抗结核药物性肝损伤小鼠模型细胞角蛋白18与基质金属蛋白酶7的表达水平

目的 分析抗结核药物性肝损伤(ATB-DILI)模型小鼠组织及血清中细胞角蛋白18(CK18)与基质细胞金属蛋白酶7(MMP-7)表达,探讨CK18与MMP-7在肝损伤发生中的临床价值。方法 6周龄SPF级雄性KM小鼠20只,体重18~24 g,按照随机区组法分为4组,每组5只。选择3组进行卡介苗(BCG)滴鼻使小鼠感染结核分枝杆菌,其中两组分别灌胃异烟肼(INH)45 mg/(kg·d)、利福平(RIF)90 mg/(kg·d),持续3周,记为INH 3周组及RIF3周组,剩余一组为BCG感染对照组;未经任何处理的为空白对照组。通过PCR检测小鼠肺组织BCG含量,病理观察小鼠肝损伤证实动物模型建立成功。比较各组肝脏指数、病变范围;比较各组小鼠血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、γ-谷氨酰转移酶(GGT)、总胆红素(TBil)、CK18、MMP-7表达情况;比较各组小鼠肝脏组织CK18、MMP-7蛋白表达情况。结果 BCG感染对照组与空白对照组小鼠ALT、AST、ALP、GGT、TBil表达比较,差异无统计学意义(P>0.05);INH 3周组和RIF 3周组小鼠ALT、AST、GGT、TBil表达高于BCG感染对照组(P<0.05)。空白对照组、BCG感染对照组小鼠肝脏组织CK18、MMP-7蛋白表达比较,差异无统计学意义(P>0.05);INH 3周组、RIF 3周组小鼠肝脏组织CK18、MMP-7蛋白表达高于BCG感染对照组(P<0.05)。空白对照组、BCG感染对照组小鼠血清CK18、MMP-7表达比较,差异无统计学意义(P>0.05);INH 3周组、RIF 3周组小鼠血清CK18、MMP-7表达高于BCG感染对照组(P<0.05)。空白对照组、BCG感染对照组小鼠肝脏指数、病变范围比较,差异无统计学意义(P>0.05);INH 3周组、RIF 3周组小鼠肝脏指数、病变范围高于BCG感染对照组(P<0.05)。结论 CK18与MMP-7可能影响ATB-DILI,明确CK18与MMP-7表达水平,提前干预,可以降低ATB-DILI发生风险。

血清细胞角蛋白18在慢性肝脏疾病中的应用

细胞角蛋白18(CK-18)是构成肝细胞中间丝的主要蛋白质,当肝细胞发生凋亡或坏死时会被释放入血。血清CK-18最初是用于评估非酒精性脂肪性肝炎的严重程度,而近些年越来越多的临床研究发现,在其他慢性肝脏疾病中血清CK-18水平也会升高,可作为评估慢性肝脏疾病程度的新型血清学标志物。本文围绕血清CK-18在不同慢性肝脏疾病的临床应用进行综述。

首次出现发热性中性粒细胞减少症的成人AML患者CK-18的诊断价值

目的探讨首次出现发热性中性粒细胞减少症(FN)的成人急性髓系白血病(AML)患者血浆半胱氨酸-天冬氨酸蛋白水解酶-3裂解的细胞角蛋白-18(CK-18)片段的诊断价值。方法收集2017年11月至2021年12月在张家港市第一人民医院血液科接受血液肿瘤强化化疗的75例AML-FN患者。在FN发作时(d_(0))、第1天(d_(1))和第2天(d_(2))测量血浆CK-18片段M30、C反应蛋白(CRP)和降钙素原(PCT)水平。对化疗期间血流感染(BSI)和脓毒症的发生情况进行评估。结果8例患者出现脓毒症,25例患者有血液培养阳性感染[BSI(+)]。BSI(+)组患者血浆CK-18水平在发热后d_(1)达到峰值。d_(1)和d_(2)时较高的血浆CK-18水平与BSI(+)和脓毒症有关。受试者工作特征(ROC)曲线分析中,d_(1) CK-18预测BSI(+)的曲线下面积(AUC)最高,为0.832(95%CI:0.742~0.922),稍高于PCT和CRP(P<0.05)。d_(1) CK-18预测脓毒症的AUC值也较高,略高于PCT和CRP,差异无统计学意义(P>0.05)。d_(0)~d_(2)期间CK-18峰值与PCT峰值有关,BSI(+)患者的相关系数(0.407)高于BSI(-)患者(0.182)。结论在AML患者中,血浆CK-18片段被发现是FN早期BSI(+)和脓毒症的潜在诊断标志物。

