细胞间隙连接蛋白43基因在斑马鱼牙齿早期发育中的表达

目的探讨细胞间隙连接蛋白43(cx43)基因在斑马鱼早期胚胎中的表达模式,为进一步研究其在牙齿发育过程中的功能奠定基础。方法提取受精后72 h的斑马鱼胚胎总RNA,逆转录合成c DNA,特异性扩增cx43基因片段,连接到PGEMT载体并判断连接方向,选择相应的RNA聚合酶体外转录,合成地高辛标记的cx43基因反义m RNA探针。运用全时相胚胎原位杂交技术检测斑马鱼胚胎发育早期cx43基因在牙齿发育部位的表达分布,茜素红染色法比较cx43原位杂交表达区域与咽齿解剖部位的关系。结果获得了cx43基因的反义m RNA探针。cx43基因在斑马鱼受精后各个时期咽弓牙齿相应部位均可见到强棕褐色阳性信号。受精后9 d时cx43原位杂交表达部位与咽齿解剖部位基本重叠一致。结论 cx43基因参与牙胚发育和矿化过程,且主要在矿化晚期发挥关键调控作用。

间隙连接蛋白connexin43基因在真核细胞中的表达

目的 :构建携带间隙连接蛋白 connexin4 3 c DNA的真核表达载体 ,建立 connexin4 3蛋白高表达细胞株。 方法 :connexin4 3 c DNA在大肠杆菌中扩增后连入真核表达载体 p ED4 ,转染中国仓鼠卵巢 ( CHO)细胞 ,用甲氨蝶呤 ( MTX)筛选得到 connexin4 3基因高表达细胞。结果 :酶切电泳结果显示载体 p ED4 -Cx4 3按设计构建。经 MTX筛选得到不同抗性的 CHO细胞 ,免疫组织化学方法显示有 connexin4 3蛋白的表达 ,但表达量有限。细胞间染料传递实验证实不同 MTX抗性的 CHO细胞间传递小相对分子质量物质的能力有差异。 结论 :利用载体 p ED4可以使 connexin4 3基因在真核细胞内表达。

HeLa细胞中抑癌基因-间隙连接基因Cx43及其蛋白产物表达缺失

目的：探讨新一代肿瘤抑制基因-间隙连接基因Cx43及其蛋白产物在人子宫颈癌细胞系HeLa中的表达及意义。方法：应用核酸分子原位杂交和流式细胞仪分析技术，研究人子宫颈癌细胞系HeLa及阳性对照细胞人正常肝细胞系QZG中，间隙连接基因Cx43mRNA及其蛋白产物的表达规律。结果：原位杂交显示，Cx43mRNA在HeLa细胞中呈阴性，在QZG细胞中呈强阳性。流式细胞仪分析示Cx43蛋白在HeLa、QZG细胞中阳性细胞计数率分别为1．9％和99．0％，差异有高度显著性（P＜0．01）。结论：CX43基因及其蛋白产物在HeLa中表达缺失可能与子宫颈癌发生恶性表型相关。

肝细胞癌中间隙连接蛋白Cx43和E-钙粘附素的表达

目的研究间隙连接蛋白(connexin43Cx43)和E-钙粘附素(E-cadherin)在肝细胞癌(hepatocelluarcarcinoma,HCC)中的表达及其关系,探讨它们在HCC发生和发展中的作用。方法采用免疫组化技术检测47例HCC中间隙连接蛋白Cx43、E-cadherin的表达。结果Cx43、E-cadherin阳性率分别为42.55%、46.81%。随着疾病进展(TNM分期),Cx43阳性率降低。肝硬化组Cx43阳性率明显低于无肝硬化组(χ2=4.7135,P=0.03)。肝内血管瘤栓组E-cadherin的阳性率明显高于无肝内血管瘤栓组(P=0.028)。Cx43、E-cadherin的阳性率在肿瘤大小、癌组织分化程度组无显著差异(P>0.05)。Spearman相关分析未发现Cx43与E-cadherin存在显著相关。结论Cx43、E-cadherin蛋白的异常表达可能在HCC的发生、进展和肝内转移中发挥作用。检测二者的表达有助于综合判断HCC的生物学行为。

