猴T淋巴细胞趋向性病毒1型双抗原夹心ELISA检测试剂盒的研制

目的研制灵敏度和特异性高的检测实验猴血清中T淋巴细胞趋向性病毒-1型(STLV-1型)抗体的双抗原夹心ELISA(dsELISA)检测试剂盒。方法采用经原核表达系统表达并纯化的人T淋巴细胞白血病病毒-1型(HTLV-1型)的Env蛋白作为包被用抗原,建立了检测STLV-1的dsELISA诊断方法。通过优化反应条件和筛选试剂,确定了dsELISA诊断试剂盒的相关条件,并经敏感性、特异性和重复性试验考查该试剂盒质量。结果试剂盒特异性好,批内重复试验变异系数(CV)<7%,批间重复试验CV<10%。对200份猴血清进行随机检测,与国际公认的诊断试剂盒(美国BioReliance公司)的符合率为97%。结论本试剂盒可初步应用于临床上实验猴STLV-1型抗体的检测。

猴T淋巴细胞趋向性病毒l型RPA和荧光RPA检测方法的建立

目的为了提高口岸对进出境野生及实验用灵长类动物猴T淋巴细胞趋向性病毒l型(Simian T-cell lymphotropic virus type 1, STLV-1)感染情况的监测和流行病学调查,本研究建立了重组酶聚合酶扩增(RPA)和荧光RPA检测STLV-1的方法。方法使用软件分析不同国家和地区分离的STLV-1的gag蛋白(gag polyprotein)基因序列,设计RPA引物和探针,建立RPA和荧光RPA检测STLV-1的方法,并对方法的特异性、敏感性和稳定性进行验证。结果通过将猴其它特定病原体与STLV-1对比检测,证实建立的检测方法具有良好的特异性;通过敏感性试验,证实建立的RPA和荧光RPA方法检测下限与PCR一致;通过对30份STLV-1阳性和阴性核酸样本的检测,证实建立的RPA和荧光RPA方法,具有PCR方法一样的稳定性和可靠性。结论本研究建立的RPA和荧光RPA检测STLV-1的方法具有良好的特异性、敏感性和可靠性,可应用于STLV-1的监测和流行病学调查。

广东等五省区猴场实验猴血清T淋巴细胞趋向性病毒1型抗体检测分析

为调查广东等地实验猴养殖场猴T淋巴细胞趋向性病毒1型(Simian T-lymphotropic virus 1,STLV-1)的流行情况,通过酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)对采集自广东、广西、云南、海南以及河南境内主要猴场的752份实验猴血清样本进行STLV-1抗体检测。结果显示,不同猴场实验猴STLV-1感染率差异较大,其中,云南猴场的感染率最高,达到25%,其次是广东境内的猴场,感染率为5%~13.5%,海南与河南境内猴场的检出率较低,分别为5%和3.13%,广西猴场未检出。按照动物种属划分,恒河猴感染率高于食蟹猴且差异显著(P<0.05)。调查结果可为实验猴生产繁育、质量控制和生物净化提供参考。

艾滋病病毒的细胞趋向性

病毒简单地来说就是RNA或是DNA基因组，其外面包裹着若干的蛋白质，侵入细胞后能够繁殖的生物。要认识到：生物作为物质，其不是单纯一种，而是有一定种类组成的。作为生物的人类群体内有所不同，这一事实是谁也不会提出异议的。多种类型的病毒的存在是很显著的，可是病毒的繁殖率快是有原因的。仅仅一个病毒感染给细胞，翌日感染细胞释放的数万个病毒粒子当中，一定会被观察到其遗传基因的变异，而且病毒随着增殖不断变化下去。我们对同病毒的认识是：其遗传性方面不是完全单一的群体，其生物活性方面，应考虑到是具有一定广度的群体。