齐墩果酸通过miR-18a-5p/STK4轴抑制白血病K562细胞恶性进展

慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)是由于骨髓造血干细胞的恶性增生导致的疾病。虽然酪氨酸激酶抑制剂(Tyrosine kinase inhibitors,TKI)对慢性粒细胞性白血病的治疗取得长足进展,但耐药问题仍未解决。因此,寻找新的治疗药物和靶点十分关键。有研究表明,miRNAs与慢性粒细胞白血病在内的多种肿瘤有密切联系,齐墩果酸(oleanolic acid,OA)对白血病细胞有较好的抑制效果。通过对转录物组测序结果发现,齐墩果酸可以显著上调丝氨酸/苏氨酸蛋白质激酶4(serine/threonine-protein kinase 4,STK 4)的水平,而miR1a-5p是STK 4的靶miRNA。因此,本文旨在探究齐墩果酸是否可以通过miR-18a-5p/STK4影响K562细胞恶性进展。K562细胞经齐墩果酸处理后差异表达基因富集在凋亡相关通路上。EdU实验和CCK-8实验结果发现,齐墩果酸降低K562细胞增殖能力(P<0.05)。qRT-PCR,免疫荧光和Western印迹结果显示,齐墩果酸处理后,K562细胞中STK 4蛋白质水平表达显著上调(P<0.05),miR-18a-5p表达下调(P<0.05)。在细胞中转染miR-18a-5p mimics,能显著抑制STK 4的表达(P<0.05);转染miR-18a-5p inhibitor能显著增加STK 4的表达(P<0.05)。活性氧(reactive oxygen species、ROS)检测和线粒体膜电位检测结果显示,齐墩果酸可以促进K562细胞中ROS的增加,降低线粒体膜电位。过表达STK 4后,与Vector组相比,细胞的线粒体膜电位下降;敲降STK 4可以逆转齐墩果酸组导致的线粒体膜电位下降。流式细胞术检测显示,齐墩果酸能明显促进细胞凋亡的发生,而转染miR-18a-5p mimics后凋亡率显著下调(P<0.05);过表达STK 4可以促进细胞从早期凋亡向晚期凋亡转化,而同时转染miR-18a-5p mimics可以抑制这一现象。我们的研究结果证实,齐墩果酸可以通过维持miR-18a-5p的低表达和保持STK 4的高表达状态来促进K562细胞的凋亡。

结直肠癌肝转移患者白细胞介素-18、促肝再生磷酸酶蛋白3表达与PI3K及AKT蛋白的关系

目的探讨结直肠癌肝转移患者癌组织中白细胞介素-18(IL-18)、促肝再生磷酸酶蛋白3(PRL-3)表达与临床病理特征及磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、丝苏氨酸蛋白激酶B(AKT)蛋白水平的关系。方法选取2019年10月至2021年10月于上海中医药大学附属岳阳中西医结合医院行同期切除术的85例结直肠癌肝转移患者(肝转移组)的癌组织样本及癌旁正常组织(距肿瘤切缘4 cm),以及同期65例未发生肝转移结直肠癌患者(未肝转移组)的癌组织为研究对象。免疫组织化学S-P法检测不同组织中IL-18、PRL-3阳性表达率,Western blot检测癌组织中PI3K、p-AKT相对表达水平,分析IL-18、PRL-3与患者临床病理的关系及其与PI3K、p-AKT表达的相关性。结果与未肝转移组比较,肝转移组TNM分期IV期、低分化程度比例较高(P<0.05)。肝转移患者癌组织中IL-18、PRL-3、PI3K、p-AKT蛋白阳性表达率高于其癌旁正常组织和未肝转移患者癌组织,且未肝转移患者癌组织中IL-18、PRL-3、PI3K、p-AKT蛋白阳性表达率高于肝转移患者癌旁正常组织(P<0.05)。相关性分析示,肝转移患者癌组织中IL-18、PRL-3表达与PI3K、p-AKT均呈正相关(P<0.05);未转移癌组织中IL-18表达与PI3K、p-AKT均呈正相关(P<0.05),PRL-3表达与p-AKT均呈正相关(P<0.05),且IL-18与PRL-3呈显著正相关(P<0.05)。结论IL-18、PRL-3可能通过激活PI3K/AKT信号通路从而参与结直肠癌肝转移过程。

