细胞质膜微囊蛋白1敲除小鼠神经干细胞培养与生物学特性

背景:研究发现细胞质膜微囊蛋白1在哺乳动物脑内表达,参与脑的正常发育,能影响脑内神经干细胞的增殖。目的:从细胞质膜微囊蛋白1敲除小鼠脑内获取神经干细胞并观察其生物学特性。方法:分别取E14-E16正常C57BL/6胚胎小鼠和细胞质膜微囊蛋白1敲除C57BL/6胚胎小鼠全脑,采用酶消化法获得单细胞悬液,置神经干细胞条件培养基中培养,原代培养7 d后,加入含体积分数10%胎牛血清的DMEM/F12培养基诱导7 d。结果与结论:从两种胎鼠脑内获取的细胞悬液培养1 d后较多细胞发生死亡,可见单个细胞漂浮于培基中,透光度较好,3 d后逐渐形成悬浮生长的多细胞团。传代后培养板底部可见少量细胞发生贴壁,7 d后可见大量细胞团出现,且细胞质膜微囊蛋白1敲除胎鼠源细胞增殖速度更明显。免疫细胞化学检测显示,两种胎鼠来源细胞团均为巢蛋白阳性,分化细胞可见神经丝蛋白200、胶质纤维酸性蛋白或O4阳性表达;正常C57BL/6胎鼠来源细胞团呈细胞质膜微囊蛋白1阳性表达,而细胞质膜微囊蛋白1敲除C57BL/6胎鼠来源细胞团呈细胞质膜微囊蛋白1表达阴性,且神经干细胞成球速度和成球数量优于正常胎鼠神经干细胞。说明实验成功从细胞质膜微囊蛋白1敲除胎鼠脑内培养出细胞质膜微囊蛋白1缺失神经干细胞,细胞质膜微囊蛋白1可促进神经干细胞的增殖,并抑制其分化。

细胞质膜微囊蛋白Caveolin-1在乳腺癌中的表达及意义

目的:探讨细胞质膜微囊蛋白Caveolin-1在乳腺癌中的表达及意义。方法:采用免疫组织化学Envision法检测60例乳腺癌患者的肿瘤组织、癌旁正常乳腺组织和乳腺良性肿瘤内Caveolin-1的表达,结合临床病理资料进行统计学分析。结果:乳腺癌、乳腺非典型增生、乳腺良性肿瘤和正常乳腺组织中Caveolin-1的阳性表达率分别为10%、12%、30%和40%,其中浸润性乳癌10%,原位癌20%,淋巴结转移20%,无淋巴结转移组30%。乳腺良恶性病变、正常乳腺组织之间差异有统计学意义。结论:Caveolin-1的表达与乳腺癌的浸润和转移密切相关,有可能作为乳腺癌的抑癌基因,其表达对于乳腺癌癌细胞转移的诊断、分级以及乳腺癌的预后有一定的指导作用。

细胞质膜微囊蛋白-1在皮肤恶性黑色素瘤中的表达及临床意义

目的探讨细胞质膜微囊蛋白-1(Caveolin-1)在皮肤恶性黑色素瘤中的表达及临床意义。方法采用免疫组织化学Envision法检测70例皮肤恶性黑色素瘤患者皮损部位和70例皮肤色素痣组织中Caveolin-1的表达,并进行统计学分析。结果免疫组化染色显示皮肤恶性黑色素瘤和色素痣均可见Caveolin-1阳性着色,恶性黑色素瘤组织内Caveolin-1的阳性强度低于色素痣,阳性表达率皮肤恶性黑色素瘤(48.5%)低于色素痣(91.2%),有显著性差异(P<0.01)。结论 Caveolin-1在黑色素瘤中可能起抑癌作用。

细胞质膜微囊蛋白-1在恶性肿瘤中的研究进展

细胞质膜微囊结构是细胞膜上特定的一种呈希腊字母Ω形状、直径50～100nm的微区域,富含胆固醇、鞘磷脂和鞘糖脂。随着分子生物学的发展,发现细胞质膜微囊结构参与许多细胞生命活动,近年来发现,该结构和许多肿瘤的发生、发展及转移关系密切。而细胞质膜微囊蛋白-1作为细胞质膜微囊结构的主要结构蛋白,对其功能起着决定性的作用。本文就细胞质膜微囊蛋白-1在妇科肿瘤中的研究现状做一综述。

