低氧对恶性黑素瘤A375细胞中Nodal及细胞迁移相关蛋白表达的影响

目的探讨低氧对恶性黑素瘤A375细胞中Nodal及细胞迁移相关蛋白表达的影响。方法对恶性黑色素瘤A375细胞进行体外培养,细胞分为空白对照组、CoCl_(2)组、SB-431542阻断组和CoCl_(2)+SB-431542组,以氯化钴(CoCl_(2))诱导构建A375细胞内的低氧环境,SB-431542阻断Nodal信号通路,应用Western Blot技术检测以上不同环境下A375细胞内Nodal、类激活素激酶(ALK7)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和波形蛋白(Vimentin)的表达。结果不同浓度的SB-431542阻断A375细胞Nodal信号通路后细胞形态无明显改变,以上不同浓度阻断24 h、48 h、72 h时A375细胞增殖活力比较差异有统计学意义(P<0.05),随着时间增加细胞活力明显增强,但是随着浓度增高,细胞活力随之下降,SB-431542对A375细胞增殖的阻断具有剂量和时间依赖性;各组Nodal、MMP2、ALK7、Vimentin的表达量比较差异有统计学意义(P<0.05),CoCl_(2)组A375细胞内Nodal、MMP2、ALK7、Vimentin的表达均较空白对照组上调(P<0.05),与CoCl_(2)组比较SB-431542阻断组、CoCl_(2)+SB-431542组表现为以上蛋白表达下调(P<0.05)。结论低氧环境可诱导恶性黑色素瘤A375细胞中Nodal及MMP2和Vimentin的表达上调,这可能与A375细胞的迁移和侵袭恶化有关,同时通过SB-431542可阻断细胞增殖的Nodal信号通路。

胸腺细胞选择相关高迁移率族蛋白在蕈样肉芽肿患者中的表达情况及临床意义

目的探讨胸腺细胞选择相关高迁移率族蛋白(TOX)在蕈样肉芽肿(MF)患者中的表达情况及临床意义。方法选择62例MF患者作为观察组,其中斑片期25例,斑块期24例,肿瘤期13例,同时选取30例良性炎症性皮肤病患者作为对照组。采用免疫组织化学染色法检测两组患者中TOX蛋白的表达情况,比较观察组和对照组患者中TOX蛋白的阳性表达率,比较斑片期、斑块期、肿瘤期MF患者中TOX蛋白的阳性表达率。结果观察组患者中TOX蛋白的阳性表达率为91.94%(57/62),明显高于对照组的30.00%(9/30),差异有统计学意义(P﹤0.01)。斑片期、斑块期、肿瘤期MF患者中TOX蛋白的阳性表达率分别为80.00%(20/25)、100%(24/24)、100%(13/13),差异有统计学意义(P﹤0.05);但两两比较,差异均无统计学意义(P﹥0.05)。结论TOX蛋白在MF患者中的表达水平较高,可能在疾病进展中具有一定作用,值得进一步研究。

尼罗罗非鱼高迁移率族蛋白4(TOX4)基因克隆及其在细菌感染过程中的表达特征

为了解析与胸腺细胞选择相关的高迁移率族蛋白4(tox high mobility group box family member 4,TOX4)在尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)响应无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)感染过程中的功能,利用聚合酶链式反应(PCR)克隆和鉴定尼罗罗非鱼TOX4基因(GenBank登录号:XP003458812)的开放阅读框(open reading frame,ORF)序列,对推导的TOX4氨基酸序列进行生物信息学分析,分析其亚细胞定位特征,以及在尼罗罗非鱼头肾淋巴细胞亚群的分布特征,并利用荧光定量PCR(qRT-PCR)技术分析TOX4基因在健康鱼各组织及响应无乳链球菌感染过程中的表达模式。结果表明:尼罗罗非鱼TOX4基因的ORF全长为2004 bp,编码667个氨基酸,预测TOX4蛋白的相对分子质量为69060,理论等电点为4.69,无信号肽序列及跨膜结构,具有一个HMG保守结构域;亚细胞定位结果显示,TOX4蛋白主要表达于细胞核中;多序列比对及系统进化分析均显示,尼罗罗非鱼与斑马拟丽鱼(Maylandia zebra)TOX4氨基酸序列的同源性最高;qRT-PCR分析显示,TOX4基因在健康尼罗罗非鱼各组织中均有表达,且在血液中表达量最高;单细胞转录组数据分析显示,TOX4基因主要在尼罗罗非鱼非特异性细胞毒性细胞(nonspecific cytotoxic cell,NCC)和巨噬细胞(macrophage,Mφ)中表达;经无乳链球菌感染后,尼罗罗非鱼脑、头肾、肠道和脾脏中TOX4基因的表达量显著上调,并在感染后12 h(脑、头肾、肠道)和48 h(脾脏)达到峰值。研究表明,TOX4可能参与尼罗罗非鱼响应细菌感染的免疫应答过程。

