肝细胞癌上调的长链非编码RNA在肝癌中的表达及作用机制

长链非编码RNA(lncRNA)是一种多位于细胞核内、没有编码蛋白质能力的转录本,长度超过200 nt。lncRNA功能广泛,可参与基因表达、蛋白质翻译及稳定、细胞分化、器官形成过程,并可通过多种方式参与调控恶性肿瘤的发生发展过程。肝细胞癌上调的lncRNA(HULC)是人类肝癌组织中特异性过表达的lncRNA。近年来研究发现,HULC在肝癌的发生发展过程中可能扮演着重要角色。本文对HULC在肝癌中的表达及作用机制的研究进展进行综述。

lncRNA CYTOR靶向miR-139-5p对三阴性乳腺癌细胞增殖的影响及其机制

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)细胞骨架调节因子RNA(CYTOR)靶向微小RNA-139-5p(miR-139-5p)对三阴性乳腺癌细胞增殖的影响及其机制。方法体外传代培养三阴性乳腺癌细胞株HCC1806,取传3代、对数生长期、生长状态良好的细胞进行后续实验。通过starBase数据库预测lncRNA CYTOR与miR-139-5p的结合位点,通过双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA CYTOR与miR-139-5p的靶向关系。取HCC1806细胞,随机分为空白对照组、阴性对照组、lncRNA CYTOR沉默组、miR-139-5p过表达组、lncRNA CYTOR沉默+miR-139-5p过表达组。阴性对照组、lncRNA CYTOR沉默组、miR-139-5p过表达组、lncRNA CYTOR沉默+miR-139-5p过表达组分别转染NC mimics、lncRNA CYTOR siRNA、miR-139-5p mimics、lncRNA CYTOR siRNA+miR-139-5p mimics,转染48 h更换新鲜培养基,继续培养24 h。空白对照组常规培养,不予转染。收集各组上述细胞,采用RT-qPCR法检测miR-139-5p、性别决定区Y框蛋白8(SOX8)mRNA表达,采用EdU法检测细胞增殖能力,采用Western blotting法检测ATP结合盒转运蛋白G2(ABCG2)、SOX8表达。结果经starBase数据库预测,lncRNA CYTOR与miR-139-5p存在结合位点;经双荧光素酶报告基因实验验证,lncRNA CYTOR与miR-139-5p存在靶向调控关系。lncRNA CYTOR沉默组、miR-139-5p过表达组、lncRNA CYTOR沉默+miR-139-5p过表达组miR-139-5p相对表达量均高于空白对照组和阴性对照组,SOX8 mRNA相对表达量、EdU阳性细胞比例以及ABCG2、SOX8蛋白相对表达量均低于空白对照组和阴性对照组(P均<0.05);lncRNA CYTOR沉默+miR-139-5p过表达组miR-139-5p相对表达量高于lncRNA CYTOR沉默组和miR-139-5p过表达组,SOX8 mRNA相对表达量、EdU阳性细胞比例以及ABCG2、SOX8蛋白相对表达量均低于lncRNA CYTOR沉默组和miR-139-5p过表达组(P均<0.05);而空白对照组与阴性对照组、lncRNA CYTOR沉默组与miR-139-5p过表达组miR-139-5p、SOX8 mRNA相对表达量以及EdU阳性细胞比例和ABCG2、SOX8蛋白相对表达量比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论lncRNA CYTOR可通过靶向miR-139-5p调控ABCG2和SOX8表达,从而促进三阴性乳腺癌细胞增殖。

TRBC1作为潜在靶点治疗T细胞来源肿瘤的研究进展

T细胞来源肿瘤具有侵袭性、易耐药且预后不良的特点,常规治疗后复发率高,目前对于其的治疗不存在特效药。若能改进早期诊断和治疗手段,将有效改善患者的预后。细胞免疫治疗对B细胞来源的血液系统肿瘤获得较高的治愈率。却因为缺乏合适的靶点对治疗T细胞来源血液系统肿瘤的免疫治疗效果不佳。最新发现的T细胞受体β链恒定结构域1(TRBC1)作为一个潜在的治疗靶点,给T细胞来源肿瘤的诊断和治疗带来希望。本文将对TRBC1在当前的疾病诊断和细胞免疫治疗中研究进展进行综述。

