阳极氧化种植体植入早期骨组织细胞趋化因子受体4的表达

背景:与传统种植体相比,阳极氧化种植体植入早期即可达到种植稳定,其相关的分子生物学机制并不明确。目的:分析细胞趋化因子受体4在阳极氧化种植体植入早期表达的意义。方法:选取4月龄Wistar大鼠40只,随机分为种植体植入6,12,24h组及空白对照组。将阳极氧化和喷砂两种表面特性的种植体分别植入实验组所有大鼠左右侧胫骨。植入6,12,24h后处死各实验组大鼠,旋出种植体,截取种植体周围直径约2cm骨组织,对照组截取胫骨近骺端直径约2cm骨组织。将各实验组一半骨组织制备蛋白样品,用Westernblot免疫印迹分析细胞趋化因子受体4蛋白,以β-actin作为内参。另一半骨组织进行中性EDTA脱钙、切片,进行细胞趋化因子受体4蛋白免疫组织化学检测。将24h组取出的种植体行扫描电镜观察。结果与结论:Westernblot结果显示,种植体植入24h内,实验组种植体周围骨组织细胞趋化因子受体4蛋白表达量均高于空白对照组。同一时间点,阳极氧化种植体周围骨组织细胞趋化因子受体4表达量均高于表面喷砂种植体周围骨组织。免疫组织化学结果支持上述结果。扫描电镜可见,阳极氧化种植体较喷砂种植体表面黏附较多的间叶样细胞。提示阳极氧化种植体诱导机体骨组织细胞趋化因子受体4高表达,可能促使种植体达到早期稳定。

左归丸靶向C-X-C趋化因子受体4对人脐带间充质干细胞体外迁移的影响

目的:探讨左归丸通过靶向调控C-X-C趋化因子受体4(CXCR4)表达对人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)体外迁移的影响。方法:采用组织块法分离培养hUC-MSCs并进行流式鉴定。利用CCK-8检测不同浓度左归丸对hUC-MSCs增殖的影响,细胞划痕和Transwell实验分析左归丸对hUC-MSCs体外迁移的影响,实时聚合酶链反应(PCR)、蛋白印迹法和流式细胞术分析hUC-MSCs中CXCR4表达变化。结果:流式细胞术结果显示,hUC-MSCs表面高表达CD73和CD90,极低表达CD34和CD45。CCK-8结果显示,0.1、0.2 mg/mL左归丸均能明显促进hUC-MSCs增殖(P<0.05)。细胞划痕和Transwell实验结果显示,0.1、0.2 mg/mL左归丸能明显促进hUC-MSCs迁移,最佳浓度为0.2 mg/mL,CXCR4拮抗剂普乐沙福则能抑制其促迁移作用(P<0.05)。实时PCR、蛋白印迹法和流式细胞术结果显示,左归丸能上调hUC-MSCs中CXCR4 mRNA和蛋白表达水平,并促进CXCR4蛋白在细胞膜表达(P<0.05)。结论:左归丸通过上调CXCR4表达促进hUC-MSCs的体外迁移。

基质细胞衍生因子-1/趋化因子受体-4轴与糖尿病大血管病变的研究现状

糖尿病是一种涉及全身多个系统并以血糖浓度升高表现为主的代谢性疾病,随着病程的发展,复杂多样的并发症常比控制血糖本身更加棘手。其中,糖尿病的大血管病变是糖尿病性心肌病、心肌梗死、大动脉粥样硬化等并发症的重要危险因素。近年来研究发现,基质细胞衍生因子-1(SDF-1)/趋化因子受体-4(CXCR4)轴具有趋化炎症细胞浸润、诱导内皮祖细胞分化的作用,因此广泛参与了血管内皮修复、新生血管形成、血管壁炎性反应、动脉粥样硬化等过程,对糖尿病大血管病变的病理生理过程变化起到重要作用,成为治疗的新靶点,但该轴在糖尿病大血管病变中的影响机制尚不清楚,一些研究提示起到保护作用,而另外一些研究则提示是一种危险因素。本文就近年来的研究成果进行简要综述,旨在为SDF-1/CXCR4的靶向治疗提供理论依据,为后期的研究提供新的视角。

淫羊藿苷调节SDF-1/CXCR4信号通路对多囊卵巢综合征大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响

