精胺氧化酶靶向调控硫氧还蛋白还原酶1促进结肠癌恶性进展

目的探讨精胺氧化酶(spermine oxidase,SMOX)靶向调控硫氧还蛋白还原酶1(thioredoxin reductase 1,TR1)对结肠癌恶性进展的影响。方法收集2018年9月至2019年6月就诊于南京市第一医院的30例结肠癌患者的结肠癌组织及其癌旁组织。采用免疫组织化学染色检测组织中的SMOX表达。采用Western blot实验检测结肠癌细胞株(HCT116、SW480、DLD-1、SW620、Caco-2、HCT-15、T84和LS123)和正常结肠细胞株NCM460的SMOX表达。利用基因表达谱互作分析(Gene Expression Profiling Interactive Analysis,GEPIA)网站查询SMOX在结肠癌组织与癌旁组织中的表达情况和SMOX表达水平与患者总生存的关系。采用Western blot实验检测上述细胞和组织中代谢产物亚精胺合成酶的水平。利用2',7'-二氯二氢荧光素二乙酸酯(2',7'-dichlorodihydrofluorescein diacetate,DCFH-DA)结合流式细胞术和组织免疫荧光实验分别检测结肠细胞和组织中代谢副产物活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平。选取SMOX表达水平最高的结肠癌细胞株HCT116和SW480为实验对象,构建慢病毒载体,用PLKO.1-puro-shCtrl、PLKO.1-puro-shSMOX、PLKO.1-puro-shSMOX+pcDNA3.1和PLKO.1-puro-shSMOX+pcDNA3.1-TR1分别转染细胞,分别为shCtrl组、shSMOX组、shSMOX+pcDNA3.1组和shSMOX+TR1组。Western blot实验检测HCT116和SW480细胞shCtrl组和shSMOX组SMOX与TR1的表达情况,以及HCT116细胞shSMOX+pcDNA3.1组和shSMOX+TR1组的TR1表达水平。利用细胞计数试剂盒(Cell Counting Kit-8,CCK-8)检测细胞增殖活力。碘化丙啶(propidium iodide,PI)单染结合流式细胞术检测肿瘤细胞周期变化。PI/异硫氰酸荧光素-膜连蛋白(PI/fluorescein isothiocyanate-Annexin V,PI/FITC-Annexin V)双染结合流式细胞术检测细胞凋亡/坏死情况。Transwell体外侵袭实验分析细胞侵袭能力。shCtrl组、shSMOX组、shSMOX+pcDNA3.1组和shSMOX+TR1组的HCT116细胞稀释至浓度为1×107个/mL的细胞悬液分别向裸鼠右侧腋窝皮下注射0.2 mL细胞悬液,建立裸鼠结肠癌移植瘤模型。4周后处死裸鼠,分离组织,剥取肿瘤称重。运用免疫组织化学染色检测裸鼠结肠肿瘤组织中Ki-67阳性细胞数。结果SMOX在8种结肠癌细胞株和结肠癌组织中的表达水平均高于正常结肠细胞株和癌旁组织,且与不良预后有关(均P<0.05)。与正常结肠细胞和癌旁组织比较,8种结肠癌细胞和结肠癌组织中的代谢产物亚精胺合成酶和ROS水平随SMOX的高表达同步升高(均P<0.05)。与shCtrl组比较,shSMOX组G_(0)/G_(1)期细胞数目增多,PI/Annexin V双阳性细胞数目增加,细胞增殖活性降低,侵袭数量减少,SMOX和TR1表达水平降低(均P<0.05)。与shSMOX组和shSMOX+pcDNA3.1组比较,shSMOX+TR1组TR1表达水平升高,S期细胞数目增多,PI/Annexin V双阳性细胞数目减少,细胞增殖活性升高(均P<0.05)。裸鼠结肠癌移植瘤模型显示,注射后14 d,与shCtrl组比较,shSMOX组和shSMOX+pcDNA3.1组肿瘤体积和重量均降低,结肠肿瘤组织中Ki-67阳性细胞数减少,而shSMOX+TR1组肿瘤体积、重量和结肠肿瘤组织中Ki-67阳性细胞数则较shSMOX+pcDNA3.1组增加(均P<0.05)。结论SMOX在结肠癌细胞和组织中表达上调,可能通过靶向提高TR1的表达促进细胞周期运转,抑制细胞凋亡,促进细胞增殖和侵袭能力及肿瘤生长,进而促进结肠癌恶性进展。

