聚合物／液晶细胞模型的构建及其表面弹性对大鼠骨髓干细胞黏附的影响

目的:构建聚合物/液晶细胞模型,探究其表面弹性对大鼠骨髓干细胞黏附情况的影响。方法:溶剂挥发致相分离方法构建聚合物/液晶细胞模型,通过偏光显微镜、扫描式电子显微镜及X射线衍射观察细胞模型的表面特征。全骨髓细胞贴壁培养法分离大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs),通过表面因子检测和诱导其成骨成脂分化进行鉴定。培养3代后分4组:纯PU空白对照组,10%膜组,30%膜组和50%膜组。接种细胞密度为5×107/L,待细胞贴壁24h后作细胞骨架染色处理,激光共聚焦显微镜观察细胞附着在材料上的情况并拍照。结果:溶剂挥发致相分离方法成功构建3种不同硬度的聚合物/液晶细胞模型;表面因子检测显示CD29、CD44、CD90呈阳性表达,而CD34和CD45呈阴性表达;经过茜素红S染色和油红O染色,成骨成脂分化形成的钙结节和脂滴都显而易见;细胞骨架染色拍摄结果显示,纯PU对照组、10%膜组和30%膜组上的细胞铺展面积较广,肌动蛋白微丝和细胞核清晰明显;而50%膜组的细胞铺展面积较小,细胞核虽较清晰,但是肌动蛋白微丝却模糊不清。结论:合适液晶含量的聚合物/液晶生物膜能支持大鼠骨髓干细胞的贴壁生长,而液晶含量过高则抑制细胞的贴壁生长。

人骨肉瘤中PTEN、EGFR的表达及其与细胞增殖的关系

[目的]探讨PTEN、EGFR、PCNA在人骨肉瘤中表达的生物学意义及其相互关系,为阐明骨肉瘤的发病分子机制提供一定依据。[方法]选取60例人骨肉瘤标本(所有标本均根据细胞和组织分化程度,将骨肉瘤分为3级:1级14例,Ⅱ级28例,Ⅲ级18例),以20例骨软骨瘤为对照,采用免疫组化S-P法,检测PTEN、EGFR、PCNA在人骨肉瘤中表达。[结果]PCNA在骨肉瘤与骨软骨瘤间,骨肉瘤各级间表达差异有统计学意义(P﹤0.05);EGFR在骨肉瘤与骨软骨瘤间,骨肉瘤各级间,PCNA弱阳性组、强阳性组间表达差异有统计学意义(P﹤0.05);PTEN染色强弱在骨软骨瘤与骨肉瘤间差异有统计学意义(P﹤0.05);PTEN在骨肉瘤各级间,PCNA弱阳性组、强阳性组间表达差异无统计学意义(P﹥0.05)。[结论]PCNA可作为骨肉瘤定性、分级的指标;EGFR在骨肉瘤的发生及恶性增殖中起到一定的作用,可作为骨肉瘤定性、分级指标;PTEN在骨肉瘤的发生中起到重要的作用,但其不可作为骨肉瘤的分级、恶性增殖指标。

CEA和PTEN在双侧原发性乳腺癌中的表达和分析

目的检测原发性双侧乳腺癌左右两侧病理石蜡切片中CEA和PTEN表达和表达强度差异,揭示其发生是单克隆还是独立克隆性。对比分析双侧病灶之间以及与单侧同病理类型之间蛋白表达差异。方法 9例原发性双侧乳腺癌左右组织标本共18个,对应单侧乳腺癌患者乳腺组织标本10个。免疫组织化学法检测CEA和PTEN表达情况。结果双侧乳腺癌第一癌与第二癌和单侧乳腺癌中CEA表达率分别为66.6%,55.5%,60%、PTEN在第一癌、第二癌、单侧乳腺癌中表达率分别为33.3%,44.4%,50%、表达差异均无统计学意义(P>0.05),双侧乳腺癌CEA中同为阳性为5例,同为阴性为3例,PTEN中同为阳性为3例,同为阴性为5例。结论双侧乳腺癌首发癌和单侧乳腺癌中CEA、PTEN蛋白的表达均无统计学差异。双侧乳腺癌第一癌与第二癌中CEA、PTEN蛋白的表达差异无统计学差异,提示双侧乳腺癌第一癌和第二癌为单克隆性。

金雀异黄素调控Egr1/PTEN信号通路诱导卵巢癌SKOV3细胞凋亡的实验研究

目的通过金雀异黄素(genistein)诱导人卵巢癌细胞SKOV3细胞的凋亡,探讨即刻早期反应基因(Egr1)/细胞骨架蛋白同源在10号染色体有缺失的磷酸酶(PTEN)信号通路在金雀异黄素诱导SKOV3细胞凋亡过程中的作用。方法应用磺酰罗丹明B(SRB)染色法测定经金雀异黄素处理后的SKOV3卵巢癌细胞生长抑制率,组蛋白DNA酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测细胞凋亡,采用游离硝基苯胺(p NA)法检测细胞内半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶3(Caspase-3)的蛋白含量,实时荧光定量PCR(Real-time PCR)测定细胞内Bcl-2相关X蛋白基因(bax)和B淋巴细胞瘤-2基因(bcl-2)的基因表达变化,蛋白质印迹法(Western blotting)分析Egr1、PTEN、蛋白激酶B(AKT)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)蛋白的表达变化。结果金雀异黄素显著抑制卵巢癌细胞SKOV3的增殖(P<0.05),并呈浓度依赖性。金雀异黄素处理24 h后,处理浓度高于40μmol/L时,与对照组相比,调亡指数、Caspase-3活性、bax的相对表达及细胞中Egr1蛋白和PTEN蛋白的表达量均显著增加(P<0.05),Bcl-2的相对表达量及AKT蛋白的磷酸化水平p-Akt则显著降低(P<0.05)。当同时给予50 nmol/L PTEN抑制剂Bpv后,p-Akt表达明显增加,细胞凋亡程度受到明显抑制。结论金雀异黄素可能通过上调Egr1/PTEN信号通路的表达抑制PI3K/Akt信号通路的激活诱导SKOV3细胞凋亡,进一步影响了调亡相关基因Bcl-2、Bax及Caspase-3的表达。