慢性粒细胞白血病病人TCRζ链表达特点

目的:建立实时定量PCR方法检测TCRζ链表达水平的方法,了解慢性粒细胞白血病(CML)外周血TCRζ链表达水平。方法:采用SYBR GreenⅠ荧光定量PCR,相对定量检测30例CML患者和30例正常人外周血的单个核细胞的TCRζ链表达情况,以β2微球蛋白基因(β2M)作为内参,根据相对定量公式:2-△△Ct计算CML病人与正常人TCRζ链表达差异倍数。结果:成功建立SYBR GreenⅠ荧光实时定量PCR检测TCRζ链表达检测技术。18例CML患者TCRζ链出现表达低于正常人,而12例CML患者TCRζ链出现表达高于正常人。结论:CML病人中TCRζ链表达水平可分为表达下调(60%)和表达上调(40%)2组,提示部分CML病人的细胞免疫缺陷可能与其TCRζ链表达下调有关。

猪T细胞受体α链基因的克隆、序列分析及其结构预测

旨在为研究猪T细胞受体分子结构与功能,并首次在国内克隆了猪T细胞受体α链基因。以GenBank上登载的猪T细胞受体（Tcell receptor,TCR）α链（AB087988）为参考序列,从甘肃合作猪外周血液淋巴细胞中用RT-PCR的方法克隆了TCR-α链基因（pTCR-α）。结果表明：克隆的TCR-α基因具有完整的ORF,全长819 bp,编码272个氨基酸,预测蛋白分子量为30 kDa,含18个强碱性氨基酸,23个强酸性氨基酸,87个疏水性氨基酸和103个极性氨基酸,含有一段20个氨基酸的信号肽序列;与GenBank上登载的TCR-α参考序列（AB087988）的同源性为94.6%,与其他具有完整ORF的猪TCR-α相比,同源性为54.4%-80.3%。推测可能是一新的TCR-α基因转录本。同时,应用生物信息学技术分析了其基因序列及编码蛋白的结构特征,这为猪T细胞受体分子结构与功能的研究奠定了基础。

石蜡包埋B细胞性恶性淋巴瘤组织克隆性免疫球蛋白重链基因重排检测研究

[目的]探讨克隆性免疫球蛋白重链(IgH)基因重排在B细胞性非霍奇金淋巴瘤(B鄄NHL)诊断中的价值。[方法]采用半巢式PCR方法,对81例B鄄NHL病例,36例反应性增生及12例非淋巴瘤组织样本进行克隆性免疫球蛋白重链基因重排检测,以上病例均为经福尔马林固定的石蜡包埋组织。[结果]81例B鄄NHL中68例IgH阳性(阳性率为83.95%),36例反应性增生均为多克隆性,12例非淋巴瘤组织样本结果IgH均为阴性。[结论]克隆性免疫球蛋白重链基因重排检测可以作为诊断恶性B细胞性非霍奇金淋巴瘤的有效分子标志。

链式CIK细胞对白血病K562细胞的体外杀伤活性

目的:研究细胞因子诱导的体外细胞经过链式激活后获得的链式CIK细胞对白血病K562细胞的杀伤效应。方法:采用血细胞单采机从外周血分离单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC),经过细胞因子诱导、扩增、培养得到链式CIK细胞,以CIK细胞作对照,检测链式CIK细胞的增殖能力,LDH释放法测定其对K562细胞的杀伤活性。结果:链式CIK细胞组在培养第5、第14天的细胞数低于CIK细胞组(P<0.01);链式CIK细胞对K562细胞的杀伤活性在效靶比40∶1和20∶1时分别为(56.1±2.24)%、(34.4±3.56)%,均低于CIK细胞(均P<0.01)。结论:链式CIK细胞是一种培养周期短、对白血病K562杀伤活性较弱的免疫细胞。