结直肠癌组织KRT15、KRT18蛋白表达与临床病理特征和预后的关系分析

目的探讨结直肠癌组织中角蛋白15(KRT15)、角蛋白18(KRT18)蛋白表达与临床病理特征和预后的关系。方法选取2018年6月至2019年6月该院收治的97例行手术治疗的结直肠癌患者作为研究对象。采用免疫组化法检测结直肠癌组织和癌旁组织中KRT15、KRT18蛋白表达,比较不同临床病理特征结直肠癌患者KRT15、KRT18蛋白表达的差异。结直肠癌患者出院后随访3年,统计其随访期间总生存期(OS)情况,采用Kaplan-Meier生存曲线和Log-rank检验分析不同KRT15、KRT18蛋白表达的结直肠癌患者OS率差异,单因素和多因素COX风险比例回归分析影响结直肠癌患者预后的因素。结果结直肠癌组织中KRT15、KRT18蛋白阳性表达率高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。低分化、TNMⅢ期、有神经侵犯、术前癌胚抗原(CEA)≥5 ng/mL的结直肠癌患者癌组织中KRT15、KRT18蛋白阳性表达率高于中、高分化、TNMⅠ~Ⅱ期、无神经侵犯、术前CEA<5 ng/mL的结直肠癌患者,差异有统计学意义(P<0.05)。KRT15、KRT18蛋白阳性表达的结直肠癌患者3年OS率依次为64.29%、60.00%,低于KRT15、KRT18蛋白阴性表达的结直肠癌患者3年OS率(依次为83.64%、85.96%),差异有统计学意义(χ^(2)=6.497、7.987,P<0.05)。多因素COX风险比例回归分析结果显示,TNMⅢ期、KRT15蛋白阳性表达、KRT18蛋白阳性表达是影响结直肠癌患者生存的危险因素(P<0.05)。结论结直肠癌组织中KRT15、KRT18蛋白表达可为结直肠癌患者预后评估提供参考。

小鼠抗人密封蛋白18剪接变异体2(Claudin18.2)CAR-T细胞的构建及体外功能验证

目的筛选一种抗人密封蛋白18剪接变异体2(Claudin18.2)的单克隆抗体(mAb),并基于该抗体序列构建靶向Claudin18.2的嵌合抗原受体T(CAR-T)细胞,用于开发CAR-T细胞疗法。方法用人Claudin18.2抗原免疫小鼠,取小鼠脾细胞与SP2/0细胞进行细胞融合,经筛选获得小鼠抗人Claudin18.2 mAb。以抗体序列为模板PCR扩增出重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)序列,用接头(linker)连接成单链抗体(scFv),并用此scFv构建CAR。将CAR克隆至慢病毒表达载体中,用包装好的慢病毒感染T细胞制备出抗Claudin18.2 CAR-T细胞。结果筛选到的小鼠抗人Claudin18.2 mAb对人和鼠的Claudin18.2抗原都有结合能力,亲和力高于对照抗体。构建的CAR-T细胞在效靶比1∶9时,对过表达Claudin18.2的阳性靶细胞的杀伤率在50%~70%。结论制备的小鼠抗人Claudin18.2 mAb具有人鼠双种属特异性,组织特异性良好,亲和力高。构建的anti-Claudin18.2 CAR-T细胞对靶细胞具有良好杀伤效果。

