猪捷申病毒Swine/CH/IMH/03分离株细胞适应性和致病性研究

为确定猪捷申病毒(PTV)Swine/CH/IMH/03株的易感细胞系及其致病性,本实验将该病毒接种不同细胞,通过细胞病变、电子显微镜观察和PCR技术进行鉴定。并进一步将该病毒回归本动物鉴定其致病性。试验结果表明,PTV Swine/CH/IMH/03对IB-RS-2和PK-15细胞系敏感,能够在IB-RS-2和PK-15细胞系中增殖。致病性试验结果显示,Swine/CH/IMH/03分离株能够导致实验猪出现神经症状,剖检可见脑、肾、脾、肠道发生出血,病理组织学检查可见脑实质内胶质细胞浸润、肾脏间质小血管淤血、脾淋巴细胞减少、小肠伴有出血及淋巴细胞浸润等病理变化,对仔猪具有强致病性。

三氯乙烯诱导人L-02肝细胞适应性反应的差异蛋白质组学分析

目的研究三氯乙烯(TCE)诱导L-02肝细胞的适应性反应及蛋白质表达改变。方法利用噻唑蓝(MTT)比色法,以0.5%二甲基亚砜(DMSO)作为溶剂对照组,确定对细胞增殖无明显作用的1μmo.lL-1TCE作为TCE诱导L-02肝细胞适应性反应的预刺激浓度,预刺激时间12 h,预刺激后再刺激浓度(适应组)为30μmo.lL-1TCE,刺激时间24 h。然后选取0,1,30和1+30μmo.lL-1TCE(1μmo.lL-1TCE预刺激12 h后,再次接受30μmo.lL-1TCE刺激24 h)4组平行进行双向凝胶电泳分离细胞总蛋白,银染显色,图像分析后,挑选差异蛋白进行基质辅助激光解吸电离飞行时间串联质谱鉴定。结果1μmo.lL-1TCE预刺激L-02肝细胞后,能降低30μmo.lL-1TCE攻击产生的细胞毒性。与单独用30μmo.lL-1TCE攻击相比,细胞增殖能力增加明显,细胞死亡减少。分析比较4组二维电泳图谱,发现15个蛋白质斑点表达发生改变,对其中5个差异较明显的蛋白点进行质谱分析鉴定,分别为Ku 86自体抗原相关蛋白1、透明质酸蛋白(hyaluronan)介导细胞运动受体、谷胱甘肽转移酶ω1、白细胞弹性蛋白酶抑制剂和空泡ATP合酶亚单位B。结论TCE可诱导L-02肝细胞产生适应性反应,引起L-02肝细胞蛋白表达改变,差异蛋白大多参与机体保护。

药物再激发危险性及肝细胞适应性研究进展

肝脏在受到外界病因（包括药物）作用后的适应性反应及再次给药危险性,是近年关注的热点,尤其是在药物性肝损伤（drug induce liver injury,DILI）领域既往研究更多是集中在探讨肝损伤的机制,但对如何判断损伤因素和适应性反应间的平衡或失衡,药物再激发危险性等方面研究较少,本文就肝细胞适应性、可能机制、药物再激发等方面最新研究进行如下综述.

细胞适应性流感病毒高产株的制备研究

与鸡胚培养制备的流感疫苗相比,细胞制备的疫苗具有免疫原性好、生产不受鸡胚限制等优点。但目前流感病毒株在细胞上产量较低,成为疫苗生产的主要限制因素。现就用于制备细胞适应性高产株主要的3种方法,即连续传代、随机突变构建病毒突变体和病毒重配的研究进展,以及突变位点对病毒增殖的影响作一概述。

禽冠状病毒IBV细胞适应性及其相关机制研究进展

禽冠状传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)的细胞适应性研究是探索IBV的感染传播机制及采用传代细胞生物反应器放大培养生产IBV疫苗的基础,是改进IBV疫苗生产工艺,提高IBV疫苗生产效率的关键。本文就目前IBV病毒的细胞适应性、适应细胞机制、敏感细胞受体研究历史和现状进行综述,为进一步对IBV潜在的物种间传播机制、细胞适应性改造或筛选及细胞适应性毒株疫苗研制提供理论指导。