细胞质膜微囊与信号转导

细胞质膜微囊 (caveolae)为 50～ 1 0 0nm的小囊泡 ,它们以内陷形式连接在细胞质膜上 ,并广泛存在于各种类型的细胞 .早在 4 0多年前用透射电镜曾观察到此微囊结构 .细胞质膜微囊的功能为通过毛细管内皮细胞转运小分子及大分子以及具有“液饮”作用 .最近实验表明 。

间充质干细胞来源膜微囊转运蛋白减轻心肌缺血再灌注损伤的研究进展

缺血性心脏病是一类严重危害人类健康的疾病，尤其是心肌梗死发生后，心肌细胞数量减少，梗死区纤维组织增生，逐渐发生退行性左心室重塑，心功能下降，最终导致充血性心力衰竭。传统药物、搭桥手术、导管介入治疗等血运重建在一定程度上改善了心肌缺血的症状，使心肌梗死患者的生存率有所提高。然而恢复血流灌注后出现心肌功能障碍和结构损害，表现为致死性再灌注损伤、心肌顿抑、心律失常和能量代谢的改变，称之为心肌缺血再灌注损伤（IRI）^[1]，即MI/R。

脂多糖作用下血管内皮钙黏蛋白经网格蛋白和微囊介导胞吞后的亚细胞分布差异

目的研究脂多糖(LPS)作用下血管内皮钙黏蛋白(VE-Cad)经不同的胞吞途径进入细胞后对VE-Cad亚细胞分布和细胞通透性的影响。方法体外培养人血管内皮细胞株CRL-2922,观察LPS(10μg/ml)作用后不同时间点VECad与R ab11(循环内颗粒标记物)及溶酶体相关膜蛋白2(L AMP2,晚期内颗粒/溶酶体标记物)的免疫共沉淀情况,网格蛋白胞吞抑制剂和微囊抑制剂对VE-Cad与Rab11和LAMP2免疫共沉淀的影响,以及单层细胞通透性的变化。结果LPS作用后1h,VE-Cad与Rab11的免疫共沉淀明显增高(P<0.05),随后逐渐降低;VE-Cad与LAMP2的免疫共沉淀在LPS作用后呈时间依赖性地增高(P<0.05)。网格蛋白胞吞抑制剂氯丙嗪(CPZ)可显著抑制LPS作用后VE-Cad与Rab11免疫共沉淀的增高(P<0.05),而微囊抑制剂非律平无此作用;微囊抑制剂非律平可显著抑制LPS作用后VE-Cad与LAMP2免疫共沉淀的增高(P<0.05),而网格蛋白胞吞抑制剂无此作用。网格蛋白胞吞抑制剂可减轻LPS作用后1h单层细胞通透性的增高,而微囊抑制剂可减轻LPS作用后4h单层细胞通透性的增高(P<0.05)。结论在LPS作用下VE-Cad分别经网格蛋白或微囊介导的胞吞进入细胞,分布于循环内颗粒或溶酶体中,从而导致不同程度的血管通透性增高。

Caveolin-1蛋白在17β-雌二醇抑制内皮素-1诱导血管平滑肌细胞增殖中的作用

本工作旨在研究Caveolin-1在17β-雌二醇（17β-estradiol,E2)抑制内皮素-1（endothelin-1,ET-1)诱导血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells,VSMCs前后ET-1对DNA合成和caveolin-1蛋白表达的影响。结果显示，ET-1可以刺激VSMCs增殖。E2作用24h后，可明显抑制ET-1的上述作用。免疫荧光证实，在VSMCs上有cavellin-1分布，ET-1刺激VSMCs增殖的过程中，VSMCs上caveolin-1蛋白荧光强度下，而事称给予E2可逆转这种下降。Western bolt证实，ET-1可抑制caveolin-1蛋白的表达而E2则可增加caveolin-1蛋白的表达。以上结果表明E2抑制ET-1诱导的VSMCs增殖可能与其增加caveolin-1蛋白表达有关。