细胞角蛋白19和间隙连接蛋白43在4-亚基硝氧喹啉诱发大鼠舌黏膜癌变过程中表达的研究

目的研究4-亚基硝氧喹啉(4NQO)诱发大鼠口腔黏膜癌变过程中细胞角蛋白19(CK19)和间隙连接蛋白43(Cx43)的表达,探讨口腔黏膜癌变过程中CK19与Cx43的相关性。方法利用4NQO诱导SD大鼠的口腔黏膜癌变,运用免疫组织化学的方法检测CK19、Cx43在口腔黏膜癌变过程中各阶段的动态变化。结果在大鼠正常舌黏膜组织中,CK19阳性染色的细胞散在分布于黏膜基底层;随着大鼠舌黏膜上皮异常增生程度的增加,CK19表达于黏膜基底上层;在口腔鳞状细胞癌(OSCC)组织中,CK19阳性染色细胞分布在黏膜各层。CK19在正常舌黏膜、轻度上皮异常增生、中度上皮异常增生、重度上皮异常增生、OSCC组织中阳性表达率分别为30.00%、50.00%、58.33%、80.00%、91.67%,差异有统计学意义(P<0.05)。在正常舌黏膜中Cx43蛋白主要表达于大鼠舌黏膜上皮细胞的细胞膜上,上皮的基底层、棘层和颗粒层呈阳性染色。随着大鼠舌黏膜上皮异常增生程度的增加,Cx43的表达明显下降。Cx43在正常舌黏膜、轻度上皮异常增生、中度上皮异常增生、重度上皮异常增生、OSCC组织中阳性表达率分别为100.00%、85.71%、66.67%、40.00%、33.33%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论在大鼠舌黏膜癌变过程中,CK19蛋白表达水平随病变程度加重显著升高,提示CK19与口腔上皮细胞的癌变有关;Cx43蛋白表达水平随病变程度加重显著下降,Cx43表达下降是口腔黏膜癌变的早期事件。CK19与Cx43蛋白表达呈负相关,CK19和Cx43的联合检测对OSCC的早期诊断有重要的作用,有利于提高OSCC早期诊断的灵敏度和特异性。

间隙连接蛋白43在舌鳞状细胞癌中的表达及意义

目的:探讨间隙连接蛋白43(connexin43,Cx43)在舌癌中的表达及意义。方法:对6例正常舌上皮、24例不同分化程度舌癌的石蜡包埋切片用定量免疫组化检测Cx43蛋白的表达,同时应用流式细胞仪和免疫细胞化学对舌癌细胞株(Tca8113)Cx43蛋白的表达进行检测。结果:正常舌上皮中Cx43蛋白定位于棘细胞层的胞膜上,Cx43阳性表达的面积和灰度值在正常舌上皮和高分化舌癌之间无显著性差异(P>0.05),但Cx43阳性表达的面积随着舌癌细胞分化程度的下降显著降低(P<0.01),而且在舌癌组织中Cx43异常表达于细胞浆。流式细胞仪和免疫细胞化学检测可见舌癌细胞中Cx43弱表达,细胞阳性率仅为4.8%,而正常舌上皮则为92.3%。结论:该结果提示Cx43表达的改变与舌癌的进展和分化相关。

