siRNA沉默HBx基因对HepG2.2.15细胞迁移能力的影响

乙肝病毒（HBV）感染是肝癌的主要致病因素，HBx在肝癌的发生发展、转移浸润过程中起着很重要的作用。本研究应用RNAi技术沉默HBx基因表达，在体外观察HBx基因对HepG2．2．15细胞迁移能力及DNA合成的影响。

NFAT5基因在食管癌组织中的表达情况及其对食管癌细胞迁移能力的影响

目的探索活化T细胞核因子5(nuclear factor of activated T cells 5,NFAT5)在食管癌组织中表达的临床意义及敲低其在食管癌细胞的表达对其迁移能力的影响。方法用免疫组化法检测所收集的26例食管癌患者组织及其癌旁组织标本中NFAT5的表达情况。将食管癌细胞ECA109分为实验组和对照组,实验组ECA109细胞转染NFAT5-siRNA质粒,对照组ECA109细胞转染MOCK-siRNA质粒,RT-PCR检测各组细胞NFAT5 mRNA的含量,蛋白免疫印迹法检测各组细胞的NFAT5、TLR4、MyD88表达情况,Transwell实验、细胞划痕实验检测实验组和对照组细胞的迁移(转移)能力。结果免疫组化实验结果显示食管癌患者组织NFAT5阳性率为80.77%(21/26),相应癌旁组织中表达率为15.38%(4/26),食管癌组织中NFAT5的阳性率显著高于癌旁组织(P<0.001)。实验组和对照组ECA109细胞转染相应siRNA后NFAT5 mRNA含量下降;实验组ECA109细胞NFAT5、TLR4、MyD88蛋白表达量分别为0.28±0.08、0.31±0.13、0.41±0.14;对照组ECA109细胞NFAT5、TLR4、MyD88蛋白表达量分别为0.95±0.15、0.84±0.22、1.04±0.26;实验组ECA109细胞TLR4、MyD88的表达明显下降(均P<0.05)。划痕实验结果表明,实验组细胞划痕愈合率为(52.67±5.21)%,对照组细胞为(82.91±7.26)%;Transwell实验结果表明,实验组成功迁移细胞数为(35±5)个,对照组成功迁移细胞数为(92±13)个,结果表明ECA109细胞低表达NFAT5后,细胞迁移能力显著下降(P<0.01)。结论NFAT5在食管癌中表达明显升高,可能与食管癌的恶性程度相关;且NFAT5通过调控TLR4/MyD88信号通路影响食管癌细胞的迁移能力。

FGF4在乳腺癌组织中的表达变化及对乳腺癌细胞株增殖、迁移能力的调控作用

目的观察成纤维生长因4(FGF4)在乳腺癌组织中的表达变化及对乳腺癌细胞株增殖、迁移能力的调控作用。方法取乳腺癌组织及癌旁正常组织各40例份,采用RT-PCR法检测FGF4 mRNA。培养正常乳腺细胞株MCF-10A、低转移乳腺癌细胞株T47D、高转移乳腺癌细胞株MDA-MB-231,采用RT-PCR法检测FGF4 mRNA,Western blotting法检测FGF4蛋白。收集T47D,利用p CDNA3.1-FGF4构建过表达FGF4的T47D稳定细胞株T47DFGF4-oe,以只转染p CDNA3.1的细胞株T47D-NC作为作为阴性对照组;收集MDA-MB-231,利用RNA干扰技术敲除FGF4构建稳定表达FGF4-shRNA的细胞株MDA-MB-231-FGF4-si,以MDA-MB-231-NC作为阴性对照组;Western blotting法检测FGF4蛋白,MTT实验及划痕实验检测细胞增殖、迁移能力。结果乳腺癌组织中FGF4 mRNA表达高于癌旁组织(P<0.05)。CF-10A、T47D细胞FGF4 mRNA和蛋白灰度值均低于MDA-MB-231细胞,T47D细胞FGF4蛋白灰度值低于MDA-MB-231细胞(P均<0.05)。T47D-FGF4-oe细胞FGF4蛋白灰度值、增殖速度高于T47D-NC细胞,划痕距离小于T47D-NC细胞(P均<0.05)。MDA-MB-231-FGF4-si细胞FGF4蛋白灰度值、增殖速度低于MDA-MB-231-NC细胞,划痕距离大于MDA-MB-231-NC细胞(P均<0.05)。结论 FGF4在乳腺癌中显著高表达,并有促进乳腺癌细胞株增殖及转移的作用。

