MicroRNA-184靶向作用EPB41L5抑制肾细胞癌存活与迁移研究

目的:研究MicroRNA-184(miR-184)对肾癌细胞存活与迁移的影响,并分析其靶基因及功能。方法:RT-PCR法检测肾细胞癌模型小鼠肿瘤组织及细胞系中miR-184的表达水平。脂质体法转染miR-184mimic至肾癌细胞A498、786-O,利用平板克隆及Transwell法测细胞克隆形成及迁移能力。生物信息学分析预测miR-184靶基因,荧光素酶报告基因法检测miR-184对靶基因的作用,Western blot法检测靶基因表达量。转染靶基因siRNA检测细胞克隆形成及迁移情况。结果:肾细胞癌小鼠肿瘤组织及肾癌细胞中miR-184表达水平显著降低(P<0.05)。转染miR-184mimic后,肾癌细胞的克隆形成能力及细胞迁移数目显著减少(P<0.05)。靶基因预测结果表明,EPB41L5的3’-UTR包含miR-184的潜在结合位点。miR-184mimic转染降低EPB41L5正常3’-UTR载体的荧光素酶活性,而对突变3’-UTR的荧光素酶活性则无影响。EPB41L5siRNA转染后,肾癌细胞中EPB41L5表达水平较对照组明显下降,同时,细胞体外克隆形成数目及迁移数目显著减少。结论:miR-184可通过作用靶基因EPB41L5而调控肾癌细胞的存活及迁移能力,影响肾细胞癌的发展。

Numb 基因负性调节 CXCR4表达抑制膀胱癌细胞 BIU-87的增殖和迁移

目的：研究 Numb 基因对趋化因子受体4（CXCR4）表达的影响以及对膀胱癌细胞增殖和迁移的影响。方法实验分为3组：实验组（在膀胱癌细胞 BIU-87中转染 Numb-ORF 表达质粒）、阴性对照组（转染空载体）和空白对照组（未行转染处理）。使用荧光定量 PCR 和 Western blotting 检测各组细胞 Numb 和 CXCR4的表达。使用 MTS 法和 Transwell 小室法检测细胞增殖和迁移能力。结果实验组、阴性对照组和空白对照组中 Numb 基因表达水平分别为31.044±3.350、4.401±0.567和4.287±0.341，差异有统计学意义（F ＝183.418，P ＝0.000）；实验组、阴性对照组和空白对照组的 CXCR4表达水平分别为0.344±0.167、0.996±0.148和1.010±0.106，差异有统计学意义（ F ＝21.355，P ＝0.002）。细胞增殖检测中实验组、阴性对照组和空白对照组的48 h 吸光度值分别为0.615±0.057、0.987±0.063和0.957±0.066，差异有统计学意义（F ＝33.210，P ＝0.001）。迁移实验中，实验组、阴性对照组和空白对照组的穿膜细胞数分别为（164.667±19.858）个、（670.133±38.760）个和（667.533±27.610）个，差异有统计学意义（F ＝286.788，P ＝0.000）。结论 Numb 可能通过负性调节CXCR4表达抑制膀胱癌细胞的增殖和迁移。