目的探讨淫羊藿苷调节基质细胞衍生因子-1(SDF-1)/CXC型趋化因子受体4(CXCR4)信号轴对多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响。方法将从PCOS模型组大鼠卵巢组织中成功分离的颗粒细胞分为PCOS组、淫羊藿苷低剂量组、淫羊藿苷中剂量组、淫羊藿苷高剂量组、重组大鼠SDF-1蛋白(Rr-SDF-1)组、淫羊藿苷高剂量+Rr-SDF-1组,另取从正常对照组大鼠卵巢组织中成功分离的颗粒细胞作为对照组。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测卵巢颗粒细胞上清液中卵泡刺激素(FSH)、睾酮(T)、黄体生成素(LH)水平;CCK-8法、EdU染色检测颗粒细胞增殖;流式细胞术检测颗粒细胞凋亡;Western blot检测颗粒细胞中Bcl-2相关X蛋白(Bax)、裂解的胱天蛋白酶-3(Cleaved Caspase-3)、SDF-1、CXCR4蛋白表达。结果与对照组比较,PCOS组FSH水平、光密度(OD)_(450)值、EdU阳性细胞率降低,T、LH水平、细胞凋亡率、Bax、Cleaved Caspase-3、SDF-1、CXCR4蛋白表达水平升高(P<0.05)。与PCOS组比较,淫羊藿苷低、中、高剂量组FSH水平、OD_(450)值、EdU阳性细胞率均依次升高,T、LH水平、细胞凋亡率、Bax、Cleaved Caspase-3、SDF-1、CXCR4蛋白表达水平均依次降低;Rr-SDF-1组对应指标变化趋势与上述相反(P<0.05)。与淫羊藿苷高剂量组比较,淫羊藿苷高剂量+Rr-SDF-1组FSH水平、OD_(450)值、EdU阳性细胞率降低,T、LH水平、细胞凋亡率、Bax、Cleaved Caspase-3、SDF-1、CXCR4蛋白表达水平升高(P<0.05)。结论淫羊藿苷可能通过抑制SDF-1/CXCR4信号通路抑制PCOS大鼠卵巢颗粒细胞凋亡。

甲基莲心碱调节SDF-1/CXCR4信号通路对糖尿病肾病的影响

目的·探讨甲基莲心碱(neferine,Nef)对糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)大鼠肾组织的作用及其相关机制。方法·采用高脂饲料喂食联合腹腔注射链脲佐菌素的方法构建DN模型大鼠,并将造模成功的大鼠随机分为DN组、Nef(低、中、高)剂量组、Nef高剂量+通路拮抗剂(AMD3100)组,每组10只。同时,选10只普通大鼠作为正常组。检测6组大鼠的空腹血糖(fasting blood glucose,FBG)、24 h尿蛋白、血清糖化血红蛋白(glycosylated hemoglobin,HbA1c)、血清肌酐(serum creatinine,Scr)、尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)水平及肾指数。分别采用苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,H-E)染色、马松(Masson)染色观察6组大鼠的肾组织的病理变化。采用硫代巴比妥酸(thiobarbituric acid,TBA)法检测肾组织丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量,分别采用水溶性四氮唑(water soluble tetrazolium,WST-1)法、钼酸铵法检测肾组织超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(catalase,CAT)的活性。分别采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)和蛋白质印迹法(Western blotting)检测肾组织中基质细胞衍生因子-1(stromal cell-derived factor-1,SDF-1)、CXC趋化因子受体4(CXC chemokine receptor 4,CXCR4)的mRNA以及蛋白表达。采用高糖(30 mmol/L葡萄糖)诱导大鼠肾小管上皮细胞NRK-52E,以建立DN细胞模型。将该细胞分为对照组、高糖(HG)组、HG+Nef(低、中、高)剂量组(即HG+Nef-L、M、H组)、HG+Nef-H+AMD3100组。分别采用WST-1法、钼酸铵法检测模型细胞中SOD、CAT活性,采用TBA法检测MDA含量,分别采用qPCR、Western blotting检测SDF-1、CXCR4的mRNA及蛋白表达,采用CCK-8法、流式细胞术检测细胞活力和凋亡率。结果·与DN组比较,Nef(低、中、高)剂量组和Nef高剂量+AMD3100组大鼠的FBG、24 h尿蛋白、HbA1c、Scr、BUN水平以及肾指数、MDA水平均较低,SDF-1、CXCR4的mRNA和蛋白表达以及SOD、CAT活性均较高(均P<0.05),肾组织病理损伤、纤维化程度有所减轻,且均呈剂量依赖性;AMD3100能减弱高剂量Nef对DN大鼠的肾保护作用。与HG组比较,HG+Nef-L、M、H组NRK-52E细胞的活力,SOD、CAT活性,SDF-1、CXCR4的mRNA和蛋白表达均较高,MDA含量及凋亡率均较低(均P<0.05);AMD3100可逆转Nef-H对NRK-52E细胞损伤的保护作用。结论·Nef可能通过激活SDF-1/CXCR4信号通路来控制DN大鼠的血糖水平并提高其抗氧化能力,从而发挥肾保护作用。