慢病毒介导的AQP8稳定表达对子宫颈癌SiHa细胞迁移能力的影响、

水通道蛋白（aquaporins，AQP）是一个疏水的、小而完整的膜蛋白家族，广泛表达于动植物体内，相对分子质量约为30000，迄今为止，哺乳动物体内共发现有13个AQP成员（AQP0～12）[1]。

全反式维A酸对内皮细胞迁移能力及明胶酶表达的影响

目的研究全反式维A酸(All鄄transretinoid,ATRA)对内皮细胞迁移能力及明胶酶表达的影响。方法应用迁移实验研究了全反式维A酸对内皮细胞迁移能力的影响,应用半定量逆转录-聚合酶链反应及蛋白印迹检测了全反式维A酸对明胶酶表达的影响,同时应用明胶酶谱法观测了全反式维A酸对明胶酶活性的影响。结果0.1μmol/L、1.0μmol/L、10.0μmol/L浓度的全反式维A酸可明显抑制佛波酯(PMA)诱导的内皮细胞迁移,抑制率分别为(44.68±7.79)%、(65.20±4.59)%及(78.37±2.58)%。同时全反式维A酸可影响明胶酶mRNA的转录进而下调其蛋白表达量及酶活性,此作用随浓度增高而增强,10.0μmol/L浓度的全反式维A酸对明胶酶AmRNA、蛋白表达量及酶活性的抑制率分别为(59.39±7.98)%、(78.40±3.23)%及(53.02±7.23)%,对明胶酶BmRNA、蛋白表达量及酶活性的抑制率分别为(65.23±3.62)%、(82.49±2.88)%及(47.32±7.72)%。结论全反式维A酸可在体外抑制佛波酯诱导的内皮细胞迁移,此作用可能是通过其对明胶酶表达及活性的抑制来实现。

马蔺子甲素对人胰腺癌细胞株PANC-1增殖、迁移、侵袭的影响及其机制

目的观察马蔺子甲素(IQ)对人胰腺导管腺癌(PDAC)细胞株PANC-1增殖、侵袭、迁移的影响,并探讨其作用机制。方法取对数生长期的PANC-1细胞置于基础培养基中,将细胞分为高剂量组、中剂量组、低剂量组、对照组,高剂量组、中剂量组、低剂量组分别加入25、20、15μmol/L的IQ,对照组加入等量0.9%NaCl溶液。采用MTT比色法检测细胞增殖能力(细胞OD值),划痕愈合实验检测细胞迁移能力(细胞迁移距离),Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力(穿膜细胞个数),qPCR法检测细胞Rho信号通路关键分子RhoA、Rac1、ROCK1、CDC42、ROCK2。结果与对照组比较,中剂量组和高剂量组培养24、48、72 h的OD值减小(P均<0.05);与同组0 h比较,低剂量组及中剂量组和高剂量组培养24、48、72 h的OD值增加(P均<0.05)。与对照组比较,低剂量组、中剂量组、高剂量组细胞迁移距离短,穿膜细胞个数少(P均<0.05);与低剂量组比较,中剂量组、高剂量组细胞迁移距离短,穿膜细胞个数少(P均<0.05);与中剂量组比较,高剂量组细胞迁移距离短,穿膜细胞个数少(P均<0.05)。与对照组比较,低剂量组及中剂量组和高剂量组RhoA、Rac1、ROCK1相对表达量减小(P均<0.05);与低剂量组比较,中剂量组、高剂量组ROCK1相对表达量减小(P均<0.05)。结论IQ可抑制PANC-1细胞增殖、侵袭及转移,其作用机制可能为抑制Rho信号通路介导的上皮间质转化进程,当药物浓度为25μmol/L时可达到最大抑瘤效应。