硫氧还蛋白还原酶结构与肿瘤治疗的研究进展

硫氧还蛋白还原酶(thioredoxin reductase,TrxR)是硫氧还蛋白(thioredoxin,Trx)系统里主要的功能蛋白,在调节多种细胞氧化还原信号通路中起关键作用。近年来,TrxR/Trx被越来越多地认为是肿瘤发展的重要调节剂,因此靶向TrxR/Trx是一种很有前景的肿瘤治疗策略。该文对TrxR的结构特点、与肿瘤相关的生理功能、TrxR抑制剂进行综述,以对TrxR的研究提供参考。

硫氧还蛋白还原酶活性检测在食管癌60例临床诊断中的应用

目的 探究硫氧还蛋白还原酶(TR)活性检测在食管癌临床诊断中的应用。方法 2019年1月至2020年7月海安市人民医院收治的食管癌病人、食管良性病灶病人及同期于该院进行体检的健康者,即分为食管癌组、良性组和对照组,各60例。分别检测食管癌组、良性组和对照组病人血浆中TR活性;检测食管癌组织病人化疗前、化疗时和化疗后血浆中TR活性;比较食管癌组病人TR活性在不同分期、转移方面的差异;评估食管癌组病人手术预后,随访2年评估远期预后情况;确定TR活性检测对食管癌病人的诊断价值。结果 与对照组(3.16±0.79)U/mL相比,良性组(6.34±0.96)U/mL和食管癌组(8.12±1.25)U/mL病人血浆中TR活性均明显升高(P<0.05);且食管癌病人血浆中TR活性明显高于良性组(P<0.05)。与化疗前(8.12±1.25)U/mL相比,化疗时(4.65±0.87)U/mL和化疗后(3.37±0.62)U/mL食管癌病人血浆中TR活性均明显降低(P<0.05);且化疗后食管癌组病人血浆中TR活性明显低于化疗时(P<0.05)。TR活性表达和食管癌病人性别、年龄、肿瘤长径和肿瘤位置均无相关性(P>0.05),与病人淋巴结转移和TNM分期密切相关(P<0.05)。和Ⅰ&Ⅱ期食管癌病人相比,Ⅲ&Ⅳ期食管癌病人血浆中TR活性明显升高(P<0.05);和未转移食管癌病人相比,食管癌转移病人血浆中TR活性明显升高(P<0.05)。食管癌病人化疗后有39例病人得到了完全或部分缓解,病人总有效率为65%。对食管癌病人随访2年统计显示,食管癌病人2年生存率为75.0%(45例),TR高表达(>4 U/mL)2年生存人数为31(31/41)例,生存率为75.6%;TR低表达(<4 U/mL)2年生存率为14(14/19)例,生存率为73.7%;log-rank检验TR高表达和低表达病人生存率比较差异有统计学意义(P<0.05)。受试者操作特征曲线(ROC曲线)分析TR检测曲线下面积(AUC)值为0.92,特异度为83.2%,灵敏度为93.6%。结论 TR高表达于食管癌病人血浆中,其可用于食管癌的早期检测,提示病情的进展情况,对病人的治疗预后能有效评价。

