纳米抗体多聚化测略提升间接竞争性酶联免疫吸附实验检测黄曲霉毒素M_(1)的灵敏度

酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)具有高通量、操作简单、检测结果明显等优点,是一种较为理想的检测食品中真菌污染物的免疫分析技术。然而,传统的ELISA方法具有较大的局限性,比如使用时抗体易受温度影响,容易变性,贮存期短,易受到检测环境中其他物质干扰而造成假阳性或假阴性等。该实验使用实验室前期获得的抗黄曲霉毒素M_(1)(aflatoxin M_(1),AFM_(1))纳米抗体(nanobody-M4,Nb-M4)与C4结合蛋白(recombinant C4 binding protein alpha,C4BPa)C端片段融合形成自组装七聚体融合蛋白(Nb-M4-C4 bpα),并基于该七聚体开发应用于乳制品中AFM_(1)的间接竞争酶联免疫吸附法(indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay,icELISA)。在最佳实验参数下,AFM_(1)的IC_(50)为0.038 ng/mL,检测限为0.009 ng/mL,较单体Nb-M4的提高了8.63倍和5.56倍。与AFM_(1)类似物和其他常见真菌毒素的交叉反应可忽略不计,且在加标乳样中获得了良好的回收率和可重复性。此外,将所开发的方法应用于实际样品中AFM_(1)的分析,结果与HPLC的结果具有很好的相关性(R^(2)=0.995)。该研究表明,自组装的七聚化纳米抗体是改善亲和力和信号放大的有效策略,今后可用于灵敏、选择性和快速检测食品中的霉菌毒素和其他小分子污染物。

促凝血与抗凝血对酶联免疫吸附实验中HBsAg检测结果的影响研究

目的 分析促凝血和抗凝血样本对于酶联免疫吸附实验(ELISA)中乙肝病毒表面抗原(HBsAg)检测结果的影响。方法 选取2022年1月至2022年6月驻马店市中心血站共3 680例无偿献血者的血液样本进行研究,均留取血液样本两份,其中一份采取促凝血处理,另外一份采取抗凝血处理,所有血液样本使用的检测仪器及试剂均相同,并于相同条件下采取ELISA检测HBsAg;并依据HBsAg弱阳性参考品的比例加入抗凝剂开展测定;比较促凝血样本和抗凝血样本ELISA检测HBsAg的样本吸光度与标准吸光度比值(S/CO值)情况。结果 促凝血样本采取ELISA法检测HBsAg显示阳性48例,阳性率是1.30%;抗凝血样本采取ELISA法检测HBsAg显示阳性30例,阳性率是0.82%。促凝血样本用于ELISA法检测HBsAg的阳性率高于抗凝血样本,差异有统计学意义(P <0.05)。3 680例无偿献血者促凝血样本和抗凝血样本内共有18名的HBsAg检测结果存在不一致,促凝血样本HBsAg检测的S/CO值普遍高于抗凝血样本。经重复实验后,上述18例样本复试结果一致,均为阳性,重复实验结果和促凝血样本的检测结果相同。HBsAg质控血清依据比例加进抗凝剂后,伴随抗凝剂量不断升高,HBsAg含量以及S/CO值逐渐降低。促凝血样本用于ELISA法检测HBsAg的S/CO值高于抗凝血样本,差异有统计学意义(P <0.05)。结论 和促凝血样本相比,酶联免疫吸附实验中采取抗凝血样本检测HBsAg可能产生漏检的情况,建议留取促凝血样本开展检测,以确保检测结果的准确度。