PCa组织Mfn2 mRNA表达及转染Mfn2过表达质粒的人PCa细胞株增殖、迁移、侵袭、凋亡观察

目的观察前列腺癌(PCa)组织Mfn2 mRNA表达及转染Mfn2过表达质粒的人PCa细胞株增殖、迁移、侵袭、凋亡情况。方法体外培养人PCa细胞株(PC3细胞和DU145细胞),分别转染Mfn2过表达质粒、空白载体质粒及不转染质粒,PC3细胞分别记为A、B、C组,DU145细胞分别记为D、E、F组。CCK-8实验检测各组细胞OD值,细胞集落形成实验测算各组细胞集落数目,以OD值和细胞集落数目表示细胞增殖能力。细胞划痕实验测算各组细胞迁移率,以细胞迁移率表示细胞迁移能力。Transwell实验测算各组细胞侵袭数目,以细胞侵袭数目数表示细胞侵袭能力。流式细胞术测算各组细胞凋亡率,Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Cleaved caspase-3、caspase-3及PI3K/AKT通路相关蛋白(p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT)。结果PCa、癌旁组织Mfn2 mRNA相对表达量分别为0.36±0.32、0.72±0.35,两者比较,P<0.05。与同组24 h比较,A、B、C组48和72 h的OD值增加(P均<0.05);与同组48 h比较,A、B、C组72 h的OD值增加(P均<0.05);与B、C组比较,A组24、48、72 h的OD值和细胞集落数目减少(P均<0.05)。与同组24 h比较,D、E、F组48和72 h的OD值增加(P均<0.05);与同组48 h比较,D、E、F组72 h的OD值增加(P均<0.05);与E、F组比较,D组24、48、72 h的OD值和细胞集落数目减少(P均<0.05)。与B、C组比较,A组细胞迁移率及细胞侵袭数目减少(P均<0.05);与E、F组比较,D组细胞迁移率及细胞侵袭数目减少(P均<0.05)。与B、C组比较,A组细胞凋亡率及Bax/Bcl-2、Cleaved caspase-3/caspase-3表达增加(P均<0.05);与E、F组比较,D组细胞凋亡率及Bax/Bcl-2、Cleaved caspase-3/caspase-3表达增加(P均<0.05);与B、C组比较,A组p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT蛋白表达降低(P均<0.05);与E、F组比较,D组p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT蛋白表达降低(P均<0.05)。结论PCa组织Mfn2 mRNA的表达低于癌旁组织,转染Mfn2过表达质粒可抑制PCa细胞株增殖、迁移和侵袭,并诱导凋亡,其作用机制可能与抑制PI3K/AKT信号通路有关。

绞股蓝总皂苷对胶质母细胞瘤细胞株U87细胞形态、迁移能力的影响

目的观察不同剂量绞股蓝总皂苷(Gyp)对胶质母细胞瘤(GBM)细胞株U87细胞形态、迁移能力的影响,并探讨其机制。方法取对数生长期U87细胞,分别加入10、5 mg/mL的Gyp溶液100μL及等量PBS(分别计为A、B、C组),常规培养细胞。比较各组细胞形态、迁移能力及IL-6蛋白。结果 A组细胞生长慢、体积小、固缩现象非常明显,细胞贴壁现象接近消失;B组细胞生长缓慢,体积缩小,胞质固缩,部分细胞甚至破裂死亡,细胞贴壁现象减弱;C组细胞生长规则,轮廓清晰,形态饱满,胞体透亮,贴壁生长良好。A、B、C组细胞迁移覆盖区域占原有划痕区的54.8%、82.4%、98.6%,两两比较,P均<0.05。A、B、C组穿膜细胞个数分别占19.8%、58.9%、100%,两两比较,P均<0.05。A、B、C组IL-6蛋白水平分别为小量、中等量、多量,两两比较,P均<0.05。结论Gyp可抑制U87细胞生长及减弱细胞迁移能力,尤以10 mg/mL的Gyp效果更佳,机制可能与其可抑制IL-6蛋白表达有关。

