肺结核患者中性粒细胞防御素1-3表达的临床研究

目的探讨人中性粒细胞防御素1-3(HNP1-3)在肺结核及耐多药肺结核发生中的作用。方法采用ELISA法检测正常人(对照组)、对药物敏感(敏感组)与耐多药(耐多药/多耐药组)肺结核患者血浆HNP1-3的浓度,并观察敏感组和耐多药/多耐药组抗结核治疗6个月后HNP1-3的变化。结果治疗前血浆HNP1-3浓度:对照组、敏感组、耐多药/多耐药组分别为(87.6±8.7)、(141.7±21.3)(、41.0±10.9)ng/ml,敏感组>对照组>耐多药/多耐药组(P分别<0.05)。抗结核治疗6个月后血浆HNP1-3浓度:敏感组为(76.5±7.1)ng/ml,较治疗前明显下降(P<0.01),耐多药/多耐药组为(53.2±7.1)ng/ml,与治疗前相比无差异(P>0.05)。血浆HNP1-3浓度与痰菌阳性持续时间及X线胸片记分呈负相关(r分别为-0.635,-0.465,P<0.01)、与外周血白细胞及中性粒细胞计数呈正相关(r分别为0.594,0.728,P<0.01)。结论HNP1-3在肺结核及耐多药肺结核的发生中可能起一定作用,HNP1-3水平降低可能是耐多药肺结核形成的原因之一。

人中性粒细胞防御素单克隆抗体制备及初步应用

目的 制备人中性粒细胞防御素 1单克隆抗体 (HNP 1McAb) ,并用HNP 1McAb建立直接免疫荧光法对正常人及一系列髓性白血病患者中性粒细胞进行免疫细胞化学染色。方法 用连续酸 尿素 聚丙烯酰胺凝胶电泳分离纯化人中性粒细胞防御素组份 (HNP 1～ 3) ,以纯化的HNP 1为抗原制备特异性的HNP 1McAb ,并建立了HNP 1McAb直接免疫荧光染色法。将分离纯化的正常人和兔外周血中性粒细胞、淋巴细胞 ,粒细胞白血病、淋巴细胞白血病患者的骨髓和外周血分别制成涂片 ,进行免疫荧光染色。结果 HNP 1McAb与正常人外周血中性粒细胞及急、慢性粒细胞白血病骨髓和外周血涂片的原、早幼、中幼、晚幼和成熟的中性粒细胞均呈特异的阳性反应。人红细胞、淋巴细胞及其他非粒细胞系统的有核细胞均呈阴性反应。对兔的中性粒细胞无交叉反应。结论 HNP 1可作为粒细胞系统的特异性分化标志 ,其相应的HNP

硫堇蛋白及细胞防御素在植物抗病性育种中的研究

硫堇蛋白及细胞防御素是一类广泛存在于植物细胞中并对细菌、真菌等病原微生物具有抑制或杀灭作用的小分子量多肽抗生素。二者在分子量、空间结构及某些化学性质具有相似性,近年来在植物抗病性育种中得以应用。对植物硫堇蛋白及细胞防御素的分类、结构、作用机制以及在植物抗性育种的应用实例进行综述。

肺结核患者血浆中性粒细胞防御素1-3浓度与病情活动的关系

目的探讨肺结核患者血浆中性粒细胞防御素1-3(HNP1-3)浓度与肺结核病情活动的关系。方法选择2009年5月～2010年6月我院收治的肺结核患者125例,其中活动性肺结核组患者61例,静止期肺结核组患者64例。另选择健康体检者100例作为对照组。采用ELISA法检测各组血浆中HNP1-3浓度。结果三组血浆HNP1-3浓度比较存在显著性差异(F=8.291,P<0.05),组间两两比较,活动性肺结核组血浆HNP1-3浓度明显高于静止期肺结核组和对照组(t=6.429,8.195,P<0.05),静止期肺结核组略高于对照组,但两组间差异无显著意义(t=0.784,P>0.05)。相关性分析发现,肺结核患者血浆HNP1-3水平与血沉无相关性(P>0.05),而与外周血白细胞及中性粒细胞计数、C反应蛋白水平和影像学计分呈正相关(r=0.574,0.692,0.658,0.608,P<0.05)。结论 HNP1-3可能在肺结核发病机制中起着重要的作用,且与肺结核病情活动性有关。