细胞酶联免疫吸附试验在检测噬菌体阳性克隆中的应用和改进

目的:通过对影响细胞ELISA的关键条件和步骤进行优化和改进,以降低实验假阳性率,提高敏感性。方法:THP-1细胞接种96孔培养板,分别用脂多糖(LPS)刺激或不刺激作为处理组和对照组,将通过噬菌体展示技术筛选获得的噬菌体分别与处理组及对照组细胞作用,洗脱未结合的噬菌体,加入HRP标记的抗M13单克隆抗体,分别用酶标仪和Kodak IS 2000R数码成像系统检测细胞与短肽的结合情况。并针对细胞的特性,在细胞的准备、固定、孵育和洗涤等关键步骤进行改进。结果:酶标仪和数码成像系统检测分别得到6个和8个可与细胞高亲和力结合的阳性噬菌体克隆,经过免疫荧光实验证实数码成像系统检测得到的8个阳性克隆均与细胞结合,并且数码成像系统多次测量值具有很好的重复性。结论:本方法为蛋白质与完整细胞的亲和活性研究提供了有效的实验方案,具有较好的应用前景。

以合成肽为抗原检测人巨细胞病毒抗体的酶联免疫吸附试验的建立及评价

目的以合成多肽为抗原建立用于人巨细胞病毒(HCMV)抗体检测的间接酶联免疫吸附试验(ELISA)。方法以固相多肽合成技术合成了HCMV 7个抗原性肽段,并对其抗原性进行了初步评价,选择高抗体反应的肽段为抗原,建立检测HCMV特异性抗体的间接ELISA。结果7个肽段中,抗体反应性较高肽段有4个;以合成多肽为抗原的间接ELISA对HCMV IgG抗体检测的敏感性和特异性分别为90.9%和100.0%,对于IgM抗体检测的敏感性和特异性分为90.0%和100.0%;与国外试剂盒测定结果有良好的符合性;该方法的精密度及稳定性良好。结论合成的HCMV多肽片段可作为抗原用于HCMV的检测,以此多肽为抗原建立的间接ELISA可用于临床HCMV特异性抗体的检测。

酶联免疫吸附试验检测人类巨细胞病毒抗体在肝移植患者术后诊断及监测中的应用

目的客观评价传统的酶联免疫吸附试验（ELISA）检测人巨细胞病毒（HCMV）抗体对肝移植患者术后诊断和监测HCMV感染的意义。方法对108例肝移植术后患者分别用ELISA检测HCMV特异性抗体IgM、用免疫组化法检测HCMV低基质磷酸化蛋白（pp65）抗原血症、用荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）检测HCMV DNA，将这3种方法的检测结果进行比较。结果108例患者中，IgM阳性者8例，pp65抗原阳性者10例，DNA阳性者12例。ELISA的敏感性较其他2种方法略低，但3种方法的特异性和阴性预测值之间差异无显著性。此外，ELISA检测HCMV IgM阳性者，其结果均在临床症状出现后6～14d检出，而pp65阳性者和HCMV DNA阳性者均在临床症状出现前被检出。结论应用ELISA检测HCMV抗体可以用于诊断监测HCMV感染情况，但有一定的局限性。

异戊烯基腺苷组细胞分裂素的快速酶联免疫吸附测定法的建立

从样品制备，ＥＬＩＳＡ类型及免疫反应时间三方面着手建立了异戊烯基腺苷（ｉＰＡ）组细胞分裂素的快速酶联免疫吸附测定法。用ＮａＩＯ４氧化合成免疫原ｉＰＡ－Ｎ９－ＢＳＡ（ＢＳＡ：牛血清白蛋白）。由此获得的免抗血清效价达１：３４５００。交叉反应试验表明该抗血清只识别ｉＰＡ组细胞分裂素。因此本研究中采用直接型（即固相抗体型）ＥＬＩＳＡ，并将最佳免疫反应平衡时间缩短至３０ｍｉｎ（４℃）。所建立的ｉＰＡ组ＥＬＩＳＡ检测极限为４．７ｆｍｏｌｉＰＡ／孔，线性检测范围０．０１～５０ｐｍｏｌｉＰＡ／孔，板内、板间的变异系数分别为３．７％和５．３％。样品的稀释曲线与标准曲线平行，回收率为８７．１％，表明本研究中采用的８０％甲醇提取、Ｓｅｐ－ｐａｋＣ１８柱初纯化的快速制样程序适合于该ＥＬＩＳＡ。对大豆植株不同部位ｉＰＡｓ含量测定结果表明，根瘤与根尖内ｉＰＡｓ含量显著高于幼叶与顶芽内的ｉＰＡｓ含量。