EIF4A1在胃癌组织中表达及其抑制剂对人胃癌细胞株增殖、存活、侵袭、迁移能力影响观察

目的观察真核翻译起始因子4A1(EIF4A1)在胃癌组织中的表达变化;另观察EIF4A1抑制剂(Silvestrol)对人胃癌细胞株SGC-7901增殖、存活、侵袭、迁移能力影响,并分析其可能机制。方法淋巴结转移阳性、阴性胃癌组织及匹配癌旁正常组织各20例份,采用免疫组化法检测各组织EIF4A1。取对数生长期SGC-7901细胞并分为3组,药物组加含120μg/m L Silvestrol(在DMSO溶剂溶解)的细胞培养液100μL,模型组加含0. 5%DMSO的细胞培养液100μL,对照组加细胞培养液100μL; CCK-8法检测细胞增殖活性,CountessⅡFL细胞计数仪计数活细胞数,Transwell实验检测细胞侵袭能力,划痕实验检测细胞迁移能力,qRT-PCR法和Western blotting法分别检测EIF4A1和AKT mRNA、蛋白。结果与癌旁正常组织比较,淋巴结转移阳性胃癌组织中EIF4A1高表达例数多(P<0. 05)。各组OD值及活细胞数两两比较,P均> 0. 05;与模型组、对照组比较,药物组侵袭细胞数少,细胞迁移距离长,EIF4A1和AKT蛋白、mRNA表达降低(P均<0. 05)。结论淋巴结转移阳性胃癌组织中EIF4A1表达量高于癌旁正常组织; Silvestrol不影响SGC-7901细胞的增殖、存活能力,但可抑制细胞侵袭、迁移能力,其机制可能与Silvestrol调控AKT信号通路有关。

miR-639在骨肉瘤组织中的表达及其模拟物转染对人骨肉瘤细胞U20S增殖、迁移、侵袭能力的影响

目的观察微小RNA-639(miR-639)在骨肉瘤组织中的表达及miR-639模拟物(miR-639 mimics)转染对人骨肉瘤细胞U20S增殖、迁移、侵袭能力的影响。方法通过GEO数据库和TCGA数据库分析骨肉瘤组织及癌旁组织miR-639表达情况,另分析miR-639高表达与骨肉瘤临床病理参数的关系。取U20S细胞,将miR-639 mimics和模拟物阳性对照(miR-NC)转染入U20S细胞中(分别计为观察组和对照组),转染后继续培养24 h,后收集细胞进行后续实验。采用CCK-8实验检测两组细胞集落形成数,Ed U实验检测细胞Ed U染色数,克隆形成实验检测细胞迁移细胞数,Transwell实验检测细胞侵袭数,荧光定量PCR法和Western blotting法分别检测细胞TUSC5 mRNA、蛋白。结果 GEO数据库显示,骨肉瘤、癌旁组织中miR-639表达水平分别为11.2±0.4、7.1±0.6,两者比较,P <0.05;TCGA数据库显示,骨肉瘤、癌旁组织中miR-639表达水平分别为19.5±3.4、7.7±2.2,两者比较,P <0.05。miR-639高表达与骨肉瘤肿瘤直径、淋巴结转移、解剖部位有关(P均<0.05)。观察组、对照组集落形成数分别为(155±12)、(84±8)个,Ed U染色数分别为(14±3)、(6±2)个,迁移细胞数分别为(120±30)、(70±18)个,侵袭细胞数分别为(100±16)、(52±23)个,两组比较,P均<0.05。观察组和对照组TUSC5 mRNA分别为0.18±0.07、0.84±0.13,TUSC5蛋白分别为0.31±0.06、0.81±0.09,两组比较,P均<0.05。结论 miR-639在骨肉瘤组织中表达升高;miR-639 mimics转染促进了骨肉瘤细胞的增殖、迁移、侵袭能力,可能与其抑制TUSC5有关。

