冰片对血脑屏障体外模型细胞间紧密连接和细胞吞饮囊泡的影响

目的探讨冰片开放血脑屏障的机制。方法制备含冰片的家兔血清 ,应用马丁达比狗肾上皮细胞系作为血脑屏障的体外模型 ,观察冰片对血脑屏障细胞间紧密连接、细胞吞饮囊泡的影响。结果冰片能使血脑屏障体外模型细胞间紧密连接结构减少、细胞吞饮囊泡数量增加、粒径增大 ,冰片血清处理 4h后先打开细胞间紧密连接 ,处理 2 4h后才对细胞吞饮造成影响 ;移除冰片血清 2 4h后上述影响即消失 ,说明上述作用具有可逆性。结论冰片能明显使血脑屏障细胞间紧密连接松散 ,使物质经细胞间通道转运加速 ;冰片能明显使血脑屏障细胞吞饮小泡数量增多、体积增大 。

高甘油三酯血症对大鼠急性胰腺炎模型中胰腺导管上皮细胞间紧密连接的影响研究

目的研究高甘油三酯血症(hypertriglyceridemia,HTG)对大鼠急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)模型胰腺组织细胞间紧密连接(tight junctions,TJs)的影响。方法48只4周龄雄性SD大鼠随机分成普通饲养组(24只)和高脂饲养组(24只),4周后普通饲养组随机分为C组和AP组,高脂饲养组随机分为HTG组和高甘油三酯血症急性胰腺炎(HTGP)组。AP组和HTGP组经腹腔注射雨蛙肽建立AP模型,C组和HTG组经腹腔注射同等剂量的生理盐水,分别于造模24 h、48 h处置大鼠,采用HE染色法观察胰腺病理改变,免疫组织化学法检测胰腺组织中TJs蛋白脂解刺激脂蛋白受体(LSR)、Tricellulin蛋白(TRIC)、ZO-1、occludin、claudin-7定位及表达,透射电镜观察胰腺导管上皮细胞间TJs变化情况。结果高脂饲养组的大鼠血清甘油三酯(triglyceride,TG)较普通饲养组明显升高(P<0.05);HTG组胰腺组织病理评分高于C组(P<0.05),相同时点HTGP组胰腺组织病理评分高于AP组,但差异无统计学意义(P>0.05);HTG组LSR、TRIC表达显著低于C组(P<0.05),AP组和HTGP组的24 h时点LSR、TRIC、occludin、claudin-7表达均低于相应对照组(P<0.05),HTGP组24 h时点LSR和TRIC的表达显著低于AP组的对应时点(P<0.05);透射电镜观察AP组和HTGP组的24 h时点,发现主胰管上皮细胞TJs较C组和HTG组减少、细胞间隙增宽,且HTGP组比AP组的细胞间隙增宽更明显。结论TJs蛋白LSR、TRIC、ZO-1、occludin、claudin-7在HTG及HTGP大鼠胰腺组织中表达较非高脂模型下降,其中以三细胞间紧密连接(tricellular tight junctions,tTJs)蛋白LSR及TRIC下降明显,提示HTG可能减弱胰腺组织的tTJs,进而加重胰腺组织损伤。

上皮细胞黏附分子增强细胞间紧密连接促进乳腺癌细胞耐药

乳腺癌是致死率很高的恶性肿瘤,由ABCG2(ATP-binding cassette G2)介导的多药耐药(multidrug resistance,MDR)是导致其化疗失败的重要原因,探讨ABCG2介导的耐药机制并探寻其关键分子是当前亟待解决的难题。上皮细胞黏附分子(epithelial cell adhesion molecule,EpCAM)参与多种肿瘤耐药,且与乳腺癌MDR密切相关,但它在ABCG2介导的乳腺癌耐药中的作用尚未阐明。本研究目的在于探究EpCAM对于ABCG2介导的乳腺癌细胞的多药耐药的调节作用及其机制。CCK8细胞毒性结果证实,相对于人乳腺癌药物敏感株MCF-7,耐药株MCF-7/MX对米托蒽醌(mitoxantrone,MX)的耐药性显著增强;Western印迹结果显示,与MCF-7相比,MCF-7/MX细胞中ABCG2高表达,EpCAM表达上调。siRNA法敲低MCF-7/MX细胞中EpCAM可下调其ABCG2表达,并恢复对MX的敏感性。倒置显微镜观察细胞形态,发现敲低EpCAM可减少MCF-7/MX细胞间连接。免疫荧光双染法观察到EpCAM与密封蛋白1(claudin 1)在MCF-7/MX细胞共定位;进一步Western印迹结果表明,敲低EpCAM减少MCF-7/MX细胞中密封蛋白1表达。综上所述,EpCAM可能通过与密封蛋白1相互作用,增强细胞间紧密连接,促进ABCG2介导的乳腺癌多药耐药。