良性增生性疾病和恶性肿瘤患者的硫氧还蛋白还原酶活性及其诊断价值分析

目的探讨良性增生性疾病和恶性肿瘤患者的硫氧还蛋白还原酶(TR)活性及其诊断价值。方法选取2021年1月至2022年12月南通大学附属江阴医院收治的202例恶性肿瘤患者为恶性肿瘤组、300例良性增生性疾病患者为良性增生组,选取同期在南通大学附属江阴医院进行体检的1846例健康志愿者为对照组。比较分析三组的TR活性。比较分析不同类型恶性肿瘤患者的TR活性以及不同类型良性增生性疾病患者的TR活性。采用受试者操作特征曲线分析TR活性对恶性肿瘤的诊断价值。结果恶性肿瘤组和良性增生组患者的TR活性水平均高于对照组,且恶性肿瘤组患者的TR活性水平高于良性增生组,差异均有统计学意义(P<0.05)。肺癌、结直肠癌、乳腺癌、胃癌、胰腺癌等不同类型恶性肿瘤患者的TR活性比较差异均无统计学意义(P>0.05)。前列腺增生、胃肠息肉、结节类、囊肿类等不同类型良性增生性疾病患者的TR活性比较差异均无统计学意义(P>0.05)。受试者操作特征曲线分析结果显示,TR活性诊断恶性肿瘤的曲线下面积为0.893(95%CI 0.757~0.825),根据约登指数最大点确定TR活性对恶性肿瘤的诊断临界值为8.44U/ml。以TR活性≥8.44 U/ml为诊断标准,其诊断恶性肿瘤的敏感度为60.90%,特异度为90.00%,表明TR活性的诊断效能较高;Kappa系数为0.508,表明TR活性检测与实际诊疗结果比较,具有较好的一致性。结论良性增生性疾病患者以及恶性肿瘤患者的TR活性均显著升高,且TR活性检测对恶性肿瘤具有一定的诊断价值。

血浆硫氧还蛋白还原酶在乳腺癌中表达及其临床价值研究

目的:研究血浆硫氧还蛋白还原酶(thioredoxin reductase,TrxR)在乳腺癌组织中的表达及其临床价值。方法:乳腺癌患者80例设为乳腺癌组,良性乳腺肿瘤患者48例设为良性对照组,50例健康体检人员设为正常对照组。采用酶联免疫吸附试验检测血浆TrxR水平,化学发光法检测血清癌抗原(carcinoma antigen 153,CA153)水平。比较3组血浆TrxR水平,分析TrxR水平与乳腺癌患者临床病理参数的关系,采用Spearman相关性分析血浆TrxR与血清CA153的相关性,受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC)评估血浆TrxR、血清CA153对乳腺癌的诊断价值,比较乳腺癌患者治疗前后TrxR水平的变化。结果:乳腺癌组血浆TrxR水平明显高于良性对照组及正常对照组,良性对照组血浆TrxR水平明显高于正常对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。组织学分级Ⅱ~Ⅲ级乳腺癌患者血浆TrxR水平明显高于Ⅰ级患者,发生淋巴结转移患者血浆TrxR水平明显高于无淋巴结转移患者,TNM分期Ⅲ~Ⅳ期患者血浆TrxR水平明显高于Ⅰ~Ⅱ期患者,差异均有统计学意义(P<0.05)。Spearman相关性分析显示,血浆TrxR和血清CA153具有一定的相关性(r=0.3805,P<0.05)。ROC曲线分析显示,TrxR诊断乳腺癌的敏感度为84.0%,特异度为75.0%,曲线下面积(area under the curve,AUC)为0.8470;CA153诊断乳腺癌的敏感度为70.0%,特异度为77.5%,AUC为0.7815。72例Ⅰ~Ⅲ期乳腺癌患者接受手术治疗及术后辅助治疗,治疗后2个月乳腺癌患者TrxR水平较治疗前明显下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:血浆TrxR可能成为有效的乳腺癌诊断指标,其在评估乳腺癌病情恶化程度、预测未来发展趋势等方面具有重要的临床意义。