胃粘膜血流量对大鼠胃粘膜适应性细胞保护作用的影响

采用氢气清除法测定胃粘膜血流量（ｇａｓｔｒｉｃｍｕｃｏｓａｌｂｌｏｏｄｆｌｏｗ，ＧＭＢＦ），观察大鼠胃内灌注低浓度盐酸酒精（０．１５ｍｏｌ／ＬＨＣｌ＋１５％ＥｔＯＨ）后灌注高浓度盐酸酒精（０．６ｍｏｌ／ＬＨＣｌ＋１５％Ｅｔｏｌｌ）对ＧＭＢＦ和胃粘膜损害的影响，以及ＧＭＢＦ在适应性细胞保护中的作用。结果如下：（１）先用低浓度盐酸酒精作为弱刺激灌注随之以高浓度盐酸酒精作为强刺激灌注，引起胃粘膜适应性保护现象，它表现为：大体损伤和损伤深度分别比单独强刺激组减少４７．０９％和４４．５７％（Ｐ＜０．０１，Ｐ＜０．０５）；与此同时，ＧＭＢＦ亦出现适应性增强反应，即比单独强刺激组增加２８．０２％（Ｐ＜０．０５）；（２）近胃动脉灌注血管加压素后，ＧＭＢＦ的适应性增强反应被阻断，对胃粘膜的适应性保护作用也消失；（３）静脉注射消炎痛后，ＧＭＢＦ的适应性增强反应被阻断，对胃粘膜的适应性细胞保护作用消失，粘膜损伤程度加重。上述结果表明：低浓度盐酸酒精作为弱刺激引起的适应性细胞保护作用与ＧＭＢＦ增加反应增强有关；减弱或阻断这一增强效应可使适应性细胞保护作用消失；内源性前列腺素参与适应性细胞保护作用可能部分与ＧＭＢＦ增加有关。

慢性饮酒大鼠胃粘膜的适应性细胞保护作用

目的:观察胃内灌注纯酒精对慢性饮酒大鼠胃粘膜的损害,并探讨慢性酒精刺激对大鼠胃粘膜细胞更新的影响及其在适应性细胞保护作用中的意义。方法:以6%(V/V)的酒精作为大鼠饮水的惟一来源,分别在大鼠饮酒的不同时程内胃内灌注100%酒精,观察大鼠胃粘膜的损伤情况。同时用免疫组化和计算机图像处理技术观察饮酒不同时程的大鼠胃粘膜的细胞增殖和凋亡,了解其细胞更新的情况。结果:100%酒精灌胃后大鼠胃粘膜的损伤和对照组相比,饮酒后1天的大鼠胃粘膜改变差异无显著性,饮酒后3～14天大鼠的胃粘膜损伤有显著性降低,饮酒后28天的大鼠差异又无显著性。饮酒3～14天的大鼠胃粘膜的细胞增殖和凋亡同步增加,提示在此时期内胃粘膜的细胞更新增强。结论:适当低浓度酒精反复刺激可以促进胃粘膜的细胞更新并引起大鼠胃粘膜的适应性细胞保护作用。

H_2O_2预处理对PC12细胞氧化应激损伤的适应性细胞保护作用

目的 探讨H2 O2 预处理对PC12细胞氧化应激损伤的适应性细胞保护作用及与脑源性神经营养因子 (brain de rivedneurotrophicfactor,BDNF)的关系。 方法 采用MTT法检测细胞活力 ,PI染色流式细胞术检测细胞凋亡 ,间接免疫荧光流式细胞术检测细胞BDNF的表达。结果 PC12细胞经 10 μmol·L-1H2 O2 预处理 90min后 ,2 0～ 6 0 μmol·L-1H2 O2 对PC12细胞生长的抑制程度明显下降 ,H2 O2 (2 0、30μmol·L-1)对PC12细胞凋亡的诱导作用明显受到抑制 ,BD NF的表达强度增强。结论 H2 O2 预处理对PC12细胞氧化应激损伤具有保护作用 。