多参数TOX免疫表型法的建立及在母细胞性浆细胞样树突状细胞肿瘤中的应用

目的:建立多参数流式检测胸腺细胞选择相关高迁移率族蛋白(TOX)在PD-1、Tim-3和CD244耗竭性T细胞中的免疫表型法,以及其在1例罕见CD4-CD56^(+)表型的血液恶性肿瘤母细胞性浆细胞样树突状细胞肿瘤(BPDCN)患者中的应用分析。方法:收集1例BPDCN患者骨髓(BM)和外周血(PB),2例非肿瘤手术患者和1例健康者BM以及11例健康者(HI)PB分别作为BM和PB对照组,利用多色流式单抗CD45、CD3、CD4、CD8、CD25、FoxP3、TOX、PD-1、Tim-3、CD244及相应同型对照进行流式细胞检测。结果:流式检测结果提示,BPDCN患者BM和PB中TOX^(+)CD3^(+)、TOX^(+)CD4^(+)和TOX^(+)CD8^(+)T细胞比例均比对照组升高;BPDCN患者BM和PB中TOX^(+)PD-1^(+)CD8^(+)、TOX^(+)Tim-3^(+)CD8^(+)和TOX^(+)CD244^(+)CD8^(+)耗竭性T细胞中的分布比例也显著高于对照组。此外,在BPDCN患者BM和PB的CD4^(+)CD25^(+)FoxP3^(+)Treg细胞中TOX^(+)细胞分布比例高于对照组;同时TOX^(+)细胞在PD-1^(+)CD4^(+)CD25^(+)FoxP3^(+)Treg、Tim-3^(+)CD4^(+)CD25^(+)FoxP3^(+)Treg和CD244^(+)CD4^(+)CD25^(+)FoxP3^(+)Treg耗竭性T细胞中的分布比例也明显高于对照组。结论:成功建立多参数流式细胞术检测PD-1、Tim-3和CD244耗竭性T细胞亚群中TOX免疫表型法,TOX可能是BPDCN患者T细胞免疫调节的重要转录因子。