茶多酚对人膀胱癌BIU-87细胞间隙连接蛋白43表达和细胞间隙连接通讯功能的影响

背景与目的:研究茶多酚的主要植物化学物质成分(-)-epigallocatechin-3-gallate(EGCG)对人膀胱癌BIU-87细胞间隙连接蛋白43(Cx43)的表达和细胞间通讯功能的影响,探讨EGCG防治膀胱肿瘤的机制。材料与方法:分别采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、膜联蛋白/碘化丙锭双标流式细胞术、RT-PCR、Western印迹和划痕标记荧光染料传输技术,体外观察不同浓度的EGCG(0、5、10、20mg/L)对BIU-87细胞的生长抑制率、凋亡率、Cx43mRNA及其蛋白的表达、细胞间间隙连接通讯功能(GJIC)的变化。结果:10mg/L和20mg/L的EGCG均能明显抑制BIU_87细胞的生长和诱导细胞凋亡,其抑制率分别为(15.67±1.15)%、(18.33±1.53)%,凋亡率分别为(42.00±4.34)%、(27.33±3.21)%。与对照组和5mg/LEGCG相比,EGCG10mg/L和20mg/L组能显著上调Cx43mRNA及其蛋白的表达,并增强细胞间的GJIC功能(P<0.05)。EGCG在10～20mg/L范围内对BIU_87细胞的生长的抑制作用、诱导细胞凋亡和上调Cx43表达的效应均随浓度的增加而增强,呈剂量依赖性(P<0.05)。结论:EGCG(10、20mg/L)能通过有效上调BIU_87细胞Cx43转录水平的表达、增强细胞间隙连接所介导的GJIC功能,从而诱导膀胱肿瘤细胞凋亡,抑制其生长。

发育大鼠心肌细胞间隙连接蛋白43表达特性

目的：探讨大鼠心肌细胞间隙连接蛋白43(Cx43)表达的发育特性。方法：应用SP免疫组化和图像分析方法,观察胎大鼠、出生1 d、5 d、10 d和25 d大鼠心肌细胞Cx43的蛋白表达。结果：(1)胎鼠心肌细胞Cx43呈斑点状遍布于心肌细胞侧—侧连接、细胞质内和闰盘处。(2)出生后1 d大鼠心肌细胞的Cx43分布与胎鼠相似,5 d和10 d组逐渐向闰盘处聚集。25 d时部分已聚集于端闰盘处,其余仍呈斑点状散在分布。(3)出生前后心室肌细胞Cx43分布有差异。分布密度总规律是：胎大鼠＞出生1 d＞5 d＞10 d＞25 d。结论：出生前后大鼠心肌细胞Cx43分布随心脏发育逐渐向闰盘处重排,其分布密度呈逐渐下降趋势。

体外受精-胚胎移植失败者子宫内膜整合素β_3及细胞间隙连接蛋白43的表达研究

目的探讨子宫内膜中整合素β_3、细胞间隙连接蛋白43(connexin 43,Cx43)表达水平与妊娠结局的关系,进而分析其与子宫内膜容受性的相关性。方法选择行体外受精-胚胎移植失败者35例作为观察组,既往有正常生育史者15例作为对照组,于黄体中期行宫腔镜检查并取内膜,应用免疫组化方法检测子宫内膜整合素β_3和Cx43表达的HSCORE评分并进行组间比较。结果观察组与对照组子宫内膜腔上皮整合素β_3表达的平均HSCORE评分分别为0.22±0.34和0.57±0.48,组间比较差异有显著性(P=0.01),而两组子宫内膜腺上皮的整合素β_3表达未见明显差别(P>0.05)。观察组与对照组子宫内膜间质细胞Cx43表达的平均HSCORE评分分别为2.11±0.83和1.49±0.77,组间比较差异有显著性(P=0.02),而两组子宫内膜上皮部的Cx43表达未见明显差别(P>0.05)。结论体外受精-胚胎移植者妊娠失败可能与子宫内膜腔上皮整合素β_3表达降低、子宫内膜间质细胞Cx43表达升高有关。

细胞间隙连接蛋白43、增殖细胞核抗原在骨肉瘤组织中的表达及临床意义

目的探讨细胞间隙连接蛋白43(Cx43)、增殖细胞核抗原(Ki-67)在骨肉瘤组织中的表达及其临床意义。方法采用免疫组织化学(EnVisionTM)法分别检测70例骨肉瘤组织及30例骨肉瘤旁组织中Cx43、Ki-67的表达情况。结果 Cx43在骨肉瘤组织、骨肉瘤旁组织中阳性表达率分别为14.29%、86.67%,二组之间差异有统计学意义(χ2=47.75,P<0.01);Ki-67在骨肉瘤组织、骨肉瘤旁组织中阳性表达率分别为71.43%、16.67%,二组之间差异有统计学意义(χ2=25.45,P<0.01)。在临床病理因素中,Cx43的表达与年龄、性别、组织学类型无关,差异无统计学意义(P>0.05),但与肿瘤直径、临床分期、肺转移有关,差异有统计学意义(P<0.05);Ki-67的表达与年龄、性别、肿瘤直径、组织学类型无关,差异无统计学意义(P>0.05),但与临床分期、肺转移有关,差异有统计学意义(P<0.05)。Cx43、Ki-67在骨肉瘤组织中的表达呈显著负相关(r=-0.56,P<0.01)。结论骨肉瘤组织中Cx43呈现低表达,Ki-67呈现过表达,两者均与临床分期、肺转移有关,因而,检测两者表达情况有利于判断患者的病情发展。