自发性细菌性腹膜炎患者治疗后人中性粒细胞防御素的变化

目的探讨自发性细菌性腹膜炎(SBP)患者治疗后人中性粒细胞防御素(HNP)的变化。方法选取2015年7月至2016年12月医院收治的78例肝硬化合并腹水患者,按有无SBP分为SBP组(48例)和非SBP组(30例),另择同期健康体检者22名作为对照组。采用双抗夹心法检测血浆HNP,同时检测外周血降钙素原(PCT)水平。结果 SBP组和非SBP组血清HNP和PCT水平均高于对照组,且SBP组血清HNP和PCT水平高于非SBP组,差异均有统计学意义(P<0.05);SBP组治疗后血清HNP和PCT水平明显下降,差异均有统计学意义(P<0.05);且经Spearman分析,血清HNP和PCT水平与SBP的严重程度具有良好的正相关性。结论 HNP与SBP严重程度相关,有效抗感染治疗可显著降低HNP水平。

人中性粒细胞防御素1-3的日节律性分泌

目的探索人中性粒细胞防御素1-3(HNP1-3)表达水平的日节律性,为其作为生物学指标提供科学依据。方法对6名健康志愿者,连续2 d从6时至22时定点采集唾液、外周血及4颗第一恒磨牙近颊沟处的龈沟液,运用酶联免疫吸附测定(ELISA)方法检测HNP1～3的表达量。结果 6名受试者HNP1-3的表达量和变化趋势为:龈沟液的中位数为5.86μg.L-1,总体变化趋势为正弦波形,14时最高,18时最低;唾液的中位数为2.15μg.L-1,总体变化趋势为"V"字波形,早晚较高,14时达峰谷;血液的中位数为4.79μg.L-1,总体变化趋势为单峰波形,6时至10时呈上升趋势并达峰值,继而缓慢下降。结论在3种体液中,HNP1-3表达量存在差异性,其昼夜的表达呈现一定节律性。

Paneth细胞防御素的功能对中医药体内抗菌机理的启示

Paneth细胞防御素是一类具有广谱、高效抗微生物活性的小分子肽 ,在肠道的先天性免疫中起着重要作用。本文从Paneth细胞防御素的生物学特性、抗菌活性及抗菌机制等方面对其进行了较全面的综述 ,同时也展望了Paneth细胞防御素在中医药研究中的前途 。

血浆人中性粒细胞防御素1-3在肺结核患者中的动态变化研究

目的探讨人中性粒细胞防御素1-3(HNP1-3)在初治及复治肺结核患者群体中的作用。方法将研究对象分为初治组(21例)、复治组(27例)及健康对照组(25例),于治疗前后分别测定血浆HNP1-3浓度(ELISA法)。结果初治组基线血浆HNP1-3水平明显高于复治组及对照组(均P<0.001),治疗6个月后水平明显降低(P<0.01);复治组基线血浆HNP1-3水平明显低于初治组及对照组(均P<0.01),经过治疗后变化不明显(P>0.05);治疗前血浆HNP1-3水平与外周血白细胞(r=0.538,P=0.027)及中性粒细胞数(r=0.676,P=0.011)呈正相关,与痰菌阴转时间呈负相关(r=-0.602,P=0.013)。结论血浆HNP1-3在初治患者中可作为反应治疗效果的指标,HNP1-3分泌不足可能造成结核杆菌难以杀灭。

潘氏细胞防御素研究进展

潘氏细胞防御素是由哺乳动物小肠隐窝潘氏细胞所分泌的一种天然抗生素肽 ,含有 32～ 36个氨基酸残基。已经发现 2 0余种潘氏细胞防御素mRNA。其合成、分泌速度快 ,抗菌谱广 ,杀灭微生物作用强大 ,是肠道天然屏障的重要组成部分 ,在抑制细菌移位、防治肠源性感染方面日益受到重视。潘氏细胞防御素的分类、分布、基因表达、功能等方面的研究已取得了一定的进展。