血清DKK1、sRAGE、hCAP-18对急性淋巴细胞白血病患儿的诊断和预后不良的预测价值

目的 探讨血清Dickkopf相关蛋白1(DKK1)、可溶性晚期糖基化终末产物受体(sRAGE)、人类阳离子抗菌蛋白-18(hCAP-18)对急性淋巴细胞白血病患儿的诊断和预后不良的预测价值。方法 选取2020年4月至2022年4月南京鼓楼医院集团宿迁医院收治的84例急性淋巴细胞白血病患儿作为研究组,包括标危28例、中危36例、高危20例。另选取同期在南京鼓楼医院集团宿迁医院体检的84例健康儿童作为对照组。收集所有研究对象的临床资料。采用酶联免疫吸附试验检测所有研究对象血清DKK1、sRAGE、hCAP-18水平。对研究组患儿进行为期1年的随访,并按随访结果分为预后不良组和预后良好组。绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血清DKK1、sRAGE、hCAP-18在急性淋巴细胞白血病患儿诊断和预后不良的预测价值。采用多因素Logistic回归分析影响急性淋巴细胞白血病发生的因素。结果 与对照组相比,研究组患儿白细胞计数(WBC)、DKK1水平显著升高,sRAGE、hCAP-18水平显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与研究组标危患儿相比,中危和高危患儿血清DKK1水平显著升高,sRAGE、hCAP-18水平显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与中危患儿相比,高危患儿血清DKK1水平显著升高,sRAGE、hCAP-18水平显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。血清DKK1、sRAGE、hCAP-18联合诊断急性淋巴细胞白血病的曲线下面积(AUC)显著高于血清DKK1、sRAGE、hCAP-18单独诊断的AUC(Z=2.820,P=0.005;Z=5.170,P<0.001;Z=5.272,P<0.001)。多因素Logistic回归分析结果显示,血清WBC、DKK1、sRAGE、hCAP-18是急性淋巴细胞白血病发生的影响因素(P<0.05)。随访1年后,26例患儿纳入预后不良组,58例患儿纳入预后良好组。与预后良好组相比,预后不良组患儿血清DKK1水平显著升高,sRAGE、hCAP-18水平显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与预后不良组中危患儿相比,高危患儿DKK1水平显著升高,sRAGE、hCAP-18水平显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。血清DKK1、sRAGE、hCAP-18联合预测急性淋巴细胞白血病患儿预后不良的AUC明显高于血清DKK1、sRAGE、hCAP-18单独预测的AUC(Z=2.312,P=0.021;Z=3.160,P=0.002;Z=2.926,P=0.003)。结论 急性淋巴细胞白血病患儿血清DKK1高表达,sRAGE、hCAP-18低表达,且三者联合检测对急性淋巴细胞白血病具有一定的诊断和预后预测价值。

颅脑损伤患者外周血白细胞介素-18、基质金属蛋白酶-9水平与迟发性颅内脑血肿的相关性

目的探讨颅脑损伤(TBI)患者外周血白细胞介素-18(IL-18)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)水平与迟发性颅内脑血肿(DTIH)的相关性。方法选取2021年4月至2022年8月医院收治的88例TBI患者作为研究对象。所有患者治疗后经2次及以上头颅CT平扫,根据是否发生DTIH分成DTIH组(45例)和非DTIH组(43例)。收集患者的一般资料,采用酶联免疫吸附法检测患者IL-18、MMP-9,采用单因素分析及Logistic多因素回归分析法分析影响发生DTIH的因素。结果单因素分析结果提示,DTIH组的舒张压、血浆凝血酶时间(TT)、IL-18及MMP-9水平高于非DTIH组,而格拉斯哥昏迷指数(GCS)评分低于非DTIH组,差异有统计学意义(P<0.05)。多因素分析结果提示,IL-18(β=0.294,OR=1.342,95%CI=1.044~1.724)及MMP-9(β=0.298,OR=1.347,95%CI=1.093~1.659)是TBI患者发生DTIH的危险因素(P<0.05)。结论IL-18和MMP-9表达异常升高与TBI患者治疗后发生DTIH相关,两者均为TBI患者发生DTIH的危险因素。

细胞角蛋白18在非酒精性脂肪性肝病风险预测和疾病进展评估中的研究进展

非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)已成为全球最流行的慢性肝脏疾病。肝组织活检仍是评估NAFLD疾病严重程度的金标准,但由于其存在有创性、潜在并发症、取样误差等局限,不适用于常规监测疾病进展与治疗预后。肝细胞凋亡可反映NAFLD疾病进展,其中角蛋白18(cytokeratin 18,CK-18)与肝细胞凋亡密切相关,被认为是NAFLD预测与诊断最有潜力的无创生物标志物之一。本文主要对CK-18及其相关无创预测模型在NAFLD、非酒精性脂肪性肝炎(nonalcoholic steatohepatitis,NASH)及肝纤维化等不同疾病特征中的表现进行综述,评估其对NAFLD风险预测和疾病进展评估中的价值,并讨论CK-18未来作为临床广泛使用的NAFLD无创诊断工具的的可能性。