细胞间紧密连接蛋白在结肠癌中的研究进展

细胞间紧密连接(TJ)是细胞间连接的主要结构,通过双细胞间紧密连接(bTJ)和三细胞间紧密连接(tTJ)两种形式发挥作用。密封蛋白(Claudin)家族、闭合蛋白(occludin)、闭锁小带蛋白(Zos)、三细胞紧密连接蛋白(tricellulin)、脂解刺激脂蛋白受体(LSR)、连接粘附分子(JAMs)等多种蛋白被发现是TJ发挥功能的主要因子。因此,深入研究TJ相关蛋白与各信号通路间的相互作用并鉴定出有意义的蛋白分子将有助于进一步阐明结肠癌细胞的发生发展机制。

Occludin蛋白与细胞间紧密连接关系及其临床意义

细胞间紧密连接(tight junctions)广泛存在于上皮细胞及内皮细胞之间,其作用是保持细胞间结构的完整性,确保其功能的正常发挥,紧密连接上有很多种蛋白,occludin蛋白是其中主要蛋白之一,occludin蛋白的结构发生变化会导致紧密连接结构及功能的改变,而紧密连接结构与功能的紊乱是很多临床疾病共同的病理生理学特点,如肿瘤、中风及炎症性肺疾病。Occludin蛋白的结构及功能的改变受很多机制的调控,本文主要对occludin蛋白的结构、功能、调控机制及其与紧密连接之间的关系进行叙述。

紧密连接蛋白Claudin-2在肾脏中的研究进展

紧密连接蛋白Claudin-2是构成细胞间紧密连接的重要蛋白分子,在维持细胞极性和紧密连接的屏障功能方面具有重要作用。Claudin-2在细胞旁路孔通道形成、阳离子通透及水分转运方面均有重要作用,并参与多种肾脏有关疾病的发生与发展。本文对肾脏中Claudin-2近10年的相关研究进展进行综述,以便对Claudin-2有一较全面的了解。

上皮紧密连接与炎性肠病的研究进展

炎症性肠病(IBD)主要是一组反复发作的慢性非特异性肠道炎症性疾病,包括克罗恩病和溃疡性结肠炎。IBD发病时,肠黏膜屏障功能异常,抗原移位刺激免疫细胞,产生大量炎性细胞因子及介质,炎性分子破坏紧密连接,加剧损伤肠黏膜屏障功能。通过保护肠上皮细胞骨架、修复上皮细胞及细胞间紧密连接能改善肠上皮屏障功能,这也是当前临床治疗IBD的新策略和新思路。

吸烟对肺癌上皮细胞间质化作用机制的研究

背景与目的肿瘤细胞脱离原发灶向周边间质浸润，已被认为是肿瘤侵袭性生长和转移早期的关键步骤。上皮细胞向间质细胞转化（又称上皮细胞间质化，Epithelialmesenchymal transition，EMT）是胚胎发育早期的一种基本生理现象，以上皮细胞表型的丧失和具迁移能力的间质细胞特性的获得为主要特征。恶性上皮肿瘤细胞通过激活已沉寂的EMT过程来摆脱上皮细胞间紧密连接，从而获得侵袭性，以实现对周围组织的浸润和向远隔器官的转移。

Nrf2在镧活化MMP9致脉络丛上皮细胞紧密连接蛋白表达改变中的作用

目的探讨核因子E2相关因子2(Nrf2)在镧活化基质金属蛋白酶9(MMP9)致脉络丛上皮细胞紧密连接蛋白表达改变中的作用研究。方法于2020年10月,采用永生化大鼠脉络丛上皮细胞(Z310细胞)体外模拟血脑脊液屏障,分为对照组和0.125、0.25、0.5 mmol/L氯化镧处理组。不同浓度氯化镧处理Z310细胞24 h后,倒置显微镜观察细胞形态学变化,细胞免疫荧光法观察MMP9、闭合蛋白(occludin)和胞质附着蛋白1(ZO-1)蛋白表达水平,蛋白免疫印迹法检测MMP9、组织金属蛋白酶抑制剂1(TIMP1)、occludin、ZO-1和Nrf2蛋白表达水平,流式细胞仪检测细胞内活性氧(ROS)水平。结果与对照组比较,氯化镧处理组Z310细胞体积变小,细胞间连接变少,死亡细胞、细胞碎片逐渐增多。0.25、0.5 mmol/L氯化镧处理组细胞内MMP9蛋白表达水平明显高于对照组(P<0.05),且TIMP1及紧密连接蛋白occludin、ZO-1蛋白表达水平较对照组明显降低(P<0.05);而与对照组比较,0.25、0.5 mmol/L氯化镧处理组细胞内ROS产生水平明显增加(P<0.05),0.125、0.25、0.5 mmol/L氯化镧处理组细胞内Nrf2蛋白表达水平明显下降(P<0.05)。结论镧可能通过下调Nrf2表达造成细胞内ROS水平增加,从而活化MMP9致细胞间紧密连接蛋白occludin、ZO-1表达水平下降。