DAPT和PI-103对人胶质瘤干细胞侵袭、迁移能力的影响

目的观察联合应用Notch1信号通路抑制剂(DAPT)和PI3K/Akt/mTOR信号通路抑制剂(PI-103)对人胶质瘤干细胞(GSCs)侵袭、迁移能力的影响。方法采用免疫磁珠法从U87细胞中分选获得GSCs;取GSCs分为DAPT处理组(A组)、PI-103处理组(B组)、DAPT和PI-103共同处理组(C组)、药物溶媒对照组(D组),A组加入20μmol/L的DAPT培养,B组加入4μmol/L的PI-103培养,C组加入20μmol/L的DAPT+4μmol/L的PI-103共培养,D组不作任何处理。Western blotting法检测各组Notch1活化标志物(Hes1、pmTOR蛋白),Transwell侵袭和迁移实验观察各组细胞侵袭、迁移能力(穿膜细胞数)。结果与D组和A组相比,B、C组Hes1蛋白相对表达量降低(P均<0.01);与D组相比,A、B、C组pmTOR蛋白相对表达量降低(P均<0.05);与A、B组比较,C组pmTOR蛋白相对表达量降低(P均<0.05)。与D组相比,A、B、C组侵袭、迁移穿膜细胞数降低(P均<0.05);与A、B组比较,C组侵袭、迁移穿膜细胞数降低(P均<0.05)。结论DAPT和PI-103联合使用可显著降低GSCs的侵袭、迁移能力。

miRNA-138模拟物转染对人乳腺癌细胞迁移、侵袭能力的影响及其机制

目的观察miRNA-138模拟物(miRNA-138 mimics)对人乳腺癌细胞迁移、侵袭能力的影响,并探讨其可能机制。方法选取人高侵袭性乳腺细胞系(MDA-MB-231、MDA-MB-468)及人低侵袭性乳腺癌细胞系(MCF-7)和人正常乳腺上皮细胞系(HBL-100),qRT-PCR法检测微小RNA-138(miRNA-138);取MDA-MB-231并分为两组,miRNA-138 mimics组细胞系以miRNA-138 mimics转染,miR-NC组细胞系以miR阴性对照模拟物(miR-NC)转染,qRT-PCR法检测miRNA-138,Transwell迁移和侵袭实验测算迁移细胞数、侵袭细胞数,Western blotting法检测SOX4蛋白及上皮间质转化(EMT)相关标志物(E-cadherin、Fibronectin、Vimentin蛋白)。结果 MDA-MB-231、MDA-MB-468、MCF-7、HBL-100中miRNA-138相对表达量分别为0.23±0.08、0.42±0.05、0.56±0.11、1.03±0.04,MDAMB-231、MDA-MB-468、MCF-7与HBL-100比较,MDA-MB-231、MDA-MB-468与MCF-7比较,P均<0.05。miRNA-138 mimics组和miR-NC组miRNA-138相对表达量分别为13.35±0.35、0.98±0.05,两组比较,P <0.05。miRNA-138 mimics组和miR-NC组迁移细胞数分别为(210±30)、(340±18)个,侵袭细胞数分别为(100±16)、(190±26)个,两组比较,P均<0.05。miRNA-138 mimics组SOX、E-cadherin、Fibronectin、Vimentin蛋白灰度值分别为0.16±0.08、0.59±0.16、0.42±0.14、0.17±0.09,miR-NC组分别为0.77±0.19、0.12±0.06、1.19±0.21、0.44±0.12,两组比较,P均<0.05。结论 miRNA-138 mimics能够抑制乳腺癌细胞侵袭和迁移,机制可能与其调控SOX4基因抑制乳腺癌细胞EMT有关。

