二代测序技术在用于脊髓灰质炎病毒分离的细胞系交叉污染鉴定中的应用

目的应用二代测序(Next generation sequencing,NGS)技术鉴定用于脊髓灰质炎(脊灰)病毒分离的RD和L20B细胞种属来源,以判断细胞间是否存在交叉污染。方法选用新复苏的RD和L20B细胞作为对照组,传代多代的RD和L20B细胞作为实验组,观察在接种两种非脊灰肠道病毒株后的细胞形态和细胞病变(Cytopathic effect,CPE),检测细胞的支原体和细胞对脊灰病毒的敏感性;利用NGS技术对细胞进行高通量测序和比对,以鉴定细胞的种属来源、识别交叉污染。结果与对照组RD细胞相比,实验组RD细胞形态出现膨胀、条柱形等变化,实验组L20B细胞形态相似;接种两种非脊灰肠道病毒毒株后,对照组RD细胞发生CPE而L20B细胞未发生CPE,实验组两种细胞均发生CPE。对照组和实验组两种细胞支原体检测均阴性,且敏感性结果均处于正常范围内。经NGS技术鉴定,实验组RD和L20B细胞均属于人源细胞,L20B细胞的种属来源与预期不符。结论实验组RD和L20B细胞间存在交叉污染;NGS技术能够快速、准确、全面地鉴定细胞系的种属来源,及时识别细胞间交叉污染,可进一步推动脊灰病毒分离用细胞系质量控制工作。