针刺联合神经干细胞修复脊髓损伤的科学依据

背景:脊髓损伤是由创伤性或非创伤性事件引起的一种神经系统疾病,常导致损伤节段以下严重功能障碍。近年来,神经干细胞移植被认为在调控脊髓损伤后的炎症反应、抑制胶质瘢痕的过度增生以及促进神经再生方面具有显著的治疗潜力。目的:综述并讨论针刺及神经干细胞移植疗法在抑制脊髓损伤诱导的继发性损伤中的潜在作用机制,深入探讨其治疗脊髓损伤的科学依据。方法:以“脊髓损伤,针刺,神经干细胞,SDF-1α/CXCR4轴”为中文检索词,以“Spinal cord injury,acupuncture,neural stem cells,SDF-1α/CXCR4 axis”为英文检索词,分别检索PubMed、Elsevier、万方及中国知网数据库,最终纳入96篇文献,汇总分析了针刺联合神经干细胞治疗脊髓损伤的相关研究成果,总结了这一联合疗法在治疗脊髓损伤后继发性损伤中的相关机制。结果与结论:①基质细胞衍生因子1α(stromal-derived factor 1α,SDF-1α)/CXC趋化因子受体4(chemokine receptor 4,CXCR4)轴在神经干细胞移植治疗脊髓损伤中扮演着至关重要的角色,该信号传导机制不仅影响神经干细胞的迁移、增殖和分化,更是决定干细胞归巢至损伤部位效率的关键因素。因此,针对该轴线的调控,对于提升脊髓损伤的治疗效果具有重要意义。②针刺作为一种传统中医疗法,在脊髓损伤的继发性损伤调控中展现出独特的优势,它能够通过调节炎症反应、抑制细胞凋亡、改善微循环、减少神经胶质瘢痕形成以及对抗氧化应激等多种途径,有效减轻脊髓损伤后的继发性损伤。③针刺还能够影响SDF-1α/CXCR4轴的表达与功能,从而增强神经干细胞的归巢和存活能力,促进神经再生和功能恢复。④结合针刺与干细胞移植的疗法,是一种创新且较好的脊髓损伤治疗策略,适用于修复神经环路,它结合了传统中医的智慧与现代生物技术的优势,为脊髓损伤患者提供了新的治疗选择。然而,目前这种联合疗法仍处于研究和探索阶段,其长期疗效和安全性尚需进一步验证。⑤综合而言,针刺及神经干细胞移植治疗脊髓损伤具有巨大的临床应用潜力,但仍需深入研究和优化治疗方案。未来,期待通过更多的临床试验和机制研究,进一步揭示这一疗法的疗效机制和最佳适应证,为脊髓损伤患者带来更好的康复希望和更高效的治疗效果。

基质细胞衍生因子-1/趋化因子受体4轴在促红细胞生成素动员骨髓间充质干细胞治疗脊髓损伤中的作用

目的 观察基质细胞衍生因子-1/趋化因子受体4（SDF-1/CXCR4）轴在促红细胞生成素（EPO）动员骨髓间充质干细胞（BMSCs）治疗大鼠脊髓损伤中的作用.方法 将96只成年雌性SD大鼠随机分为假手术组、模型对照组、EPO组、BMSCs组、BMSCs＋ EPO组和BMSCs＋ EPO＋AMD3100组,每组16只,采用改良Allen法制作大鼠脊髓损伤模型,通过Basso-Beattie-Bresnahan （BBB）评分估计神经功能恢复情况,通过酶联免疫吸附试验（ELISA）法测定脊髓损伤后肿瘤坏死因子（TNF-α）和SDF-1水平,应用免疫荧光检测损伤的脊髓中BMSCs的分布,通过Transwell实验探索EPO对BMSCs迁移功能的影响,原位缺口末端标记法（TUNEL）法检测各组凋亡指数,Western blot检测损伤局部促红细胞生成素受体（EPOR）和CXCR4的水平.结果 术后第7天各组BBB评分分别为：（20.7±3.4）、（6.4±1.7）、（9.5±2.7）、（9.9±1.9）、（11.4±3.6）、（7.0±1.2）分;术后第28天各组BBB评分分别为：（21.0±3.8）、（10.5±2.8）、（15.3±3.6）、（16.2±3.9）、（18.5±4.0）、（10.8±2.2）分,BMSCs＋ EPO组运动功能改善显著优于其他各组（P＜0.05）,EPO能够显著降低受损脊髓中TNF-α水平并上调SDF-1水平（P＜0.05）,EPO较对照组能显著促进BMSCs的迁移（P＜0.05）.结论 EPO可以通过上调SDF-1/CXCR4轴的表达动员骨髓基质干细胞向脊髓损伤部位迁移,并促进BMSCs对脊髓损伤的修复作用.

基质细胞源性因子-1α／CXC趋化因子受体-4轴经PI3K／Akt通路对胃癌细胞CD133表达的调控作用

目的观察胃癌中基质细胞源性因子-1α／CXC趋化因子受体-4（SDF-1α／CXCR4）轴经由P13K／Akt信号通路对下游分子CD133表达及其活性的影响。方法免疫细胞化学染色检测胃癌KATO—Ⅲ细胞株中CXCR4、Akt、P—Akt及CD133的表达。分别用SDF-1α、AMI）3100及LY294002作用于胃癌KATO-Ⅲ细胞株，半定量酶链聚合反应（PCR）检测CXCR4mRNA和CDl33mRNA的表达变化，蛋白免疫印迹法检测CXCR4、Akt、P-Akt及CD133蛋白的表达变化。结果免疫细胞化学染色证实KATO-Ⅲ细胞呈CXCR4、Akt、P—Akt及CD133阳性表达。SDF-1α组中，CXCR4蛋白（0．980±0．083）、p-Akt蛋白（0．770±0．071）及CD133蛋白（0．890±0．078）表达与对照组（0．750±0．042、0．680±0．038、0．720±0．034）比较明显增高（P〈0．05）。与对照组（0．540±0．036、0．520±0．034）比较，CD133mRNA（0．890±0．061）表达明显增高（P〈0．05）。AMD3100组与对照组（0．750±0．042、0．680±0．038、0．720±0．034）比较，CXCR4蛋白（0．430±0．055）、P-Akt蛋白（0．350±0．050）及CD133蛋白（0．110±0．060）表达显著下降（P〈0．05）。LY294002组中，p-Akt蛋白（0．100±0．033）、CD133蛋白（0．440±0．055）表达与对照组（0．680±0．038、0．720±0．034）比较显著下降（P〈0．05）。同时，与对照组（0．540±0．036）比较，CD133mRNA（0．310±0．021）表达差异有统计学意义（P〈0．05）。结论刺激或抑制SDF-1α／CXCR4轴可经由P13K／Akt信号通路上调或下调CD133表达。

