关系。结果成束蛋白和CK14在食管正常鳞状上皮阴性(基底细胞除外),在食管鳞癌组织明显上调,阳性率分别为79.3%和67.0%,两者联合阳性率高达86.2%。成束蛋白和 CK14在高、中分化鳞癌中表达更高(成束蛋白在高、中、低分化鳞癌阳性率为87.1%、83.9%、62.1%,P=0.054;CK14在高、中、低分化鳞癌阳性率为87.1%、76.4%、27.6%,P<0.01)。两种蛋白表达与预后无明显关系(P=0.8980和 P=0.2610)。两种蛋白表达呈正相关(r=0.487,P<0.01)。成束蛋白在绝大多数细胞系高表达,仅在生长和侵袭能力弱的 TE12细胞系中无表达,而 CK14仅在 KYSE180细胞系中表达。结论成束蛋白、CK14在食管鳞癌普遍表达上调,可能在食管鳞癌发生发展中起重要作用。联合应用还有望成为食管鳞癌诊断的有效标志物。

细胞角蛋白14基因在非小细胞肺癌中的表达与意义

目的探讨细胞角蛋白14(CK14)基因的表达在非小细胞肺癌(NSCLC)发生、发展及转移中的意义。方法采用免疫组织化学染色法检测110例NSCLC患者癌组织、癌旁组织、正常肺组织中CK14的表达。采用Western blotting法检测12例患者新鲜组织中CK14的表达。应用非条件Logistic回归分析CK14表达水平与NSCLC患者各临床病理参数的关系。结果免疫组织化学染色结果显示,CK14在NSCLC癌组织中高表达,阳性表达率为68.18%,与癌旁组织和正常肺组织相比,差异有统计学意义(P<0.001)。CK14表达水平与NSCLC患者性别、组织类型、分化程度、分期以及淋巴结转移情况显著相关(P<0.05),与年龄无关(P>0.05)。Western blotting结果显示,CK14在NSCLC癌组织中的表达率较癌旁组织和正常肺组织高。非条件Logistic分析显示,低分化癌、病理分期Ⅱ期和Ⅲ期、CK14表达阳性是NSCLC患者发生淋巴结转移的重要危险因素(P<0.05)。结论 CK14表达在NSCLC的发生、发展和转移中发挥重要作用。CK14有望成为评估NSCLC生物学行为的重要指标。

人皮肤真皮组织中角朊干细胞样细胞的分离与培养

背景:皮肤真皮组织是皮肤损伤修复时除表皮基底层以外可形成表皮层结构的重要干细胞来源。目的:探索从人皮肤真皮组织中分离培养角朊干细胞样细胞的新方法。方法:将一定大小的成人腹部全层皮肤组织用Dispase过夜消化后去除表皮层结构,然后用0.1%Ⅰ型胶原酶过夜消化,离心分离以获取真皮来源总细胞。将分离的细胞用含有体积分数1%N2,2%B27,20μg/L表皮生长因子和40μg/L碱性成纤维细胞生长因子的DMEM/F12(1:1)无血清培养液悬浮后以低密度接种于培养皿进行培养。采用RT-PCR和免疫细胞荧光染色法对其进行分析。结果与结论:RT-PCR分析结果显示所分离的真皮细胞中含有表达Lgr5和Lirg1等特异基因的毛囊来源干细胞;免疫细胞荧光分析结果显示其表达细胞角蛋白8和细胞角蛋白14。在无血清条件下培养6d时,可观察到表达细胞角蛋白14和整合素α6的"铺路石"样细胞克隆。进行传代培养后P1细胞表达角朊干细胞标志物CD29、细胞角蛋白14和P63。传代培养至P3,4时大部分细胞分化,不能继续传代。结果证实,以无血清培养液结合低密度培养法可直接从人真皮组织中有效地培养增殖活跃、细胞角蛋白14和P63阳性的角朊干细胞样细胞。

