miRNA-126下调细胞骨架调控蛋白Twinfilin-1对心肌细胞肥大的抑制效应

目的探讨miRNA-126下调细胞骨架调控蛋白Twinfilin-1(Twf1)对心肌细胞肥大的抑制效应。方法通过内皮素(ET)-1人工诱导原代培养新生大鼠健康心肌细胞形成心肌细胞肥大,以实时定量PCR检测miRNA-126和心肌细胞肥大标志性基因的表达量,利用化学修饰RNA模拟物转染法使miRNA-126过表达,利用重组腺病毒转染使Twf1过表达。以抗α-辅肌动蛋白(actinin)荧光染色法测量细胞表面积,以Western印迹法检测Twf1和心肌肌钙蛋白(cTn)I的蛋白表达量,荧光素活性检测实验判定miRNA-126与Twf1的3′端非编码区(UTR)嵌和。结果肥大心肌细胞的miRNA-126表达量显著低于健康心肌细胞(P<0.01)。miRNA-126干预后肥大心肌细胞表面积明显缩小(P<0.01)。miRNA-126模拟物转染组心肌细胞肥大标志性基因心房钠尿肽(ANP)、α-actinin、Myh6、Myh7相对表达量均显著低于空白心肌细胞组(P<0.01)。miRNA-126模拟物与Twf1的3′-UTR核心序列重组体共反应组的相对荧光表达显著低于内对照载体组(P<0.01)。miRNA-126组Twf1蛋白相对表达量显著低于空白心肌细胞组和错义miRNA(scr-miRNA)转染组(P均<0.01)。miRNA-126模拟物转染组心肌细胞磷酸化cTnI蛋白表达量显著低于空白心肌细胞组和scr-miRNA转染组(P均<0.01);各组间cTnI蛋白表达量的差异无显著性(P均>0.05)。结论miRNA-126具有心肌肥大抑制效应,调节方式为下调Twf1基因表达抑制cTnI的磷酸化。

MSTN基因对牛肌动蛋白细胞骨架调节通路的影响

为探究肌肉生长抑制素(myostatin,MSTN)对牛骨骼肌生长发育的作用机制,本研究前期利用定量蛋白质组学与磷酸化蛋白质组学分析野生型蒙古牛(MG.WT)和MSTN+/-蒙古牛(MG.MSTN+/-)腿臀肌肌肉组织中蛋白质水平和磷酸化修饰水平的差异变化,使用已建立的牛骨骼肌卫星细胞体外诱导成肌分化模型,检测设计合成的MSTN siRNA(si-MSTN)干扰效果;采用实时荧光定量PCR和Western blotting方法检测转染si-MSTN的增殖期(GM)和分化第3天(DM3)牛骨骼肌卫星细胞中肌动蛋白细胞骨架调节通路相关基因的mRNA和蛋白水平的表达变化,研究敲低MSTN表达对肌动蛋白细胞骨架调节通路的影响。结果显示,在MSTN+/-蒙古牛肌肉组织中共鉴定到16个肌动蛋白细胞骨架调节通路相关基因表达丰度上调;转染si-MSTN细胞中的MSTN表达水平极显著降低(P<0.01);在转染si-MSTN的GM期牛骨骼肌卫星细胞中,肌动蛋白细胞骨架调节通路相关基因ENAH、ACTN4和Cdc42的mRNA水平均显著升高(P<0.05),PFN1、RhoA和ACTN4的蛋白水平均显著或极显著升高(P<0.05;P<0.01);在转染si-MSTN的DM3牛骨骼肌卫星细胞中,ENAH、CFL1、SCIN和Cdc42基因mRNA水平均显著升高(P<0.05),RhoA基因mRNA水平极显著升高(P<0.01),PFN1和ACTN4的蛋白水平均显著升高(P<0.05)。结果表明,干扰MSTN可以促进肌动蛋白细胞骨架调节通路相关基因的表达,探明了MSTN可能通过介导肌动蛋白细胞骨架调节通路影响牛骨骼肌卫星细胞增殖和成肌分化的分子机制,为进一步研究MSTN对牛成肌分化的调控机制提供参考。

钠氢交换调控因子1(NHERF1)的结构与功能

钠氢交换调控因子1是一种由358个氨基酸组成的多功能连接蛋白.其分布位置与表达水平将决定其功能,当其位于细胞膜上,可能表现为一个肿瘤抑制因子;当其处于细胞质中,可能成为致癌蛋白.其功能机制的研究主要集中在磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)和血小板衍生因子(PDGF)、外向整流氯离子通道(ORCC)等信号通路,以及细胞迁移和微丝骨架分布的调控方面.本文对近年来关于NHERF1/EBP50的结构和功能的研究进行了综述.