老年人淋巴细胞IL-2Rγ链的表达及其意义

Objective:To study the role of IL 2Rγ chain in the immuno senescence process Methods:8 young, aged from 18 to 35 years(average 24 9±5 8 years), and 17 old healthy people, aged from 65 to 79 years(average 69 4±4 2 years), had been selected for determination the proliferative responses of peripheral blood lymphocytes to PHA, the percentage and dynamic changes of CD132, CD45R positive cells, also, the gene expression of IL 2Rγ chain with RT PCR using the designed primers Results:The results showed that the PHA proliferative response of lymphocytes of aged people(0 199±0 055) were lower than that of young people(0 279±0 054), P=0 0012 The expression of IL 2Rγ chain on the lymphocytes surface decreased in aged people, 46 2%±7 7%, compared to young people, 68 0%±11 8%, P<0 001, It was verified from RT PCR result that the event occurred at transcription level The time dynamic curve of IL 2Rγ chain expression were different between aged and young people Conclusion:A preliminary conclusion would be drawn that the IL 2Rγ chain play an important role in the declined immune function of aged

SEA对PML-RARα多肽体外诱导外周血单个核细胞TCRζ链表达的作用

目的:了解金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)联合PML-RARα融合多肽体外诱导正常人外周血T细胞活化TCRζ链基因表达情况。方法:利用T细胞液体培养法分别与正常人外周血淋巴细胞加入PML-RARα融合多肽、SEA和SEA联合PML-RARα多肽诱导培养T细胞,其中SEA刺激包括培养初始或培养第5天加入SEA两组(PS、PSI),并设空白对照组(不加多肽及SEA)。分别收集各组培养20 d后细胞提取mRNA并合成cDNA,采用SYBR G reenⅠ荧光定量PCR和相对定量检测TCRζ链在不同组别T淋巴细胞中的表达情况,以β2微球蛋白基因(β2M)作为内参,根据相对定量公式:2-△△C t分析TCRζ链表达差异。结果:与空白组相比,联合诱导组在培养初始加入SEA及第5天加入SEA的培养T细胞中TCRζ链表达上升,而单独SEA诱导组的TCRζ链表达下降。结论:超抗原SEA联合PML-RARα多肽体外诱导T细胞可使TCRζ链基因表达水平升高,有望为研制急性早幼粒细胞白血病疫苗提供新的切入点。

SEA联合K562细胞体外诱导正常人脐带血单核细胞TCRζ链表达的作用

目的:研究金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)对K562细胞体外诱导脐血T细胞活化TCRζ链基因表达情况。方法:常规分离4例脐带血单核细胞,分别与抗CD3单克隆抗体、单纯K562细胞、SEA以及SEA联合K562细胞共培养,诱导T细胞活化增殖,并设空白对照组。刺激培养48 h后收集各组细胞提取mRNA并合成cD-NA,采用SYBR GreenⅠ荧光定量PCR和相对定量检测TCRζ链在不同组别T淋巴细胞中的表达情况,以β2微球蛋白基因(β2M)作为内参,根据相对定量公式:2-ΔΔCt计算TCRζ链表达差异倍数。结果:抗CD3单抗组、K562细胞组、SEA组、SEA联合K562细胞组诱导培养T细胞中TCRζ链表达差异倍数分别是(4.52±0.96)、(1.65±0.26)、(1.43±0.44)、(3.41±0.30),表明各组均有活化T细胞的作用,但各组TCRζ链表达水平有差异,其中SEA联合k562细胞组的T细胞ζ链基因表达均明显高于单纯k562组及单纯SEA组(P<0.01)。结论:超抗原SEA有助于增强K562细胞体外诱导T细胞活化作用。