抗结核药物性肝损伤患者血清细胞角蛋白18-M30与M65的临床意义的探讨

目的探讨抗结核药物性肝损伤(ATB-DILI)患者血清细胞角蛋白18-M30与M65的临床意义。方法收集2017年~2022年在我院诊断ATB-DILI的患者70例和37例健康人。采用ELISA检测血清CK18-M30、CK18-M65水平,收集其生化学及凝血检验指标。结果ATB-DILI组与健康人群在CK18-M30对数、CK18-M65对数、ALB、TBIL、DBIL、IBIL、ALT、AST、GGT、ALP、INR有统计学差异(P<0.05)。Pearson相关分析,CK18-M30对数、CK18-M65对数与ALB正相关,与INR负相关(P<0.05),M30/M65与ALT正相关(P<0.05)。Spearman等级相关分析,ATB-DILI严重程度与CK18-M30对数、CK18-M65对数、ALB负相关(P<0.05),与年龄、TBIL、DBIL、IBIL、ALT、AST、GGT、ALP、INR正相关(P<0.05)。结论CK18-M30、M65对ATB-DILI的有一定的临床意义,可用于疾病严重程度的判断。

角蛋白KRT18对LRP16亚细胞定位的影响

目的:通过构建LRP16绿色荧光蛋白(GFP)融合子,观察LRP16蛋白在乳腺癌MCF-7、小鼠成纤维NIH3T3细胞株中的亚细胞定位,研究角蛋白18(Cytokeratin18,KRT18)对LRP16亚细胞定位的影响,并利用Western-blot对KRT18能够调控LRP16核浆穿梭进一步验证。方法:构建真核表达载体pEGFP-LRP16,经脂质体介导pEGFP-LRP16质粒单独转染,与携带KRT18基因的Flag-pCDNA3-KRT18质粒共同转染NIH3T3、MCF-7细胞,荧光显微镜观察LRP16的亚细胞分布变化。Western-Blot法进一步验证在KRT18过表达和小干扰(siRNA)技术沉默掉KRT18后对内源性LRP16蛋白核浆分布的影响。结果:成功构建pEGFP-LRP16融合载体,荧光显微镜观察LRP16蛋白在MCF-7细胞呈核型分布为主,在NIH3T3细胞呈浆型分布为主。与KRT18共同转导后LRP16亚细胞分布趋向细胞浆。Western blot分析证实角蛋白18会介导内源性LRP16由核向浆穿梭的生物学功能。结论:KRT18通过与LRP16相互作用将LRP16扣留在细胞浆,是影响LRP16亚细胞分布的关键因子。为进一步研究KRT18对LRP16翻译后核功能执行的调控机制奠定了基础。

血清sCD163、CK18、25-(OH)D_(3)对肝硬化食管静脉曲张破裂出血患者医院感染风险的影响及预测价值

目的 探讨血清可溶性血红蛋白清道夫受体-163(sCD163)、细胞角蛋白18(CK18)、25-羟维生素D_(3)[25-(OH)D_(3)]对肝硬化合并食管静脉曲张破裂出血(EVB)患者医院感染风险的影响及预测价值。方法 选取南阳市中心医院2021年2月至2023年2月收治的114例肝硬化合并EVB患者,根据入院10 d内是否发生医院感染分为感染组(36例)和非感染组(78例)。比较两组血清sCD163、CK18、25-(OH)D_(3)水平,分析入院时血清sCD163、CK18、25-(OH)D_(3)水平与发生医院感染的相关性及影响因素,评价入院时血清sCD163、CK18、25-(OH)D_(3)水平联合检测对肝硬化合并EVB患者发生医院感染的预测价值。结果 入院时感染组血清sCD163、CK18水平较非感染组高,25-(OH)D_(3)水平较非感染组低(P<0.05);入院时血清CD163、CK18水平与发生医院感染均呈正相关,25-(OH)D_(3)水平与发生医院感染呈负相关(P<0.05);入院时血清sCD163(>5.16 mg·L^(-1))、CK18(>14.25μg·L^(-1))水平为发生医院感染的危险因素,25-(OH)D_(3)(>8.62μg·L^(-1))水平为发生医院感染的保护因素。入院时血清sCD163、CK18、25-(OH)D_(3)水平联合预测EVB患者发生医院感染的曲线下面积大于各单一指标(P<0.05)。结论 肝硬化合并EVB患者血清sCD163、CK18、25-(OH)D_(3)水平与医院感染有关,是影响医院感染的独立风险因素。