颅内动脉瘤中血管平滑肌细胞基质细胞衍生因子-1α/CXC型趋化因子受体4表达及表型转化的研究

目的探讨基质细胞衍生因子-1α(SDF-1α)/CXC型趋化因子受体4(CXCR4)在人体颅内动脉瘤(IA)壁中的表达与分布,以及血管平滑肌细胞(VSMCs)表型转化。方法纳入2018年1月至2019年6月长海医院神经外科接受开颅夹闭治疗的IA患者。在12例IA(未破裂和破裂IA各6例)和6例颞浅动脉(STA)组织中,利用高通量测序检测SDF-1α和CXCR4的表达;利用免疫组织化学观察VSMCs表型转化及血管重构;利用CFD软件对IA进行壁面切应力(WSS)对比。应用SPSS 21.0统计软件分析,组间比较采用t检验。结果苏木精-伊红(HE)及免疫组织化学显示与STA比较,动脉瘤壁内VSMCs异常增殖、排列紊乱、细胞解离变性、间隙变大等;瘤壁内VSMCs中SDF-1α、CXCR4及基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的表达均增多,而α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达减少(0.050±0.014比0.017±0.006、0.045±0.010比0.012±0.004、0.040±0.009比0.006±0.004、0.037±0.006比0.060±0.011,t=3.590、5.360、6.112、-3.324,P<0.05)。高通量测序发现,动脉瘤中SDF-1α、CXCR4和MMP-2表达高于STA[1723.34±837.69比863.99±444.96、1348.53±1013.31比123.93±33.07、2172.38±944.46比1187.50±431.23,表达差异倍数变化(FC)=1.995、10.881、1.829,P<0.05],α-SMA表达降低(19430.64±10833.29比69054.70±16140.74,FC=0.281,P<0.01);破裂IA中SDF-1α、CXCR4和MMP-2表达高于未破裂IA(2321.50±259.83比1125.18±785.85、1998.29±970.94比698.77±550.43、3012.64±291.15比1332.12±427.99,FC=2.063、2.860、2.262,P<0.05),α-SMA表达差异无统计学意义(25597.72±4241.84比13262.55±12203.28,FC=1.930,P>0.05)。破裂IA大部分伴有较低的WSS,未破裂IA大部分伴有较高的WSS。结论人颅内动脉瘤壁的VSMCs中SDF-1α/CXCR4信号通路激活,VSMCs发生表型转化,血管重构明显。较低的WSS可能通过瘤壁内的炎性反应与IA破裂密切相关。

加味四妙丸介导SDF-1/CXCR4信号通路对痛风性关节炎的治疗作用

目的研究加味四妙丸介导基质细胞衍生因子(SDF)-1/趋化因子受体(CXCR4)信号通路对痛风性关节炎的治疗作用。方法将75只SPF级大鼠随机分成健康组、模型组、研究组各25例,对模型组和研究组大鼠建立痛风性关节炎模型,只对研究组进行加味四妙丸治疗,通过大鼠步态分级和关节炎症程度评定检测模型是否成立;容积法对大鼠关节肿胀程度进行测定;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测关节液炎症指标及SDF-1表达;苏木素-伊红(HE)染色了解大鼠关节组织内在形态;反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法和Western印迹检测滑膜软骨组织中SDF-1、CXCR4、基质金属蛋白酶(MMP)-3、MMP-9、MMP-13等的基因、蛋白表达水平。结果模型组关节炎症指数及步态分级较健康组显著上升(P<0.05);研究组较模型组关节炎症指数及步态分级显著降低(P<0.05);与模型组对比,研究组6、12、24、48 h时踝关节肿胀度显著下降(均P<0.05);研究组较模型组关节液中IL-1β、IL-6、TNF-α、MDA显著降低,SOD显著升高,SDF-1含量、SDF-1 mRNA和蛋白、CXCR4、MMP-3、MMP-9、MMP-13 mRNA及其蛋白表达显著下降(均P<0.05)。结论加味四妙丸能够通过抑制SDF-1/CXCR4信号通路的表达降低痛风性关节炎大鼠的关节肿胀程度及抑制炎症反应从而达到治疗目的。