T细胞淋巴瘤T细胞受体γ链基因重排的检测

目的 探讨T细胞淋巴瘤T细胞受体γ链基因重排的情况。方法 用免疫组化标记筛选 30例T细胞淋巴瘤、2例高度可疑为T细胞淋巴瘤和 10例淋巴结反应性增生 ,采用聚合酶链式反应扩增方法检测T细胞受体γ链基因重排。结果 30例T细胞淋巴瘤中 2 7例和 2例高度可疑为T细胞淋巴瘤均出现T细胞受体γ链基因重排 ,10例淋巴结反应性增生均无T细胞受体γ链基因重排。结论 T细胞淋巴瘤病变中存在T细胞单克隆增生 ,支持肿瘤单克隆起源学说 ;T细胞受体γ链基因重排检测是区分T细胞淋巴瘤和淋巴结反应性增生的有效方法 ,且对T细胞淋巴瘤疑难病例的诊断有帮助。

MAIT细胞恒定链Jα33在IgA肾病患者中的表达及意义

目的探讨黏膜相关恒定链T淋巴细胞(MAIT)恒定链Jα33在IgA肾病(IgAN)患者中的表达及其临床意义。方法收集2014年1月1日至2015年12月31日宜昌市中心人民医院住院患者肾脏标本共55例,其中未经免疫治疗的不同程度蛋白尿IgA肾病患者肾穿标本30例,经治疗有效和无效的IgA肾病患者肾穿标本各10例,选择因车祸引起腹部复合性钝性损伤并发有肾脏损伤需进行肾脏部分切除的住院患者肾脏标本5例作为对照组,分别检测MAIT细胞恒定链Jα33在患者外周血及肾脏组织中的表达。结果与对照者比较,MAIT细胞恒定链Jα33 mRNA及蛋白水平在IgAN患者肾组织中明显上调,差异具有统计学意义(P<0.05),而在外周血中的表达比较差异无统计学意义(P>0.05);MAIT细胞恒定链Jα33在不同程度蛋白尿IgAN患者肾脏组织中的表达差异无统计学意义(P>0.05);与未经免疫治疗的IgAN患者比较,MAIT细胞恒定链Jα33在治疗有效的IgAN患者肾脏组织中的表达水平明显下调,差异具有统计学意义(P<0.05),而与治疗无效组的表达比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 IgAN患者肾组织MAIT细胞恒定链Jα33表达量增多,经治疗有效后MAIT细胞恒定链Jα33表达减少;Jα33+MAIT可能参与IgAN发病过程。

细胞色素B-245α链及胆固醇酯转运蛋白基因多态性与广泛型侵袭性牙周炎易感性的关系

目的:探讨细胞色素B-245α链(cytochrome B-245 alpha chain,CYBA)rs4673及胆固醇酯转运蛋白(cholesteryl ester transfer protein,CETP)rs12720922基因多态性与广泛型侵袭性牙周炎(generalized aggressive periodontitis,GAgP)易感性的关系,为筛选GAgP的高危人群提供遗传学依据。方法:采用病例对照研究方法,纳入GAgP患者372例和健康对照者133名。采用基于基质辅助的激光解吸电离飞行时间质谱技术进行CYBA rs4673及CETP rs12720922基因型测定,不同基因型与GAgP易感性的关系采用多重逻辑回归模型分析,对于两个基因多态性位点在GAgP易感性方面的交互作用采用似然比检验进行分析,交互作用模型采用相乘模型。结果:372例GAgP患者平均年龄(27.5±5.2)岁,包括男性152例,女性220例;133名健康对照者平均年龄(28.8±7.1)岁,包括男性53例,女性80例;两组人群年龄差异有统计学意义(P<0.05),性别构成比差异无统计学意义(P>0.05)。CYBA rs4673位点CT/TT基因型频率在GAgP组显著高于对照组[18.0%(66/366)vs.10.6%(14/132),P<0.05];调整年龄、性别后,与CC基因型个体相比,CT/TT基因型个体患GAgP风险明显增高(OR=1.86,95%CI:1.01~3.45,P<0.05)。CETP rs12720922位点基因型(GG、AA/AG)频率在GAgP组和对照组间差异无统计学意义(P>0.05)。CYBA rs4673和CETP rs12720922在GAgP易感性方面存在显著交互作用,与CYBA rs4673CC基因型及CETP rs12720922 AA/AG基因型个体相比,当两个位点分别为CT/TT基因型及GG基因型时,个体的GAgP患病风险显著增加(OR=3.25,95%CI:1.36~7.75,P<0.01)。结论:CYBA rs4673 CT/TT基因型与GAgP易感性相关,且与CETP rs12720922 GG基因型在GAgP易感性方面存在显著交互作用。