P16、Ki67、CK14细胞学检测与HPV感染在宫颈上皮内瘤变诊断中的意义

目的探讨检测宫颈脱落细胞中P16、Ki67、CK14与薄层液基细胞学检查(TCT)及高危型人乳头瘤病毒检查(HR-HPV)在宫颈上皮内瘤变(CIN)筛查的应用价值。方法选取宫颈病变筛查者的宫颈脱落细胞作为研究样本,对所有患者行TCT及HR-HPV检查,对阳性结果或临床症状高度可疑的患者行阴道镜活检和P16、Ki67、CK14检测。结果 P16、Ki67、CK14在实验组阳性表达率均高于TCT及HPV单独筛查阳性表达率,差异有统计学意义(P<0.05)。P16、Ki67、CK14在实验组各组中阳性表达率组间比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 P16、Ki67、CK14联合细胞学检测对宫颈上皮内瘤变的早期筛查有较高的准确率,为临床治疗提供一定的指导。

CK5/6和CK14在乳房外Paget病的分布

目的观察细胞角蛋白5/6(CK5/6)及14(CK14)在乳房外Paget病中的表达特点,并探讨其生物学意义。方法应用免疫组化二步法分别检测34例乳房外Paget病患者皮损及20例正常对照皮肤中CK5/6及CK14的表达情况。结果 CK5/6和CK14在乳房外Paget病中阳性表达,两者主要在表皮全层弥漫性表达,表达率分别为91.17%和88.24%。结论 CK5/6和CK14在乳房外Paget病的组织来源方面起到一定的启示作用,推测乳房外Paget病的肿瘤细胞可能来源于异常分化的基底细胞层表皮干细胞。

上皮根鞘细胞在牙骨质发育中的作用

目的:观察牙根发育中上皮根鞘细胞(Hertwig′s epithelial root sheath,HERS)断裂后结局和增殖凋亡相关基因的表达,探讨上皮根鞘在牙根发育特别是牙骨质形成中的可能作用。方法:用TUNEL( TdT-mediated -dUTP nick end labeling , TUNEL)法原位细胞凋亡检测牙根发育中上皮根鞘细胞凋亡的情况。以细胞角蛋白14(cytokeratin 14)标记上皮根鞘细胞,追踪其断裂后结局。SP免疫组化法检测增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen, PCNA )和凋亡抑制基因Bcl -2在上皮根鞘细胞的表达。结果:牙形成后,内外釉上皮结合增殖形成HERS,此时呈PCNA表达阳性;牙根发育开始后,HERS呈Bcl -2阴性表达,在少量牙本质基质形成处,上皮根鞘细胞开始呈TUNEL阳性表达,之后HERS断裂,在其外侧可见成牙骨质细胞的形成,断裂的HERS细胞部分转入牙周膜形成上皮剩余(the epithelial rest of Malassez),而细胞牙骨质形成中可见部分埋入细胞呈CK14阳性表达。结论:HERS细胞的凋亡可能会为成牙骨质细胞分化提供信号,部分HERS细胞可能参与牙骨质的形成。

CK10、CK14、p63在移植至裸鼠皮下的人表皮的表达

目的研究人表皮移植至裸鼠皮下后表皮细胞的表型变化。方法将制备的人包皮表皮皮片移植到裸鼠背部皮下,7d取材。移植前后人表皮皮片标本行HE染色及细胞角蛋白10(CK10)、细胞角蛋白14(CK14)、p63免疫组织化学染色镜下观察。结果人表皮皮片移植到裸鼠皮下成活率达70%,移植成活的表皮基底层细胞增殖,细胞数增多,新生表皮增厚。免疫组化结果显示,与移植前相比,CK10表达减弱,CK14和p63表达增强,这与人皮肤创伤愈合过程中表皮细胞表型变化一致。结论移植人表皮到裸鼠皮下的方法可以模拟人皮肤创伤愈合过程,是一种可行的在体研究人表皮细胞的实验方法。