应用快速孵育法优化酶联免疫吸附实验过程探讨——以乙型肝炎病毒表面抗原检测为例

目的利用快速孵育法优化酶联免疫吸附实验操作流程,通过缩短孵育时间,以提高工作效率。方法收集化学发光法定量检测乙肝表面抗原阳性高值样本30例、阳性中值样本30例、阳性临界值样本30例、阴性样本30例,使用ELISA试剂盒说明书推荐方法和快速孵育法同时进行检测,比较检测结果相关性。结果使用酶标板孵育器将孵育时间缩短至原来的1/2、1/3时,ELISA试剂盒说明书推荐方法、快速孵育法与化学发光法检测结果符合率100%;当孵育时间缩短至原来时间的1/4时,两种方法与化学发光法阴性、高值和中值样本检测结果符合率100%;临界值样本检测时,ELISA试剂盒说明书推荐方法与化学发光法检测结果符合率100%,快速孵育法与化学发光法结果 6例不一致,检测结果符合率80%。结论通过实验证实,酶联免疫吸附实验时,快速孵育法可满足临床检测,可将孵育时间缩短至原试剂盒推荐时间的1/3或1/2,可提高工作效率。

抗体夹心酶联免疫吸附法测定鸡白细胞介素-2

利用抗鸡白细胞介素-2(ChIL-2)单克隆抗体作包被抗体、生物素标记的抗ChIL-2多克隆抗体作检测抗体建立了一个抗体夹心酶联免疫吸附测定系统.此系统对鸡白细胞介素-2的检测灵敏度为50 pg/mL.两种抗体与鸡干扰素-α和人白细胞介素-2等细胞因子不产生任何非特异性反应.以不同种类的促有丝分裂剂或鸡病毒刺激鸡淋巴细胞,培养液中分泌产生的天然鸡白细胞介素-2的量用此系统检出.在促有丝分裂剂中,植物血凝素(PHA)导致ChIL-2的产生量最高;在病毒方面,传染性法氏囊病毒最能促使ChIL-2的分泌.本研究建立的抗体夹心酶联免疫吸附测定系统为我们以定量方式测定鸡白细胞介素-2提供了一个灵敏度高、特异性好的工具.

酶联免疫吸附实验中全自动立式洗板法应用效果评价

目的 与传统手工洗板法、水平注液式洗板法相比较,评价酶联免疫吸附实验中全自动立式洗板法的应用效果.方法 评价全自动立式洗板法洗板机的性能,包括微孔中液体残留量测定、针头堵孔可能性检测、交叉污染可能性检测.收集乙型肝炎病毒表面抗原化学发光法定量检测结果分别为阴性、弱阳性、阳性、强阳性的四组样本各30例,使用酶联免疫吸附实验原理乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒检测,其中洗板步骤分别使用手工洗板法、水平注液式洗板法、全自动立式洗板法三种方法,由酶标仪读取结果,记录洗板时间,数据利用r检验进行统计学分析.结果 本研究中全自动立式洗板法酶标板微孔中液体残留量均值为0.0087±0.0002μL,＜0.01μL;全自动立式洗板机使用6个月（每周至少使用2次）,96个针头未出现堵孔现象,洗板机6个月前后的直线水柱长度分别为6.53±0.27cm、6.58 ±0.31cm,两组数据差异无统计学意义;阳性质控品和阴性质控品交叉检测,及阳性混合血清和阴性混合血清交叉检测未出现交叉污染现象.120例临床样本利用三种洗板法的定性检测结果一致,其中30例弱阳性样本,均有1例假阴性且来源于同一样本;三种洗板法检测阴性、弱阳性、阳性、强阳性样本的测定结果差异无统计学意义（P＞0.05）.手工洗板法、水平注液式洗板法、全自动立式洗板法的洗板时间分别为8min、5min、20s.结论 全自动立式洗板法可满足酶联免疫吸附实验临床检测中洗板要求.