血清CXCL10、CCCK-18水平对伴糖尿病冠心病患者PCI术后短期预后的预测效能

目的探讨血清CXC趋化因子配体10(CXCL10)、细胞角蛋白18裂解片段(CCCK-18)水平对伴糖尿病冠心病患者经皮冠状动脉介入术(PCI)后短期预后的预测效能。方法选取2020年12月至2022年12月在安阳市第三人民医院实施相应PCI手术的149例伴糖尿病冠心病患者作为研究对象,采用酶联免疫吸附法检测血清CXCL10、CCCK-18水平。术后随访3个月,根据患者是否发生主要心血管不良事件(MACE)分为预后良好组121例和预后不良组28例。采用受试者工作特征曲线(ROC)评估血清CXCL10、CCCK-18水平对伴糖尿病冠心病患者PCI术后短期预后的预测效能,采用二分类Logistic逐步回归分析探讨伴糖尿病冠心病患者PCI术后短期预后的影响因素。结果预后不良组患者冠状动脉评分(Gensini)≥70分和多支血管病变的占比分别为78.57%、89.29%,明显高于预后良好组的43.80%、60.33%,差异均有统计学意义(P<0.05),其他临床资料比较差异均无统计学意义(P>0.05);预后不良组患者的血清CXCL10、CCCK-18水平分别为(19.35±2.41)ng/mL、(306.45±33.69)U/L,明显高于预后良好组的(8.63±1.87)ng/mL、(218.36±22.15)U/L,差异均有统计学意义(P<0.05);经ROC分析结果显示,血清CXCL10、CCCK-18水平预测伴糖尿病冠心病患者PCI术后短期预后的最佳截断值分别为13.51 ng/L、262.47 U/L,而两者联合预测的曲线下面积(AUC)95%置信区间(95%CI)为0.912(0.868~0.957);经多因素Logistic逐步回归分析结果显示:Gensini评分≥70分、多支血管病变、CXCL10、CCCK-18均是伴糖尿病冠心病患者PCI术后短期预后的影响因素(P<0.05)。结论伴T2DM冠心病PCI术后预后不良患者的血清CXCL10、CCCK-18水平较预后良好者明显升高,两者联合检测对术后不良心血管事件具有一定的预测效能。

过表达lncRNA HCG18调控miR-107/CDKN2B轴对甲状腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制研究

目的探讨长链非编码RNA人类白细胞抗原复合体18(lncRNA HCG18)调控miR-107/周期蛋白依赖激酶抑制因子2B(CDKN2B)轴对甲状腺乳头状癌(PTC)细胞增殖、侵袭、迁移的影响。方法实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、Western blot分别检测60例PTC患者癌组织、癌旁组织及人正常甲状腺上皮细胞TEC及人PTC细胞WRO、TPC-1、SW579中HCG18、miR-107、CDKN2B蛋白表达;将WRO细胞分为CK组、si-NC组、si-HCG18组、pcDNA组、pcDNA-HCG18组、pcDNA-HCG18+mimic NC组、pcDNA-HCG18+miR-107 mimic组,qRT-PCR检测各组细胞HCG18、miR-107表达;CCK-8法检测细胞增殖;划痕实验检测细胞迁移;Transwell检测细胞侵袭;Western blot检测CDKN2B、细胞周期素D1(CyclinD1)、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9蛋白表达;双荧光素酶实验验证HCG18和miR-107、miR-107和CDKN2B的关系。结果在PTC组织和PTC细胞中,HCG18、CDKN2B蛋白低表达,miR-107高表达,且在WRO细胞中HCG18、CDKN2B蛋白水平最低,miR-107表达最高(P<0.05),因此,选择WRO细胞进行转染。与si-NC组比较,si-HCG18组HCG18、CDKN2B蛋白表达降低,miR-107表达升高(P<0.05);与pcDNA组比较,pcDNA-HCG18组HCG18、CDKN2B蛋白表达升高,miR-107表达降低(P<0.05);与pcDNA-HCG18+mimic NC组比较,pcDNA-HCG18+miR-107 mimic组HCG18表达变化差异无统计学意义(P>0.05),miR-107表达升高,CDKN2B蛋白表达降低(P<0.05);上调HCG18可抑制WRO细胞增殖、侵袭、迁移及CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白表达,而下调HCG18则呈相反趋势;过表达miR-107可减弱上调HCG18对WRO细胞增殖、侵袭与迁移的抑制作用;HCG18与miR-107、miR-107与CDKN2B存在靶向调控关系。结论过表达HCG18可能通过海绵化miR-107来上调CDKN2B表达,进而抑制PTC细胞增殖、迁移与侵袭。