PS_2、TGF-α和COX-2在应激胃粘膜适应性细胞保护中的作用

采用重复水浸束缚应激 (WRS)制作模型 ,动态监测胃粘膜血流量 (GMBF) ,大体及光镜下观察粘膜损伤程度 (UI)及组织学变化 ,逆转录 多聚酶链反应 (RT PCR)检测PS2 、TGF α及环氧化酶 2 (COX 2 )基因表达变化 ,免疫组化染色进一步证实PS2 、TGF α表达 ,研究WRS大鼠胃粘膜乳癌相关肽(PS2 ,为三叶肽家族一员 )、转化生长因子α(TGF α)及COX 2基因表达的变化 ,探讨其在应激胃粘膜适应性细胞保护中的相互关系及作用。结果显示 ,单次应激造成胃粘膜广泛损伤 ,重复应激后胃粘膜产生适应性 ,胃粘膜血流量上升 ,损伤逐渐减轻 ,4次应激后 ,损伤指数降低为单次应激的 2 1 99% ,并且胃腺区细胞增殖 ,pS2 、TGF α基因表达增强 (分别为 0 37± 0 0 2vs 0 77± 0 0 1,P<0 0 1;0 86±0 0 1vs 0 93±0 0 1,P <0 0 1) ,免疫组织化学染色证实了二者的变化趋势 ,而COX 2表达逐渐减弱 (0 4 5± 0 0 2vs 0 2 2±0 0 1,P <0 0 1)。结果提示胃粘膜适应性细胞保护伴有细胞增殖 ,pS2 、TGF α表达水平增强及COX 2表达水平逐渐减弱。

ERK1／2-STAT3通路在H2O2预处理导致的适应性细胞保护中的作用

目的:探讨ERK1/2-STAT3通路在H2O2预处理导致的适应性细胞保护中的作用。方法:在PC12细胞建立H2O2预处理对抗氧化应激(300μmol/L H2O2)损伤细胞的模型。应用Hoechst33258核染色法观察细胞调亡的形态学改变;应用碘化丙啶(PI)染色流式细胞术检测细胞凋亡率;免疫印记法(Western blotting)测定p-ERK1/2和p-STAT3的表达水平。结果:100μmol/L H2O2预处理PC12细胞90 min可明显抑制300μmol/LH2O2作用12 h引起的细胞凋亡,并激活ERK1/2和STAT3;ERK1/2抑制剂UO126和JAK2抑制剂AG-490(10μmol/L)均可明显地阻断H2O2预处理引起的细胞保护作用;UO126(10μmol/L)亦能明显地抑制H2O2预处理对STAT3的上调作用。结论:H2O2预处理能激活PC12细胞的ERK1/2-STAT3信号转导旁路,这可能是预处理的细胞保护机制之一。

应激状态下大鼠胃黏膜适应性细胞保护作用的研究

目的 :探讨心理、一氧化氮合酶 (NOS)及胃黏膜血流量 (GMBF)与应激状态下大鼠胃黏膜适应性细胞保护相互作用及意义。方法 :采用高压恒流脉冲刺激器复制胃黏膜损伤模型 ,将 72只雄性 SD大鼠随机分为对照组、规则光组及不规则光组 3组 ,分光光度法检测 NOS活性 ,动态检测 GMBF及 Nils L ambecht法判定胃黏膜损伤指数 (II)。结果 :在两个应激组中 ,NOS均升高 ,GMBF均下降后回升 ,而黏膜损伤均渐趋减轻。在规则组中 ,II与 GMBF呈显著负相关 ,在不规则组中 ,II与 NOS和 GMBF均呈显著负相关 ,而 NOS与 GMBF呈显著正相关。结论 :NOS、GMBF及心理共同参与了胃黏膜适应性细胞保护反应。

细胞更新对慢性饮酒大鼠胃黏膜适应性细胞保护的影响

目的 :以低浓度酒精作为弱刺激 ,通过慢性饮酒的大鼠动物模型 ,探讨慢性饮酒和大鼠胃粘膜适应性细胞保护作用之间的关系 ,以及胃粘膜细胞更新的作用。方法 :分别在饮酒不同时程的大鼠胃内灌注 2ml10 0 %酒精 ,分析胃粘膜的损伤情况。以流式细胞术、免疫组化和计算机图像处理技术观察大鼠胃粘膜的细胞增殖和凋亡 ,探讨胃粘膜的细胞更新情况。结果 :①纯酒精可使大鼠的胃体和胃窦出现溃疡和出血 ,饮用 6 % (v/v)酒精 3～ 14d的大鼠这种现象明显减轻 ,饮用 6 % (v/v)酒精 1d和 2 8d的大鼠则无改变。②饮用 6 % (v/v)酒精 3～ 14d的大鼠胃粘膜细胞更新加快 ,而饮酒 2 8d大鼠胃粘膜细胞凋亡增加 ,细胞增殖减少。结论 :细胞更新加快是适度低浓度酒精刺激引起的胃粘膜适应性细胞保护作用的重要原因 ,低浓度酒精刺激超过一定时限可引起胃粘膜萎缩性病变的趋势 ,使胃粘膜抵抗能力降低。