酶联免疫吸附分析实验在食品分析教学中的实施

该文通过对酶联免疫吸附分析(ELISA)实验在食品分析教学中实施情况进行探讨。介绍了该实验的基本原理以及实施过程,并以在食品安全检测领域中较常用的竞争ELISA为例,论述了用ELISA检测食品中有害小分子化学物质的实验步骤。为有关院校开展ELISA实验提供指导和借鉴。

促红细胞生成素酶联免疫吸附测定法的研究

目的:建立血清促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)的酶联免疫检测(ELISA)方法,观察其临床应用价值。方法:制备EPO多克隆抗体,异丙醇洗涤处理酶标板以增强其吸附能力,利用交叉反应法选择出抗原、抗体及酶标抗体的最佳的配对工作浓度。反应后,观察本方法的灵敏度、回收率、特异度、稳定性等指标,观察效果。以正常血清为对照组,测定缺铁性贫血组、乳腺癌组,并与放射免疫检测对比。结果:酶标板结合蛋白能力增强。抗体、酶标抗体、抗原最佳工作浓度分别为1∶1000,1∶6000,1∶800。灵敏度为0.46U/L,与生长激素、铁蛋白交叉反应率低;高浓度、低浓度样品平均回收率分别为96.3%、97.3%,批内和批间变异分别为8.31%、7.82%,稳定性好。乳腺癌组、缺铁性贫血组EPO水平均明显高于正常对照组。放射免疫检测及酶联免疫检测检出结果差别无统计学意义。结论:本血清EPO双抗体夹心ELISA法的建立在诊断相关疾病方面有一定的临床应用价值。

实时荧光定量-PCR和酶联免疫吸附法检测巨细胞病毒-IgM抗体的比较

目的:比较实时荧光定量-PCR和酶联免疫吸附法检测巨细胞病毒-IgM抗体水平的敏感性及准确率。方法:收集108例孕前筛查妇女,同时采用实时荧光定量-PCR和酶联免疫吸附法检测外周血巨细胞病毒-IgM抗体水平,并对这两种检测方法的阳性率进行比较。结果:实时荧光定量-PCR法阳性率为74%,酶联免疫吸附法为57%,两者差异有统计学意义(P<0.05);18例荧光定量-PCR法阳性的妇女血清巨细胞病毒-IgM拷贝数低于10-4/ml。结论:实时荧光定量-PCR与酶联免疫吸附法相比,对巨细胞病毒-IgM抗体检测具有较高的敏感性和准确率,值得临床推广使用。

细胞-酶联免疫吸附试验及其应用

酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）问世数十年来，广泛应用于检测各种体液中的可溶性抗原或抗体。在传统的ELISA中，微孔板上包被的是可溶性的抗体或抗原，然而在免疫学研究和临床检测时，需要了解免疫活性细胞表面表达的特定分子以对细胞特性进行认定和分类，亦需测定抗某种细胞的抗体或评价某种细胞的功能，因而传统的ELISA中的包被物或受检物就要被替代，检测模式有所改变。

酶联免疫吸附试验检测细胞角蛋白19的方法学评价及其在肠癌诊断中的意义

目的对应用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清细胞角蛋白19（CK19）进行方法学评价,同时探讨其在诊断肠癌中的意义。方法对检测CK19的ELISA进行灵敏度、精密度、准确性、干扰试验、正常参考值的检测。结果该方法检测灵敏度、精密度、回收率、抗干扰试验各项指标均符合临床试验要求,正常参考值0-3.5 ng/mL,3.5 ng/mL为诊断肠癌的最佳阈值,该阈值时诊断肠癌的敏感性57.2%、特异性82.1%。结论ELISA可用于临床检测血清CK19,适合各级医院临床开展使用,有可能作为肠癌疗效监测的指标。