免疫球蛋白重链和T细胞受体γ基因重排在非霍奇金淋巴瘤中检测的临床意义

目的 :探讨免疫球蛋白重链 ( Ig H)和 T细胞受体 γ( TCRγ)基因重排在非霍奇金淋巴瘤( NHL )中的检测意义。方法 :用 PCR方法检测 2 5例 NHL和 1例反应性淋巴结炎患者 ,及 2 0例正常人骨髓、周围血和 /或淋巴结单个核细胞 ( MNCs)中克隆性 Ig H、TCRγ基因重排。结果 :克隆性Ig H和 /或 TCRγ基因重排在 2 5例 NHL 中检出为 84.0 % ( 2 1 / 2 5 ) ;克隆性 Ig H基因重排在 B-NHL和 T-NHL中检出分别为 86.7% ( 1 3 / 1 5 )和 2 0 .0 % ( 2 / 1 0 ) ,克隆性 TCRγ基因重排分别为5 3 .3 % ( 8/ 1 5 )和 80 .0 % ( 8/ 1 0 )。 1例反应性淋巴结炎和 2 0例正常人均未检测到 Ig H和 TCRγ基因重排。结论 :Ig H、TCRγ基因重排检测有助于 NHL 的诊断和鉴别诊断 ,及发现 NHL

猪T细胞受体γ链基因的克隆及生物信息学分析

目的:克隆猪T细胞受体γ链(pTCR-γ)基因,用以研究猪T细胞受体分子结构与功能。方法与结果:以GenBank上登载的pTCR-γ基因为参考序列,用RT-PCR法从猪外周血淋巴细胞中克隆pTCR-γ基因。序列分析表明,pTCR-γ基因开放读框为1026bp,编码341个氨基酸残基,含有由23个氨基酸残基构成的信号肽序列;与参考序列相比,在核苷酸和推导氨基酸序列上的同源性分别为95.6%和88.8%;系统进化分析发现,该基因与绵羊、恒河猴、人、马、牛的同源性相对较高,与褐鼠、家犬、家鼠、家猫的同源性次之,而与禽类、鱼类的同源性最低;生物信息学结构预测表明猪T细胞受体γ链含2个结构域,其中1个为IG_LIKE1结构域(IGv结构域),由第14～114位共101个氨基酸残基组成;另一个为IG_LIKE2结构域(IGc结构域),由第143～238位共96个氨基酸残基组成。结论:克隆并应用生物信息学技术分析了猪T细胞受体γ链基因序列及编码蛋白的结构特征,为进一步研究γ链的结构与功能奠定了基础。