细胞间隙连接蛋白43在耐药性卵巢癌中的表达

目的 探讨细胞间隙连接蛋白 4 3(CX4 3)与上皮性卵巢癌化疗疗效 (耐药或敏感 )及临床病理的关系。方法 从 1999年 1月至 2 0 0 3年 6月间临床资料及随访资料完整的卵巢癌病例中 ,筛选出 6 0例原发上皮性卵巢癌和 6例正常卵巢作为研究对象。根据临床诊断将其分为 3组 :①化疗耐药组 30例 ,②化疗敏感组 30例 ,③正常卵巢组 6例。全部病例术前均未接受过放疗 ,入院后均行全子宫和双附件切除 +盆腔淋巴结清扫 +阑尾切除 +大网膜切除术 ,6 6例患者均有随访结果。用流式细胞仪定量分析 6 6例标本组织中CX4 3蛋白的表达量。结果 CX4 3蛋白的表达为化疗耐药组 <化疗敏感组 <正常卵巢组织 ,单向方差分析两两比较结果差异有显著意义。结论 CX4 3蛋白表达量的下降与上皮性卵巢癌的化疗耐药显著相关。

间隙连接蛋白Cx43在去卵巢雌鼠腺垂体滤泡星形细胞中的表达

目的 探讨间隙连接蛋白 Cx4 3在骨质疏松 (OP)雌鼠腺垂体滤泡星形细胞 (FS细胞 )中的表达规律及其生物学意义。方法 采用 10月龄未孕产 SD雌性大鼠 4 0只 ,随机分为去卵巢组和对照组 ,于术后 6周处死两组大鼠。处死前测量大鼠全身骨密度。取大鼠垂体 ,应用 SP免疫组化方法检测大鼠腺垂体 FS细胞中间隙连接蛋白 Cx4 3的表达。结果 术后 6周末去卵巢组大鼠全身骨密度明显低于对照组大鼠骨密度 (P<0 .0 1)。腺垂体中 Cx4 3阳性表达主要定位于相邻的 FS— FS、FS—内分泌细胞中 ,上述细胞的胞浆和 /或胞膜呈棕黄色。去卵巢组大鼠腺垂体 Cx4 3的表达阳性率和阳性信号的表达强度均明显降低 (P<0 .0 1)。结论 SD雌性大鼠去卵巢 6周建立 OP模型。OP模型腺垂体中 Cx4 3蛋白在上述细胞中表达下降可能是大鼠 OP发生的一个环节。

间隙连接蛋白43与自杀基因系统旁观者效应的关系

目的观察胞嘧啶脱氨酶(CD)基因和单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-tk)基因对胆管癌细胞和胆管癌移植瘤的作用以及转染间隙连接蛋白43(Cx43)基因对旁观者效应的影响。方法MTT法比较双自杀基因系统作用下和(或)Cx43基因转染后QBC939细胞的细胞抑制率及旁观者效应。前体药物应用前、后测量移植瘤的大小,判断自杀基因系统的作用和Cx43蛋白对旁观者效应的影响。结果CD和HSV-tk基因在转染细胞中获稳定表达。mRNA和蛋白水平均显示CD+tk+Cx+细胞中Cx43的表达量增加。自杀基因系统对CD+tk+Cx+细胞组和它生成的移植瘤组的抑制作用均比CD+tk+细胞组高。结论双自杀基因系统在体内、外对胆管癌细胞和移植瘤均有明显的抑制作用,Cx43基因导入可明显增强旁观者效应和对肿瘤的抑制作用。