不同标本对快速酶联免疫吸附法测定B淋巴细胞活化因子结果的影响

目的 探讨应用快速酶联免疫吸附(InstantELISA)法测定B淋巴细胞活化因子(BAFF)时不同临床标本对其结果的影响,为临床标本的采集及处理提供依据。方法 按要求采集有代表性的外源性干扰临床标本,用奥地利BenderMedSystems公司产品检测。结果 较低程度溶血、高血脂及高浓度黄疸标本对测定结果无显著影响(P >0 .0 5 )。结论 InstantELISA法BAFF检测试剂盒具有受临床常见干扰型标本影响小的特点,是一种准确性、灵敏度、特异性较高的检测体内BAFF的试剂盒。

胶体层析法、酶联免疫吸附实验法应用于艾滋病病毒抗体初次筛查中的研究价值

目的 探讨胶体层析法、酶联免疫吸附实验法在艾滋病病毒(HIV)抗体初次筛查中的应用,并分析其研究价值,为临床诊断与合理治疗提供指导。方法 回顾性分析于贵阳市疾病预防控制中心利用全国艾滋病实验室检测管理系统收集的2020年9月至2021年9月贵阳市的308例疑似艾滋病(AIDS)检测者的临床资料,所有检测者均进行胶体层析法、酶联免疫吸附实验法及免疫印迹法检测HIV抗体,以免疫印迹法为金标准,分析胶体层析法、酶联免疫吸附实验法的检测结果、对HIV感染的诊断效能及酶联免疫吸附实验法阳性样本带型分布情况。结果 308例检测者中免疫印迹法检测出阳性有220例,阴性88例,酶联免疫吸附实验法检测出阳性219例,阴性89例,阳性检出率为71.10%(219/308),低于免疫印迹法阳性检出率的71.43%(220/308),但两组比较,差异无统计学意义(P>0.05);胶体层析法检测出阳性有220例,阴性88例,阳性检出率为71.43%(220/308),与免疫印迹法阳性检出率71.43%(220/308)比较,差异无统计学意义(P>0.05);酶联免疫吸附实验法检测对HIV感染诊断的灵敏度、特异度、准确度、阳性预测值、阴性预测值均显著高于胶体层析法检测(均P<0.05);由酶联免疫吸附实验法检测阳性样本带型分布情况可见,219例AIDS患者中gP160、gP120带型出现率最高,出现率为100.00%,P55出现率最低,出现率为32.88%。结论 酶联免疫吸附实验法与胶体层析法对于HIV感染的诊断均具有一定的检测价值,且酶联免疫吸附实验法在HIV抗体初筛中灵敏度、特异度、准确度较高于胶体层析法。

西藏自治区血液中心实验室酶联免疫吸附试验检测“灰区范围”浅谈

现在全国大多数血站实验室把“灰区”设置定为COx（1±CV）或CO＋2s，（其中CV为该试剂的批内CV，一般在15％～20％，s为实验室做室内质量控制的标准差）。本研究认为酶联免疫吸附试验（ELISA）“灰区”对于不同检测项目和应用的领域、地域的不同，其设置不能一概而论。

流式细胞术,酶联免疫吸附反应及HLA配型——几种新型配型方法在器官移植中的应用

流式细胞术，酶联免疫吸附反应及ＨＬＡ配型——几种新型配型方法在器官移植中的应用戴春笋杨俊伟关键词流式细胞术酶联免疫吸附ＨＬＡ配型中图法分类号Ｒ４４６在器官移植发展的过程中，术前组织配型的实施以及术后免疫抑制剂应用，无疑是推动器官移植迅速发展的两大重要...