番茄红素对人内皮祖细胞增殖、迁移、成管能力的影响观察及其机制探讨

目的 观察番茄红素(Lyc)对人内皮祖细胞(EPCs)增殖、迁移、成管能力的影响,并探讨其作用机制。方法 取EPCs,培养24 h后分为4组;A组加入含10%胎牛血清的培养基和ox-LDL(10 mg/L)的培养基培养24 h后弃去上清,再加入含10%胎牛血清和Lyc(10 mg/L)的培养基培养24 h;B组加入含10%胎牛血清和ox-LDL(100 mg/L)的培养基培养48 h;C组加入含10%胎牛血清和Lyc(10 mg/L)的培养基培养48 h;D组加入含10%胎牛血清的培养基培养48 h;比较各组细胞增殖活力、细胞划痕愈合率、形成小管直径及p62、LC3-Ⅱ、Beclin-1、p-AMPK/AMPK、p-mTOR/mTOR蛋白相对表达量。另取EPCs,培养24 h后分为4组;E组首先加入含10%胎牛血清和AMPK抑制剂小分子化合物C(CC)的培养基温箱孵育30 min,然后加入含10%胎牛血清和ox-LDL(10 mg/L)的培养基培养24 h后弃去上清,最后再加入含10%胎牛血清和Lyc(10 mg/L)的培养基培养24 h;F组加入含10%胎牛血清的培养基和ox-LDL(10 mg/L)的培养基培养24 h后弃去上清,再加入含10%胎牛血清和Lyc(10 mg/L)的培养基培养24 h;G组加入含10%胎牛血清和ox-LDL(100 mg/L)的培养基培养48 h;H组加入含10%胎牛血清的培养基培养48 h;比较各组细胞增殖活力、细胞划痕愈合率、形成小管直径及p62、LC3-Ⅱ、Beclin-1蛋白相对表达量。结果 与B组比较,A组细胞增殖活力、细胞划痕愈合率、形成小管直径及LC3-Ⅱ、Beclin-1、p-AMPK/AMPK蛋白相对表达量增加,p62、p-mTOR/mTOR蛋白相对表达量减小(P均<0.05);与B组比较,D组细胞增殖活力、细胞划痕愈合率、形成小管直径及p-AMPK/AMPK蛋白相对表达量增加,p62、LC3-Ⅱ、Beclin-1、p-mTOR/mTOR蛋白相对表达量减小(P均<0.05)。与F组比较,E组和G组细胞增殖活力、细胞划痕愈合率、形成小管直径减小(P均<0.05);与G组比较,E组p62蛋白相对表达量增加,E组LC3-Ⅱ、Beclin-1蛋白相对表达量和H组p62、LC3-Ⅱ、Beclin-1蛋白相对表达量减小(P均<0.05)。结论 Lyc可以促进EPCs增殖、迁移和成管能力并增强自噬,其作用机制可能是上调AMPK磷酸化水平,下调mTOR的磷酸化水平,进而抑制mTOR信号通路。

lncRNA-AB073614在U251细胞中的表达及对细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响

目的观察脑胶质瘤细胞U251中长链非编码RNA(lncRNA)-AB073614表达变化及小分子干扰RNA片段(si-RNA)转染对其细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响。方法取U251细胞、正常星形胶质细胞NHA,采用Realtime PCR法检测AB073614。随后U251细胞分别加入或不加入si-RNA转染,MTT实验检测细胞增殖情况,细胞划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell实验检测细胞侵袭能力。结果 U251、NHA细胞中AB073614表达水平分别为3.57±0.28、1.00±0.17,两者比较,P<0.05。MTT实验显示,si-AB073614转染的U251细胞存活率低于未转染的(P<0.05)。细胞划痕实验显示,si-AB073614转染的U251细胞迁移能力低于未转染的(P<0.05)。Transwell实验显示,si-AB073614转染的U251细胞穿膜细胞数低于未转染的(P<0.05)。结论 U251细胞中lncRNAAB073614表达升高,si-RNA转染lncRNA-AB073614能明显抑制其增殖、侵袭、迁移能力。