普萘洛尔对人脐静脉内皮细胞生物学行为及SOX18、MMP-7、VEGFA表达的影响

目的探讨普萘洛尔对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)增殖、凋亡、迁移及成管能力,以及对性别决定区Y框18(sex determining region Y-box 18,SOX18)、基质金属蛋白酶-7(matrix metalloproteinase-7,MMP-7)和血管内皮生长因子A(vascular endothelial growth factor A,VEGFA)表达的影响。方法以不同浓度的普萘洛尔处理HUVEC,采用CCK-8法检测细胞活力,选出最佳浓度及时间。实验分为对照组,普萘洛尔不同浓度(50、100、150μmol/L)组,采用流式细胞术、细胞划痕实验和成管实验观察HUVEC凋亡、迁移和管腔形成情况,Western blot和实时荧光定量PCR法检测SOX18、MMP-7、VEGFA蛋白及mRNA表达水平。结果与对照组相比,普萘洛尔不同浓度组细胞凋亡率升高(P<0.05),且随药物浓度增加显著升高(P<0.05);普萘洛尔不同浓度组伤口愈合率降低,成管节点数和成管总长度减少,SOX18、MMP-7、VEGFA蛋白及mRNA表达下调(P<0.05)。结论普萘洛尔可抑制HUVEC的增殖、迁移、成管能力并促进细胞凋亡,降低SOX18、MMP-7和VEGFA表达水平。

细胞角蛋白检测对儿童ALL药物性肝损伤预测价值

目的探究血清细胞角蛋白18-M30(CK18-M30)和18-M65(CK18-M65)对儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)治疗后发生药物性肝损伤(DILI)的预测价值。方法2019年3月—2022年2月,新乡医学院第一附属医院收治ALL病儿66例,依据DILI分为观察组49例(发生)和对照组17例(未发生),观察组依据DILI病情分为轻度、中度和重度亚组。收集病儿相关临床资料,检测血清CK18-M30和CK18-M65活力。分析发生DILI的影响因素及血清CK18-M30和CK18-M65表达对并发DILI的预测价值。结果观察组血清CK18-M30和CK18-M65活力高于对照组(t=14.230、12.735,P<0.05)。DILI病情越严重,血清CK18-M30和CK18-M65活力越高(F=20.122、5.551,P<0.05)。ALL疾病危险程度、感染、输血、血清CK18-M30和CK18-M65活力等均为ALL病儿发生DILI的危险因素(OR=1.869~2.866,95%CI=(1.205~1.799)~(2.773~4.257),P<0.05),保肝药应用则为发生DILI的保护因素(OR=0.522,95%CI=0.395~0.670,P<0.05)。血清CK18-M30和CK18-M65预测ALL病儿发生DILI的受试者工作特征曲线下面积(AUC)分别为0.739和0.699,两者联合预测效能更高。结论ALL病儿血清CK18-M30和CK18-M65活力可作为发生DILI的预测指标。

CCCK-18CTRP-3miR-340-5p预测重症高血压性脑出血患者预后的价值

目的探讨CCCK-18、CTRP-3、miR-340-5p在重症高血压性脑出血患者中的表达及相关性。方法选取哈尔滨医科大学附属第一医院2019-10—2021-10收治的80例重症高血压性脑出血患者为观察组,另选取同期健康体检者80例为对照组,比较对照组与观察组血清CCCK-18、CTRP-3、miR-340-5p水平,依据mRS评分将观察组患者分为预后良好组(55例)和预后不良组(25例),比较不同预后患者一般资料及血清CCCK-18、CTRP-3、miR-340-5p水平,Logistic回归分析重症高血压性脑出血患者预后的影响因素,Pearson相关性分析CCCK-18、CTRP-3、miR-340-5p之间的相关性,ROC曲线分析血清CCCK-18、CTRP-3、miR-340-5p单独及三者联合预测高血压性脑出血预后的价值。结果观察组血清CCCK-18高于对照组,CTRP-3、miR-340-5p低于对照组(P<0.05)。预后良好组血清CCCK-18低于预后不良组,CTRP-3、miR-340-5p高于预后不良组(P<0.05)。Logistic回归分析显示,血清CCCK-18、CTRP-3、miR-340-5p均是重症高血压性脑出血患者预后的影响因素(P<0.05)。血清CCCK-18与血清CTRP-3、miR-340-5p呈负相关(r=-0.385,r=-0.406,P<0.05),三者联合检测预测患者预后的AUC值较高(P<0.05)。结论重症高血压性脑出血患者CCCK-18呈高表达,CTRP-3、miR-340-5p呈低表达,其对高血压脑出血病情判断和预后具有重要意义。

