巨噬细胞诱导型C型凝集素参与尿毒症微炎症状态及机制

目的探讨巨噬细胞诱导型C型凝集素(macrophage-inducible C-type lectin,Mincle)参与尿毒症微炎症状态的机制。方法SD大鼠随机分为假手术组和5/6肾切除手术建立的尿毒症组。检测肠道组织形态及通透性;透射电子显微镜观察肠道组织及肠巨噬细胞形态;免疫组化法检测肠组织切片中Mincle的表达;Western blotting检测巨噬细胞表面的Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)和NF-κB蛋白的表达。分离出血浆后,用鲎试剂动态浊度定量检测法检测血中内毒素,散射免疫比浊法检测C反应蛋白(C reactive protein,CRP),酶联免疫吸附法检测白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)及肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平,并进行统计学分析。结果尿毒症组空肠、回肠、结肠Mincle表达高于假手术组(P<0.05);尿毒症组的回肠、空肠、结肠TLR4、NF-κB蛋白表达差异有统计学意义(P均<0.001);尿毒症组血中的内毒素、CRP、IL-6、TNF-α水平较假手术组显著增加(P<0.05)。结论尿毒症时肠道巨噬细胞表面的Mincle增高并进一步通过TLR4/NF-κB通路介导肠道巨噬细胞向M1型转化,释放炎症产物引起全身微炎症状态。

间充质干细胞诱导的神经干细胞对脑出血大鼠的神经保护作用

目的探讨胎盘间充质干细胞(pMSCs)诱导的神经干细胞(iNSCs)对脑出血(ICH)大鼠的神经保护作用。方法利用诱导培养基将胎盘间充质干细胞诱导生成神经干细胞;采用免疫荧光染色鉴定诱导生成的神经干细胞表达神经干细胞相关标记物的情况。SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、脑出血组(ICH组)、诱导的神经干细胞移植组(iNSCs组),构建大鼠纹状体内囊出血模型,24 h后,将诱导的神经干细胞原位移植入脑出血部位。移植7 d后,采用前肢放置实验、转角实验、改良型神经功能缺损评分等方法评估各组的神经功能;评估各组大脑血肿体积率;采用HE及尼氏染色观察各组大脑组织形态变化;采用免疫荧光双标染色观察各组神经元Cleaved-Caspase-3表达情况;采用Western blot检测各组大脑组织超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)蛋白表达水平。结果胎盘间充质干细胞诱导培养7 d后,有大量直径100μm左右、桑葚样或圆球体形的细胞球出现,细胞球中Nestin、GAP-43、Sox-2等神经干细胞标记物高表达。与ICH组比较,iNSCs组的神经功能障碍改善,且大脑血肿体积率降低(P均<0.05)。HE及尼氏(Nissl)染色结果显示,iNSCs组大脑血肿周围的炎细胞浸润数目较ICH组减少,同时,iNSCs组神经元数量增加(P<0.05)。免疫荧光双标染色结果显示,与ICH组比较,iNSCs组大脑血肿周围Cleaved-Caspase-3阳性神经元数目减少(P<0.05);Western blot结果显示,iNSCs组SOD蛋白水平高于ICH组(P<0.05)。结论胎盘间充质干细胞诱导的神经干细胞移植可能通过提高大脑抗氧化能力,减少脑出血大鼠神经元凋亡,进而促进脑出血大鼠的神经损伤修复。

脂肪干细胞向血管平滑肌细胞诱导的实验研究

目的研究人脂肪干细胞(adipose derived stem cells,ADSCs)在体外单层培养条件下诱导为血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)的可行性。方法应用酶消化法消化人脂肪组织获得ADSCs,基础培养液培养传代,取第1代细胞用于诱导分化实验。实验分两组,ADSCs以含5ng/mLTGF-β1及50ng/mLPDGF-BB的M-199诱导液联合诱导,作为诱导组;以含10%FBS的M-199培养液培养ADSCs作为未诱导组。镜下观察细胞生长情况;免疫荧光和RT-PCR方法检测平滑肌细胞特异标记的表达情况;流式细胞仪检测诱导阳性率。结果诱导组细胞形态形成平滑肌细胞特有的"峰-谷"生长模式,未诱导组细胞形态未发生改变,与原代ADSCs相似呈成纤维细胞样生长。诱导培养14d,诱导组细胞体外扩增能力较未诱导组显著降低(P<0.01)。免疫荧光检测:诱导组表达平滑肌特异标记α平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、平滑肌肌球蛋白重链(smooth muscle-myosin heavy chain,SM-MHC)和Calponin,未诱导组无表达。细胞诱导前α-SMA、SM-MHC及Calponin阳性表达率分别为3.26%±1.31%、3.55%±1.60%、4.02%±1.81%;诱导组阳性表达率分别为48.13%±8.31%、45.33%±10.68%、39.13%±9.42%;诱导前、后差异有统计学意义(P<0.01)。RT-PCR检测:诱导组表达平滑肌特异标记α-SMA、SM-MHC、Calponin和SM-22α,未诱导组无表达。结论脂肪干细胞经体外培养及诱导后,呈明显的VSMCs特性,有可能成为血管组织工程新的种子细胞来源。