Caveolin-1蛋白及ERK1/2信号转导途径在17β-雌二醇抑制血管平滑肌细胞增殖中的作用

目的:研究caveolin-1蛋白及细胞外信号调节激酶(ERK1/2)在17β-雌二醇(E2)抑制血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖中的作用。方法:在培养的VSMCs上,采用[3H]-TdR掺入法、Western blotting观察E2预处理前后血清(FCS)对VSMCs DNA合成及caveolin-1、MKP-1、磷酸化ERK1/2蛋白表达的影响,同时采用RT-PCR技术观察caveolin-1 mRNA的变化。结果:E2作用24h,可明显抑制FCS诱导的VSMCs增殖。RT-PCR及Western blotting结果显示,FCS可抑制caveolin-1 mRNA及蛋白表达,而E2预处理可增加其表达。同时,Western blotting结果还提示,E2预处理可增加MKP-1蛋白表达,抑制ERK1/2蛋白表达。结论:E2可通过增加caveolin-1及MKP-1蛋白表达,抑制磷酸化ERK1/2活性,促进其降解,来抑制VSMCs增殖。

微囊蛋白基因及其与疾病关系研究进展

微囊蛋白 (caveolin)基因家族已鉴定出 3个成员 :微囊蛋白 1、微囊蛋白 2、微囊蛋白 3 ,并被定位于抑癌基因位点区域 .微囊蛋白 1是细胞质膜微囊的标记蛋白 ,其中间疏水区域在细胞膜内形成发夹结构 ,并使其N端区域与C端区域在细胞膜内表面聚合形成支架结构 .微囊蛋白 1与微囊蛋白 2以组成异源寡聚体的形式存在 ,在脂肪细胞、内皮细胞和成纤维细胞中表达最丰富 ,微囊蛋白 3则特异表达于肌肉 .离体与活体研究结果均表明微囊蛋白 1可能具有抑癌功能 ,并可能在细胞信号传导中起刹车作用 .微囊蛋白 1基因敲除小鼠心血管NO与Ca2 +信号途径受损、功能异常 ,肺泡上皮细胞出现异常扩增 ,脂质代谢失衡 ,身体消瘦 .微囊蛋白 2基因敲除小鼠肺功能与耐力均严重受损 ,与微囊蛋白 1基因敲除小鼠的表型非常相似 .微囊蛋白 3为维持心脏正常功能所必需 。

乙醇对HepG2细胞陷窝蛋白-1表达的影响

目的探讨乙醇引起肝细胞膜的氧化应激以及此氧化应激机制是否与陷窝蛋白-1(CAV-1)相关。方法培养人肝癌HepG2细胞株,分别设实验组:不同浓度(100、200、500、1 000和1 500mmol/L)乙醇分别刺激不同时间(0~24h);正常对照组:用等量的1μmol/L无菌0.9%氯化钠注射液替代乙醇。四甲基偶氮唑盐比色法、乳酸脱氢酶(LDH)比色检测细胞生存率和细胞活性;选定200mmol/L浓度乙醇作为实验浓度,应用蛋白质印迹法、实时反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测CAV-1表达的动态变化。结果 200mmol/L浓度的乙醇未影响细胞的生存率。蛋白质印迹法检测200mmol/L乙醇在24h内致HepG2细胞CAV-1表达增多。结论乙醇刺激细胞能够诱导CAV-1表达增加。

小窝在G蛋白偶联雌激素受体调控小鼠主动脉内皮细胞一氧化氮合酶活性中的作用

目的探讨小窝(caveolae)对雌激素通过G蛋白偶联雌激素受体(GPER)调控小鼠主动脉内皮型一氧化氮合酶(eNOS)活性的影响。方法当细胞融合度达到80%~90%时,选取内皮细胞分为对照1组、DMSO组、雌二醇1组、雌二醇2组、雌二醇3组(n=5),其中雌二醇1组、雌二醇2组、雌二醇3组按浓度梯度加入雌二醇(10、50、100 nmol/L),对照1组不予任何处理,DMSO组加入50μl DMSO培养。另选取内皮细胞分为对照2组(未作任何处理)、阴性对照1组[加入小窝蛋白1(Cav-1)阴性对照干扰RNA]、Cav-1敲减组(加入Cav-1干扰RNA);选取部分内皮细胞设对照3组(未作任何处理)、阴性对照2组(加入GPER阴性对照干扰RNA)、GPER敲减组(加入GPER干扰RNA)。检测Cav-1、GPER、eNOS、磷酸化eNOS(p-eNOS)蛋白表达。结果与对照1组比较,雌二醇3组p-eNOS蛋白表达明显增加(0.47±0.07 vs 0.20±0.04,P<0.05)。对照2组、阴性对照1组、Cav-1敲减组GPER、eNOS、Cav-1蛋白表达比较,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。与对照2组比较,Cav-1敲减组GPER、eNOS、Cav-1蛋白表达明显降低(P<0.05,P<0.01)。对照3组、阴性对照2组、GPER敲减组eNOS、p-eNOS表达比较,无统计学差异(P>0.05)。与对照3组比较,GPER敲减组GPER蛋白表达明显降低(0.56±0.22 vs 2.40±0.65,P<0.05)。结论小窝参与了雌激素通过GPER调控小鼠主动脉eNOS活性的过程。