LIM结构域蛋白2基因在基质-上皮细胞微环境中对前列腺上皮细胞迁移能力的影响

本研究旨在观察LIM结构域蛋白2（LM02）基因在基质一上皮细胞微环境中对前列腺上皮细胞迁移能力的影响。一、材料与方法参照文献[1]方法原代培养前列腺外周带基质细胞（PZs）、移行带基质细胞（TZs）；含LM02全长基因的慢病毒载体感染WPMY-1细胞组（WPMY-1-LM02）和空载体组（WPMY-1-NC）本课题组前期已构建。

miRNA-299-3p对肺癌细胞系A549迁移、增殖、凋亡、多柔比星敏感性的影响

目的观察微小RNA-299-3p(miRNA-299-3p)对人肺癌细胞A549迁移、增殖、凋亡、多柔比星敏感性的影响。方法以A549细胞为研究对象,首先评价miRNA-299-3p对靶基因三磷酸腺苷结合盒E1(ABCE1)的调控效应;通过CCK-8染色、划痕实验、活力分析、TUNEL染色以及蛋白印迹方法系统分析miRNA-299-3p转染的A549细胞迁移、增殖、凋亡以及对多柔比星敏感性的影响。结果 miRNA-299-3p对肺癌细胞ABCE1具有显著抑制效应。经miRNA-299-3p转染的A549细胞增殖活性、迁移等生物学特征并未受到明显影响。然而,miRNA-299-3p显著增加了A549细胞对多柔比星的敏感性,与对照组相比,同样剂量的多柔比星药物导致A549细胞活性显著下降,凋亡水平显著升高。结论 miR-299-3p靶向抑制ABCE1表达,其过表达并不能显著抑制A549细胞的增殖,但miR-299-3p联合多柔比星促进了A549细胞对多柔比星的敏感性,显著促进了A549细胞的凋亡。

miR-32-5p和FKBP14基因转染对SPC-A1细胞增殖、迁移、侵袭的影响及其靶向关系验证

目的观察miR-32-5p和FK506结合蛋白14(FKBP14)基因转染对人非小细胞肺癌(NSCLC)细胞系SPC-A1增殖、迁移、侵袭能力的影响,并验证两者之间靶向关系。方法选取SPC-A1细胞,将细胞为A、B、C、D、E、F组,分别转染miR-32-5p+pcDNA-FKBP14、miR-32-5p+pcDNA、miR-32-5p、miR-con、pcDNA-FKBP14、pcDNA-con,采用MTT法检测细胞吸光度值,并计算细胞存活率;Transwell实验检测细胞迁移数、侵袭数,Western blotting法检测细胞CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白相对表达量。取SPC-A1细胞,将细胞分为G、H、I、J组,分别转染FKBP14-WT+miR-con、FKBP14-WT+miR-32-5p、FKBP14-MUT+miR-con、FKBP14-MUT+miR-32-5p,采用荧光素酶活性检测试剂盒检测细胞荧光素酶活性。取SPC-A1细胞,将细胞分为K、L、M、N组,分别转染miR-32-5p、miR-con、anti-miR-32-5p、anti-miR-con,Western blotting法检测细胞中KBP14蛋白相对表达量。结果与B组比较,A组细胞存活率、迁移细胞数、侵袭细胞数及CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白相对表达量增加(P均<0.05);与D组比较,C组细胞存活率、迁移细胞数、侵袭细胞数及CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白相对表达量减少(P均<0.05);与F组比较,E组SPC-A1细胞存活率、迁移细胞数、侵袭细胞数及CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白相对表达量增加(P均<0.05)。与G组比较,H组细胞荧光素酶活性减弱(P<0.05);与I组比较,J组细胞荧光素酶活性无显著变化(P>0.05)。与L组比较,K组FKBP14蛋白相对表达量减少(P<0.05);与N组比较,M组FKBP14蛋白相对表达量增加(P<0.05)。结论过表达miR-32-5p或敲减FKBP14后SPC-A1细胞存活率降低,迁移细胞数、侵袭细胞数减少,miR-32-5p与FKBP14存在靶向调控关系。