血清人中性粒细胞防御素1-3在冠状动脉粥样硬化性心脏病中的临床意义研究

目的:探讨血清人中性粒细胞防御素1-3(human neutrophil peptide 1-3,HNP1-3)在冠状动脉粥样硬化性心脏病(冠心病)中的临床意义。方法:纳入108例冠心病患者设为病例组,其中重度冠心病患者32例,轻度冠心病患者76例,选取108例同期健康体检者作为对照组。收集两组一般资料,ELISA法检测血清HNP1-3水平,Spearman′s等级相关分析法分析血清HNP1-3水平与其他参数的相关性,受试者工作特征曲线(ROC曲线)分析HNP1-3诊断冠心病的检验效能,logistic回归分析冠心病的危险因素。结果:病例组血清HNP1-3水平明显高于对照组[(143.96±6.23)ng/mL对(112.68±7.23)ng/mL,P<0.001],重度冠心病患者血清HNP1-3水平明显高于轻度冠心病患者[(164.56±9.65)ng/mL对(135.68±10.43)ng/mL,P<0.001)。血清HNP1-3与炎性指标hs-CRP(r=0.419,P<0.001)及Gensini评分(r=0.318,P=0.009)呈显著相关性。HNP1-3诊断冠心病的ROC曲线下面积为0.736,95%CI:0.706～0.875,最佳截点为131.23 ng/mL,敏感性为72.36%,特异性为75.09%。Logistic回归分析表明HNP1-3>131.23 ng/mL是冠心病的危险因素(OR=2.167,95%CI:1.456～3.355,P<0.001)。结论:血清HNP1-3在冠心病中明显升高,有望作为血清生物标志物用于预测冠心病及其严重程度。

牛中性粒细胞β防御素5对肺炎克雷伯菌感染小鼠的预防作用

为探究牛中性粒细胞β防御素5(bovine neutrophilβ-defensins 5,BNBD5,B5)对肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae,KP)感染小鼠的保护作用,将40只C57BL/6J小鼠随机分为正常对照组,B5处理组,KP感染组和B5预处理后感染KP组,每组10只。HE染色观察肺组织病理变化,ELISA检测肺脏TNF-α和IL-1β水平,涂板法检测肺脏和脾脏的细菌载量,流式细胞术检测肺脏巨噬细胞和中性粒细胞。结果表明,鼻内给予B5未引起肺脏病理损伤,未诱导肺脏产生过量TNF-α和IL-1β。B5能减轻KP引起的肺组织病理损伤,显著减少肺脏和脾脏中的细菌载量;增加肺组织中的巨噬细胞和中性粒细胞,明显上调肺组织TNF-α水平。表明鼻内给予B5能保护KP感染小鼠。

人中性粒细胞防御素对自发性细菌性腹膜炎的诊断价值

目的探讨人中性粒细胞防御素（HNP）与自发性细菌性腹膜炎（SBP）的相关性及其对SBP的诊断价值。方法77例肝硬化并腹水患者按有无SBP分组：SBP组45例，非SBP组32例，设立健康体检者对照组28名。采用双抗体夹心法检测血浆HNP。同时检测外周血白细胞总数、中性粒细胞比率、降钙素原（PeT）和C-反应蛋白（CRP）等炎性指标。做受试者工作曲线比较HNP、PCT和CRP在SBP中的诊断价值。计量资料采用单因素方差分析和q检验，计数资料采用χ2检验，多个实验组间的两两比较采用χ2分割法；受试者工作曲线下面积采用z检验。结果外周血白细胞总数在SBP组为（6．01±2．25）×10^9／L、非SBP组为（4．85±1．94）×10^9／L、对照组为（5．49±1．76）×10^9／L，差异无统计学意义（F=2．91，P〉0．05）；中性粒细胞比率分别为70．7％±10．4%、68．2％±9．0%、69．5％±8．7％，差异无统计学意义（F=3．07，P〉0．05）。3组血浆HNP值差异有统计学意义（F=4．05，P〈0．05），且SBP组[（17．66±6．40）ng／ml]明显高于非SBP组[（9．99±3．33）ng／ml]与对照组[（8．92±2．30）ng／ml]，q值分别为3．20，3．52，P值均〈0．05。3组CRP值差异有统计学意义（F=33．02，P〈0．05），且SBP组[（31．32±18．65）mg／L]及非SBP组[（15．08±9．95）mg／L]与对照组[（5．96±2．91）mg／L]比较，q值分别为11．03和3．69，P值均〈0．05。PCT阳性率在SBP组为62．2％，与非SBP组25．0％和对照组10．7％比较，x2值分别为10．41，15．40，P值均〈0．05。HNP的曲线下面积最高，PeT次之，CRP最低，分别为0．719，0．707，0．629。当HNP、PeT和CRP的截断值分别为10ng／ml、0．5ng／ml和8mg／L时，其对SBP诊断的敏感度分别为71．1％、62．2％和73．3％，特异度分别为71．9％、75．0%和56．3％，Youden指数分别为0．430、0．372和0．296。结论HNP与SBP明确相关，且与PCT-样对SBP有良好的诊断价值。CRP对SBP的诊断有一定参考价值，而血常规对SBP的诊断意义不大。