细胞质膜微囊蛋白caveolin-1表达与乳腺癌侵袭转移的相关性

细胞质膜微囊蛋白1（caveolin-1）是细胞质膜微囊的功能蛋白，与细胞内外物质的转运、细胞的内吞以及细胞信号通路调节等功能相关，通过其脚手架区域，在多种信号分子向胞内传递信息的过程中发挥重要作用，与多种肿瘤细胞的增殖、分化、侵袭、转移以及凋亡关系密切。

过氧化氢对人晶状体上皮细胞内细胞质膜微囊蛋白的影响

目的探讨过氧化氢（H2O2）对人晶状体上皮细胞的细胞质膜微囊蛋白（CP）及磷酸化CP-1分布与表达的影响。方法给予人晶状体上皮细胞（SRA01／04）不同浓度及不同时间点的H2O2刺激。用激光共聚焦显微镜和免疫荧光显微镜观察CP及磷酸化CP-1的分布。通过免疫印迹试验观察CP表达水平的变化以及磷酸化CP—1的表达。结果通过激光共聚焦显微镜和荧光显微镜，观察到人晶状体上皮细胞的质膜和细胞质内含有丰富的CP；当给予细胞H2O2刺激后，细胞质内CP的分布增多；当刺激时间达到1h，细胞膜被破坏，但仍可观察到CP的分布情况。此外，H2O2的刺激可以使CP-1发生磷酸化。免疫印迹试验发现，随着H2O2作用时间的延长和刺激浓度的升高，细胞质膜和细胞总蛋白质的CP表达水平呈下调趋势。结论H2O2刺激人晶状体上皮细胞后，CP重新分布并可能破坏了细胞质膜微囊（caveolae）的结构，使得细胞的CP表达下调。细胞质膜微囊和CP可能在人晶状体上皮细胞中具有重要作用。

Caveolin-1在内皮素-1诱导血管平滑肌细胞增殖中的作用

目的 :探讨caveolin - 1蛋白在VSMC的分布、在ET - 1诱导的VSMC增殖中表达的变化情况。方法 :在培养的VSMC上 ,使用 [3 H]TdR掺入法观察ET - 1和BQ12 3对其DNA合成的影响 ;用荧光免疫组化方法观察cave olin - 1蛋白在VSMC的分布 ,ET - 1对caveolin - 1蛋白表达的影响 ;用Westernblot检测ET - 1和BQ12 3对caveolin - 1蛋白表达的影响。结果 :ET - 1可以呈浓度梯度地刺激VSMC的增殖 ,ETAR特异性阻断剂BQ12 3可以抑制ET - 1的作用 ;免疫荧光证实了在VSMC上 ,caveolin - 1分布于细胞表面 ,在ET - 1刺激增殖过程中 ,VSMC上caveolin - 1蛋白荧光强度下降 ;Westernblot证实ET - 1可以抑制caveolin - 1蛋白的表达。结论 :在VSMC上 ,caveolin - 1主要分布于细胞表面 ,在ET - 1刺激增殖过程中 ,caveolin - 1蛋白表达发生了变化 ,ET - 1可通过ETAR抑制caveolin - 1蛋白的表达。