儿茶酚胺激动剂和阻断剂对大鼠胃粘膜适应性细胞保护作用的影响

本文观察了儿茶酚胺激动剂和阻断剂对大鼠慢性应激诱发的胃粘膜适应性细胞保护作用的影响，并分析内源性生长抑素与保护作用的关系。结果表明，慢性应激诱导的大鼠胃粘膜适应性保护作用在交感神经切除后完全消失，多巴胺或异丙肾上腺素使保护作用部分恢复，去甲肾上腺素无作用；在交感神经完整大鼠，心得安或氟哌啶醇可抑制慢性应激诱发的保护作用，酚妥拉明无作用。血浆生长抑素在应激及交感神经切除后均无显著变化。提示慢性应激时交感肾上腺系统的激活参与了大鼠胃粘膜适应性保护作用，且可能通过多巴胺及肾上腺能β受体介导。

HO-1介导H_2O_2预处理对PC12细胞氧化应激损伤的适应性细胞保护作用

目的探讨血红素氧合酶-1(HO-1)对H2O2预处理的适应性细胞保护效应的介导作用。方法PI染色流式细胞仪(Flowcytometer,FCM)检测PC12细胞凋亡,流式细胞仪检测PC12细胞HO-1蛋白的表达。结果PC12细胞经10μmol/L H2O2预处理90 min后,20、30、50、100μmol/L H2O2对PC12细胞凋亡的诱导作用明显下降;10μmol/L H2O2预处理90 min后,PC12细胞HO-1蛋白表达量明显增加;给予10μmol/L的HO-1蛋白特异性阻断剂ZnPP后,可显著阻断10μmol/L H2O2预处理90 min对50μmol/L H2O2损伤PC12细胞的保护作用。结论血红素氧合酶-1(HO-1)介导了H2O2预处理对PC12细胞氧化应激损伤的适应性细胞保护作用。

三叶肽对胃黏膜适应性细胞保护的调节作用

目的探讨三叶肽(ITF)对胃黏膜适应性细胞保护的调节作用。方法采用重复水浸束缚应激(WRS)法制作模型,动态监测模型动物的胃黏膜血流量(GMBF),观察黏膜损伤指数(UI)及病理组织学变化;采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质免疫印迹法(Westernblot)检测乳癌相关肽(PS2)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、ITF、转化生长因子-α(TGF-α)及环氧合酶-2(COX-2)的表达。结果单次WRS后造成胃黏膜广泛损伤;重复应激后胃黏膜产生适应性,GMBF上升,损伤逐渐减轻;经4次应激后,UI降低到单次应激的22.0%,并且胃腺区细胞增殖。单次应激后,PS2基因表达减弱,而iNOS、ITF、TGF-α及COX-2基因表达均增强;重复应激后,PS2、ITF、TGF-α表达逐渐增强,而iNOS及COX-2基因表达逐渐减弱;正常时iNOS、ITF及COX-2几乎无表达,PS2、ITF、TGF-α主要在胃腺颈部表达;应激后PS2、ITF、TGF-α不但在胃腺颈部黏膜增殖带表达增强,在胃腺基底部亦有表达,iNOS及COX-2在溃疡及其边缘存在。结论胃黏膜适应性细胞保护伴有细胞增殖,PS2、ITF、TGF-α表达逐渐增强,iNOS及COX-2表达逐渐减弱,表明三叶肽在这一现象中具有重要的调节作用。

适应性免疫细胞与原发性舍格伦综合征的相关性

原发性舍格伦综合征(primary Sjögren's syndrome,pSS)是一种自身免疫性疾病,发病过程伴随适应性免疫应答的改变。了解其发病过程适应性免疫细胞的病理生理学改变,有助于进一步寻找免疫治疗的靶点。本文就目前国内外研究现状,对pSS和适应性免疫细胞的相关性作一综述。

乙醇诱导门脉高压大鼠胃粘膜损伤及适应性细胞保护作用

目的：采用乙醇诱导急性胃粘膜损伤模型。观察门脉高压大鼠胃粘膜的损伤及适应性细胞保护作用。方法：40只大鼠随机分为门脉高压组（PHT）和假手术组（SO），两组再分为未加无水乙醇组。20%乙醇预处理后再加入无水乙醇组及加无水乙醇组，应用Guth法计算胃粘膜损伤指数（Ulcer index,UI），采用激光多普勒血流计法粘膜血流量显著升高，适应性细胞保护作用减弱。结论：门脉高血压可以削弱胃粘膜的防御机制。增加有害物质对胃粘膜的敏感性。而用低浓度乙醇预处理的门脉高压大鼠适应性细胞保护作用减弱。