全反式维甲酸对大肠癌细胞间隙连接蛋白Cx32与Cx43表达及增殖和迁移能力的影响

目的:检测全反式维甲酸(ATRA)对大肠癌细胞Caco-2及SW480增殖、迁移及间隙连接蛋白Cx32与Cx43胞膜表达的影响,分析其对大肠癌效应作用机制。方法:取对数生长期大肠癌细胞分为ATRA处理组及阴性对照组,以1×10-8、1×10-7、1×10-6、1×10-5及1×10-4 mol·L-1 ATRA处理Caco-2及SW480细胞,应用MTT法测定其生长抑制率;以1×10-5及1×10-4 mol·L-1 ATRA处理SW480细胞,应用划痕法测定其迁移率,流式细胞术测定Cx32及Cx43胞膜阳性率。结果:与阴性对照组比较,ATRA处理组Caco-2及SW480细胞经1×10-4 mol·L-1 ATRA作用24、48及72h后,生长抑制率明显提高(P<0.01);ATRA处理组SW480细胞经1×10-5 mol·L-1 ATRA作用24和48h后,平均迁移率明显低于阴性对照组(P<0.05)。ATRA处理组SW480细胞经1×10-5及1×10-4 mol·L-1 ATRA作用24和48h后,胞膜Cx32及Cx43表达阳性率明显高于阴性对照组(P<0.05)。结论:ATRA可增加大肠癌细胞Cx43及Cx32膜表达,并抑制其增殖及迁移能力,其效应机制可能涉及间隙连接蛋白的胞内蛋白相互作用及细胞间通讯联系功能改变。

间隙连接蛋白Cx43在非小细胞肺癌的表达及其临床意义

目的 探讨间隙连接蛋白Cx43在非小细胞肺癌中的表达特征及其临床意义。方法 应用免疫组织化学ABC法检测Cx43在 65例非小细胞肺癌组织中的表达 ,并分析该蛋白表达与肺癌临床病理特征的关系。结果 65例肺癌标本中Cx43的阳性表达率为 3 6.92 % ,2 0例癌旁组织均见Cx43阳性表达。Ⅰ～Ⅱ期和Ⅲ～Ⅳ期组间Cx43阳性表达率差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ,中～高分化的肺癌其Cx43阳性表达率明显高于低分化者 (P <0 .0 1)。Cx43表达与淋巴结转移有密切关系 (P <0 .0 1) ,但与组织学类型无明显关系(P >0 .0 5 )。结论 Cx43异常表达在肺癌发生、发展及转移过程中起着重要作用 。

整合素β3和细胞间隙连接蛋白43与体外受精-胚胎移植妊娠结局的关系

目的：探讨子宫内膜整合素β3、细胞间隙连接蛋白43表达水平与体外受精-胚胎移植妊娠结局的关系，进而分析其与子宫内膜容受性的相关性。方法：前瞻性收集了IVF／ICSI—ET病例36例，其中11例临床妊娠者作为妊娠组，25例未妊娠者作为非妊娠组。于黄体中期取内膜，应用单克隆抗体免疫组化方法检测子宫内膜整合素β3和Cx43表达情况。结果：妊娠组与非妊娠组子宫内膜腔上皮整合素B3表达的HSCORE平均分数分别为0．55（0．00—1．60）和0．07（0．00—1．10），差异有显著性（P=0．02）；而子宫内膜腺上皮整合素β3表达比较，两组之间差异无显著性；子宫内膜间质细胞和上皮细胞中Cx43表达在两组均未发现统计学差异。结论：子宫内膜腔上皮整合素β3表达水平可能与体外受精一胚胎移植妊娠结局有相关性。