大肠杆菌侵袭基因缺失突变株与人脑微血管内皮细胞的相互作用

ibeA、ibeB、ibeC是与大肠杆菌侵袭人脑微血管内皮细胞(HBMEC)密切相关的基因,但迄今各基因的功能并不清楚。应用侵袭分析和免疫荧光技术分析了各基因的缺失突变型及野生型大肠杆菌对HBMEC的侵袭、细胞骨架与细胞间紧密连接的影响。结果显示:野生型菌大肠杆菌侵袭率为3.46%,而ibeA、ibeB、ibeC缺失突变株分别为0.54%、0.82%和0.73%;ibeA缺失突变型与野生型大肠杆菌作用相似,可引起HBMEC的细胞骨架蛋白分布改变,在细胞膜处呈明显的聚集,而ibeB和ibeC缺失突变株并未引起细胞骨架的明显改变;野生型和ibeA缺失突变型大肠杆菌可引起紧密连接结构的明显改变,而ibeB和ibeC缺失突变株对紧密连接结构的影响不明显。这些观察到的结果提示:ibeB和ibeC基因产物可能在调节细胞骨架和影响细胞紧密连接中起重要作用,而ibeA基因产物在其中的作用较小。

星形胶质细胞、周皮细胞与血脑屏障

血脑屏障（blood-brain barrier,BBB）是一个调节中枢神经系统内环境的细胞屏障,维持脑内离子、激素和递质等动态平衡。由脑毛细血管内皮细胞及细胞间紧密连接、星形胶质细胞终足、基膜和周皮细胞共同组成的一个细胞复合体。近年来,许多研究都是针对内皮细胞及其紧密连接,而对星形胶质细胞和周皮细胞研究相对较少,并且二者在BBB中的作用尚不清楚,本文就此方面的研究进展进行综述。

出血性休克后肠道细胞骨架降解早于紧密连接破坏

出血性休克引起肠道屏障破坏导致全身性炎症反应，继而发生多器官功能障碍。肠道屏障功能依赖于完整的肠上皮细胞间紧密连接（tight junction），通过细胞骨架的纤维状肌动蛋白锚定于细胞内。研究者假设，出血性休克引起血流灌注不足，通过激活肌动蛋白解聚因子／cofilin（胞黄磷蛋白，A／C）使纤维状肌动蛋白丧失并导致紧密连接破坏。

肠上皮屏障与炎症性肠病研究进展

肠上皮屏障损伤是近年炎症性肠病(inflammatory bowel disease,IBD)细胞和分子发病机制研究的新领域.肠上皮屏障是肠黏膜的重要防线之一,若受损则可引起肠上皮通透性增加,在IBD发病过程中起重要作用.目前研究重点侧重于肠上皮细胞和细胞间紧密连接结构和功能的改变,维持和修复肠上皮屏障可望成为治疗IBD的新策略.

结直肠癌组织中Tricellulin、LC3和Beclin1的表达及意义

目的观察结直肠癌组织中细胞间紧密连接蛋白(Tricellulin)、细胞自噬相关蛋白LC3、Beclin1的表达,并探讨其意义。方法收集经外科手术切除的结直肠标本145例份,其中正常结直肠黏膜76例份、结直肠癌69例份,患者均未接受放化疗,标本均经病理确诊。采用免疫组化SP法检测结直肠癌组织及正常结直肠黏膜组织中Tricellulin、LC3和Beclin1表达,并分析三者阳性表达与结直肠癌患者临床病理特征的关系;同时采用Western blotting法检测Tricellulin、LC3和Beclin1在正常结直肠上皮细胞和结直肠癌细胞中的蛋白表达。采用Pearson或Spearman相关检验分析Tricellulin、LC3和Beclin1表达的相关性。结果正常结直肠黏膜组织与结直肠癌组织中Tricellulin阳性表达率分别为48. 68%(37/76)、69. 57%(48/69); LC3阳性表达率分别为46. 05%(35/76)、66. 67%(46/69); Beclin1阳性表达率分别为43. 42%(33/76)、65. 22%(45/69),两种组织中Tricellulin、LC3和Beclin1的阳性表达率比较差异有统计学意义(P均<0. 05)。与正常结直肠上皮细胞相比,Tricellulin、LC3和Beclin1均在结直肠癌细胞中高表达,差异有统计学意义(P均<0. 05)。Tricellulin、LC3及Beclin1表达与结直肠癌患者肿瘤浸润深度、TNM分期、淋巴结转移和远处转移有关(P均<0. 05)。结直肠癌组织中Tricellulin与LC3、Beclin1表达呈正相关(r分别为0. 334、0. 377,P均<0. 05),LC3与Beclin1表达呈正相关(r=0. 323,P <0. 05)。结论结直肠癌组织中Tricellulin、LC3和Beclin1均呈高表达,三者可能共同参与了结直肠癌的发生发展及侵袭转移。

