鸡传染性法氏囊病活疫苗(B87株)病毒含量细胞间接免疫荧光方法的建立

为测定鸡传染性法氏囊病活疫苗(B87株)的病毒含量,采用Vero细胞建立鸡传染性法氏囊病活疫苗(B87株)病毒含量细胞间接免疫荧光方法,测定细胞半数感染量(TCID50)。通过与传统鸡胚半数致死量(ELD50)方法进行敏感性和相关性比较,间接免疫荧光方法具有更高的敏感性,两种方法的相关系数r为0.823。间接免疫荧光方法的建立为该疫苗的检验提供了一种新途径。

鸡马立克氏病火鸡疱疹病毒间接免疫荧光检测方法的建立与比较

为建立鸡马立克氏病火鸡疱疹病毒(MDV HVT)的间接免疫荧光方法,将MDV HVT病毒接种96孔细胞板培养(CEF),72 h后用鸡抗马立克氏病病毒阳性血清作为一抗和兔抗鸡荧光抗体作为二抗,对反应条件进行优化,建立了间接免疫荧光方法(IFA)。并与经典的马立克蚀斑计数方法进行病毒滴度的测定比较,运用统计学方法分析,P小于0.05,相关系数为0.995,说明两种方法相关性很好,两种方法均可用于马立克氏病病毒的滴度测定。IFA方法较蚀斑计数方法操作简便快捷,可代替蚀斑计数方法用于马立克氏病活疫苗的病毒含量的初步测定,同时为2025年版《中国兽药典》马立克氏病活疫苗增加IFA鉴别检验方法积累实验数据。

弓形虫GRA1蛋白单克隆抗体的制备与间接免疫荧光检测方法的建立

本研究旨在利用原核表达系统表达弓形虫GRA1蛋白并制备单克隆抗体,用于弓形虫病的诊断及GRA1蛋白功能研究。以弓形虫cDNA为模板,设计引物扩增GRA1基因片段,构建原核表达质粒,转化至BL21(DE3)感受态细胞,利用IPTG诱导表达蛋白并纯化。用纯化后的重组蛋白作为免疫原免疫小鼠制备单克隆抗体并鉴定。以制备的弓形虫GRA1单克隆抗体为一抗,FITC标记的羊抗鼠IgG为二抗,优化反应条件建立弓形虫间接免疫荧光检测方法。结果表明:成功构建了原核表达质粒pET-30a(+)-TG-GRA1;SDS-PAGE结果显示,重组蛋白GRA1为可溶性表达,分子量约为27 kDa;Western blot结果显示重组蛋白GRA1可被犬弓形虫阳性血清识别,表明GRA1有良好的反应原性。成功筛选出5株单克隆细胞株,分别命名为1-B10、2-C3、2-C9、3-C11以及6-E6,并对它们进行亚型鉴定,其中2-C3、2-C9、3-C11为IgG1,1-B10、6-E6为IgM;IFA结果显示单克隆抗体具有良好的反应原性;建立了mAb 2-C9最佳稀释浓度为0.875μg/mL、最佳孵育时间为1.5 h,FITC标记的羊抗鼠IgG最佳稀释倍数为1∶400、最佳孵育时间为1.5 h的间接免疫荧光检测方法,并对15只小鼠的肝脏组织切片进行检测,结果表明该方法可用于弓形虫动物组织切片的检测,有助于弓形虫感染的实验室诊断及弓形虫的动态分布研究。

活细胞间接免疫荧光法检测再生障碍性贫血患者T淋巴细胞亚群方法的改进

目的探讨基层实验室检测再生障碍性贫血患者T淋巴细胞亚群的最佳实验方法。方法首先在普通光学显微镜上加装落射荧光装置改装成了荧光显微镜，用改良后的活细胞间接荧光法检测了26例再生障碍性贫血患者的T淋巴细胞亚群。结果26例再障患者CD3、CD4、CD8的平均百分比和CD4／CD8的平均比值分别是63．5±6、32．5±7．5、37、5±8．5、0、85±0．7；20例正常对照组CD3、CD4、CD8的平均百分比和CD4／CD8的平均比值分别是66、0±8．1、42、5±9、31．5±7、1．5±0、4。经SPSS11．5软件处理，t检验分析，其各组P值〈0．05，结果有显著性差异。