外周血血管内皮生长因子和硫氧还原蛋白还原酶水平对卵巢癌的诊断价值

目的探讨外周血血管内皮生长因子(VEGF)和硫氧还蛋白还原酶(TrxR)水平对卵巢癌的诊断价值。方法收集54例卵巢癌患者(卵巢癌组),40例卵巢良性病变患者(良性病变组),80例体检健康者(健康组)外周血标本,分别测定人附睾蛋白4(HE4)、VEGF和TrxR水平。分析外周血VEGF和TrxR表达水平对卵巢癌的诊断价值及其在卵巢癌手术前后与临床病理特征之间的关系。用受试者工作特征(ROC)曲线评价各指标对卵巢癌辅助诊断的价值。结果3组间HE4、VEGF和TrxR水平比较差异均有统计学意义(均P<0.05)。外周血VEGF、TrxR水平与卵巢癌FIGO分期、病理分型及是否转移无相关性(P>0.05)。Spearman相关性分析结果表明HE4和VEGF(r=0.530,P<0.001)、HE4和TrxR(r=0.581,P<0.001)、VEGF和TrxR(r=0.566,P<0.001)水平均呈正相关。VEGF、TrxR水平用于区分卵巢癌和良性病变时的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.715、0.770;用于区分卵巢癌和健康者时,AUC分别为0.950、0.957。VEGF和TrxR在卵巢癌手术前后差异均有统计学意义(均P<0.001)。结论VEGF和TrxR在卵巢癌早期诊断中具有一定的意义,可用于大规模筛查及手术前后疗效监测。

高体积分数氧对胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞硫氧还蛋白及其还原酶表达的影响

目的探讨高体积分数氧(高氧)对胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)硫氧还蛋白(Trx)及硫氧还蛋白还原酶(TrxR)表达的影响。方法无菌条件下取孕19 d SD大鼠的胎鼠肺组织,剪碎。采用1 g/L胰酶和1 g/L胶原酶消化19 d胎鼠肺组织块,经差速离心和反复贴壁法,分离、纯化、原代培养胎鼠AECⅡ,待其生长至亚融合状态时,随机分为空气和高氧组。于培养箱内静置30 min后,空气组置于同一室内空气中,高氧组通以1 000 mL/L纯氧(2 L/min)10 min;然后密封培养瓶,置培养箱中培养。二组分别培养12、24、48 h,倒置相差显微镜下观察高氧对其细胞形态及活性的影响;并采用半定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测其Trx mRNA和TrxR mRNA表达。采用SPSS 13.0软件进行组间两样本均数t检验。结果细胞爬片上AECⅡ纯度为(94±2)%,表明所获细胞适合研究使用。与空气组比较,随时间延长,高氧暴露各时间点AECⅡ生长状态明显不良;悬浮细胞增多,但大多数细胞仍具有活力;高氧暴露可促使AECⅡTrx mRNA、TrxR mRNA表达增加,且二者分别于24 h(t=2.471 P=0.033)和48 h(t=2.916 P=0.015)表达最强。结论高氧暴露可促使胎鼠AECⅡTrx mRNA和TrxR mRNA表达上调;Trx和TrxR的表达上调可能是高氧肺损伤的重要保护作用机制之一。