育泡饮对大鼠卵巢颗粒细胞间隙连接蛋白43表达及分泌功能的影响

[目的]观察育泡饮对体外培养大鼠卵巢颗粒细胞(GC)间隙连接蛋白43(CX43)表达及雌二醇(E2)分泌的影响,探索中药促进卵泡发育的可能作用机制。[方法]制备大鼠卵巢颗粒细胞进行原代培养,细胞培养48 h后,加入促卵泡激素(FSH)50 ng/mL和不同剂量的育泡饮,继续培养48 h,放免法测定颗粒细胞培养液中E2的含量,Westernblot法检测CX43蛋白的表达。[结果]1)育泡饮能够促进卵巢颗粒细胞分泌E2,随着药物浓度的增大,E2分泌逐渐增加。2)育泡饮可明显促进颗粒细胞CX43蛋白的表达,其中高剂量组的促进作用与FSH组作用相似。[结论]育泡饮能明显促进卵巢颗粒细胞CX43蛋白的表达及E2分泌,说明育泡饮可通过上调CX43蛋白的表达促进颗粒细胞的增殖,增强颗粒细胞的抗凋亡能力,进而调节卵泡的发育。

微小染色体维持蛋白2与细胞间隙连接蛋白43在非霍奇金淋巴瘤中的表达和临床研究

目的分析探讨非霍奇金淋巴瘤中微小染色体维持蛋白2(MCM2)和细胞间隙连接蛋白43(Cx43)的表达,并探讨其临床意义。方法选择2015年2月—2017年2月间在周口市中心医院接受治疗的55例非霍奇金淋巴瘤患者作为观察组,另选择35例反应性增生淋巴结患者作为对照组,分别采用SP法对两组患者的MCM2和Cx43表达,并对测定结果进行分析。结果经过对比研究,观察组患者MCM2的阳性表达率显著高于对照组,观察组的Cx43阳性表达率明显低于对照组患者(P<0.05)。同时,MCM2的表达与Cx43的表达没有显著关系,但是与患者的肿瘤恶性程度存在显著相关性,MCM2的表达还与患者肿瘤的临床分期和Ki-67存在显著相关性。结论非霍奇金淋巴瘤的恶性程度会导致MCM2和Cx43蛋白出现异常表达,因此,通过测定MCM2和Cx43蛋白对于诊断非霍奇金淋巴瘤具有重要价值。

小鼠细胞间隙连接蛋白基因的克隆和序列分析

通过提取小鼠细胞总RNA ,采用RT -PCR的方法 ,扩增了连接蛋白Cx4 3的cDNA整个氨基酸编码区域 ,并将其克隆到了pGEM质粒中的EcoR .I位点。对序列的分析显示其有 114 6bp ,编码 382个氨基酸。与已有大鼠、牛及人相应序列比较 ,存在部分差异。该重组质粒工作的完成 ,为其表达、调控等方面的研究奠定了基础。

去卵巢大鼠骨细胞中间隙连接蛋白43表达的研究

目的 研究去卵巢致骨质疏松大鼠骨细胞中间隙连接蛋白 43(Cx43)的表达及意义。方法 采用 1 0月龄未孕产 Wistar雌性大鼠 30只 ,随机分为去卵巢组、假手术组和尼尔雌醇治疗组。于术后 8w末测量三组大鼠全身及腰椎骨密度 (BMD) ,采用放免法测定血清雌二醇水平 ,采用SABC免疫组化法观察 Cx43在成骨细胞和破骨细胞中的表达情况。结果 术后 8w末去卵巢组全身及腰椎 BMD和血清雌二醇水平明显低于假手术组和尼尔雌醇治疗组 (P<0 .0 1 )。去卵巢组成骨细胞内 Cx43阳性表达率 (1 3.8%± 1 .1 4 % )低于假手术组 (63.6%± 2 .46% )和尼尔雌醇治疗组(63.6%± 2 .1 2 % ) (P<0 .0 1 ) ,而破骨细胞内去卵巢组 Cx43阳性表达率 (66.1 %± 1 .37% )高于假手术组 (42 .2 %± 1 .93% )和尼尔雌醇治疗组(41 .8%± 1 .81 % ) (P<0 .0 1 )。上述指标假手术组和尼尔雌醇治疗组差异无显著性。结论 去卵巢大鼠 Cx43在成骨细胞中表达下降 ,而在破骨细胞中表达增加 ,在成骨和破骨细胞中 Cx43表达的变化可能是去卵巢大鼠发生骨质疏松的机制之一。