应用间接免疫荧光技术检测人巨细胞病毒-PP65抗原的临床意义

目的:探讨人巨细胞病毒(HCMV)-PP65抗原检测的临床意义。方法:利用间接免疫荧光技术对本院56例住院患者外周血HCMV-PP65抗原进行检测,其中器官移植组35例(肾移植患者13例,肝移植患者14例,骨髓移植患者8例),其他疾病组21例。设本院健康体检者20例为正常对照组。结果:56例标本中有25例检出HCMV-PP65抗原阳性,阳性率为45%。25例抗原阳性患者中,有临床症状的患者外周血中的HCMV-PP65抗原阳性细胞数明显高于无临床症状的HCMV-PP65抗原阳性的患者,两者比较差异有显著性(P<0.01)。正常对照组无一例阳性。结论:HCMV-PP65抗原检测具有简便、敏感的特点,其结果与患者的临床症状相关,可以作为监测HCMV活动性感染的指标,为临床提供诊治依据。

间接免疫荧光检测系统性红斑狼疮患者血清抗巨核细胞抗体

本研究通过检测系统性红斑狼疮(SLE)患者血清中抗巨核细胞抗体,以探讨SLE患者发生血小板减少的发病机制。应用间接免疫荧光法检测36例SLE伴血小板减少患者中的血清抗巨核细胞抗体,并与30例血小板正常的SLE患者和30名正常人对照。结果表明,血清抗巨核细胞抗体阳性在36例SLE伴血小板减少患者中占7例(19.4%),在30例血小板计数正常的SLE患者中有2例(6.7%),及在正常人中有1例(3.3%),后者与SLE伴患者血小板减少患者相比,差异有统计学意义p=0.046),但伴有或不伴有血小板减少的SLE患者之间差异无统计学意义(p=0.132)。结论 :SLE患者血清存在抗巨核细胞的自身抗体,并与部分患者发生血小板减少有关,应扩大病例数作出肯定结论 ,进一步了解SLE所致血小板减少的机理。

4种自身抗体对间接免疫荧光法检测抗中性粒细胞胞质抗体的影响

目的:观察抗核抗体、抗线粒体抗体、抗高尔基体抗体和抗核糖体P蛋白抗体对间接免疫荧光(ⅡF)法检测抗中性粒细胞胞质抗体(ANCA)结果的影响。方法:用ⅡF法检测4种自身抗体阳性血清可能出现的ANCA荧光图谱;用ELISA法确认上述4种血清的靶抗原。结果:用乙醇固定的中性粒细胞检测ANCA受自身抗体的影响较大,甲醛固定的中性粒细胞受到的影响较小,同时应用猴肝切片可将这4种自身抗体与ANCA区别。结论:联合应用猴肝切片与乙醇和甲醛固定的中性粒细胞抗原片,有助于准确判断ANCA结果。

间接免疫荧光法检测抗中性粒细胞胞浆抗体

为了解ＲＡ和ＳＬＥ患者中ＡＮＣＡ阳性情况，我们建立间接免疫荧光法（ＩＩＦ），对两种疾病血清中的ＩｇＧ型和ＩｇＭ型荧光抗体进行检测，并与正常人对照。现将结果报道如下。１材料与方法１１检测对象正常献血员血清４２份，ＲＡ患者血清４７份，ＳＬＥ患者血清３７...

牦牛肠道病毒间接免疫荧光检测方法的建立与初步应用

为了建立准确、快速的牦牛肠道病毒(yak enterovirus)检测方法,利用本实验室已获得的一株牦牛肠道病毒SWUN-AB001,免疫健康兔获得抗SWUN-AB001高免血清,建立了一种检测牦牛肠道病毒的间接免疫荧光试验(IFA)方法,并对其工作条件和时间进行筛选,优化出最佳条件。采用该方法对40份临床腹泻样本进行了牦牛肠道病毒的检测,并与RT-PCR的检测结果进行比较。结果表明:获得的高免血清在该IFA方法中的最佳稀释度为1∶100,工作时间为30min;FITC标记的羊抗兔IgG(二抗)的稀释度为1∶800,工作时间为45min,牦牛肠道病毒特异性亮绿色荧光颗粒清晰可见;同时与牛病毒性腹泻病毒、轮状病毒、大肠杆菌、沙门菌、葡萄球菌和空肠弯曲杆菌反应均未见明显的荧光颗粒;该方法能够检测SWUN-AB001病毒的最低浓度约为20TCID50·mL-1;该方法的临床检测结果与RT-PCR的检测结果之间无差异(P=0.329)。结果表明该方法特异性强、重复性好、灵敏度高,为该病毒在牦牛养殖地区的流行病学调查、临床诊断和快速诊断试剂的开发奠定了基础。