MEBT/MEBO对慢性难愈合创面组织中CK14及CK19表达水平的影响

目的探讨皮肤再生医疗技术(moist exposed burn therapy/moist exposed burn ointment,MEBT/MEBO)对大鼠慢性难愈合创面组织中CK14及CK19表达水平的影响。方法按照随机数表法将90只SPF级Wistar大鼠随机分为空白组、急创组、慢创组、rb-bFGF组及MEBO组,每组18只,空白组大鼠仅做背部备皮处理,急创组大鼠建立急性创面模型,慢创组、rb-bFGF组及MEBO组大鼠建立慢性创面模型;造模成功后,空白组大鼠备皮处皮肤以及急创组与慢创组大鼠创面予以生理盐水纱布湿敷,rb-bFGF组大鼠创面予以重组牛碱性成纤维细胞生长因子(recombinant bovine basic fibroblast growth factor,rb-bFGF)凝胶治疗,MEBO组大鼠创面予以湿润烧伤膏(moist exposed burn ointment,MEBO)治疗。分别于局部处理第3、7、14天取各组大鼠皮肤或创面组织行Masson染色,观察组织形态学差异,并进行Western blotting及RT-PCR检测,对比CK14、CK19蛋白表达及其mRNA转录水平。结果(1)Masson染色结果显示,急创组、rb-bFGF组及MEBO组大鼠创面组织形态学差异不明显,均可见炎性细胞逐渐减少,新生血管及皮肤附属器逐渐形成,创面组织形态逐渐接近正常,而慢创组大鼠创面组织中炎性细胞消散及新生血管生长较慢,逐渐形成瘢痕组织形态。(2)局部处理第3、7、14天,急创组、慢创组、rb-bFGF组及MEBO组大鼠创面组织中CK14蛋白表达及其mRNA转录水平均呈逐渐升高的趋势(P均<0.05),至局部处理第14天,急创组、rb-bFGF组及MEBO组均升高至空白组水平(P均>0.05),而慢创组仍低于其它各组(P均<0.05)。(3)局部处理第3、7、14天,急创组、慢创组、rb-bFGF组及MEBO组大鼠创面组织中CK19蛋白表达及其mRNA转录水平均呈先升高后降低的趋势(P均<0.05),至局部处理第14天,急创组、rb-bFGF组及MEBO组均降低至空白组水平(P均>0.05),而慢创组仍高于其它各组(P均<0.05)。结论MEBT/MEBO能够促进慢性难愈合创面愈合,调控创面组织中CK14及CK19的表达水平可能是其部分作用机制。

细胞牙骨质发育的组织形态学观察

目的:通过追踪观察小鼠细胞牙骨质发育过程中的组织形态和细胞活性改变,探讨源于上皮根鞘断裂的上皮性细胞是否参与细胞牙骨质的发育。方法:选取出生后15、19、25 d BALB/c小鼠的下颌第一磨牙根尖1/3区细胞牙骨质,细胞角蛋白14(CK 14)标记追踪上皮根鞘断裂后的上皮性细胞;TUNEL(Td T-mediated-d UTP nick end labeling,TUNEL)法检测细胞牙骨质在发育过程中的细胞凋亡情况;透射电镜观察细胞牙骨质发育的超微结构。结果:细胞凋亡检测结果显示,细胞牙骨质形成过程中可见大量被埋入或正被埋入细胞呈现凋亡阳性表达;免疫组化染色结果显示,其中部分细胞呈CK14阳性表达;透射电镜观察结果显示,细胞牙骨质形成过程中上皮性细胞被其外侧成牙骨质细胞分泌的基质包围。结论:来源上皮根鞘断裂的上皮性细胞可能作为牙骨质细胞参与细胞牙骨质的形成。

体外构建3D人工皮肤

背景:已有研究采用3D打印人工皮肤,但存在皮肤表皮层不能分化为多层等缺陷。目的:优化人工皮肤的构建方法,获得更好的人工皮肤。方法:从牛尾和鼠尾中分别提取与纯化胶原。从儿童包皮组织中分离培养原代成纤维细胞和角质细胞,再以牛尾(或鼠尾)胶原包埋成纤维细胞,构建真皮层;将角质细胞接种于含鼠尾(或牛尾)胶原包埋的成纤维细胞上培养7 d,再气提培养7 d,获得人工皮肤。观察人工皮肤的收缩性、水接触角,并进行苏木精-伊红染色、天狼猩红染色及免疫荧光染色。结果与结论:(1)鼠尾胶原构建人工皮肤真皮层面积下降了50%,牛尾胶原构建人工皮肤真皮层面积只下降了21%;(2)牛尾胶原构建人工皮肤的接触角与人皮肤接近,比鼠尾胶原构建人工皮肤的疏水性更好;(3)天狼猩红染色结果显示,与鼠尾胶原构建的人工皮肤相比,牛尾胶原构建人工皮肤的胶原折光性更强,胶原排列更有序,纤维更粗;(4)苏木精-伊红染色显示,与鼠尾胶原构建人工皮肤相比,牛尾胶原构建人工皮肤真皮层的表皮可形成更多层;(5)结果表明,将角质细胞接种于牛尾胶原包埋的成纤维细胞上,可构建更好的人工皮肤。