MLCK、Cav1.2在高甘油三酯血症相关性急性胰腺炎大鼠中的表达及其关系研究

目的:探讨高甘油三酯血症相关性急性胰腺炎(HTGP)大鼠胰腺组织中肌球蛋白轻链激酶(MLCK)与钙通道蛋白1.2(Cav1.2)的表达及其相互关系。方法:48只雄性SD大鼠随机分为正常饲料组和高脂饲料组,喂养4周后,测定血清甘油三酯(TG)含量。正常饲料组随机分为3个亚组:空白对照组、急性胰腺炎(AP)组、AP+MLCK抑制率ML-7干预组;高脂饲料组随机分为3个亚组:高甘油三酯血症(HTG)组、HTGP组、HTGP+ML-7干预组。腹腔注射雨蛙肽(50μg/kg)建立AP模型,造模后24h处死大鼠,测定血清淀粉酶(AMY)含量;光镜下观察胰腺病理变化;透射电镜下观察胰腺细胞超微结构与细胞间紧密连接(TJ)改变;免疫组织化学法检测胰腺组织MLCK、Cav1.2的表达及定位。结果:正常饲料组和高脂饲料组的TG水平分别为(1.16±0.33)mmol/L、(3.30±1.07)mmol/L,高脂饲料组的TG水平较正常饲料组显著升高(P<0.01)。诱导AP后血清AMY含量及胰腺病理评分升高,并且HTGP组血清AMY含量、胰腺病理评分较AP组显著升高(均P<0.05);ML-7干预后血清AMY含量降低及胰腺病理损伤减轻。HTGP组、AP组大鼠胰腺中MLCK、Cav1.2表达均较HTG组显著增加(均P<0.05),其中HTGP组MLCK、Cav1.2的表达较AP组显著增加(均P<0.05);ML-7能够有效抑制MLCK、Cav1.2的表达。HTGP组MLCK、Cav1.2的表达分别与胰腺病理评分呈正相关关系(r1=0.853,r2=0.779,均P<0.05)。透射电镜下可见AP组、HTGP组胰腺细胞超微结构损伤及TJ增宽,其中以HTGP组增宽更为明显;ML-7干预后TJ增宽减小。结论:HTGP大鼠胰腺组织MLCK、Cav1.2表达上调,其与疾病严重程度相关,且MLCK可能通过改变细胞间TJ及调控Cav1.2的表达参与HGTP的发病机制。

血脑屏障的结构和功能

中枢神经系统（CNS）内的神经信号传递需要一个高度可控的微环境。在三个关键界面上的细胞形成了血液和中枢神经系统之间的屏障：血脑屏障（BBB）、血脑脊液屏障和蛛网膜屏障。血脑屏障中微血管的内皮细胞是血液-中枢神经系统主要的交换部位。本文将BBB的结构和功能，如血管内皮细胞间紧密连接形成的物理屏障，由细胞膜的转运体和胞饮机制构成的转运屏障做了总结。

大鼠外翻肠囊法研究马钱子中马钱子碱、士的宁的肠吸收特性

目的:研究马钱子中马钱子碱、士的宁在大鼠肠道的吸收特性。方法:以表观渗透系数(Papp)为指标,运用大鼠外翻肠囊模型,研究不同肠段、浓度、p H、P-gp抑制剂、MRP抑制剂、细胞间紧密连接开放剂对马钱子中马钱子碱和士的宁在大鼠肠吸收的影响。结果:不同肠段中,马钱子中马钱子碱和士的宁的Papp为回肠≈结肠>空肠>十二指肠;不同浓度下,两者Papp无显著性差异;不同p H条件下,两者吸收有较大差异,其中p H=7.4条件下,两者吸收最好;在分别加入P-gp和MRP抑制剂后,两者的肠吸收均显著性增加;加入细胞间紧密连接开放剂,两者的肠吸收有一定的增加,但不显著。结论:马钱子中马钱子碱、士的宁肠吸收机制可能是以被动转运为主,且均受P-gp和MRP的影响。