miR-3613-3p通过调节SDF1/CXCR4通路对非小细胞肺癌细胞A549凋亡的影响

目的探讨miR-3613-3p通过调节基质细胞衍生因子1(stromal cell-derived factor 1,SDF-1)/趋化因子受体4(C-X-C chemokine receptor type 4,CXCR4)通路对A549细胞凋亡的影响。方法运用TargetScan在线分析miR-3613-3p与CXCR4的相关性:将CXCR4的3端非编码区克隆进pMIR-REPORT Luciferase载体,利用双荧光素酶报告系统检测miR-3613-3p是否靶向调控CXCR4;转染miR-3613-3p mimics或者miR-3613-3p inhibitor进A549细胞,通过免疫印迹法检测SDF1/CXCR4通路相关蛋白和凋亡标志蛋白的表达量;同时采用Annexin V染色法测定细胞凋亡水平。结果TargetScan分析后,miR-3613-3p仅在一个区域与CXCR4具有较高匹配度;通过双荧光素酶报告系统发现,miR-3613-3p靶向结合CXCR4的3端非编码区;梯度转染miR-3613-3p mimics时,CXCR4、cleaved-caspase3/caspase3、cleaved-caspase9/caspase9表达量下降,BAX表达量上升,Bak表达量下降,细胞凋亡水平下降(0.206±0.033 vs 0.062±0.015,P=0.021);而用梯度转染miR-3613-3p inhibitor时,CXCR4、cleaved-caspase3/caspase3的表达量上升,cleaved-caspase9/caspase9、BAX表达量下降,Bak表达量上升,细胞凋亡水平上升(0.201±0.017 vs 0.613±0.061,P=0.019);外源SDF-1刺激的同时转染miR-3613-3p inhibitor,细胞凋亡水平没有明显变化(0.204±0.029 vs 0.197±0.030,P=0.82)。结论miR-3613-3p通过抑制SDF1/CXCR4通路抑制非小细胞肺癌细胞A549的凋亡。

复方甘草酸苷调控SDF-1/CXCR-4轴治疗特应性皮炎小鼠的作用机制

目的:探讨复方甘草酸苷调控基质细胞衍生因子-1/趋化因子受体-4(SDF-1/CXCR-4)轴治疗特应性皮炎小鼠的作用机制。方法:120只Nc/Nga小鼠随机分成6组:正常对照组、模型组、复方甘草酸苷低(10 mg·kg^-1)、中(20 mg·kg^-1)、高(40 mg·kg^-1)剂量组、地塞米松组(30 mg·kg^-1),每组20只。模型组、地塞米松组、复方甘草酸苷各剂量组建立特应性皮炎模型。造模成功24 h后地塞米松组、复方甘草酸苷各剂量组分别灌胃给予相应药物,1次/d,连续给药14 d,正常对照组及模型组给予等体积生理盐水。试验结束后,游标卡尺测量小鼠右耳厚度,实时荧光逆转录法(RT-PCR)法及蛋白质免疫印迹(Western-blot)法测定右耳组织SDF-1、CXCR-4 mRNA及蛋白表达水平。结果:模型组右耳厚度、耳部皮炎组织SDF-1、CXCR-4 mRNA及蛋白表达水平显著高于正常对照组(P<0.05);地塞米松组、复方甘草酸苷各剂量组右耳厚度、耳部皮炎组织SDF-1、CXCR-4 mRNA及蛋白表达水平显著低于模型组(P<0.05),且随着复方甘草酸苷给药剂量的增加,各指标呈下降趋势(P<0.05);复方甘草酸苷低、中剂量组各指标与地塞米松组差异有统计学意义(P<0.05)。模型组耳部皮肤结构缺失,细胞水肿明显,大量淋巴细胞浸润;地塞米松组及复方甘草酸苷高剂量组皮肤结构较为完整,细胞水肿及炎细胞浸润明显减少;复方甘草酸苷低、中剂量组皮肤结构仍有缺失,细胞水肿、淋巴细胞浸润较模型组减轻。结论:复方甘草酸苷能明显抑制小鼠耳部特应皮炎反应、抑制小鼠耳部炎症细胞浸润;其机制与复方甘草酸苷能抑制SDF-1、CXCR-4 mRNA及蛋白表达水平有关。

三焦针法通过激活SDF-1α/CXCR4通路对快速老化模型小鼠学习和记忆能力的改善作用

目的:探讨三焦针法对快速老化模型(SAMP8)小鼠神经功能和基质细胞衍生因子1α/趋化因子受体4(SDF-1α/CXCR4)通路的改善作用,探讨三焦针法在SAMP8小鼠中的作用机制。方法:实验分为模型组(SAMP8小鼠)、非穴位针刺组(SAMP8小鼠+非穴位针刺)、穴位针刺组(SAMP8小鼠+穴位针刺)、穴位针刺+AMD3100组(SAMP8小鼠+穴位针刺+AMD3100处理)和对照组(SAMR1小鼠),每组10只小鼠。Morris水迷宫实验检测各组小鼠学习和记忆功能指标,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测各组小鼠海马组织中β淀粉样蛋白(Aβ)1-42水平,胆碱乙酰基转移酶(chAT)和乙酰胆碱酯酶(AchE)试剂盒检测各组小鼠海马组织中chAT和AchE活性,Western blotting法检测各组小鼠海马组织中SDF-1α和CXCR4蛋白表达水平。结果:与对照组比较,模型组小鼠逃避潜伏期延长(P<0.05),海马组织中Aβ1-42水平升高(P<0.05),穿越平台次数、原象限游泳距离与总距离比值、原象限游泳时间与总时间比值和海马组织中chAT及AchE活性、SDF-1α及CXCR4蛋白表达水平降低(P<0.05);与模型组比较,穴位针刺组小鼠逃避潜伏期缩短(P<0.05),海马组织中Aβ1-42水平降低(P<0.05),穿越平台次数、原象限游泳距离与总距离比值、原象限游泳时间与总时间比值和海马组织中chAT活性、SDF-1α及CXCR4蛋白表达水平升高(P<0.05);与穴位针刺组比较,穴位针刺+AMD3100组小鼠逃避潜伏期延长(P<0.05),海马组织中Aβ1-42水平升高(P<0.05),穿越平台次数、原象限游泳距离与总距离比值、原象限游泳时间与总时间比值和海马组织中chAT活性、SDF-1α及CXCR4蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论:三焦针法可能通过激活SDF-1α/CXCR4通路减少Aβ1-42的积累,改善SAMP8小鼠的神经功能。