甲基-β-环糊精干扰脂质微区影响脑胶质瘤细胞系C6侵袭和迁移的体外研究

目的观察甲基-β-环糊精(MβCD)破坏脂质微区结构对经体外培养的大鼠脑胶质瘤细胞系C6细胞侵袭和迁移能力的影响。方法采用MβCD(5mmol/L)破坏经体外培养的大鼠脑胶质瘤细胞系C6细胞膜脂质微区,通过Transwell细胞侵袭和迁移实验检测细胞侵袭性和迁移能力;Western blotting检测细胞膜脂质微区结构蛋白Caveolin-1和膜受体表皮生长因子受体表达水平的变化。结果干扰组大鼠脑胶质瘤细胞系C6细胞Caveolin-1和表皮生长因子受体表达水平明显低于对照组(P=0.000,0.001)。对照组大鼠脑胶质瘤细胞系C6细胞穿过聚碳酸酯微膜数目为(54.00±9.59)个/视野,干扰组为(23.94±5.56)个/视野,两组比较差异有统计学意义(P=0.000)。对照组大鼠脑胶质瘤细胞系C6细胞迁移至空白端的细胞数目为(134.00±9.68)个/视野,干扰组为(88.00±6.22)个/视野,两组比较差异有统计学意义(P=0.000)。结论甲基-β-环糊精破坏脂质微区结构后可降低经体外培养的大鼠脑胶质瘤细胞系C6细胞的侵袭性和迁移能力,其机制可能与降低Caveolin-1和表皮生长因子受体等多种膜蛋白和受体表达水平有关。

表柔比星联合环磷酰胺对乳腺癌MDA-MB-231细胞成瘤性及caveolin-1表达的影响

目的:探讨表柔比星联合环磷酰胺对MDA-MB-231细胞成瘤性及其对肿瘤中细胞质膜微囊蛋白-1(caveolin-1)表达的影响。方法:以乳腺癌MDA-MB-231细胞建立裸鼠移植瘤模型,实验分为表柔比星组、环磷酰胺组、表柔比星+环磷酰胺组(联合用药组)和对照组(注射等体积0.9%氯化钠溶液),采用免疫组织化学法检测移植瘤中caveolin-1表达,以图像信号采集与分析系统进行图像扫描分析。结果:表柔比星组、环磷酰胺组和联合用药组的抑瘤率分别为31.28%、33.42%和66.14%。免疫组织化学法显示给药组肿瘤组织中caveolin-1表达明显增强,caveolin-1在联合用药组(253.22±38.52)肿瘤组织中表达较对照组(31.73±2.28)和表柔比星组(157.52±32.69)、环磷酰胺组(148.23±41.66)明显增强,图像灰度值统计分析显示差异有统计学意义(P<0.05)。结论:表柔比星和环磷酰胺可抑制乳腺癌肿瘤细胞生长,二者联用抑瘤作用增强,肿瘤生长体积与caveolin-1的表达呈反向性,提示二者之间可能在抑瘤机制上存在相关性。

微囊介导 VE－Cad 胞吞参与了 LPS 作用后血管通透性增高的形成

目的:观察脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)作用后微囊介导的血管内皮钙黏蛋白(vascular endothelial cadherin,VE-Cad)胞吞,及其在血管通透性增高中的作用。方法:采用人血管内皮细胞株CRL-2922,以及免疫组化、免疫印迹、免疫共沉淀等技术方法,观察LPS处理后不同时点细胞质膜微囊重要结构蛋白小窝蛋白1(caveolin-1,Cav1)的蛋白表达和磷酸化,Cav1与VE-Cad的共沉淀和共定位,以及微囊抑制剂对LPS处理后Cav1与VE-Cad的共沉淀、VE-Cad质膜表达和单层细胞通透性的影响。结果:(1)LPS处理后Cav1蛋白表达无显著变化,但其Tyr14位点的磷酸化水平逐渐增高(P<0.05),Cav1与VE-Cad的免疫共沉淀逐渐增多(P<0.05),免疫组化激光共聚焦显微镜观察在4 h时可见明显的共定位;(2)细胞质膜微囊抑制剂非律平(5 mg/L)可以显著减少LPS处理4 h Cav1与VE-Cad的免疫共沉淀(P<0.05),增强VE-Cad的质膜表达(P<0.05),改善单层细胞通透性(P<0.05)。结论:细胞质膜微囊介导VE-Cad胞吞参与了LPS作用后血管通透性增高的形成。