再生障碍性贫血患者外周血CD8^(+)T细胞TOX与抑制性受体的表达水平及相关性分析

目的探讨再生障碍性贫血(AA)患者外周血CD8^(+)T细胞中胸腺细胞选择相关高迁移率族蛋白(TOX)与不同抑制性受体的表达水平,并进行相关性分析。方法回顾性选择2019年9月至2020年11月天津医科大学总医院血液科AA患者27例,其中男21例,女6例,年龄[M(Q_(1),Q_(3))]48(30,72)岁。健康对照者33名,其中男17名,女16名,年龄46(27,69)岁。通过流式细胞术检测AA患者及健康对照者外周血CD8^(+)T细胞中TOX、程序性细胞死亡受体‑1(PD‑1)、T细胞免疫球蛋白和黏蛋白结构域‑3(TIM‑3)、细胞毒性T淋巴细胞相关抗原‑4(CTLA‑4)、具有免疫球蛋白(Ig)和免疫受体酪氨酸抑制基序(ITIM)结构域的T细胞免疫受体(TIGIT)、穿孔素、颗粒酶B的表达水平。TOX表达水平与不同抑制性受体的相关性采用Pearson相关性分析。结果AA患者外周血CD8^(+)T细胞TOX、PD‑1、TIM‑3、CTLA‑4、TIGIT、穿孔素、颗粒酶B的表达水平分别为47.33%(41.47%,56.61%)、(30.61±12.37)%、(39.94±10.84)%、(6.21±3.40)%、(51.45±20.21)%、(71.32±22.46)%、(52.39±23.99)%,均高于健康对照组的27.32%(21.64%,46.96%)、(21.29±10.01)%、(21.11±3.00)%、(1.31±0.34)%、(30.80±13.40)%、(46.72±22.53)%、(21.75±16.43)%(均P<0.05)。CD8^(+)T细胞TOX的表达水平与PD‑1、TIM‑3、CTLA‑4、TIGIT、穿孔素、颗粒酶B的表达水平均呈正相关(r=0.49、0.65、0.70、0.54、0.58、0.48,均P<0.05)。结论AA患者外周血CD8^(+)T细胞TOX与不同抑制性受体的表达水平均高于健康对照组,且TOX表达水平与不同抑制性受体表达水平均呈正相关。

T细胞耗竭发生机制及其在免疫治疗中的研究进展

肿瘤治疗是现今世界最主要的医学难题之一,据2019年肿瘤统计年鉴报道,世界约有176万肿瘤新发和60万死亡病例,肿瘤也是美国的第二大死亡原因。在肿瘤病程中,由于抗原的持续性刺激,CD8^(+)T细胞逐渐分化为耗竭T细胞,其特征是抑制性受体的积累、效应功能的降低和增殖能力的下降。由于T细胞耗竭对控制肿瘤发生与发展非常重要,近些年来,有关T细胞耗竭的研究发展迅猛,尤其是发现了PD-1^(+)TCF1^(+)CD8^(+)祖细胞群以及胸腺细胞选择相关高迁移率族蛋白(thymocyte selection-associated high mobility group box,TOX)在T细胞耗竭表观遗传方面的重要性,这些内容对深入理解肿瘤免疫过程以及改善免疫治疗方案有着十分重要的意义。文章就T细胞耗竭的发生机制、表观遗传调控以及逆转方法的相关研究进展作一综述。

较低级别胶质瘤TOX基因表达水平与放疗敏感性的关联研究

目的探讨胸腺细胞选择相关高迁移率族蛋白(TOX)基因表达与较低级别胶质瘤(LGG)患者放疗敏感性的关系。方法采用生物信息学研究方法,选取肿瘤基因组图谱(TCGA)数据库中的474例LGG患者作为试验集(TCGA-474集),中国脑胶质瘤基因组图谱(CGGA)数据库中的两个不同的遗传数据集(分别包括412例和171例患者)作为验证集(CGGA-412集和CGGA-171集)。根据是否接受放疗将患者分层,根据TOX基因在LGG中的表达水平分为TOX高表达组和低表达组,绘制患者生存曲线,采用log-rank检验对比分析TOX高表达组和低表达组患者的总生存(OS)和无进展生存(PFS)。结果TCGA-474集患者OS多因素分析显示TOX高表达是OS的保护因素(HR=0.061,95%CI为0.005~0.791,P=0.044)。按放疗与否分层并调整混杂因素后,TOX高表达组患者在TCGA-474集、CGGA-412集、CGGA-171集的HR(95%CI)分别为0.405(0.261~0.629)、0.581(0.418~0.806)和0.464(0.269~0.800),P值分别为<0.001、0.001、0.008。TCGA-474集的放疗患者中,TOX高表达组患者的OS(P<0.001)和PFS(P<0.001)均较低表达组延长,差异有统计学意义。TOX高表达组患者的OS获益在CGGA-412集(P<0.001)和CGGA-171集(P<0.001)均较低表达组延长,差异有统计学意义。结论TOX的高表达可能与LGG的放疗敏感性有关,可能是LGG放疗敏感性的一个基因标记。