人中性粒细胞防御素对念珠菌的抗菌活性研究

目的 探讨防御素在机体抗念珠菌中的作用及其抗菌机制。方法 用 5％乙酸提取人中性粒细胞中的酸溶性成分，采用凝胶过滤层析获得人中性粒细胞防御素（ human neutrophil peptide， HNP），检测 HNP对白念珠菌 M1012R、白念珠菌 NIH A－ 207、乳酒念珠菌、热带念珠菌、季也蒙念珠菌等 5株念珠菌的抗菌活性。同时用电镜观察防御素作用后念珠菌的超微结构变化。结果 采用 Sephadex G100及 Biogel P10凝胶过滤层析可获得纯化的 HNP。 HNP对白念珠菌 M1012R、 NIH A－ 207、乳酒念珠菌、热带念珠菌、季也蒙念珠菌等菌有抗菌活性，其活性随防御素浓度升高而增强。电镜观察见防御素作用后的念珠菌表面有明显的凹陷和穿孔，胞膜与胞壁分离及空泡形成等改变。结论 HNP对念珠菌有较强的抗菌活性。

科尔沁牛中性粒细胞防御素5的原核表达及纯化

目的原核表达科尔沁牛中性粒细胞防御素5(bovine neutrophilβ-defensin 5,BNBD5),并进行纯化。方法用Trizol试剂提取牛外周血中性粒细胞总RNA,RT-PCR法扩增BNBD5的cDNA序列,与pMD18-T载体连接,构建重组克隆质粒pMD18-T-BNBD5,并进行测序,应用DNA Star生物分析软件对科尔沁牛BNBD5与其他物种(绵羊、山羊、驯鹿、家鼠、人类、鳜鱼、中华蜜蜂)β防御素的核苷酸序列进行同源性比较及进化树分析;对科尔沁牛与其他品种牛(新疆荷斯坦牛、印度水牛、荷兰弗里斯兰牛)β防御素的BNBD5核苷酸序列进行进行同源性比较及进化树分析;将构建正确的重组克隆质粒pMD18-T-BNBD5亚克隆至原核表达载体pET-30a(+),构建重组表达质粒pET-30a-BNBD5,转化大肠埃希菌(E.coli)BL21(DE3),IPTG诱导表达后,利用Ni离子亲和柱纯化,SDS-PAGE鉴定表达产物和纯化产物。结果通过PCR扩增获得了195 bp的BNBD5全长cDNA序列,为一个完整的开放阅读框(ORF),与GenBank中登录的BNBD5编码区序列(AJ278799)相似性达93.4%,推导该序列编码45个氨基酸残基,并含有防御素的特征性分子结构,即在特定位置上有6个保守的半胱氨酸残基;共有13处碱基出现突变,导致其推导的氨基酸序列出现8处变异,但6个保守型半胱氨酸位点均未出现变异。与其他物种的BNBD5核苷酸序列同源性分析表明,科尔沁牛与山羊、绵羊同源性最高,达80%以上;与中华蜜蜂同源性最低,在10%以下。与其他品种牛的BNBD5核苷酸序列同源性分析表明,科尔沁牛与新疆荷斯坦牛同源性最高,达90%以上;与荷兰弗里斯牛的同源性最低,约66%。质粒pET-30a-BNBD5经PCR及单双酶切鉴定证明构建正确,表达及纯化蛋白相对分子质量约10 000,主要以可溶性形式表达,表达量占菌体总蛋白的25.1%,纯化产物含量达2.15 mg/ml。结论成功表达并纯化了科尔沁牛BNBD5。

血清T细胞激活性低分泌因子、补体C1q肿瘤坏死因子相关蛋白1、人中性粒细胞防御素1-3在冠状动脉粥样硬化性心脏病中表达及意义

目的探讨血清T细胞激活性低分泌因子(RANTES)、补体C1q肿瘤坏死因子相关蛋白1(CTRP1)、人中性粒细胞防御素1-3(HNP1-3)在冠状动脉粥样硬化性心脏病患者中的表达及意义。方法选取自2018年1月至2019年12月阜阳市人民医院收治的80例冠状动脉粥样硬化性心脏病患者纳入B组。根据病情严重程度将B组患者分为轻度组(n=29),中度组(n=26),重度组(n=25)。另选择同期于我院体检的60例健康者纳入A组。分析A组、B组及B组不同疾病程度患者血清RANTES、CTRP1、HNP1-3水平变化情况。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清RANTES、CTRP1、HNP1-3单独检测及联合检测对冠状动脉粥样硬化性心脏病的诊断效能。结果B组血清RANTES、CTRP1、HNP1-3水平均显著高于A组,差异有统计学意义(P<0.05)。重度组患者血清RANTES、CTRP1、HNP1-3水平均显著高于中度组、轻度组患者,且中度组高于轻度组,差异有统计学意义(P<0.05)。RANTES+CTRP1+HNP1-3联合检测的曲线下面积(AUC)最大(P<0.05),特异度、准确度分别为93.32%、94.15%,诊断价值最高。结论在冠状动脉粥样硬化性心脏病中血清RANTES、CTRP1、HNP1-3的表达和病情严重程度之间存在着密切关系,且三者联合检测在诊断冠状动脉粥样硬化性心脏病时具有较高的准确度,可为靶向药物治疗冠状动脉粥样硬化性心脏病提供新思路。