三七根及花总皂苷抗肿瘤细胞诱导的血小板聚集研究

目的:考察三七根和花总皂苷抗肿瘤细胞诱导的血小板聚集(TC IPA)作用。方法:应用B ron氏比浊法分别从体外、体内考察三七根和花总皂苷对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231诱导的血小板聚集能力。结果:三七花总皂苷在120、240、480 mg/L质量浓度下对TC IPA均有一定的抑制作用,三七根总皂苷只在高、中剂量抑制TC IPA。体内实验三七根和三七花总皂苷各剂量均可显著抑制TC IPA,且呈剂量依赖关系。三七花作用效果优于三七根。结论:三七根和花总皂苷具有抗肿瘤细胞诱导的血小板聚集能力,具有潜在的抗肿瘤血行转移能力。

骨髓间充质干细胞向早期神经元样细胞诱导分化的研究(英文)

背景:骨髓间充质干细胞(mesenchymalstemcells,MSCs)不仅能分化成间质细胞,而且能向实质细胞(如心肌细胞)转化。在体外定向诱导MSCs分化成神经细胞,是目前国内外研究热点,具有重大理论意义。目的:探讨大鼠MSCs体外诱导分化成神经元的能力。设计:随机空白对照实验的研究。地点、材料和干预:实验在吉林大学公共卫生学院毒理教研室完成。实验动物采用Wistar大鼠(吉林大学实验动物中心),6周龄,雌雄不限。将2～4代的rMSCs接种在铺有盖玻片的24孔板中。分为3个实验组,一个对照组。实验组分别加入终浓度为0.25,0.50和1.00mmol/L异丁基甲基黄嘌呤(isobutylmethylxanthine,IBMX)诱导传代的rMSCs,待细胞分化后进行形态学观察,对照组中不加诱导剂,并用免疫细胞化学方法进行细胞鉴定。主要观察指标:培养MSCs的生长情况,诱导后细胞的形态学变化及nestin(小鼠抗大鼠,单克隆),神经元特异性烯醇化酶(neuron-specificenolase,NSE)抗体(兔抗鼠,多抗)、微管相关蛋白-2a,b(microtubule-associatedprotein-2a,b,MAP-2a,b)的免疫细胞化学检测。结果:加入IBMX后,0.25mmol/L组分化成神经元样细胞较少。1.0mmol/L组细胞加入IBMX第2天开始可见细胞陆续死亡。0.5mmol/L组2d即可见有神经元样细胞出现,细胞具有典型的神经元形态特征。

沙眼衣原体感染Hela229细胞诱导SOCS-1,3的表达

目的 :探讨SOCS的表达与沙眼衣原体抑制宿主免疫功能导致持续性感染之间的关系。方法 :应用RT PCR和Westernblotting检测沙眼衣原体感染和未感染Hela2 2 9细胞SOCS 1,3mRNA水平和蛋白质水平的表达 ;免疫荧光检测反义寡核苷酸阻断SOCS 1,3表达后对沙眼衣原体增殖的影响。结果 :沙眼衣原体感染Hela2 2 9细胞后可诱导SOCS 1,3的表达 ,阻断SOCS 1,3表达后沙眼衣原体增殖受到抑制。结论 :沙眼衣原体感染Hela2 2 9细胞后可诱导SOCS 1,3的表达 ,SOCS 1,3的表达是沙眼衣原体抑制宿主免疫功能 。