化脓隐秘杆菌间接免疫荧光方法的建立及应用

通过制备兔抗化脓隐秘杆菌(Trueperella pyogenes)高免血清,筛选固定方法、封闭液、洗涤液、抗体稀释度、抗体孵育时间等应用条件,建立一种检测化脓隐秘杆菌的间接免疫荧光方法。结果表明:用冷丙酮作固定剂,10%山羊血清作封闭液,0.05%Tween–20的0.01 mol/L pH 7.4 PBS(磷酸缓冲盐溶液)作洗涤液,兔抗化脓隐秘杆菌高免血清(一抗)1∶50稀释,37℃作用2 h,羊抗兔FITC(二抗)1∶100稀释,37℃作用2 h,草酸铵结晶紫衬染菌体3 min,对纯培养物化脓隐秘杆菌检测,可见清晰的特异性荧光,能区分溶血隐秘杆菌、伪结核棒状杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、沙门氏菌、猪链球菌;在人工感染化脓隐秘杆菌死亡小鼠的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏及发病山羊临床病料中均能检出化脓隐秘杆菌。

间接免疫荧光法和酶联免疫吸附试验对抗中性粒细胞胞质抗体检测方法的结果比较

目的探讨临床间接免疫荧光法和临床酶联免疫吸附试验对抗中性粒细胞胞质抗体临床检测方法的结果比较。方法选取2018年1月至2019年1月在沈阳金域医学检验所有限公司实验室诊断部的抗中性粒细胞胞质抗体临床检测样本200例,并进行临床间接免疫荧光法(IIF)和临床酶联免疫吸附法(ELISA)检测抗中性粒细胞胞质抗体(ANCA)的临床一致性比较。结果两种临床方法的一致性较好且差异具有临床统计学意义(P<0.05)。结论临床间接免疫荧光法和临床酶联免疫吸附试验法单独检测抗中性粒细胞胞质抗体均有漏检,临床联合检测的效果最佳,值得在临床上进一步推广。

探讨改进的免疫荧光方法检测尿液足细胞的实用性

目的介绍一种改进的尿液足细胞检测方法并探讨其临床实用性。方法采用免疫荧光法,在验证足细胞抗体特异性的基础上,从制片和荧光染色两方面对我实验室原检测尿足细胞方法加以改进,并对改进前后尿足细胞检出率和平均检出足细胞数量进行比较。结果①小鼠抗人Podocalyxin(PCX)单克隆抗体仅与肾组织的肾小球足细胞及肾脏病患者尿中足细胞特异结合;②尿沉渣涂片改为甩片,沉渣中有形成分调至适度可以减少脱片;③荧光染色同时用PI复染细胞核,可显著提高足细胞的分辨率,在狼疮肾炎Ⅳ型患者中,方法改进后平均足细胞数(16.85±12.56)个/20HP,明显高于方法改进前的(3.16±3.06)个/20HP,两组比较有显著性差异(P<0.05)。结论小鼠抗人PCX抗体可用于鉴别尿足细胞,经改进的方法能明显提高足细胞检出率。

犬腺病毒间接免疫荧光检测方法的建立

用犬腺病毒制作的抗原玻片,通过确定最佳一抗和荧光抗体浓度,特异性试验和敏感性试验,建立了犬腺病毒间接免疫荧光方法,可用于狐狸脑炎的诊断。

猪瘟病毒间接免疫荧光检测方法的建立

为了建立猪瘟病毒(CSFV)检测的间接免疫荧光(IFA)法,试验以猪瘟阳性血清为一抗、荧光素FITC标记的羊抗猪IgG为二抗,将CSFV接种于猪血管内皮细胞(EC)后,并对反应条件进行优化。结果表明:IFA法最佳工作条件为猪瘟阳性血清1∶200倍稀释,荧光素FITC标记的羊抗猪IgG荧光抗体1∶50倍稀释;用建立的IFA法检测CSFV感染的EC为阳性,而用猪圆环病毒(PCV)和猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)感染的EC检测结果为阴性。说明建立的检测细胞培养中CSFV抗原的IFA法具有敏感性、特异性、简便快速等优点,可用于CSFV在EC上的感染和定位研究。