硒蛋白硫氧还蛋白还原酶2(TXNRD2)在肿瘤组织中的表达及其对生存预后的影响

目的:以硒蛋白硫氧还蛋白还原酶2基因(TXNRD2)为研究靶点,探讨TXNRD2与肿瘤微环境中的免疫细胞及免疫浸润的相关性,旨在揭示TXNRD2对人类恶性肿瘤发生和发展的影响,为肿瘤的免疫治疗和预后预测提供新的靶点。方法:从癌症基因组图谱(TCGA)数据库,基因型-组织表达(GTEx)数据库,癌症细胞系百科全书(CCLE)和人类蛋白质图集等采集数据,描述33种肿瘤中TXNRD2的表达、预后、免疫微环境、免疫新抗原、肿瘤突变负担(TMB)和微卫星不稳定性(MSI)。采用Kaplan-Meier Plotter分析TXNRD2在肿瘤中的差异生存曲线。采用单因素和多因素COX回归分析皮肤黑色素瘤(SKCM)和脑下级脑胶质瘤(LGG)的总体生存率(OS)的影响因素,采用多因素回归和Nomogram列线图建立SKCM、LGG预测评分模型。结果:TXNRD2在多种肿瘤中普遍高表达,且其可以预测多种肿瘤患者的生存率。同时,TXNRD2表达水平与肿瘤免疫浸润、肿瘤微环境和免疫肿瘤抗原明显相关。单因素COX回归分析显示,TXNRD2、年龄、种族和pTNM-stage是SKCM患者的总生存期的危险因素,TXNRD2、年龄、分级、放射治疗是LGG患者的总生存期的危险因素。除此之外,TXNRD2的会表达影响DNA修饰基因(MMRs)和甲基转移酶的表达。结论:TXNRD2对人类恶性肿瘤的发生和发展有重要影响,可为肿瘤的免疫治疗和预后预测提供新的靶点,从而为癌症的预防诊断和治疗提供参考。

低硒大鼠心肌线粒体型硫氧还蛋白还原酶的活性和表达

目的探讨低硒状态下大鼠心肌线粒体型硫氧还蛋白还原酶(TR2)的活性和表达变化,分析体内硒水平改变对TR2活性的影响及其可能的机制。方法用低硒饲料喂养断乳2周的Wistar大鼠14周,分别采用生物化学方法、Western blot和Northern blot杂交检测心肌组织中TR2的活性改变及TR2蛋白、基因表达变化。结果低硒组大鼠心肌TR2活性降低至对照组的69.3%,差异有非常显著意义。蛋白杂交的峰面积密度扫描结果显示,常硒组为3 538,低硒组为2 167。Northern blot结果显示,低硒组与对照组差异无显著意义。结论低硒能够降低心肌TR2的活性和蛋白表达水平,但并不影响此酶的基因表达。提示低硒导致心肌TR2活性降低可能是由于TR2蛋白合成过程中SeCys插入减少所致。

吉西他滨诱导胰腺癌细胞株SW1990的耐药作用与硫氧还蛋白还原酶活性的改变

目的建立对吉西他宾耐药的胰腺癌细胞株,探讨硫氧还蛋白还原酶(TrxR)在耐药过程中的作用。方法采用间歇浓度递增法诱导胰腺癌细胞株SW1990对吉西他宾耐药,检测其生物学性状变化,并对比观察TrxR活性变化。结果药物培养9个月后,得到稳定传代的SW1990/GZ耐药细胞株;其形态学、生长特征等均发生了明显变化,细胞变圆、体积缩小、内质网扩张、颗粒样物质增多及细胞倍增时间延长;对吉西他滨、5-氟尿嘧啶、阿霉素和丝裂霉素的耐药性均显著增加;耐药细胞的TrxR活性也明显增高。结论SW1990/GZ有多药耐药现象,TrxR在耐药过程中起一定作用。