大鼠血管平滑肌细胞迁移与西洛他唑的干预效应

目的:探讨西洛他唑对原代培养大鼠血管平滑肌细胞迁移能力的影响及其可能的调控作用。方法:实验于2003-03/12在解放军沈阳军区总医院全军心血管病研究所完成。使用胶原酶消化法处理健康雄性SD大鼠,获得原代培养的鼠血管平滑肌细胞,加入终浓度为0.5μmol/L西洛他唑培养72h为西洛他唑组,对照组为加入等量的Dulbecco改良的Eagle培养液培养的血管平滑肌细胞。应用细胞刮伤实验和基质金属蛋白酶活性测定分析西洛他唑对原代培养血管平滑肌细胞迁移能力的影响。应用蛋白质印记杂交方法分析给药前后血管平滑肌细胞内基质金属蛋白酶2,9和细胞外信号调节激酶蛋白的表达情况。结果:①细胞刮伤实验显示,与对照组比较,西洛他唑组血管平滑肌细胞迁移能力明显受抑,迁移距离明显缩短。明胶酶活性分析发现,西洛他唑组细胞基质金属蛋白酶活性明显低于对照组。②蛋白质印迹杂交分析发现,西洛他唑可引起原代培养血管平滑肌细胞迁移能力下降。西洛他唑组细胞内基质金属蛋白酶2,9蛋白表达明显低于对照组(14.34±0.70,12.65±0.98;93.67±1.90,83.67±1.05,t=67.86,85.65,P<0.05)。③蛋白质印迹杂交分析检测显示,西洛他唑组与对照组血管平滑肌细胞内信号调节激酶1,2蛋白表达无明显差异(P>0.05);细胞内磷酸化信号调节激酶蛋白表?

人参皂苷20（R）-Rg3抑制肿瘤细胞的迁移与AQP1水通道的可能关系

目的：观察人参皂苷20（R）-Rg3对高转移前列腺癌PC3M细胞迁移能力及细胞内水通道AQP1表达的影响。方法：采用MTT法和划痕实验观察不同浓度Rg3对PC3M细胞活力及迁移的影响；采用免疫荧光法鉴定PC3M细胞中AQP1蛋白的表达；应用免疫印迹法检测不同浓度Rg3对细胞中AQP1表达的影响，蛋白酶体抑制剂MG132和lactacystin对AQP1表达的调节作用，及Rg3对ERK1／2磷酸化的影响及与AQP1表达的关系；

依泽麦布抑制膀胱癌细胞增殖、迁移及其机制

目的探究依泽麦布(Ezetimibe)对膀胱癌细胞增殖、迁移以及周期分布的影响及其可能机制。方法将膀胱癌细胞系T24和5637分别用不同浓度(0、5、10、20、40、60、80、100 mmol/L)的依泽麦布处理48 h后,采用噻唑兰(MTT)实验测试依泽麦布对膀胱癌细胞增殖能力的影响;运用划痕实验检测依泽麦布对细胞迁移能力的影响;应用流式细胞仪来检测依泽麦布处理后细胞周期的分布情况;Western blot检测CDK2和CDK4以及上β-连接素(β-catenin)和波形蛋白(vimentin)的表达情况。结果不同浓度依泽麦布处理膀胱癌细胞T24和5637后,细胞增殖能力受到明显抑制,呈现浓度依赖性;经依泽麦布处理后,膀胱癌细胞周期阻滞在G0/G1期,细胞迁移能力减弱;Western blot实验显示,依泽麦布能够诱导膀胱癌细胞中CDK4、CDK6、β-catenin和vimentin的蛋白表达下调。结论依泽麦布能够抑制膀胱癌细胞的增殖和迁移能力,并导致细胞周期发生G0/G1期阻滞。