SDF-1/CXCR4信号轴在牙髓血运重建中的作用

目的:研究基质细胞衍生因子-1/CXC趋化因子受体4(SDF-1/CXCR4)信号轴在牙髓血运重建中对组织再生的作用。方法:18只8周龄SD大鼠随机分为常规组(N组)、常规+SDF-1水凝胶组(N+SDF-1组)和常规+抗SDF-1抗体中和作用组(N+antiSDF-1组),每组6只,实验牙为双侧下颌第一磨牙,建立无髓根管模型后,按照分组进行处理。14 d后,收集双侧下颌骨,分别进行苏木精-伊红(HE)染色和免疫组织化学检测,观察根管新生组织类型以及CXCR4+细胞情况。结果:N组、N+SDF-1组根管新生组织冠方为不规则矿化基质,根尖方向可见成纤维样细胞组成的致密结缔组织,N+SDF-1组部分根管内可见新生小血管;N+anti SDF-1组典型组织学表现为根管内无明显的新生结缔组织,根尖孔区有大量的幼稚成纤维样细胞和小血管集聚,细胞无进入根管内的趋势。N组和N+SDF-1组根管内CXCR4+细胞,N+anti SDF-1组根管内见少量CXCR4+细胞。结论:SDF-1/CXCR4信号轴在牙髓血运重建中通过趋化细胞归巢进入根管内的方式,参与了组织再生,并具有促进血管新生的作用。

瑞芬太尼对气腹大鼠SDF-1/CXCR4通路及肾脏损伤的影响

目的:探究瑞芬太尼对气腹大鼠基质细胞衍生因子-1/CXC趋化因子受体4(SDF-1/CXCR4)通路及肾脏损伤的影响。方法:健康雄性SPF级SD大鼠随机分为5组:假手术组(S组)、气腹模型组(M组)、瑞芬太尼低剂量组(R-L组)、瑞芬太尼高剂量组(R-H组)及SDF-1/CXCR4通路阻滞剂AMD 3100组(AMD组),S组只经脐插入气腹针,不充气,M组、R-L组、R-H组、AMD组均经脐插入气腹针后充入CO_(2)建立气腹大鼠模型。气腹终止前15 min,R-L组、R-H组分别经尾静脉输注瑞芬太尼0.25 mg·kg^(-1)·min^(-1)、1.0 mg·kg^(-1)·min^(-1),AMD组尾静脉输注AMD 31000.4 mg·kg^(-1)·min^(-1),S组、M组尾静脉输注等量生理盐水,术后24 h处死。全自动生化分析仪检测血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)水平,原位末端标记(TUNEL)法检测肾组织细胞凋亡情况,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测肾组织SDF-1、CXCR4 mRNA水平,免疫印迹(WB)法检测肾组织SDF-1、CXCR4蛋白表达。结果:与S组比较,M组大鼠血清Scr、BUN水平、肾组织细胞凋亡率、肾组织SDF-1、CXCR4 mRNA及蛋白表达显著增加(P<0.05);与M组比较,R-L组、R-H组、AMD组大鼠血清Scr、BUN水平、肾组织细胞凋亡率、肾组织SDF-1、CXCR4 mRNA及蛋白表达显著降低,其中R-H组均低于AMD组(P<0.05)。结论:瑞芬太尼可减轻气腹大鼠肾脏损伤,可能与抑制SDF-1/CXCR4通路有关。