不同类型冠心病患者血清硫氧还蛋白还原酶研究

目的探讨血清硫氧还蛋白还原酶(TrxR)在不同类型冠心病患者中的水平,分析其与炎性因子的关联,探讨其在冠心病病理过程中的作用及可能机制。方法选择2011年12月—2012年12月在九江学院附属医院心血管内科住院并经冠状动脉造影确诊为冠心病的患者115例,其中稳定型心绞痛(SAP)组37例、不稳定型心绞痛(UAP)组37例、急性心肌梗死(AMI)组41例,同期另选择40例体检健康者作为对照组。根据Gensini评分系统对冠状动脉病变血管狭窄程度进行定量分析;并分别采用酶联免疫吸附试验与乳胶免疫比浊法检测血清中TrxR、肿瘤坏死因子α(TNF-α)与超敏C反应蛋白(hs-CRP)水平。分别比较各组TrxR水平及其与炎性因子和Gensini评分的相关性。结果 4组血清TrxR、TNF-α、hs-CRP水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05);其中与对照组比较,SAP组、UAP组和AMI组TrxR水平降低,TNF-α、hs-CRP水平升高(P<0.05);与SAP组比较,UAP组和AMI组TrxR水平降低,TNF-α、hs-CRP水平升高(P<0.05);与UAP组比较,AMI组TrxR水平降低,TNF-α、hs-CRP水平升高(P<0.05)。相关性分析结果显示,血清TrxR水平与TNF-α水平呈负相关(r=-0.919,P<0.001);血清TrxR水平与hs-CRP水平呈负相关(r=-0.885,P<0.001);血清TrxR水平与Gensini评分呈负相关(r=-0.812,P<0.001)。结论低水平的TrxR促进了冠心病的发生、发展,其机制可能是通过调节TNF-α和hs-CRP水平参与其中。

应激对大鼠心肌线粒体型硫氧还蛋白还原酶表达的影响

目的探讨线粒体型硫氧还蛋白还原酶(mitochondrialthioredoxinreductase,TR2)在大鼠心肌抗氧化应激反应中的作用。方法将Wistar雄性大鼠分成非应激组和应激组,应激组大鼠在处死前一天在冰水浴中泳动5min,采用Northernblot和Westernblot检测大鼠心肌线粒体型硫氧还蛋白还原酶和蛋白的表达。结果应激组大鼠心肌中线粒体型硫氧还蛋白还原酶基因和蛋白表达均高于非应激组。结论线粒体型硫氧还蛋白还原酶基因和蛋白表达的增加有利于大鼠心肌抗氧化损伤。

健康人外周血烟曲霉硫氧还蛋白还原酶抗原特异性T淋巴细胞检测与结果评价

目的为评估烟曲霉硫氧还蛋白还原酶(thioredoxin reductase,TR)抗原是否具有免疫保护作用,文中建立并优化检测健康人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中TR抗原特异性T淋巴细胞(TR/AST)分泌干扰素γ(interferonγ,IFN-γ)与白细胞介素-4(interleukin-4,IL-4)的酶联免疫斑点法(enzyme linked immunospot assay,ELISPOT)检测技术,以探讨TR抗原特异性T淋巴细胞在侵袭性曲霉病(invasive aspergillosis,IA)中的作用。方法采用方阵滴定法优化ELISPOT反应条件。以烟曲霉TR为特异性刺激物,阳性细胞刺激剂为对照,用ELISPOT技术检测20名健康人外周血PBMC分泌IFN-γ、IL-4的阳性斑点形成细胞(spot forming cell,SFC)频数。结果方阵滴定法结果显示,10μg TR抗原、健康人PBMC终浓度为3×105/孔时ELISPOT检测结果最佳。20名健康人特异性分泌IFN-γ和IL-4的SFC频数分别为15(3.5,59.5)个和0(0,0)个,IFN-γ的SFC频数显著高于IL-4,差异有统计学意义(P<0.001)。TR可刺激所有20名健康人产生IFN-γ应答,其中9例产生强IFN-γ应答(SFC>20个/3×105PBMC),占45%;而19名健康人在TR刺激后不产生IL-4应答,仅1例产生弱IL-4应答(SFC=1)。结论烟曲霉TR抗原诱导的T细胞免疫以Th1型免疫应答占绝对优势,因此,该抗原具有成为保护性抗原的潜能。