树突状细胞诱导的杀伤细胞治疗非霍奇金淋巴瘤患者的应用价值

目的探讨树突状细胞诱导的杀伤细胞(DC-CIK)治疗非霍奇金淋巴瘤的临床效果。方法选取2011年1月至2014年12月该院收治的84例非霍奇金淋巴瘤作为研究对象,按数字表法将患者随机分为观察组与对照组,观察组患者采用DCCIK治疗,对照组患者使用细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)治疗。收集培养好且细菌检测为阴性的DC-CIK或CIK细胞,应用无菌生理盐水清洗3次,将Ag-DC致敏后的CIK细胞离心洗涤,用100mL生理盐水、25mL人血清蛋白和20万单位白细胞介素-2(IL-2)重悬细胞,2h内回输给患者,回输前给予患者肌注非那根25mg。观察并比较2组患者的临床治疗效果。结果观察组患者的细胞增殖速率显著高于对照组,培养第6天,细胞数明显大于对照组。随培养时间的增加,DC-CIK细胞CD3^+/CD8^+、CD3^+/CD56^+的双阳性细胞比例显著高于同等条件下的CIK细胞,且DC-CIK细胞的分泌因子水平显著高于同等条件下的CIK细胞,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 DC-CIK细胞治疗非霍奇金淋巴瘤具有明显的临床效果,值得进一步深入研究。

活动性结核患者单核细胞中B淋巴细胞诱导成熟蛋白1的mRNA水平降低

目的研究活动性结核患者单核细胞中B淋巴细胞诱导成熟蛋白1(Blimp-1)的mRNA水平与结核分枝杆菌(MTB)潜伏感染者和健康者相比是否发生改变。方法收集活动性结核患者、结核菌潜伏感染者和和健康者的抗凝外周血,从外周血中分离并纯化单核细胞,荧光定量PCR检测单核细胞中Blimp-1 mRNA的水平。而后分别用MTB的H37Rv菌株全菌裂解液和ESAT-6/CFP-10的抗原多肽刺激健康者的单核细胞,荧光定量PCR检测刺激前后单核细胞中Blimp-1 mRNA的水平。结果与健康者相比,活动性结核患者、潜伏感染者单核细胞Blimp-1的mRNA水平显著降低;与未刺激的单核细胞相比,全菌裂解液刺激后的单核细胞Blimp-1的mRNA水平显著降低,而ESAT-6/CFP-10抗原多肽刺激后的单核细胞中Blimp-1的mRNA水平无显著变化。结论活动性结核患者和MTB潜伏感染者单核细胞Blimp-1的mRNA水平降低,MTB全菌裂解液刺激的人单核细胞中Blimp-1的mRNA水平降低。

源于脾干细胞的破骨细胞诱导生成及培养

目的 建立一种可以获得大量破骨细胞或破骨样细胞的方法 ,以便进行原发性骨质疏松有关破骨细胞的研究。方法 C5 7雌性小鼠经尾静脉注射 5 氟脲嘧啶后 ,取脾细胞悬液在含有rmIL 3 ,rhIL 6和胎牛血清(FCS)以及牛血清白蛋白 (BSA)的α MEM 琼脂半固体培养 7d左右 ,获得脾脏造血干细胞集落 ;此集落再以粒细胞 巨噬细胞集落刺激因子 (GM CSF)诱导生成破骨样细胞。结果 经活体观察、酒石酸 抗酸性磷酸酶 (TRAP)染色、扫描电镜检查 ,证实所得细胞为破骨细胞。结论 建立了一种获得大量破骨细胞或破骨样细胞方法 。

骨髓基质细胞向成骨细胞诱导分化的研究进展

骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSC)是位于骨髓中的一种干细胞,因在体外经适当的培养条件可以向成骨细胞、成软骨细胞、脂肪细胞、成肌细胞等多种间充质来源的组织细胞分化,又被称为间充质干细胞(mesenchymal stem cell).骨髓基质细胞位于骨髓,具有取材方便,易于体外扩增,自体移植无免疫排斥性等优点,是骨组织工程中种子细胞的理想来源.骨髓基质细胞,其向成骨细胞的定向诱导分化将是关键的一步.笔者就骨髓基质细胞向成骨细胞诱导分化有关影响因素的研究进展作一综述.