卵巢癌患者血清CK18、HOXB7水平与化疗效果及预后的关系研究

目的探讨卵巢癌患者血清细胞角蛋白18(CK18)、同源盒蛋白B7(HOXB7)水平与化疗效果和预后的关系。方法选择2018年6月1日至2020年6月1日该院收治的148例卵巢癌化疗患者作为卵巢癌组,招募同期在该院体检的140例健康女性作为对照组。根据化疗效果将卵巢癌患者分为化疗有效组(76例)和化疗无效组(72例),采用酶联免疫吸附试验测定血清CK18、HOXB7水平;对卵巢癌患者随访3年,根据预后差异分为存活组(110例)和死亡组(38例)。受试者工作特征(ROC)曲线分析血清CK18、HOXB7水平对预后的预测价值,多因素COX回归分析影响患者死亡的因素。结果与对照组比较,卵巢癌组血清CK18水平降低、HOXB7水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与化疗有效组比较,化疗无效组血清CK18水平降低,HOXB7水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05);死亡组年龄、国际妇产科联盟(FIGO)分期Ⅲ~Ⅳ期、低分化患者比例及HOXB7水平高于存活组,CK18水平低于存活组,差异均有统计学意义(P<0.05);血清CK18、HOXB7及二者联合预测卵巢癌患者3年发生死亡的曲线下面积(AUC)分别为0.875、0.861、0.937;多因素COX回归分析提示,CK18水平降低是卵巢癌患者3年死亡的保护因素,HOXB7水平升高是独立危险因素(P<0.05)。结论卵巢癌患者血清CK18水平降低、HOXB7水平升高,二者与化疗效果及患者预后密切相关,可能成为卵巢癌患者预后评估的分子标志物。

非酒精性脂肪性肝病患者血清IL-1RA、CTRP13和CK-18水平变化及其临床意义探讨

目的探讨非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)患者血清白细胞介素-1受体拮抗剂(IL-1RA)、补体C1q肿瘤坏死因子相关蛋白13(CTRP13)和细胞角蛋白18(CK-18)水平变化及其临床意义。方法2021年1月~2023年1月我院收治的67例NAFLD患者和55例健康体检者,经肝活检诊断肝脏脂肪变性分级,采用ELISA法检测血清IL-1RA、CTRP13和CK-18水平。应用多元Logistic回归分析危险因素。结果NAFLD组血清IL-1RA和CTRP13水平分别为(328.6±54.3)pg/ml和(2634.2±397.5)pg/ml,显著低于健康人组【分别为(673.1±125.4)pg/ml和(3425.7±423.8)pg/ml,P<0.05】,而血清CK-18水平为(15.2±3.1)ng/ml,显著高于健康人组【(3.9±0.7)ng/ml,P<0.05】;17例F3级肝脂肪变性患者血清IL-1RA和CTRP13水平分别为(256.3±47.6)pg/ml和(2056.3±308.4)pg/ml,显著低于29例F1级患者【分别为(388.3±59.4)pg/ml和(3071.5±409.3)pg/ml,P<0.05】或21例F2级患者【分别为(304.7±50.1)pg/ml和(2498.1±374.2)pg/ml,P<0.05】,而血清CK-18水平为(23.4±4.7)ng/ml,显著高于F1级患者【(8.1±1.3)ng/ml,P<0.05】或F2级患者【(18.5±2.9)ng/ml,P<0.05】;F3级肝脂肪变性患者肥胖、合并糖尿病、合并高脂血症、有代谢综合征家族史、血清IL-1RA≥256.5pg/ml、CTRP13≥2056.5pg/ml和CK-18≥21.6 ng/ml占比分别为70.6%、76.5%、88.2%、70.6%、35.3%、35.3%和70.6%,与50例F1/F2级的38.0%、42.0%、40.0%、30.0%、92.0%、80.0%和10.0%比,差异显著(P<0.05);多因素Logistic回归分析表明,肥胖【OR(95%)为2.0(1.1~3.6)】、合并糖尿病【OR(95%)为2.1(1.1~4.1)】、合并高脂血症【OR(95%)为1.6(1.0~2.6)】、IL-1RA【OR(95%)为0.5(0.3~0.9)】、CTRP13【OR(95%)为0.5(0.3~0.9)】和CK-18【OR(95%)为1.7(1.2~2.5)】为影响NAFLD患者肝脏脂肪变性程度的危险因素(P<0.05)。结论NAFLD患者血清IL-1RA、CTRP13和CK-18水平异常变化可能为评估肝脏脂肪变性程度提供一定的依据。