硫氧还蛋白还原酶-2在非小细胞肺癌中的表达及预后

目的:探讨硫氧还蛋白还原酶-2(thioredoxin reductase-2,TrxR2)在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及对患者预后的影响。方法:免疫组化法检测90例手术后NSCLC癌组织及癌旁正常肺组织中TrxR2的表达,分析TrxR2表达与患者临床病理特征及生存预后的关系。结果:TrxR2在NSCLC组织中的表达高于癌旁正常组织(P<0.05),TrxR2的表达与患者性别、是否吸烟、肿瘤组织分级、TNM分期无相关性(P>0.05),而与年龄及淋巴结转移显著相关(P<0.05)。随访90例患者发现TrxR2高表达组的患者预后更差(P<0.05)。结论:TrxR2在NSCLC中高表达,有望成为NSCLC转移及预后判断的重要指标。

马尾松树皮提取物对癌细胞内硫氧还蛋白还原酶的影响

目的探索马尾松树皮提取物(PMBE)对体外培养的人肺腺癌细胞Glc-82、肝癌细胞Bel-7402和宫颈癌细胞Hela内的硫氧还蛋白还原酶(TrxR)的抑制作用。方法运用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法、酶联免疫吸附法(ELISA)、NADPH还原反应和DCF荧光法检测细胞存活率及癌细胞内的TrxR浓度、TrxR活性和活性氧(ROS)水平。结果 MTT和ELISA检测未见PMBE所引起的三种癌细胞内TrxR蛋白含量的明显升高;在生理条件及氧胁迫下,PMBE均可显著抑制三种癌细胞内的TrxR活性;ROS测定说明氧胁迫下PMBE不能有效降低三种癌细胞内的ROS水平。结论 PMBE能够有效抑制人体呼吸、消化和生殖系统的三种癌细胞内的TrxR活性,并降低了其对氧胁迫的耐受性。

丙型肝炎病毒非结构蛋白NS3上调硫氧还蛋白还原酶1基因的表达

目的:探讨丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白NS3对硫氧还蛋白还原酶1(TXNRD1)启动子转录的激活作用. 方法:以HCV非结构蛋白NS3反式调节基因的基因表达谱芯片结果为基础,利用生物信息学技术确定TXNRD1的启动子区域(TXNRD1p),聚合酶链反应(PCR)扩增TXNRD1p, 克隆至真核报告载体pCAT3-Basic中,构建pCAT3- TXNRD1p报告载体;以该质粒转染肝癌细胞系HepG2细胞系,用酶联免疫黏附法(ELISA)检测氯霉素乙酰转移酶(CAT)的表达活性;并与pcDNA3.1(-)-NS3共转染HepG2 细胞系,用ELISA法检测CAT的表达活性. 结果:成功获得TXNRD1启动子的正确克隆CATB-TXNRD1p 和pcDNA3.1(-)-NS3瞬时转染的HepG2细胞的CAT表达活性是pCAT3-Basic空载体的9倍,pCAT3-TXNRD1p的2.0倍,进一步验证了利用基因表达谱技术研究HCV NS3 蛋白反式激活作用的结果. 结论:TXNRD1启动子有顺式激活下游基因的活性;HCV的NS3蛋白具有对TXNRD1的反式激活作用.

硫氧还蛋白还原酶：一种新型有效的胃癌化疗疗效监测标志物

胃癌是国际上发病率较高的肿瘤,寻找新型有效的肿瘤标志物用于胃癌的诊断和疗效评估,对于胃癌的临床治疗有较大的帮助。本研究选取经临床确诊的155例胃癌患者为研究对象,探究血浆硫氧还蛋白还原酶(thioredoxin reductase,TR)在胃癌化疗后临床获益人群与未获益人群中检测水平的差异,以及其与治疗效果的关系。结果显示,未获益组TR阳性率为82益组TR阳性率(48显示,未获益组人群与获益组人群的TR活性诊断阈值为8the curve,AUC)为0瘤特异性抗原(cancer antigen,CA)19?9和CA72?4。同时,TR与常规胃癌标志物的联合检测提高阳性检出率至98有较高的一致性。