牛中性粒细胞β防御素5成熟肽的毕赤酵母表达及纯化

牛中性粒细胞β防御素5(BNBD5)是天然存在于牛肺脏肺泡巨噬细胞内的一种抗菌肽之一。为了进一步研究天然抗菌分子-防御素的抗分枝杆菌活性提供实验材料,通过克隆BNBD5成熟肽片段的编码区序列,成功构建了毕赤酵母表达载体pPIC9K/mBNBD5,并诱导其在毕赤酵母菌株GS115中成功表达了mBNBD5蛋白,从而为进一步的实验奠定了坚实的基础。

牛中性粒细胞β防御素5重组蛋白联合利福平体内抗牛结核分支杆菌作用

探索牛中性粒细胞β防御素5重组蛋白联合利福平在体内抗牛分支杆菌的作用,为开发新型抗结核药物提供试验依据。将40只Balb/c小鼠随机分为4组,即空白对照组、感染模型组、利福平单独用药组、利福平与牛中性粒细胞β防御素5(牛β防御素5)联合用药组,每组10只,除正常对照组小鼠,其余小鼠鼻腔滴入牛分支杆菌,200CFU/只,4周后每天皮下注射利福平,连续2周,联合用药组同时皮下注射牛β防御素5,隔2d给药1次,连续2周,1周后采血用于检测血清中TNF-α、IL-1β、IL-10浓度,取肺脏、脾脏用于观察组织基本病理变化和菌落计数。结果显示,与感染模型组相比,利福平组血清中TNF-α(P<0.01)和IL-1β(P<0.05)浓度显著降低,肺脏和脾脏中的载菌量明显减少,肺组织病理变化显著减轻;与利福平组相比,利福平与牛β防御素5组血清中IL-10浓度显著升高(P<0.01),肺脏(P<0.05)和脾脏(P<0.05)中的载菌量明显减少,肺组织病理变化明显减轻。牛中性粒细胞β防御素5可协助利福平发挥更强的抗牛分支杆菌活性。

香菇多糖诱导人肺腺上皮细胞β-防御素-2基因表达的研究

探讨香菇多糖诱导人肺腺上皮细胞的人-β-防御素-2(HBD-2)基因表达的情况。香菇多糖体外刺激人肺腺上皮细胞(SPC-A-1)后,应用RT-PCR技术检测SPC-A-1细胞HBD-2 mRNA的表达。香菇多糖可上调人肺腺上皮细胞(SPC-A-1)HBD-2 mRNA的表达;这种增强表达与药物的刺激剂量和刺激时间具有一定的相关性。

3种血清指标联合检测对肝硬化合并细菌性腹膜炎的诊断价值

目的探讨血清中性粒细胞防御素(HNP)、血清降钙素原(PCT)和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)联合检测在肝硬化合并细菌性腹膜炎患者中的临床价值。方法将受试者分为肝硬化合并细菌性腹膜炎(SBP组)、无细菌性腹水组(非SBP组)和对照组,采用电化学发光免疫分析法检测血清HNP水平,免疫荧光定量法检测血清PCT和酶联免疫吸附法检测血清MCP-1水平,分析联合检测与单项检测的敏感度和特异度,同时分析SBP组患者经抗菌药物有效治疗后其血清HNP、PCT及MCP-1水平变化。结果 SBP组血清HNP、PCT及MCP-1水平均显著上升,与非SBP组和对照组对比,差异均有统计学意义(P<0.05);经治疗后,三者水平均显著下降;HNP、PCT及MCP-1联合检测的敏感度和特异度高于单项检测,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论联合检测HNP、PCT及MCP-1对于肝硬化合并细菌性腹膜炎患者的早期诊断和疗效观察具有重要的临床意义。

肠源性α-防御素在炎症性肠病发病机制中作用的研究进展

防御素作为小肠腺泡底部潘氏细胞分泌的主要抗菌肽，具有广谱的杀菌、抗炎、抗病毒功能，对肠道的黏膜屏障功能和免疫功能都有非常重要的维持和调节作用。近年发现防御素和炎症性肠病（IBD）的发病联系紧密。