厚朴酚通过调节SDF-1/CXCR4信号通路减轻LPS诱导的肾小球血管内皮细胞损伤

目的:研究厚朴酚对脂多糖(LPS)诱导的肾小球血管内皮细胞(GECs)损伤的影响以及基质细胞衍生因子-1(SDF-1)/趋化因子受体-4(CXCR4)信号通路的作用。方法:体外培养人肾小球血管内皮细胞(HRGEC),将HRGEC分为正常组,模型组,厚朴酚-L、M、H组,厚朴酚+NUCC-390组共6组。除正常组外,其余组均用LPS诱导建立HRGEC损伤模型;CCK8法检测各组HRGEC增殖情况;流式细胞术检测各组HRGEC凋亡情况;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组HRGEC上清液白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组HRGEC中SDF-1、CXCR4 mRNA水平;Western blot检测各组HRGEC的SDF-1、CXCR4、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl2相关X蛋白(Bax)蛋白水平。结果:与正常组比较,模型组HRGEC存活率降低、凋亡率升高,IL-6、TNF-α水平显著升高,SDF-1mRNA、CXCR4 mRNA、SDF-1蛋白、CXCR4蛋白、Bax蛋白表达水平显著升高,Bcl-2蛋白表达水平显著降低,差异均有统计学意义(均P<0.05)。与模型组比较,厚朴酚-L、M、H组HRGEC存活率升高、凋亡率降低,IL-6、TNF-α水平显著降低,SDF-1mRNA、CXCR4 mRNA、SDF-1蛋白、CXCR4蛋白、Bax蛋白表达水平显著降低,Bcl-2蛋白表达水平显著升高,且呈剂量依赖性,差异均有统计学意义(均P<0.05)。与厚朴酚-H组比较,厚朴酚+NUCC-390组HRGEC存活率降低、凋亡率升高,IL-6、TNF-α水平显著升高,SDF-1mRNA、CXCR4 mRNA、SDF-1蛋白、CXCR4蛋白、Bax蛋白表达水平显著升高,Bcl-2蛋白表达水平显著降低,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论:厚朴酚可能通过抑制SDF-1/CXCR4信号通路和HRGEC炎症反应、凋亡,而减轻LPS诱导的HRGEC损伤。

基于miR-381调控SDF-1/CXCR4信号通路探讨电针对缺血性脑卒中后神经损伤修复的影响

目的:观察电针对缺血性脑卒中模型大鼠miR-381、富含亮氨酸重复序列C4蛋白(LRRC4)及其下游基质细胞衍生因子1(SDF-1)/趋化因子受体4(CXCR4)信号通路的影响,探讨电针改善缺血性脑卒中神经损伤的作用机制。方法:从50只雄性SPF级SD大鼠中随机选取10只作为假手术组,剩余大鼠制备大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,将造模成功的30只大鼠随机分为模型组、电针组和激动剂组,每组10只。电针组大鼠于“百会”“大椎”行电针干预,选用疏密波,频率2 Hz/10 Hz,电流强度1 mA,每次30 min,每日1次,共干预14 d。激动剂组大鼠于侧脑室注射miR-381激动剂,每次10μL,7 d 1次,注射2次。干预后,观察各组大鼠ZeaLonga神经功能缺损评分;HE染色法观察各组大鼠缺血侧脑组织形态;ELISA法测定血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)和神经生长因子(NGF)含量;Western blot法检测缺血侧脑组织LRRC4、SDF-1、CXCR4、细胞外信号调节激酶1(ERK1)蛋白表达;实时荧光定量PCR法检测缺血侧脑组织miR-381及LRRC4、SDF-1、CXCR4、ERK1 mRNA表达。结果:干预后,模型组大鼠脑组织细胞排列紊乱、数量减少,可见大量空泡,间质水肿明显;电针组和激动剂组大鼠脑组织细胞上述病理变化减轻。与假手术组比较,模型组大鼠ZeaLonga神经功能缺损评分及血清TNF-α、IL-6含量升高(P<0.01),血清NGF含量降低(P<0.01);缺血侧脑组织SDF-1、CXCR4、ERK1蛋白表达降低(P<0.01),LRRC4蛋白表达升高(P<0.01);缺血侧脑组织miR-381及SDF-1、CXCR4、ERK1 mRNA表达降低(P<0.01),LRRC4 mRNA表达升高(P<0.01)。与模型组比较,电针组、激动剂组大鼠ZeaLonga神经功能缺损评分及血清TNF-α、IL-6含量降低(P<0.05,P<0.01),血清NGF含量升高(P<0.05,P<0.01);缺血侧脑组织SDF-1、CXCR4、ERK1蛋白表达升高(P<0.01),LRRC4蛋白表达降低(P<0.01);缺血侧脑组织miR-381及SDF-1、CXCR4、ERK1 mRNA表达升高(P<0.05,P<0.01),LRRC4 mRNA表达降低(P<0.01)。结论:电针“百会”“大椎”可通过上调miR-381靶向抑制LRRC4表达,进而激活SDF-1/CXCR4信号通路,对缺血性脑卒中后神经损伤修复起到一定的促进作用。