间接免疫荧光法检测IgG型抗内皮细胞抗体在川崎病诊断中的意义

目的探讨IgG型抗内皮细胞抗体(IgG-AECA)在川崎病诊断中的意义。方法采用间接免疫荧光法(IIF),以人脐静脉内皮细胞为底物抗原,分别检测2019年1—5月于南京医科大学附属儿童医院就诊的80例川崎病病儿急性期和恢复期外周血中IgG-AECA的表达情况,其中合并冠状动脉损伤(CAL)者29例。同时选取40例因呼吸道感染发热病儿和30例择期手术病儿作为一般发热组和正常对照组。结果急性期川崎病组IgG-AECA阳性率为41.2%(33/80),显著高于一般发热组[15.0%(6/40)]和正常对照组[0%(0/30)];与急性期相比,川崎病病儿恢复期IgG-AECA阳性率[20.0%(16/80)]下降,但仍高于一般发热组和正常对照组(P<0.05),伴有CAL的川崎病病儿急性期血清IgG-AECA阳性率为55.2%(16/29),明显高于无CAL病儿[29.0%(15/51)](P<0.05)。此外,IgG-AECA阳性川崎病病儿白细胞总数(WBC)、C反应蛋白(CRP)和血细胞沉降率(ESR)等炎性指标明显高于AECA阴性病儿(P<0.05),IgG-AECA高滴度组病儿外周血WBC、CRP和ESR高于低滴度组(P<0.05)。结论IgG-AECA在川崎病病儿特别是合并CAL病儿中有较高的阳性率,表明其参与了川崎病血管炎及CAL的发生,血清AECA的检测对川崎病早期诊断具有一定的参考价值。

单克隆抗体间接免疫荧光(IFA)检测猪附红细胞体

为建立利用单克隆抗体检测猪附红细胞体病的间接免疫荧光(IFA)方法,用抗猪附红细胞体的单克隆抗体,对48份疑似猪附红细胞体感染的病猪猪血进行免疫荧光检测,并与血涂片镜检及PCR检测方法进行比较,结果显示IFA检测的阳性率为68.75%,与PCR检测阳性率为77.08%符合率较高,比血涂片的瑞氏和姬姆萨染色镜检阳性率高出近30个百分点;而用猪肺炎支原体、猪链球菌和猪巴氏杆菌作对照,结果均呈阴性。建立的用抗猪附红细胞体的单克隆抗体检测猪附红细胞体病的IFA特异性强,敏感性高;检测临床样品的结果准确可靠。

细胞滴片间接免疫荧光实验技术的探讨

目的:探讨在有限条件下简化细胞滴片间接免疫荧光实验操作技术。方法:以大鼠胸腺细胞为抗原,兔抗鼠抗血清为一抗,FITC羊抗兔IgG荧光抗体为二抗做细胞滴片的间接免疫荧光染色,荧光显微镜观察结果。结果:细胞悬液浓度在105～106个/ml为宜,新鲜细胞固定后可长期保存备用,冻存细胞则不能使用;固定剂可选10%甲醛、甲醇等,也可不用固定剂;粘片剂也可不用;平整的试管架代替湿盒更方便。结论:细胞滴片的间接免疫荧光实验操作步骤可简化,以减少实验开支。

快速诊断呼吸道合胞病毒感染——间接免疫荧光法测定脱落细胞

本文报告用免疫荧光抗体技术(IFAT)直接检测气管分泌物中脱落细胞病毒抗原,并与常规病毒分离和血清学检查进行比较,确定IFAT可否作为呼吸道合胞病毒(RSV)感染的快速诊断方法。

抗中性粒细胞胞浆抗体的间接免疫荧光法检测

目的建立简便、准确的抗中性粒细胞胞浆抗体检测方法。方法用2%冰醋酸破坏红细胞提取白细胞制得白细胞抗原片,以1:40稀释的抗人IgG荧光抗体进行染色,检测80例SLE患者及40例正常对照组血清的抗中性粒细胞胞浆抗体,并与德国欧蒙公司提供的ANCA试剂盒进行对比试验。结果80例SLE患者血清中检出13例P-ANCA阳性,阳性率16.2%,与进口试剂结果相一致。结论①研制的ANCA间接免疫荧光检测方法结果可靠、操作简便;②ANCA的检测对系统性红斑狼疮伴发小血管炎的诊断有一定的价值。

用Hela细胞检测Bip抗体间接免疫荧光法的建立

目的建立抗免疫球蛋白结合蛋白(Bip)抗体检测的间接免疫荧光法(IIF),为探讨其在类风湿关节炎(RA)中的意义做出方法学准备。方法以Hela细胞为抗原基质固定于载片上,加入待测稀释血清温育,待抗原抗体特异结合后加入荧光素标记的抗人IgG与待测Bip抗体结合,最后置荧光显微镜下观察Hela细胞胞浆有无特异荧光出现。结果RA患者血清检测中可见到Hela细胞胞浆中出现特异性荧光,而健康献血员血清检测中未发现Hela细胞胞浆中的特异性荧光,实验所见荧光模式与文献报道相符。结论以Hela细胞为抗原基质的间接免疫荧光法能够对血清中Bip抗体进行检测。