链式激活的免疫细胞治疗恶性肿瘤患者的护理

对120例恶性肿瘤患者进行链式激活的免疫细胞生物治疗。治疗后3例出现皮肤过敏,6例因病情严重未按疗程完成细胞治疗,111例患者顺利完成细胞治疗,无其他不良反应。治疗前积极健康教育引导患者及家属配合治疗,细胞制备、输注中严格无菌操作防止细胞液污染、预防并发症发生,同时全程加强心理护理,提高患者对治疗的信心,对链式激活的免疫细胞治疗的顺利开展起着积极作用。

lncRNA MIF-AS1调节miR-423-5p/PYCR1轴对前列腺癌细胞恶性生物学行为的影响

目的探究长链非编码RNA(lncRNA)巨噬细胞移动抑制因子反义RNA1(MIF-AS1)调节miR-423-5p/吡咯啉-5-羧酸还原酶1(PYCR1)轴对前列腺癌(PC)细胞恶性生物学行为的影响。方法体外培养PC3细胞,敲低MIF-AS1或下调miR-423-5p表达,检测PC患者肿瘤组织与癌旁组织和细胞中MIF-AS1、miR-423-5p和PYCR1 mRNA的表达;检测细胞增殖、凋亡、迁移与侵袭;Western blot检测PYCR1蛋白表达;验证miR-423-5p和MIF-AS1、PYCR1的关系。结果MIF-AS1、PYCR1 mRNA在肿瘤组织中呈高表达,miR-423-5p呈低表达。沉默MIF-AS1可抑制PC3细胞增殖、迁移、侵袭及PYCR1表达,上调miR-423-5p表达,诱导细胞凋亡(P<0.05);抑制miR-423-5p表达可逆转沉默MIF-AS1对PC3细胞恶性行为的抑制作用(P<0.05)。MIF-AS1、PYCR1与miR-423-5p存在靶向调控关系。结论沉默MIF-AS1可能通过上调miR-423-5p来抑制PYCR1表达,抑制PC细胞的恶性行为。

基于混沌链C细胞自动机的加密方法研究

提出一种基于混沌细胞自动机的分组密码算法,采用固定边界条件下反向加密正向解密的Feistel迭代方式,计算机模拟的实验结果证明:该算法在固定密钥的密文差错扩散率和固定明文的密文差错扩散率接近50%,可有效对抗差分攻击、穷举明文和穷举密钥攻击。

牙鲆T细胞抗原受体(TCR)β链同源cDNA的克隆

从牙鲆外周血淋巴细胞cDNA文库中克隆TCRβ1319bp同源cDNA序列并对其基因结构进行生物信息学分析。RT-PCR其编码区为942bp,编码314个氨基酸,编码区包括V、D、J和C区4个基因片段。TCRVβ片段主要包括从21～115位氨基酸残基的95个氨基酸序列,Jβ区与哺乳动物的Jβ区高度保守,在位于Vβ和Jβ之间的Dβ区中没有发现8碱基保守序列(GGACAGGG),CDR3β氨基酸序列为GTRILYE。牙鲆TCRCβ片段共有179个氨基酸残基,缺失位于Cβ细胞外区和临近区域的2个5～9氨基酸弹性区域。牙鲆TCRCβ片段的铰链区有6个氨基酸残基,缺少半胱氨酸位点,含Lys271保守位点。经RT-PCR检测,在脾、外周血和前肾中都发现TCRβ的表达,肌肉和肝中均未克隆到目的片段。

人肝细胞生长因子β链在E.coli中的表达、纯化及活性测定

目的 为获得重组人肝细胞生长因子β(rhHGF-β)的高效表达体系,分离纯化rhHGF-β,以期研究其在生物学和医学中的作用。方法 从人胎肝组织中提取总RNA,采用RT-PCR技术,对HGF-β基因加工修饰,与载体PBV220重组,构建rhHGF-β的表达载体,转化大肠杆菌,筛选rhHGF-β的高效表达菌株。对rhHGF-β进行粗纯化,透析复性后MTT法检测生物活性。结果 获得了rhHGF-β完整的cDNA序列,重组克隆的酶切结果与设计一致。目的 蛋白的表达量占全菌蛋白的30％,粗纯化后纯度达90％,复性产物能刺激大鼠肝细胞的增殖。结论 建立了rhHGF-β的表达体系,获得了具有生物活性的rhHGF-β,为进一步大量制备和研究HGF的生物学功能提供了重要的实验数据。