脐血源神经干细胞在SDF-1/CXCR4趋化下对脑出血大鼠神经损伤恢复的作用

目的探讨移植的脐血源神经干细胞(UCBNSCs)在基质细胞衍生因子-1(SDF-1)/CXC趋化因子受体4(CXCR4)作用下对脑出血大鼠神经功能修复的影响。方法(1)体外迁移实验中,将UCBNSCs置入Transwell小室的上室,在下室中分别加入0、30、60和120ng/mL浓度的SDF-1。(2)体内实验中,将60只脑出血模型大鼠按照随机数字表法分为UCBNSCs移植组和对照组,每组30只。造模后2d分别向2组大鼠颅内移植UCBNSCs悬液10μL和等量的磷酸盐缓冲液(PBS),同时腹腔注射5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)标记内源性神经干细胞。分别于移植后1d、1周、2周对2组大鼠进行改良神经功能缺损评分(mNSS)。移植后2周处死全部大鼠,进行SDF-1、BrdU、血管内皮生长因子(VEGF)、神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)及双肾上腺皮质激素(DCX)免疫荧光染色;同时采用转移酶介导的三磷酸脱氧鸟苷-生物素刻痕末端标记(TUNEL)检测试剂盒检验细胞凋亡情况。结果(1)体外实验中,UCBNSCs中能够检测到CXCR4的表达;60ng/mLSDF-1对UCBNSCs迁移作用最大,与其他浓度SDF-1比较,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)体外实验中,移植2周后,UCBNSCs组大鼠室管膜下区BrdU标记的细胞数量增多,BrdU/DCX、BrdU/GFAP细胞数量明显比对照组增多,差异有统计学意义(P<0.05);UCBNSCs移植组脑损伤区神经营养因子VEGF阳性细胞数[(88.30±7.21)个/视野]明显高于对照组[(53.20±4.45)个/视野],差异有统计学意义(t=4.144,P=0.000);UCBNSCs移植组脑损伤区凋亡细胞的数量[(34.30±2.44)个/视野]明显低于对照组[(47.70±1.98)个/视野],差异有统计学意义(t=4.266,P=0.001)。移植后2周时UCBNSCs组mNSS评分[(6.40±0.163)分]明显低于对照组[(7.50±0.17)分],差异有统计学意义(t=4.714,P=0.002)。结论SDF-1/CXCR4可以趋化移植的UCBNSCs到达脑出血损伤区,促进大鼠神经功能恢复,其作用机制可能与促进神经发生、VEGF的分泌和抑制细胞凋亡有关。

食管鳞癌组织CXCR4与EMT相关因子表达及其相关性

目的研究食管鳞癌组织中细胞趋化因子受体4(CXC chemokine receptor 4,CXCR4)与上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关因子表达情况及相关性,探讨CXCR4介导食管鳞癌转移的相关机制。方法选取2009-01-01-2011-12-31天津医科大学肿瘤医院食管肿瘤科114例经病理确诊的食管鳞癌患者手术切除存档蜡块。应用免疫组织化学法检测含114例的原发食管鳞癌组织芯片中CXCR4及EMT相关因子的表达,分析各指标与临床病理特征的相关性及CXCR4与EMT相关因子的相关性。结果食管鳞癌中CXCR4的胞质阳性表达率为62.3%(71/114),与淋巴结转移(P=0.009)和肿瘤浸润深度(P=0.008)有关。β-catenin细胞质异常表达率为65.8%(75/114),与肿瘤直径(P=0.045)、淋巴结转移(P=0.001)和TNM分期(P=0.005)有关。β-catenin胞膜异常表达率为64.9%(74/114),与肿瘤部位有关(P=0.033)。Vimentin阳性表达率为31.6%(36/114),与肿瘤淋巴结转移(P=0.013)、淋巴结转移个数(P=0.029)和TNM分期(P=0.024)有关。Logistic回归多因素分析示,CXCR4表达与淋巴结转移(P=0.030)、肿瘤浸润深度(P=0.005)、β-catenin胞质表达(P=0.011)和Vimentin的表达(P=0.022)有关。Spearman分析显示,CXCR4与β-catenin胞质表达(r=0.278,P=0.003)和Vimentin(r=0.256,P=0.006)具有相关性。结论食管鳞癌淋巴结转移过程中存在CXCR4高表达及EMT现象,且CXCL12/CXCR4生物轴介导淋巴结转移过程可能与涉及调节EMT发生有关。

基质衍生因子1诱导高血压脑出血患者内皮祖细胞增殖迁移的机制

目的 观察基质衍生因子-1（SDF-1）对高血压脑出血患者内皮祖细胞（EPCs）增殖迁移能力的影响并探讨其作用机制.方法 抽取急性期高血压脑出血患者空腹外周静脉血,分离并贴壁培养EPCs 6 d后,用含有不同浓度SDF-1培养基培养24h,测定细胞增殖、迁移能力,趋化因子受体4（CXCR4）和黏附分子整合素α5β1（α5β1）蛋白表达水平;采用小于扰RNA （siRNA）转染法观察CXCR4 siRNA对EPCs增殖、迁移能力的影响;加入抗α5β1抗体,进一步探讨α5β1在EPCs增殖迁移中的作用.结果 SDF-1剂量依赖性增加高血压脑出血患者EPCs增殖及迁移能力,在浓度为80 μg/L时达到高峰（A值：0.57 ±0.03 P ＜0.05）;进一步分析表明,SDF-1能够诱导CXCR4蛋白大量表达[（2.30±0.05）倍,P＜0.05],CXCR4 siRNA处理后,SDF-1诱导的EPCs增殖及迁移能力明显下降（A值：0.363±0.020）;此外,SDF-1显著性诱导α5β1的表达[（1.65±0.06）倍,P＜0.05],且CXCR4 siRNA预处理后SDF-1诱导的α5β1的表达明显下降[（0.71±0.04）倍];加入o5β1抗体后,SDF-1/CXCR4诱导的EPCs增殖及迁移能力明显下降[A值：0.311±0.037,迁移细胞数：（25.52±5.60）个].结论 SDF-1剂量依赖性地增强急性期高血压脑出血患者EPCs增殖及迁移能力,主要是通过CXCR4介导α5β1通路来实现的,提示SDF-1/CXCR4-α5β1可作为受损后血管修复的潜在靶点.