低频变化电场促进细胞定向移动的研究

细胞趋电性在伤口愈合、胚胎形成、神经再生等领域至关重要。前期研究表明,细胞在脉冲电场下也能够定向移动,但目前多种非直流电场也被临床证实能有效地促进伤口愈合,而其机制尚不清楚。本研究设计了能产生连续变化电场的电刺激器,研究分析低频(10、5、1 Hz)正弦波、三角波和斜坡波电场下阿米巴细胞的运动特性,发现在正弦波电场组中,5 Hz电场下细胞比1 Hz导向性更高(P<0.01);在三角波电场组中,5 Hz电场下细胞迁移速率最高(P<0.001,P<0.001);在斜坡波电场组中,10 Hz电场下细胞导向性比5 Hz和1 Hz均低(P<0.001,P<0.001)而5 Hz电场下细胞迁移速率高于1 Hz(P<0.05),综合考虑5 Hz趋电性最好。把上述三组中最优电场与直流电场和脉冲电场对比,发现上述三种电场下细胞运动特性均优于50%占空比脉冲电场,更重要的是,5 Hz斜坡波下细胞导向性与直流电场下无明显差异(ns),而迁移速率优于后者(P<0.001),是本研究中具有最佳趋电性的电场。实验结果表明,低频变化电场也能够引起细胞定向迁移,不同波形电场下细胞趋电性差异明显,而5 Hz斜坡波电场具有基础和临床研究的应用潜力。

猴STLV1抗体免疫梳检测方法的建立及应用

以基因工程技术制备猴嗜T淋巴细胞病毒I型(STLV1)的STLV1-30蛋白作为诊断抗原,建立用于特异性检测实验猴血清中抗STLV1抗体的免疫梳方法。应用原核表达载体pGEX-4T-1构建STLV1 STLV1-30基因的重组表达质粒,并在感受态细胞BL21中表达,将该重组蛋白纯化后作为诊断抗原,建立免疫梳标准化检测程序,并应用于临床检测。结果显示,最佳抗原包被量为0.02 mg/mL;制备好的免疫梳均能够特异性检测到相应的STLV1阳性血清而不与其他病毒血清间发生交叉反应;该方法能够敏感地检测到1∶400倍稀释的STLV1阳性血清;稳定性和重复性试验结果显示,同一样品重复检测3次,变异系数(CV)均小于10%;利用该检测方法在对11份可疑猴血清样品进行检测,免疫梳方法与ELISA检测结果一致率为100.0%,Kappa=1.000。表明该检测方法具有灵敏度高、特异性强、重复性好等特性,可用于猴T淋巴细胞趋向性病毒I型抗体的检测。

Stem cells tropism for malignant gliomas

Various studies have demonstrated the tremendous tropism of stem cells for malignant gliomas,making these cells a potential vehicle for delivery of therapeutic genes to disseminated glioma cells.However,little is known about the mechanisms underlying the glioma-induced tropism of stem cells.Soluble factors including chemokines or growth factors released and expressed by glioma cells at least mediate the tropism of stem cells for gliomas.Here we review the possible mechanisms of stem cells tropism for malignant gliomas.

肠道病毒71型致病机制研究进展

肠道病毒71型（EV71）是引起手足口病的主要病原体之一，已经引起世界各地的大范围流行，可引起严重的并发症并导致患儿死亡。其引起严重并发症的致病机制尚不清楚，与许多因素有关包括细胞趋向、细胞凋亡和宿主免疫反应。该文主要介绍决定EV71细胞趋向的因素，引起细胞凋亡的相关机制及宿主免疫反应在EV71致病机制中的作用。

前列腺素D2及其受体CRTH2与支气管哮喘的最新研究进展

前列腺素D2（prostaglandinD2，PGD2）是由支气管哮喘（简称哮喘）患者的肥大细胞等分泌的一种主要的前列腺素类物质。尽管它在哮喘发病机制中的作用尚不完全清楚。但大量研究表明PGD2通过相应受体介导参与哮喘的形成。最近，对于新型Th2细胞上表达的化学趋向性受体同种分子（chemoattractantreceptorhomologousmoleculeexpressedonTh2cells，CRTH2）受体的研究取得新进展，前列腺素类受体（dprostanoidreceptor，DP）与CRTH2两者协同作用诱导炎症细胞迁移和细胞因子的产生，介导哮喘等过敏性疾病的发生发展过程。该篇主要综述PGD2及其受体CRTH2在哮喘发病中作用机制的最新研究进展。