胸部CT联合硫氧还蛋白还原酶检测对孤立性肺结节良恶性的诊断价值

目的:探讨CT扫描联合硫氧还蛋白还原酶(thioredoxin reducatse,TR)检测对孤立性肺结节(solitary pulmonary nodule,SPN)良恶性的诊断价值。方法:回顾性分析89例孤立性肺结节患者的临床资料,其中恶性结节46例(恶性组),良性结节43例(良性组)。比较两组患者SPN CT征象及血清TR水平,比较CT扫描、TR检测、CT联合TR检测3种方法诊断SPN的敏感度、特异度、准确度、阳性预测值和阴性预测值。结果:恶性组毛刺征、分叶征、胸膜凹陷征、血管集束征阳性率高于良性组,结节最大长径大于良性组,血清TR水平高于良性组,差异均有统计学意义(P<0.05)。诊断SPN的敏感度、特异度、准确度CT检查分别为78.3%、88.4%和83.1%,血清TR水平分别为37.0%、86.0%和60.7%,联合检查分别为82.6%、86.0%和84.3%。联合检查及单独CT诊断SPN敏感度、准确度高于TR检测,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:CT扫描及CT联合血清TR检测对SPN的诊断价值优于TR检测,TR检测可以有效辅助CT扫描对SPN的定性诊断。

乙型肝炎病毒表面抗原主蛋白上调硫氧还蛋白还原酶1基因的表达

目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)表面抗原主蛋白(SHBs)对硫氧还蛋白还原酶1(TXNRD1)启动子转录的激活作用。方法以我室构建的SHBs基因表达谱芯片结果为基础,利用生物信息学技术确定TXNRD1的启动子区域(TXNRD1p),聚合酶链反应(PCR)扩增TXNRD1p,克隆至真核报告载体pCAT3-Basic中,构建pCAT3-TXNRD1p报告载体;以该质粒转染肝癌细胞系HepG2细胞系,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测氯霉素乙酰转移酶(CAT)的表达活性;并与pcDNA3.1(-)-SHBs共转染HepG2细胞系,用ELISA法检测CAT的表达活性。结果pCAT3-TXNRD1p与pcDNA3.1(-)-SHBs瞬时共转染的HepG2细胞的CAT表达活性是pCAT3-TXNRD1p的7.4倍,是pCAT3-TXNRD1p与pcDNA3.1(-)-empty共转染的2.5倍。结论我室克隆的TXNRD1启动子有顺式激活下游基因的活性;HBV的SHBs蛋白可以上调TXNRD1的启动子活性。

叠氮钠、过氧化氢对SH-SY5Y细胞内硫氧还蛋白还原酶的影响

过度氧化应激是诱发许多神经退变病的重要因素。叠氮钠(NaN3)是线粒体有氧呼吸链细胞色素c氧化酶(COX)的特异性抑制剂,过氧化氢(H2O2)释放氧自由基造成氧化损伤,两者都可以用于氧化应激情况下神经元损伤模型的建立。硫氧还蛋白还原酶(thioredoxin reductase,TR)特异性的还原氧化型的硫氧还蛋白(thioredoxin,TRx),调节细胞中氧化还原的平衡。现以不同浓度NaN3或H2O2处理人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y细胞),建立损伤模型。通过MTT法、形态学方法检测SH-SY5Y细胞损伤程度。同时,通过Western blot定量法、免疫细胞化学法,检测损伤的SH-SY5Y细胞中TR含量的改变,观察TR在胞内的分布。实验表明,NaN3、H2O2均以浓度依赖方式损伤SH-SY5Y细胞;TR分布于SH-SY5Y细胞的胞浆,表明TR是一种分泌蛋白,损伤后分布无明显变化。但一定浓度的NaN3作用后3h,胞内TR水平显著降低,即神经系统内呼吸链受损可抑制TR的表达,为神经退变病的防治提供了新的思路。