培养的人动脉平滑肌细胞诱导高密度脂蛋白氧化修饰

目的 探讨高密度脂蛋白氧化修饰发生的机制。方法 利用体外培养的人动脉平滑肌细胞与人血浆高密度脂蛋白共同温育后 ,用琼脂糖凝胶电泳方法观察高密度脂蛋白电泳迁移率 ,紫外光分光光度法测定高密度脂蛋白共轭二烯的含量 ,利用荧光分光光度法测定其硫代巴比妥酸反应物质的量 ,用可见光分光光度法测定高密度脂蛋白的脂氢过氧化物含量。结果 人血浆高密度脂蛋白与人动脉平滑肌细胞共同培养 4 8h后 ,与天然高密度脂蛋白比较 ,其电泳迁移率明显增加 ,其共轭二烯、硫代巴比妥酸反应物质及脂氢过氧化物的含量均比天然高密度脂蛋白显著增加 (P <0 .0 1)。

新生兔骨髓基质细胞向成骨样细胞诱导分化

最新研究表明骨髓基质细胞（ bone marrow stromal cells，BMSCs）不仅是具有多向分化能和旺盛增殖活力的细胞，还具有特殊的免疫学特性，表达对异体宿主低免疫原性和免疫抑制作用。本实验分离培养的新生兔骨髓基质细胞，经成骨诱导可以为成年兔骨修复提供充足的骨组织工程种子细胞。

低温冷冻对CIK细胞诱导及活性影响的研究

目的 研究低温冷冻对CIK(cytokine-induced killer cells)细胞诱导及活性的影响,方法 用经过程序降温仪冷冻后的脐血单个核细胞定向诱导CIK细胞,其活性与用新鲜的脐血单个核细胞定向诱导生成的CIK细胞进行比较,并对冷冻过的经21d诱导生成的CIK细胞,与未冻存过的细胞进行活性比较。用乳酸脱氢酶(LDH)分析法分析细胞毒活性,用流式细胞分析仪分析CIK细胞的纯度。结果 冻存后的脐血单个核细胞诱导生成的CIK细胞在扩增能力、纯度和细胞毒性方面与新鲜细胞诱导生成的CIK细胞无明显差异;经过冻存的CIK细胞在纯度和细胞毒性方面与未冻存前也无明显差异。结论 对于CIK细胞的临床应用具有指导意义。

输注TGF-β1基因修饰的供体脾细胞诱导同种大鼠移植心脏耐受的实验研究

目的:研究TGF-β1修饰的供者脾细胞特异性输注对同种大鼠移植心脏耐受的诱导及效果。方法:建立同种大鼠异位心脏移植模型,用脂质体转染TGF-β1基因修饰供者脾细胞;观察TGF-β1修饰的脾细胞输注组,单纯脾细胞输注组和假处理组移植心脏存活天数和病理改变。结果:建立了稳定转染TGF-β1基因的脾细胞;TGF-β1修饰的脾细胞特异性输注可明显延长移植心脏存活时间(17.0±3.3)d,与单纯脾细胞输注组(7.0±1.1)d和假处理组(6.3±1.0)d比较,差异有显著性(P<0.05);而且可明显减轻同种移植心脏的病理损伤。结论:输注TGF-β1基因修饰的供体脾细胞可诱导同种大鼠移植心脏的耐受产生。

骨髓间充质干细胞诱导分化为心肌细胞及其内向整流钾电流特征

【目的】体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)分化为心肌细胞并探讨其内向整流钾电流(IK1)特征。【方法】采用密度梯度离心法和贴壁培养法分离、纯化大鼠骨髓MSCs,在第3代细胞以5-氮杂胞苷进行诱导,用免疫细胞化学染色和RT-PCR方法鉴定诱导细胞,并采用全细胞膜片钳技术检测IK1表达。【结果】诱导后细胞体积较诱导前增大,呈长梭形。14d后细胞之间出现连接,排列方向渐趋一致。免疫细胞化学染色显示Desmin、α-sarcomericactin和心肌特异性cTnI呈阳性反应,RT-PCR结果表明诱导细胞有心肌β肌球蛋白重链表达。诱导细胞IK1表达呈明显的不均一性,部分细胞IK1与正常心室肌细胞相似,但IK1电流密度总体上低于正常心室肌细胞。【结论】5-氮杂胞苷能在体外诱导MSCs向心肌细胞分化;诱导细胞IK1表达不均一性提示可能有致心律失常潜能。

脑源性神经生长因子修饰的BMSCs向成骨细胞诱导分化的研究

骨折愈合是一个极其复杂的骨再生过程。其修复的过程就是正常胚胎骨发生过程的重演,是一系列的细胞和细胞外基质的变化过程。骨折愈合机制受到机体及局部环境的多层面、多途径的调节,在不同的愈合阶段有不同的细胞参与,